人鼻黏膜间充质干细胞生物学特性与自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.29.013

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (29): 4666-4672.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.29.013

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人鼻黏膜间充质干细胞生物学特性与自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤

卓毅¹，段答¹，葛丽特¹，袁挺¹，刘波¹，吴沛¹，王昊¹，龙浪¹，刘作¹，贺西京²，卢明¹

¹湖南师范大学第二附属医院(解放军第一六三医院神经外科)，湖南省长沙市 410003；²西安交通大学第二附属医院骨科，陕西省西安市 710000

修回日期:2017-04-28 出版日期:2017-10-18 发布日期:2017-11-08
通讯作者: 卢明，博士，教授，湖南师范大学第二附属医院(解放军第一六三医院神经外科)，湖南省长沙市 410003；贺西京，博士，教授，西安交通大学第二附属医院骨科，陕西省西安市 710000
作者简介:卓毅，男，1988年生，湖南省张家界市人，土家族，2016年湖南师范大学医学院毕业，硕士，医师，主要从事神经外科学及神经损伤修复研究。
基金资助:
国家自然科学基金(81371358)；湖南省自然科学基金(14JJ2060)；湖南省教育厅研究生创新项目(CX2015B188)

Biological characteristics and clinical observation of autologous nasal mucosa mesenchymal stem cells in the treatment of spinal cord injury

Zhuo Yi¹, Duan Da¹, Ge Li-te¹, Yuan Ting¹, Liu Bo¹, Wu Pei¹, Wang Hao¹, Long Lang¹, Liu Zuo¹, He Xi-jing², Lu Ming¹

¹the Second Affiliated Hospital of Hunan Normal University (Department of Neurosurgery, the 163^rd Hospital of Chinese PLA), Changsha 410003, Hunan Province, China; ²Department of Orthopedics, the Second Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University, Xi’an 710000, Shaanxi Province, China

Revised:2017-04-28 Online:2017-10-18 Published:2017-11-08
Contact: Lu Ming, M.D., Professor, the Second Affiliated Hospital of Hunan Normal University (Department of Neurosurgery, the 163rd Hospital of Chinese PLA), Changsha 410003, Hunan Province, China
About author:Zhuo Yi, Master, Physician, the Second Affiliated Hospital of Hunan Normal University (Department of Neurosurgery, the 163rd Hospital of Chinese PLA), Changsha 410003, Hunan Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81371358; the Natural Science Foundation of Hunan Province, No. 14JJ2060; the Postgraduate Innovation Project of Hunan Provincial Education Department, No. CX2015B188

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
生物学特性：文章对培养的鼻黏膜间充质干细胞进行生物学特性研究，主要包括细胞取材、培养出鼻中隔偏曲手术患者的鼻黏膜间充质干细胞，并进行鉴定，再用扫描及透射电子显微镜观察细胞的超微结构，在体外对其向脂肪组织、软骨组织及神经元方向诱导分化。
自体：文章中“自体”一词是指采用脊髓损伤患者自体血清培养出自体鼻黏膜间充质干细胞，再将培养成熟的自体鼻黏膜间充质干细胞通过腰椎穿刺术的方式进行自体移植。采用自体血清培养细胞的优势就是去除了胎牛血清的免疫排斥反应，如发热等。

