脂肪干细胞在颗粒脂肪移植中的作用

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.41.004

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
脂肪细胞培养：将吸脂来源的脂肪组织用D-Hanks冲洗，去除残留的血细胞和组织碎片，把脂肪组织放入离心管中，记录原始体积。向组织中加入等体积的0.1%Ⅰ型胶原酶，放入37 ℃气浴振荡器中消化30 min。然后将消化好的组织静置5 min，待其分层后，用吸管吸取位于悬液上层的脂肪细胞，将含有脂肪细胞的悬液以1 000 r/min(167×g)，离心2 min 后弃掉下层悬液得到脂肪细胞。

摘要
背景：血管基质层细胞中含有大量的脂肪干细胞，有研究显示脂肪干细胞在移植过程中可能发挥着很重要的作用。
目的：观察脂肪干细胞在颗粒脂肪移植中的作用。
方法：选取10只雄性SPF级BALB/C小鼠，取出正常脂肪组织，提取动物腹部脂肪中的脂肪干细胞和颗粒脂肪，选取24只裸鼠作为移植受体，所有动物分为3个实验组，分别为对照组、颗粒脂肪移植组、混合移植组(脂肪干细胞和颗粒脂肪)。2个移植组分别将颗粒脂肪细胞悬液及脂肪干细胞和颗粒脂肪混匀后细胞悬液注射到小鼠腹背左右肩胛处；对照组注射等量的细胞基础培养液。4周后，分离血浆及取出移植物进行指标检测。
结果与结论：①混合移植组能显著性的增加移植物的质量，降低移植脂肪的吸收率，相对于颗粒脂肪移植组差异有显著性意义(P < 0.01)；②移植后血浆中血管内皮细胞生长因子相对于对照组明显提升，其中混合移植组高于颗粒脂肪移植组(P < 0.01)；③颗粒脂肪移植组碱性成纤维细胞生长因子的含量明显低于相混合移植组；④混合移植组微血管密度显著高于颗粒脂肪移植组(P < 0.01)；⑤动物移植物中的细胞形态较单纯颗粒脂肪细胞完好；⑥混合移植组的脂肪油滴的数目明显多于颗粒脂肪移植组；⑥结果提示，脂肪干细胞能够显著性提高碱性成纤维细胞生长因子的表达，改善移植物的微循环，显著改善颗粒脂肪细胞的形态和功能。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0001-7793-300X(赵雪莲)

关键词: 干细胞, 脂肪干细胞, 颗粒脂肪移植, 微血管密度

Abstract:

BACKGROUND: There are a lot of adipose-derived stem cells in the vascular stroma. These cells are shown to play a very important role in the fat granule transplantation.
OBJECTIVE: To explore the role of adipose-derived stem cells in the fat granule transplantation.
METHODS: Normal adipose tissues were obtained from 10 male BALB/C mice, SPF grade. Adipose-derived stem cells and fat granules were extracted from the abdominal fat tissues. Another 24 nude mice acted as recipients and were assigned into control, fat granule transplantation or mixed transplantation (adipose-derived stem cells+fat granules) groups. In the latter two groups, fat granule suspension and suspension of fat granules and adipose-derived stem cells were injected into the shoulder of rats, respectively. In the control group, the same volume of cell medium was injected. Four weeks later, separated plasma and grafts were taken out for indicator measurement.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the fat granule transplantation group, the mixed transplantation could remarkably increase the weight of grafts, while reduce the absorption of grafted fat tissues (P < 0.01). After transplantation, the highest level of vascular endothelial growth factor in the plasma was obtained in the mixed transplantation group followed by fat granule transplantation group and control group (P < 0.01). Level of basic fibroblast growth factor and microvessel density were significantly higher in the mixed transplantation group than the fat granule transplantation group (P < 0.01). Better cell morphology and higher number of fat droplets were found in the mixed transplantation group compared with the fat granule transplantation group. All these results indicate that adipose-derived stem cell transplantation can remarkably promote the expression of basic fibroblast growth factor, improve graft microcirculation, and improve morphology and function of fat granules.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Stem Cells, Transplantation, Vessels, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

赵雪莲，张春莉，苏晓光，张卓男，韩朋，张洁，王艳玲，张锤. 脂肪干细胞在颗粒脂肪移植中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(41): 6105-6111.

