脂肪干细胞移植对Duchenne型肌营养不良症鼠神经肌肉再生单位的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.19.016

中国组织工程研究 ›› 2015, Vol. 19 ›› Issue (19): 3042-3048.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.19.016

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脂肪干细胞移植对Duchenne型肌营养不良症鼠神经肌肉再生单位的影响

孔杰^1，2，操基清¹，杨娟¹，陈菲¹，李亚勤¹，黄汝成²，金远林²，张成¹

¹中山大学第一附属医院神经科，广东省广州市 510080；²广州中医药大学附属宝安区中医院脑病科，广东省深圳市 518133

出版日期:2015-05-06 发布日期:2015-05-06
通讯作者: 张成，教授，博士生导师，中山大学第一附属医院神经科，广东省广州市 510080
作者简介:孔杰，男，1980年生，安徽省合肥市人，汉族，2012年中山大学毕业，博士，主要从事干细胞移植治疗神经遗传性疾病的研究。

Effect of adipose stem cell transplantation on the neuromuscular regeneration unit of Duchenne muscular dystrophy mice

Kong Jie^{1, 2}, Cao Ji-qing¹, Yang Juan¹, Chen Fei¹, Li Ya-qin¹, Huang Ru-cheng², Jin Yuan-lin²,Zhang Cheng¹

¹Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China; ²Department of Encephalopathy, Baoan District Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou University of Chinese Medicine, Shenzhen 518133, Guangdong Province, China

Online:2015-05-06 Published:2015-05-06
Contact: Zhang Cheng, Professor, Doctoral supervisor, Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China
About author:Kong Jie, M.D., Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, Guangdong Province, China; Department of Encephalopathy, Baoan District Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou University of Chinese Medicine, Shenzhen 518133, Guangdong Province, China

摘要/Abstract

摘要：

背景：目前，Duchenne型肌营养不良症尚无有效治疗方法，之前的研究表明基因治疗和干细胞移植治疗是可能的“治愈”方法。实验拟将两者结合起来，在动物模型上观察其疗效，并验证之前提出的神经肌肉再生单位的假说。
目的：探讨脂肪干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症的有效性和可行性，观察细胞移植对肌纤维、新生血管及神经末梢的影响。
方法：体外分离培养mdx鼠脂肪干细胞，经杆状病毒基因载体进行基因修饰，用于移植治疗Duchenne型肌营养不良症模型鼠。移植后检测实验动物的血清肌酸激酶水平、肌肉病理改变及肌肉内dystrophin表达；免疫荧光检测细胞移植后血管、肌肉和神经再生情况。
结果与结论：细胞移植后，能够重建模型鼠的dystrophin表达，一定程度上减轻并逆转肌肉的病理损害，进而降低血清激酸激酶水平；此外，细胞移植后能够形成干细胞来源的肌纤维、血管内皮细胞和神经末梢。这些证据表明，脂肪干细胞移植是有希望治疗Duchenne型肌营养不良症的方法之一。

关键词: 干细胞, 移植, 神经肌肉再生单位, Duchenne型肌营养不良症, 脂肪干细胞移植

Abstract:

BACKGROUND: Currently, there is no effective treatment for Duchenne muscular dystrophy. Previous studies have shown that gene therapy and stem cell transplantation therapy are possible to be “cure” approaches. Therefore, this study intended to evaluate their efficacy in animal models, and to verify the hypothesis of neuromuscular regeneration unit.
OBJECTIVE: To explore the efficacy and feasibility of adipose stem cell transplantation for Duchenne muscular dystrophy and to observe the effects of cell transplantation on muscle fibers, new vessels and nerve endings.
METHODS: Adipose stem cells from mdx mice were isolated and cultured in vitro, and then modified by recombinant baculovirus followed by implantation into mouse models of Duchenne muscular dystrophy. Serum creatine kinase level, muscle pathological changes and muscle dystrophin expression were detected in experimental animals after transplantation; immunofluorescence staining was used to detect vascular, muscle and nerve regeneration after cell transplantation.
RESULTS AND CONCLUSION: After transplantation, dystrophin expression was found that could reduce and
even reverse the pathological damage of muscles to a certain extent, thereby to reduce the serum level of creatine kinase. In addition, stem cells-derived muscle fiber, vasular endothelial cells and nerve ending were formed after cell transplantation. These evidences domenstrate that adipose stem cell transplantation is one of promising treatments for Duchenne muscular dystrophy.