摘要
背景：干细胞应用于脊髓损伤的报道很多，但是这些细胞存在免疫排斥、取材困难、纯化不易等各方面的缺陷，而鼻黏膜间充质干细胞无上述缺点，将其应用于临床脊髓损伤患者疗效分析目前尚无相关报道。
目的：观察人鼻黏膜间充质干细胞的生物学特性，同时进行自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗晚期不完全性脊髓损伤的临床疗效观察与评价。
方法：①取材、培养鼻中隔偏曲手术患者的鼻黏膜间充质干细胞，扫描及透射电子显微镜观察细胞的超微结构，并在体外对其进行多向诱导分化；②经医学伦理委员会同意后，取材培养脊髓损伤患者的鼻黏膜，通过腰椎穿刺术注射到8例晚期不完全性脊髓损伤患者椎管内，细胞移植1-3次，前后移植间隔时间为5-7 d，每次移植细胞总数约为5×10⁷个。细胞移植治疗前及随访6个月时按照国际截瘫医学会ASIA 评分标准进行评分。
结果与结论：①鼻黏膜间充质干细胞在光镜下形态以梭形为主，并呈现出放射状排列，细胞免疫荧光表达STRO-1；②流式细胞学检测显示高表达间充质干细胞表面标记物CD73、CD90、CD105，不表达造血干细胞标记物CD34、CD45，且细胞纯度达97%以上；③鼻黏膜间充质干细胞在扫描及透射电子显微镜下可见短粗的微绒毛及不同的细胞生长形态；④鼻黏膜间充质干细胞还具有向骨组织、脂肪组织、干细胞球及神经元分化的潜能；⑤经自体血清培养的鼻黏膜间充质干细胞移植后，除1例患者住院期间无明显神经功能改善外，其余患者均有不同程度的神经功能恢复且无任何不良副反应；⑥结果表明，鼻黏膜间充质干细胞是组织工程细胞修复中一种新型的种子细胞来源；自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤患者能达到一定的治疗效果，具有临床应用价值。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0001-7894-5811(卓毅)

关键词: 干细胞, 移植, 鼻黏膜, 间充质干细胞, 脊髓损伤, 细胞移植, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Stem cells have been widely used in the treatment of spinal cord injury, but the clinical application is limited by immune rejection, difficulty in cell harvesting and purification. However, human nasal mucosa mesenchymal stem cells (hNM-MSCs) have no such problems, and its clinical application in the treatment of spinal cord injury has been not reported yet.
OBJECTIVE: To observe the biological characteristics of autologous hNM-MSCs and its clinical efficacy in the treatment of advanced incomplete spinal cord injury.
METHODS: NM-MSCs were isolated from the human nasal mucosa, cultured and identified in vitro. The ultrastructure of NM-MSCs was observed by transmission electron microscope and scanning electron microscope. Then the NM-MSCs were induced to differentiate into osteocytes, adipocytes, stem cell spheres, or neurons in vitro. Totally eight patients with incomplete spinal cord injury were enrolled and subjected to hNM-MSCs transplantation via lumbar puncture for 1-3 sessions of about 5×10⁷ cells each, with an interval of 5-7 days, after the approval of the medical ethics committee. All the patients were followed up for 6 months. Preoperative and postoperative therapeutic effect evaluations were performed on the basis of American Spinal Injury Association (ASIA) scores.
RESULTS AND CONCLUSION: Under light microscope, the NM-MSCs were mainly spindle-shaped, positive for STRO-1 and exhibited a radial arrangement. NM-MSCs highly expressed CD73, CD90 and CD105, but did not express CD34 and CD45, with the purity of over 97%. And lots of podgy microvilli were seen on the surface of NM-MSCs under the scanning electron microscope, and two kinds of cell morphologies were seen under the transmission electron microscope. Moreover, hNM-MSCs had the ability to differentiate into osteocytes, adipocytes, stem cell spheres and neurons. During the 6-month follow-up, seven patients achieved neurological function recovery to different extents except for one patient, and no side effects were found. It is concluded that hNM-MSCs can become the ideal seed cells for tissue-engineered cell repair. Autologous NM-MSCs transplantation for the treatment of spinal cord injury can achieve the ideal effect, with the value of clinical application.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Nasal Mucosa, Mesenchymal Stem Cell Transplantation, Spinal Cord Injuries, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.

卓毅，段答，葛丽特，袁挺，刘波，吴沛，王昊，龙浪，刘作，贺西京，卢明. 人鼻黏膜间充质干细胞生物学特性与自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(29): 4666-4672.

Zhuo Yi, Duan Da, Ge Li-te, Yuan Ting, Liu Bo, Wu Pei, Wang Hao, Long Lang, Liu Zuo, He Xi-jing, Lu Ming. Biological characteristics and clinical observation of autologous nasal mucosa mesenchymal stem cells in the treatment of spinal cord injury[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(29): 4666-4672.