Zhao Xue-lian, Zhang Chun-li, Su Xiao-guang, Zhang Zhuo-nan, Han Peng, Zhang Jie, Wang Yan-ling, Zhang Chui. Role of adipose-derived stem cells in the fat transplantation[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2016, 20(41): 6105-6111.

图/表（结果） 2

2.1 实验动物数量分析 实验选用受体裸鼠24只，分为3组，实验过程中无脱失，全部进入结果分析。

2.2 移植后裸鼠一般状况 在实验观察期间动物各项活动和状态较为良好，未出现较严重的不良情况产生，总体动物饮食，活动受移植物的影响较小。

2.3 脂肪干细胞和颗粒脂肪细胞形态观察 见图1。实验中发现脂肪干细胞在分离之后，细胞呈现长梭形如图1A所示，在培养传代之后逐渐转变为梭形细胞；颗粒脂肪分离之后，细胞呈现椭圆形的细胞形态(图1B)，在细胞周围散布很多脂肪油滴小点，细胞形态多不相同。

2.4 移植后动物体质量和移植物的质量变化 所有动物称质量数据均为采取禁食措施，各项数据均能真实反映动物的体质量变化。

由表1可以发现实验进行过程中动物的整体体质量有一定的下降趋势，其中2个移植组相对于对照组体质量出现一定程度的下降，无统计学意义。实验结束时，取出移植物的质量相差较大，颗粒脂肪移植组相比对照组有较大的差异，差异有显著性意义(P < 0.01)。混合移植组的移植物质量明显高于颗粒脂肪移植组，并且差异有显著性意义(P < 0.01)。

2.5 血浆中血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的变化 研究测定血浆中血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的水平，采用ELISA的试验方法测定血浆中微量生长因子水平，相关数据见表2。

由表2可以发现，移植后动物血浆中血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子均明显高于对照组(P < 0.05)，其中混合移植组相对于颗粒脂肪移植组和对照组均能显著性的提高血浆中血管内皮生长因子水平，差异有显著性意义(P < 0.01)；另外混合移植组与颗粒脂肪移植组比较，差异有显著性意义(P < 0.01)。

2.6 微血管密度的水平 见表3。

由表3可以看出动物在移植后混合移植组移植物中微血管密度明显高于颗粒脂肪移植组，差异有显著性意义(P < 0.01)，微血管密度上升提示脂肪干细胞移植能够显著性增加脂肪组织中微血管的数目，改善移植物的营养供应，提升脂肪细胞的存活率。

2.7 苏木精-伊红染色和油红O染色观察裸鼠移植物脂肪组织周围的油滴数目及细胞形态结果见图2。

由图2可以发现油红O染色之后动物的脂肪组织中的油滴数目呈现明显的不同，其中混合移植组明显的增加了脂肪组织周围的油滴数目及颜色，提示动物脂肪细胞的功能较为完好。苏木精-伊红染色后能够发现细胞形态发生了一定的转变，颗粒脂肪移植组的细胞边界模糊，细胞不规则排列，混合移植组细胞明显清晰可见，细胞形态要好于颗粒脂肪移植组。