Key words: Stem Cells, Adipose Tissue, Muscular Dystrophy, Duchenne

中图分类号:

R394.2

孔杰，操基清，杨娟，陈菲，李亚勤，黄汝成，金远林，张成. 脂肪干细胞移植对Duchenne型肌营养不良症鼠神经肌肉再生单位的影响[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(19): 3042-3048.

Kong Jie,, Cao Ji-qing, Yang Juan, Chen Fei, Li Ya-qin, Huang Ru-cheng, Jin Yuan-lin. Effect of adipose stem cell transplantation on the neuromuscular regeneration unit of Duchenne muscular dystrophy mice[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(19): 3042-3048.

图/表（结果） 4

2.1 实验动物数量分析参加实验共有mdx小鼠60只，C57BL/6小鼠30只，因放疗副反应、麻醉意外等原因mdx小鼠共脱落9只，51只mdx小鼠进入结果分析，C57BL/6小鼠共脱落5只，25只C57BL/6小鼠进入结果分析。
2.2 Mdx鼠脂肪干细胞的分离培养及病毒转染脂肪组织经胶原酶消化后，可得到均一乳白色的细胞悬液。培养24 h后细胞完全贴壁，培养3 d后达到增殖高峰，呈集落样生长。传代培养后细胞贴壁和增殖时间明显缩短，细胞呈梭形，突起减少，形态大小较一致，呈成纤维细胞样生长，为束状或漩涡状排列。多次传代后细胞仍能保持旺盛的增殖能力和均一的成纤维细胞样形态学特征。病毒转染后细胞仍呈贴壁生长，比较病毒转染前后细胞生长状态和倍增时间，无明显差别。
2.3 脂肪干细胞移植治疗后mdx鼠血清激酸激酶水平降低 Duchenne型肌营养不良症患者血清激酸激酶水平明显升高，一般升高至正常值的20倍以上。外周血清中激酸激酶含量的多少，一定程度上可以反映肌纤维破坏的程度。在脂肪干细胞移植治疗4，8，12周后处死模型鼠，收集外周血用以检测激酸激酶水平，结果显示，与正常对照组相比较，治疗组外周血中激酸激酶水平随着移植时间的推移逐渐降低，而假治疗组则继续升高(图1)，两组比较差异有显著性意义(P < 0.05)。
2.4 细胞移植后mdx鼠腓肠肌病理损伤减轻正常小鼠的肌肉横切面可见肌细胞大小基本一致，细胞呈多角形，轮廓清晰、完整，肌细胞核位于细胞周边，未见有细胞核中移现象；肌纤维间隙正常，间质无炎细胞浸润，肌束结构完整。Mdx鼠肌纤维横截面肌细胞大小不一，肌纤维失去正常的多角形形态，变成圆形，可见明显萎缩与肥大的肌细胞，细胞间质中炎性细胞浸润，可见肌纤维脂肪化和纤维样变性，核中心移位较为明显(图2)。
细胞移植后，随着时间的推移，肌肉病理损伤有一定的好转。尽管肌细胞仍大小不一、形态各异，可见萎缩和肥大细胞，但相对来说萎缩的细胞逐渐减少，大多肌纤维呈肥大状态。细胞间质中炎性细胞浸润减少，核中心移位现象也有减少趋势(图2)。
镜下计数含有中心移位细胞核的肌纤维和正常肌纤维，可计算出核中心移位肌纤维比例。假治疗组mdx鼠核中心移位肌纤维比例最高，可达60%左右，细胞移植后4，8，12，16周，核中心移位比例逐渐有减少趋势，分别为55.7%，51.3%，48.8%和46.1%(图2)。

2.5 细胞移植后重建mrcro-dystrophin表达随着移植后时间的延长，模型鼠腓肠肌中的mrcro-dystrophin表达越来越多。移植后4周，只看到少量的阳性纤维，大小不均，多为圆形，呈簇状分布，部分mrcro-dystrophin表达不完整。移植后8周，可见阳性纤维呈现明显的肌纤维形态，但大小不一，数量有所增加。移植后12周，阳性纤维数量进一步增加，形态更加典型。移植后16周，可见阳性纤维略呈片状分布，在低倍镜下观察到1只模型鼠表现出大片的阳性纤维聚集(图3)。
在镜下计数mrcro-dystrophin表达阳性和阴性的肌纤维数，计算细胞移植后阳性纤维的比例。结果显示，假治疗组小鼠阳性肌纤维数量小于1%，经细胞移植治疗4周后，肌膜dystrophin阳性纤维数大约占细胞总数的3%，部分肌膜dystrophin染色不连续；移植后8周和12周时，阳性细胞数分别占细胞总数的7%和12%；移植后16周时进一步增多，约为17%，其中有一个样本达到22%(图3)。