图/表（结果） 4

2.1 人鼻黏膜间充质干细胞培养及鉴定结果 组织块贴壁七八天后有细胞爬出，细胞呈梭形、多角形，传代后细胞纯度提高，形态均一，以平行排列生长为主或呈漩涡状生长(图1A)；细胞免疫荧光鉴定表达STRO-1(图1B)；经流式细胞术检测，细胞不表达CD34、CD45表面标记物，表达CD73、CD90以及CD105基质细胞标记物，第4代细胞纯度达97%以上(图1C)。

2.2 扫描电镜和透射电镜观察结果 扫描电镜下可见细胞膜表面分布有大量微绒毛(图2A)。透射电镜下可见细胞呈现出2种不同生存状态：图2B中细胞处于静止期，细胞核较大且仅1个核仁，细胞器较少，可见未成熟线粒体及溶酶体；图2C中细胞处于相对活跃期，细胞内可见2个细胞核且核仁较大，另外可见有少量内质网、线粒体、核糖体等细胞器存在，细胞结构清晰。

2.3 人鼻黏膜间充质干细胞成脂与成骨诱导分化 人鼻黏膜间充质干细胞经成脂诱导剂诱导后，大部分细胞变成短胖的梭形及椭圆形，细胞周围有折光性强的空泡形成(图3A)，经油红O染色后可有大量红色的脂滴存在(图3B)；人鼻黏膜间充质干细胞经成骨诱导剂诱导后，细胞形态开始由梭形变成紧密排列的立方形态(图3C)，经茜素红染色后细胞内见有红色矿化结节存在(图3D)。上述结果显示人鼻黏膜间充质干细胞在体外具有向骨细胞和脂肪细胞分化的能力。

2.4 人鼻黏膜间充质干细胞体外诱导成干细胞球 人鼻黏膜间充质干细胞在体外经含2% B27的DMEM/F12培养基诱导3 d后，细胞开始出现向一个中心聚集的现象；继续诱导至第5天时细胞聚合成一个球形(图4A)，且球的体积逐渐变大，数目也增加，第7天时球体呈悬浮状态(图4B)；用神经干细胞标记物Nestin染色显示阳性表达(图4C)。

2.5 人鼻黏膜间充质干细胞神经元诱导分化的形态变化及荧光染色 人鼻黏膜间充质干细胞体外用维甲酸诱导 7 d后细胞开始变细延长，细胞形态更加立体，出现单极、双极或多极细胞，细胞周围折光性增强，部分细胞交织成网状，细胞轴突延长，为典型神经元的形态(图5A)。对分化的类神经元样细胞进行TUJ-1免疫荧光染色显示呈阳性表达(图5B)。

2.6 试验流程图 见图6。

2.7 对8例晚期不完全性脊髓损伤患者进行细胞移植及半年随访 见表1。

2.8 对8例晚期不完全性脊髓损伤患者ASIA评分 见表2。

2.9 安全性评估 8例患者进行自体鼻黏膜间充质干细胞移植后均未出现发热、抽搐、黏膜炎、腹泻、恶心呕吐、肌肉骨骼疼痛、皮疹、头痛头晕等不良反应。

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引言

材料方法

1.1 设计 首先对后续所要应用于临床的人鼻黏膜间充质干细胞进行细胞学鉴定及生物学特性研究，再进行临床细胞移植治疗，进行回顾性分析。

1.2 时间及地点 于2015年1月至2016年5月在湖南师范大学第二附属医院神经外科实验室完成，该实验室为湖南师范大学重点实验室。

1.3 对象 鼻黏膜组织块获取与培养均在湖南师范大学第二附属医院干细胞移植实验室完成，经伦理委员会批准，患者或患者家属签字同意后获取组织块。

主要试剂：高糖DMEM/F12培养基、胎牛血清、双抗(青霉素20 000 U/mL、链霉素20 000 μg/L)、0.125%胰蛋白酶消化液购自美国Gibco公司；Nestin一抗、STRO-1一抗均购自Abcom公司；鼠抗人单克隆抗体CD34-ECD，CD45-PC7，CD73-FITC，CD90-FITC，CD105-FITC均购自美国Biolegend公司；油红O、茜素红S、全反式维甲酸购自美国Sigma公司；成骨、成脂诱导剂均购自英国Invitrogen公司。