参考文献

[1] 贾玉磊, 人脂肪干细胞协同颗粒脂肪移植的实验研究[D].河北医科大学,2014.
[2] 周紫微,赵宇.脂肪干细胞研究进展与应用前景[J]. 安徽医科大学学报, 2013,(7): 846-849.
[3] 田霖,孙筱放,刘海波,等.人脂肪干细胞的分离培养与生物学特性[J].中国组织工程研究, 2012,16(32): 5946-5952.
[4] 徐婷,吴慧玲, 自体颗粒脂肪移植存活率的研究进展(综述)[C].2012年浙江省美容与整形学术年会暨私营美容机构行业论坛, 温州:2012.
[5] Sun W, Ni X, Sun S, et al.Adipose-Derived Stem Cells Alleviate Radiation-Induced Muscular Fibrosis by Suppressing the Expression of TGF-beta1. Stem Cells Int. Stem Cells Int. 2016;2016:5638204.
[6] Heo JS, Choi Y, Kim HS,et al.Comparison of molecular profiles of human mesenchymal stem cells derived from bone marrow, umbilical cord blood, placenta and adipose tissue. Int J Mol Med.2016; 37(1):115-125.
[7] Ozpur MA, Guneren E, Canter HI,et al.Generation of Skin Tissue Using Adipose Tissue-Derived Stem Cells. Plast Reconstr Surg.2016;137(1): 134-143.
[8] Zhang J, Bai X, Zhao B, et al.Allogeneic adipose-derived stem cells promote survival of fat grafts in immunocompetent diabetic rats. Cell Tissue Res. 2016;364(2):357-367.
[9] 冯有支,雷岳崇,谭赵云,等.自体颗粒脂肪移植在合并多种畸形的重睑修复中的应用[J].中国美容医学, 2012,21(11): 1470-1471.
[10] 黄金龙,徐妍,闻可,等.脂肪干细胞辅助颗粒脂肪移植在隆乳术中的应用[C]. 2012全国中西医结合医学美容学术交流大会,成都. 2012.
[11] Petersen GF, Hilbert BJ, Trope GD,et al.Direct Conversion of Equine Adipose-Derived Stem Cells into Induced Neuronal Cells Is Enhanced in Three-Dimensional Culture. Cell Reprogram. 2015; 17(6):419-426.
[12] Sheykhhasan M, Qomi RT, Ghiasi M. Fibrin Scaffolds Designing in order to Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells Differentiation to Chondrocytes in the Presence of TGF-beta3. Int J Stem Cells.2015;8(2): 219-227.
[13] Mehrabani D, Babazadeh M, Tanideh N, et al.The Healing Effect of Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells in Full-thickness Femoral Articular Cartilage Defects of Rabbit. Int J Organ Transplant Med. 2015; 6(4):165-175.
[14] Tang XB, Dong PL, Wang J, et al.Effect of autologous platelet-rich plasma on the chondrogenic differentiation of rabbit adipose-derived stem cells. Exp Ther Med. 2015;10(2):477-483.
[15] Yao W, Hu Q, Ma Y, et al. Human adipose-derived mesenchymal stem cells repair cisplatin-induced acute kidney injury through antiapoptotic pathways. Exp Ther Med. 2015;10(2):468-476.
[16] Mohammadpour H, Pourfathollah AA, Nikougoftar Zarif M, et al.Increasing proliferation of murine adipose tissue-derived mesenchymal stem cells by TNF-alpha plus IFN-gamma. Immunopharmacol Immunotoxicol. 2016;38(2):68-76.
[17] Razavi S, Khosravizadeh Z, Bahramian H, et al. Changes of neural markers expression during late neurogenic differentiation of human adipose-derived stem cells. Adv Biomed Res. 2015;4:209.
[18] Horikoshi-Ishihara H, Tobita M, Tajima S, et al. Coadministration of adipose-derived stem cells and control-released basic fibroblast growth factor facilitates angiogenesis in a murine ischemic hind limb model. J Vasc Surg. 2015 Nov 17. pii: S0741-5214(15)02013-3.
[19] 孙哲.脂肪干细胞与碱性成纤维细胞生长因子在颗粒脂肪移植中应用的研究进展[J].医学综述, 2012,18(15): 2401-2403.
[20] 刘世宇,陆伟,张晓军,等.脂肪干细胞和纤维蛋白胶快速构建人工皮肤修复创面的研究[J].实用口腔医学杂志, 2009, 5(6):769-773.
[21] 王克明,栾杰,穆兰花,等.提高自体颗粒脂肪移植成活率的研究进展[J]. 组织工程与重建外科杂志, 2007,3(6): 353-355.
[22] 雷华,李青峰.脂肪干细胞的研究进展[J].中华整形外科杂志,2003,19(6): 64-65.
[23] Razavi S, Razavi MR, Ahmadi N, et al.Estrogen treatment enhances neurogenic differentiation of human adipose derived stem cells in vitro. Iran J Basic Med Sci. 2015;18(8):799-804.
[24] Ha KY, Park H, Park SH, et al.The Relationship of a Combination of Human Adipose Tissue-Derived Stem Cells and Frozen Fat with the Survival Rate of Transplanted Fat. Arch Plast Surg.2015;42(6): 677-685.
[25] 李晶.湿性脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪移植填充颜面部凹陷的疗效观察[D]. 重庆医科大学,2013.
[26] 闫俊灵,狄国虎,丁红,等.脂肪干细胞介导的自体脂肪移植隆胸[J].中国组织工程研究, 2013,17(5): 878-885.
[27] 李越, 梁杰,张培华.自体颗粒脂肪移植在矫治面部老化中的应用[J]. 广东医学院学报, 2012,30(1):28-30.
[28] 刘乃军,黄金井, 脂肪干细胞辅助自体颗粒脂肪移植术研究进展[J].中国美容医学, 2012,21(9): 1451-1454.
[29] Koh YG, Kwon OR, Kim YS, et al.Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells With Microfracture Versus Microfracture Alone: 2-Year Follow-up of a Prospective Randomized Trial. Arthroscopy. 2016;32(1):97-109.
[30] Aboul-Fotouh GI, Zickri MB, Metwally HG, et al. Therapeutic Effect of Adipose Derived Stem Cells versus Atorvastatin on Amiodarone Induced Lung Injury in Male Rat. Int J Stem Cells.2015;8(2):170-180.
[31] Chen Y, Dahai H, Zhao Z, et al.[Effects of adipose-derived mesenchymal stem cells over-expressing glial cell line-derived neurotrophic factor on electrically injured sciatic nerve of rats]. Zhonghua Shao Shang Za Zhi.2015;31(3):199-204.
[32] Weimin P, Zheng C, Shuaijun J, et al.Synergistic enhancement of bone regeneration by LMP-1 and HIF-1alpha delivered by adipose derived stem cells. Biotechnol Lett. 2016;38(3):377-384.
[33] Yun SP, Lee MY, Ryu JM, et al.Role of HIF-1alpha and VEGF in human mesenchymal stem cell proliferation by 17beta-estradiol: involvement of PKC, PI3K/Akt, and MAPKs. Am J Physiol Cell Physiol.2009;296(2): C317-26.
[34] Gu A, Tsark W, Holmes KV, et al.Role of Ceacam1 in VEGF induced vasculogenesis of murine embryonic stem cell-derived embryoid bodies in 3D culture. Exp Cell Res. 2009; 315(10):1668-1682.
[35] Das H, George JC, Joseph M, et al. Stem cell therapy with overexpressed VEGF and PDGF genes improves cardiac function in a rat infarct model. PLoS One.2009; 4(10):e7325.
[36] Zisa D, Shabbir A, Suzuki G,et al.Vascular endothelial growth factor (VEGF) as a key therapeutic trophic factor in bone marrow mesenchymal stem cell-mediated cardiac repair. Biochem Biophys Res Commun.2009;390(3):834-838.
[37] Guo X, Lian R, Guo Y, et al. bFGF and Activin A function to promote survival and proliferation of single iPS cells in conditioned half-exchange mTeSR1 medium. Hum Cell.2015;28(3):122-132.
[38] An SS, Jin HL, Kim KN,et al.Neuroprotective effect of combined hypoxia-induced VEGF and bone marrow-derived mesenchymal stem cell treatment. Childs Nerv Syst.2010; 26(3): 323-331.
[39] Sun J, Sha B, Zhou W, et al.VEGF-mediated angiogenesis stimulates neural stem cell proliferation and differentiation in the premature brain. Biochem Biophys Res Commun.2010;394(1):146-152.
[40] Lee YB, Polio S, Lee W, et al.Bio-printing of collagen and VEGF-releasing fibrin gel scaffolds for neural stem cell culture. Exp Neurol.2010;223(2):645-652.
[41] Deng ZG, B Li, Zu C.[The effect of allogenic hematopoietic stem cell transplantation on tumor recurrence and metastasis of hepatocellular carcinoma after hepatectomy and the relationship with presence of AFP mRNA and VEGF-C mRNA in peripheral blood]. Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban.2010;41(2): 256-260.
[42] Xie JX, Feng Y, Yuan JM, et al.Positive effects of bFGF modified rat amniotic epithelial cells transplantation on transected rat optic nerve. PLoS One.2015; 10(3): e0119119.
[43] Yujuan T, Shaoquan C, Zaizhong Z, et al.[Effect of propranolol gel on plasma VEGF, bFGF and MMP-9 in proliferating infantile hemangiomas of superficial type]. Zhonghua Zheng Xing Wai Ke Za Zhi.2015; 31(4): 268-273.
[44] Huat TJ, Khan AA, Abdullah JM, et al.MicroRNA expression profile of bone marrow mesenchymal stem cell-derived neural progenitor by microarray under the influence of EGF, bFGF and IGF-1. Genom Data.2015; 5:201-205.
[45] Zhengcai-Lou, Zihan-Lou, Yongmei-Tang. Comparative study on the effects of EGF and bFGF on the healing of human large traumatic perforations of the tympanic membrane. Laryngoscope. 2016;126(1): E23-28.