8例晚期不完全性脊髓损伤患者，男4例，女4例，年龄26-53岁，平均年龄39岁。

1.4 方法

1.4.1 人鼻黏膜间充质干细胞的取材和培养 人鼻黏膜间充质干细胞生物学特性研究阶段选择鼻中隔偏曲手术患者，签署志愿同意书，获取组织块前两三天开始鼻腔内滴入氯霉素眼药水等抗生素进行术前准备，每天3次或4次。获取组织块时，用丁卡因进行局部麻醉，于中鼻甲内侧根部，取2块直径约0.5 cm组织。获取组织块后用无菌PBS平衡盐溶液(含青霉素200 U/mL和链霉素200 U/mL)漂洗3-5次，将组织块上的血迹洗净为止，再将获取的鼻内组织块转移至体积分数为10%胎牛血清+DMEM/F12培养基中，用眼科剪剪成0.5 mm³小组织块，立刻转移至离心管内进行离心，离心弃掉上清后接种于50 mL培养瓶底部，动作需轻柔以便更好地贴壁，待组织块贴壁后缓慢将培养液加至4 mL，移至体积分数为5% CO₂，37 ℃的培养箱内进行培养。等到细胞从组织块中增殖爬出时开始换液，且每3 d换液1次，每次换液2 mL，当细胞爬出并增殖到培养瓶底部50%面积时开始传代，实验选用第4，5代细胞。

1.4.2 细胞免疫荧光及细胞流式鉴定 对培养至第4代的人鼻黏膜间充质干细胞进行细胞免疫荧光鉴定。步骤如下：①取出6孔板内经诱导分化后的细胞载玻片，用PBS清洗细胞载玻片3次，每次5 min；②用40 g/L多聚甲醛溶液固定15 min；③冲洗掉固定液，加入兔抗Nestin (1︰1 000)、兔抗STRO-1(1︰1 000)、兔抗TUJ-1(1︰1 000)放置于4 ℃冰箱内孵育过夜；④次日从冰箱内取出孵育好的载玻片，用PBS平衡盐溶液清洗一抗3次，每次5 min；⑤清洗完毕后再加入二抗(稀释倍数为200倍)，避光常温下孵育1 h；⑥用PBS平衡盐溶液洗掉二抗，每次5 min，洗3次；⑦洗净后加入DAPI染细胞核，孵育15 min；⑧用甲醇再清洗1次(因DAPI可以溶于甲醇)；⑨用抗荧光猝灭剂进行最后的封固；⑩置于荧光显微镜下观察实验结果并拍照记录。

取第4代人鼻黏膜间充质干细胞，PBS洗涤3次，0.25%胰蛋白酶37 ℃消化后，用含血清培养基终止消化，分为每管0.1 mL。阴性对照管加入抗IgG-FITC，IgG-ECD和IgG-PC7；其他管分别加入鼠抗人抗体CD34-ECD，CD45-PC7，CD73-FITC，CD90-FITC，CD105-FITC，室温孵育30 min，流式细胞仪检测。

1.4.3 扫描电镜与透射电镜样品制备 消化第5代人鼻黏膜间充质干细胞并收集，PBS洗涤2次，2 000 r/min 离心10 min，常规清洗、固定、脱水、干燥及导电处理标本后，于日立S-3400N扫描电镜及FEI Tecnai G2 Spirit透射电镜下观察、拍照。

1.4.4 人鼻黏膜间充质干细胞体外成球及定向诱导分化 取第4代人鼻黏膜间充质干细胞，用胰蛋白酶消化后接种于新的培养瓶内，1 d后用含2% B27的DMEM/F12培养基换液，待细胞成球。再取第4代人鼻黏膜间充质干细胞接种于放置无菌盖玻片的6孔板内，待细胞密度高达80%以上时，分别加入下列细胞诱导剂：成脂细胞诱导剂、成骨细胞诱导剂以及神经元诱导剂(全反式维甲酸)。每2 d或3 d换液1次，对照孔未加入任何诱导剂，各实验组采用诱导剂诱导两三周后进行油红O、茜素红S以及神经元特异性Ⅲ类β微管蛋白(TUJ-1)细胞免疫荧光染色。

1.4.5 术前准备 8例晚期不完全性脊髓损伤患者入院后首先做相关常规检查对病情进行评估，然后鉴别患者是否能做自体鼻黏膜间充质干细胞移植术，排除相关的禁忌证，最后患者如果同意接受鼻黏膜间充质干细胞自体移植治疗，签署细胞移植知情同意书。手术的适应证主要包括：无严重心血管、呼吸、消化、循环系统以及脊柱严重畸形等疾病；三大常规检查、乙肝、丙肝、梅毒、HIV等指标均正常。

1.4.6 移植方法及安全评估 自体鼻黏膜间充质干细胞制备完毕后(制备方法同1.4.1，用自体血清替换胎牛血清，其余方法相同)，通过腰椎穿刺的方法进行椎管内注射。患者取侧卧位，穿刺点为L₃_-₄椎间隙，消毒铺巾后进行利多卡因3 mL局部麻醉，于无菌条件下将第4代自体鼻黏膜间充质干细胞用注射器缓慢注入椎管内，术后患者去枕平卧4-6 h，1个疗程细胞移植的次数为1-3次，前后移植间隔为5-7 d，每次移植细胞总数约为5×10⁷个。由2名或3名神经外科主治医师完成鼻黏膜间充质干细胞移植前和移植后6个月的国际ASIA标准评分。每次移植后对患者进行安全评估，观察患者是否出现发热、抽搐、黏膜炎、腹泻、恶心呕吐、肌肉骨骼疼痛、皮疹、头痛头晕等症状。

1.5 主要观察指标 脊髓损伤患者移植治疗前后疗效评价以及安全性。

1.6 统计学分析 应用SPSS 18.0软件系统进行统计学处理。计量资料采用x(_)±s表示，治疗前后的比较采用配对t检验。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

间充质干细胞是一种在机体分布较为广泛的成体干细胞，具有快速增殖及向多方分化的生物学特性。它即可以分化为脂肪细胞、骨细胞等中胚层的组织细胞，也被证实能够向神经元、神经胶质细胞等外胚层的细胞分化^[7-8]。鼻黏膜间充质干细胞在鼻腔内分布比较广泛，于鼻中隔、上、中、下鼻甲的黏膜内均有分布^[9]。实验采用流式细胞术检测证实鼻黏膜间充质干细胞表面表达CD73、CD90以及CD105基质细胞标记物，却不表达CD34、CD45标记物，第4代细胞纯度可高达97%以上。通过扫描电镜和透射电镜观察鼻黏膜间充质干细胞的超微结构：在扫描电镜下，可见表面大量微绒毛存在，微绒毛丰富说明细胞的分泌功能强；在透射电镜下，有2种形态结构存在：一种是处于相对静息期的细胞；另一种是处于相对活跃期的细胞，提示该细胞能分泌相关细胞因子来维持自身的增殖与分化^[10-11]。

为了证实鼻黏膜间充质干细胞具有多向分化潜能，将鼻黏膜间充质干细胞向骨细胞、脂肪细胞、神经干细胞球和神经元定向分化。结果显示：经成脂诱导剂诱导后, 油红O染色可见大量红色的脂滴存在；经成骨诱导剂诱导后，茜素红染色可见有红色矿化结节存在；经含2% B27的DMEM/F12培养基诱导后，神经干细胞标记物Nestin免疫荧光染色阳性表达；最后经维甲酸诱导后，出现典型的类神经元形态，细胞免疫荧光染色表达神经元标记物TUJ-1。上述结果证实了鼻黏膜间充质干细胞具有多向分化潜能。