引言

材料方法

1.1 设计 随机对照动物实验研究。

1.2 时间及地点 2014年7月至2015年8月在河北医科大学第二医院实验室完成。

1.3 材料

1.3.1 试剂、耗材、仪器 胎牛血清、DMEM/F12培养液(美国gibco公司)；胰岛素、双抗、谷氨酰胺(美国sigma公司)；荧光倒置显微镜(日本OLYMPUS公司)；苏木精-伊红、油红等染料(浩玛生物科技有限公司)；血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的ELISA试剂盒(上海绿叶生物科技有限公司)；胶原蛋白酶、胰酶(上海伟进生物科技有限公司)；SP试剂盒，二抗，一抗等(联科生物有限公司)。

1.3.2 实验动物 雄性SPF级BALB/C小鼠10只，体质量(20±2) g；SPF级裸鼠24只，体质量(15±2) g，购自河北省实验动物中心。所有动物均饲养在SPF级的动物房中，温度为(25±1) ℃，相对温度为40%-60%。所用动物标准饲料均经过⁶⁰Co放射灭菌。

1.4 实验方法

1.4.1 脂肪干细胞的分离提取 实验操作均需要在高标准的无菌洁净室中完成，取正常的BALB/C小鼠，麻醉处死，取出腹部白色脂肪组织，使用适量的PBS进行冲洗后将脂肪剪碎成1.0-2.0 mm的大小，加入0.075%的Ⅰ型胶原蛋白酶溶液^[15-16]，上述溶液的基质为PBS，待消化好以后以600 r/min的离心转速离心15 min。轻轻吸弃上层液体，将下层提取物用PBS再洗1次，重复上述操作，最后将其重悬于低糖DMEM为基础的完全培养基中(含有体积分数10%-12%胎牛血清、1%的双抗、100 U/mL的胰岛素等)^[17-18]，接种于培养瓶中培养在37℃、体积分数5%CO₂的培养环境中，接种24 h后观察细胞状态，半换液。待细胞生长状况较好的时候，正常换液传代，传代2次后，进行脂肪干细胞移植。

1.4.2 颗粒脂肪分离^[19] 取出正常的BALB/C小鼠的腹部脂肪细胞，将其洗净后剪碎至0.5-1.0 mm大小，将其放入DMEM/F12中以1 000 r/min离心5 min，弃上清再度混悬即得到脂肪细胞颗粒。