目前，国内外对于鼻黏膜间充质干细胞的研究都很少，实验从细胞免疫组化、细胞表型检测、电镜及细胞的分化能力等多方面验证其生物学特性。鼻黏膜间充质干细胞作为一种新型的间充质干细胞，它不仅具有其他间充质干细胞的一般生物学特性，还有诸多优势：①具有更高的增殖效率和更短的传代时间；②广泛分布鼻腔内，易于取材，无免疫排斥及伦理问题；③来源于外胚层，无需跨胚层分化为神经元；④嗅黏膜终生可更新，其生物学活性不随年龄的增长而改变；⑤安全性高，经染色体核组分析和肿瘤基因分析显示体外无限传代后没有基因变异^[12]。另外，采用患者本人的血清对自体鼻黏膜间充质干细胞进行培养，从而避免了异性蛋白带来的过敏反应，避免传染性疾病的传播、优化细胞自身的适应能力。

上述8例晚期不完全性脊髓损伤患者移植自体血清培养的鼻黏膜间充质干细胞，除1例患者住院期间无明显神经功能改善外，其余患者均有较满意的神经功能恢复，未出现不良反应。患者损伤平面以下的运动功能评分显著上升(P < 0.05)，运动功能改善；患者痛觉也有所恢复，痛觉的评分显著增加(P < 0.05)；患者触觉评分结果差异无显著性意义。以上结果可见，在细胞治疗后较短的时间可改善临床症状，其可能的因素是鼻黏膜间充质干细胞通过激活旁分泌作用产生多种细胞营养因子，改变脊髓损伤所处的微环境达到促进神经修复的作用^[13]。当鼻黏膜间充质干细胞与宿主细胞相互作用时产生许多可溶性细胞营养因子，包括神经生长因子、脑源性神经营养因子、胶质源性神经营养因子、血管内皮生长因子、促红细胞生成素、碱性成纤维细胞生长因子及胰岛素样生长因子21等^[14-16]。这些神经营养因子能够促进体内受损伤的神经组织得到修复，改善临床症状。

有动物实验及临床研究证实了间充质干细胞移植后促进脊髓损伤神经功能恢复的作用机制与细胞分化、旁分泌等作用密切相关^[6^，^17-19]。Saito等^[18]于2008年报道了1例自体骨髓间充质干细胞通过腰椎穿刺注射到蛛网膜下腔用于治疗急性期脊髓损伤患者。通过6个月的随访，其感觉、运动功能均有明显好转，并且无任何不良反应。本研究观察发现8例患者中多数患者在移植后5-7 d开始出现临床症状的改善，可能是植入的鼻黏膜间充质干细胞分泌某些神经营养因子促进宿主自身的神经功能修复。目前多数学者认为轴突损伤后的再生和突触的形成是机体神经功能恢复的必要条件，而移植后的鼻黏膜间充质干细胞分泌的神经递质释放也具有促进神经功能恢复的能力^[20-21]。研究结果说明在鼻黏膜间充质干细胞移植后，其分泌蛋白改变了损伤局部的微环境，神经功能可以得到部分恢复，改善临床症状，但神经功能的恢复仍然局限在一定范围内。

神经组织再生与修复需要一个合适的微环境，其损伤局部的微环境需具有充足的神经营养因子，且没有阻碍神经轴突生长的胶质瘢痕和抑制轴突生长的抑制因子^{[5, 22]}。鼻黏膜间充质干细胞移植能改变损伤局部的微环境，促进神经组织的再生与修复。

然而鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤仍有诸多问题需要解决：①深入研究鼻黏膜间充质干细胞治疗脊髓损伤的修复机制；②如何更好地提高鼻黏膜间充质干细胞向神经元方向分化的比例；③鼻黏膜间充质干细胞移植后是否能够与损伤处的细胞建立正常的神经、突触联系；④在今后的临床应用中需要对细胞质量、剂量、手术适应证、禁忌证，安全及疗效评价系统进一步规范。

因此，鼻黏膜间充质干细胞对脊髓损伤的治疗虽然已经显示了较大的潜能，但是临床的广泛应用还要经过一段长期的探索过程。有理由相信，只要更加深入探索鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的作用机制，解决细胞移植存在的诸多问题，一定有助于开发出一项治疗脊髓损伤安全有效的治疗方法。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

人鼻黏膜间充质干细胞生物学特性与自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤

Biological characteristics and clinical observation of autologous nasal mucosa mesenchymal stem cells in the treatment of spinal cord injury

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