1.4.3 动物分组及处理 取正常的BALB/C小鼠10只，按照以上方法分离脂肪干细胞和颗粒脂肪，将脂肪干细胞和颗粒脂肪按照一定的比例混合后移植到裸鼠的皮下组织中。本实验拟开展3个实验组，将24只裸鼠随机平均分配到3个处理组中，每组8只动物，分别为对照组；颗粒脂肪移植组和脂肪干细胞+颗粒脂肪移植组(混合移植组)。

1.4.4 移植方法 实验中将移植物分别注射到每只动物的腹背左右肩胛处的皮下组织中，注射深度为2.0-3.0 mm。对照组注射等量的干细胞培养液DMEM/F12。实验开始前将动物用水合氯醛麻醉，脂肪干细胞和颗粒脂肪按照不同的计量单位进行注射，取5 mL脂肪干细胞的细胞悬液(细胞浓度1×10⁹ L^-¹)和5 g的颗粒脂肪混匀后，得到脂肪干细胞和颗粒脂肪的混合物，混合物中干细胞的浓度为5×10⁸ L^-¹，每只动物注射1 000 mg的悬液，左右各500 mg移植物。同时颗粒脂肪单独移植组在相同位置各注射500 mg的颗粒脂肪。注射时注意注射速度要控制在0.5 mL/min，注射时保证移植物准确的注射到动物的皮下组织中，移植完成后，观察动物的状态，待动物苏醒后称质量记录，移植后每周测定一次动物体质量和观察动物移植处的变化情况。

1.4.5 移植后动物处理 ①注射移植后观察动物的每次状况，每周测定动物的体质量情况，观察有无异常情况出现；②实验观察4周，实验结束动物全部麻醉取血，3 000 r/min离心15 min，分离血浆，用于测定相关生化指标；③将肩胛处的移植物取出，分离包膜和相粘连的结缔组织，观察各组移植物的形态有无差异，并称质量记录；④用体积分数4%的甲醛固定48 h后石蜡包埋切片后做CD31免疫组织化学实验、苏木精-伊红染色和油红O染色观察脂肪颗粒的形态和微血管密度估算；⑤血浆用于ELISA试剂盒测定血浆中血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子水平。

微血管密度的估算：采用CD31对脂肪细胞进行标记，其中的微血管密度则使用CD31的表达量表示，石蜡包埋的切片为3.0-4.0 μm经过脱蜡处理，水化和抗原修复，在常温的条件下孵育一抗2 h，4 ℃过夜，兔源二抗标记后在37 ℃的水浴锅中孵育60 min，PBS冲洗2次，再用DAB显色剂染色，室温自来水冲洗终止显色，苏木精复染、温水冲洗、烘干、中性树胶封固^[20-22]。

根据文献报道研究^[23-24]，脂肪细胞中的微血管数目的计算：任何与周围微血管、其他结缔组织分界清楚的被标记的单个细胞或细胞丛都作为独立可计数的微血管，在计数过程中，不考虑官腔和红细胞的存在。在低倍镜及下寻找脂肪细胞中的微血管密集区域进行计数。由计数软件通过显微镜在高倍镜下采集计数区域图像，然后按照计数规则对标记的可代表微血管存在的细胞或者细胞丛进行计数。将所有计数面积区域的实际大小调整为为1 mm×1 mm，选择3个计数区域中的最高值的平均值代表这只动物的脂肪移植物中的微血管数。

1.5 主要观察指标 ①脂肪干细胞和颗粒脂肪细胞形态观察；②移植后动物体质量和移植物的质量变化；③血浆中血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的变化；④微血管密度的水平；⑤苏木精-伊红染色和油红O染色观察裸鼠移植物脂肪组织周围的油滴数目及细胞形态结果。

1.6 统计学分析 研究的数理统计分析均使用SPSS 18.0软件，所有数据均采用x(_)±s表示。使用的统计学方法主要是方差齐性使用配对t 检验，方差不齐采用秩和检验。P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

颗粒脂肪移植技术是替代传统移植填充物的新型手术治疗方法，被广泛的应用于美容整形烧烫伤等方面^[9^，^25-28]。临床上多采用自体脂肪细胞移植来消除免疫排斥等不良反应，但是在移植的过程中发现，颗粒脂肪移植后形成坏死^[29]、炎症以及高比率的脂肪吸收等现象，提示在颗粒脂肪移植后的整体能量供给出现了问题，血液微循环不足造成脂肪的流失的主要原因^[11]。

脂肪干细胞是一种能够大量获取、具有多种分化潜质的多功能细胞，脂肪干细胞具有易获取，低免疫原性、组织相容性好以及抗击凋亡等特点^[30]，被广泛的应用于各项研究中。脂肪干细胞被认为能在多方面协助移植物，其中主要包括：①移植后部分脂肪细胞出现死亡等消亡情况，脂肪干细胞会分化成颗粒脂肪细胞，进而对细胞形成补充，较少脂肪的吸收溶解；②移植后在短期内移植物处于缺氧缺营养支撑时期，脂肪干细胞可以促进血管生成因子的释放，进而促进血管再生，恢复移植物的供养情况提高脂肪的成活率^[31-32]；③同时脂肪干细胞也具有自我恢复存活的功能，增加了移植物的自我修复和减少脂肪吸收。另外有研究表明，脂肪干细胞具有在缺氧的情况，继续发挥细胞生物学功能，是一种很强生命力的干细胞种群。

研究主要探讨了脂肪干细胞在颗粒脂肪移植中的作用，采用对比分析的试验方法，在24只裸鼠上设置3个组别分别为对照组、颗粒脂肪移植组、颗粒脂肪+脂肪干细胞移植组，通过测定血浆中血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的水平、估算微血管密度、苏木精-伊红染色结合油红O染色等手段，探究脂肪干细胞在颗粒脂肪移植中的作用，实验结果显示，脂肪干细胞具有很强的促进脂肪细胞成活率、减少脂肪吸收率、改善移植物的血液微循环、促进脂肪细胞功能等方面的作用。同时试验中发现混合移植组因为加入了脂肪干细胞，造成血浆中血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子水平显著高于单纯颗粒脂肪移植组，血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子被认为是在脂肪移植的过程中发挥着关键作用的2种细胞因子^[33-37]，血管内皮生长因子主要是与机体内血管内皮生长因子受体2的受体相结合，促进血管生成，由血管内皮生长因子受体2受体介导的血管生成可以促进血管内皮细胞的增殖以及细胞迁移，进而诱导血管的再生，并且增加血管的通透性，促进新生血管网的重建，使得移植脂肪组织得到更充足的血供，从而提高移植脂肪组织的存活率，并且降低移植脂肪组织的吸收率^[38-41]。另外有研究表明，碱性成纤维细胞生长因子是对血管形成和再生有促进作用的生长因子^[42]，活化各种修复细胞，既作用于内皮细胞趋化因子，同时促进内皮细胞的分裂，因此具有强烈的促进前脂肪细胞增殖分化及心血管形成的作用^[43]，在脂肪移植的早期可为移植的脂肪提供良好的血供，极大缩短组织的缺血时间，进而降低组织由于缺血而造成的坏死，增加存活率，在后期可减少移植脂肪的吸收率，以获得稳定的手术效果^[44-45]。

研究中发现，移植4周后观察移植物的重量发现颗粒脂肪移植组相对于混合移植组的移植物的重量明显下降(P < 0.01)，提示脂肪干细胞能显著提高脂肪细胞的存活率和降低脂肪细胞的吸收率。在微血管密度的测定结果中发现颗粒脂肪移植组相对于混合移植组的微血管密度明显下降(P < 0.01)，提示脂肪干细胞能显著性的提升移植物中微循环，改善血供提高移植物的存活。在油红O染色中也可以得到相同的印证。研究结果显示在脂肪干细胞移植的过程中能够显著的改善移植物的微循环和提高促血管生成因子的释放，进而促进了脂肪细胞的生成和提高脂肪移植的存活率。