2.6 脂肪干细胞移植能够促进肌纤维再生利用GFP作为示踪剂来检测移植细胞促进神经、肌肉再生的情况。分别在细胞移植12，16周后处死mdx鼠，行免疫荧光染色。结果显示干细胞移植后12周，在胫前肌中发现GFP阳性肌纤维，表明有干细胞成分参与形成肌纤维。GFP阳性肌纤维在肌肉中并不是分散分布，大多数呈簇状聚集成群。移植后16周，在腓肠肌纵切面也观察到类似的结果(图4)。在腓肠肌纵切面上进行了GFP和AChR双标记免疫荧光染色，结果发现少量表达绿色荧光的新生肌纤维，同时也表达AchR(图4)。
2.7 脂肪干细胞移植促进新生血管形成应用血管内皮细胞标记——CD34和GFP免疫双标染色，寻找来源于干细胞的血管存在的证据。在移植后16周的模型鼠肌肉组织肌纤维间隙中，发现了由干细胞参与形成的新生微血管(图5)。干细胞移植后12周，在肌肉组织肌束膜间质中，也观察到来源于干细胞的血管形成(图5)。

2.8 脂肪干细胞移植能够形成GFP阳性的神经末梢采用神经微丝(NF)来标记神经纤维，用免疫三标记的方法进行观察，在移植后8周和12周模型鼠中未发现GFP阳性神经末梢。在移植后16周的模型鼠腓肠肌中，发现由干细胞参与形成的神经纤维(图6)，而且能够与肌纤维膜上的乙酰胆碱受体相互接触，进而参与到神经肌肉接头的形成。

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引言

Duchenne型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy，DMD)是一种常见的X连锁隐性遗传病。本病以进行性四肢近端骨骼肌萎缩肌无力为特征，突出表现为骨盆带肌肉无力^[1]。因病情进行性进展，患者全身肌肉逐渐萎缩，慢慢不能站立行走，需长期卧床。Duchenne型肌营养不良症的病因是由于位于Xp2.1的抗肌萎缩蛋白基因(dystrophin gene)突变导致其编码的产物——抗肌萎缩蛋白(dystrophin)缺乏，进而引起肌细胞进行性损害，最终导致肌纤维坏死，肌肉萎缩。目前该病尚无有效治疗方法，患者通常于20-30岁死于呼吸循环衰竭^[2]。
目前，很多研究者都在探索有效治疗Duchenne型肌营养不良症的方法，细胞(尤其是干细胞)移植治疗是目前最有希望治愈Duchenne型肌营养不良症的方法之一。细胞疗法是将正常具有修复功能的细胞移植到患者病变的肌肉组织中，修复并替代病损肌肉组织的治疗方法。理想的细胞治疗策略是：输入的细胞能够在患者体内长期存活并不断更新，同时不断的迁移到受损肌肉组织修复病损的肌纤维。因而具有自我更新、无限扩增且能多向分化的干细胞就成为细胞移植治疗的首选种子细胞。
干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症的研究已经取得了一定进展，输入的干细胞能在宿主体内存活，部分细胞能够迁移到肌肉组织中定植，能够促进肌肉组织的再生，减少肌纤维坏死，这些结果表明，干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症是可行的^[3-5]。然而，目前尚缺乏移植干细胞后形成的再生肌肉能发挥功能的直接证据。
课题组在之前的研究中应用脂肪干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症模型鼠，结果发现细胞移植后出现一定的治疗效应。本实验着重探讨干细胞移植后如何介入肌纤维修复，并提出了神经肌肉再生单位的构想，现总结如下。

材料方法

设计：对比观察研究。
时间及地点：实验主体部分于2011年9月至2013年9月在中山大学第一附属医院神经科实验室完成。
材料：①Duchenne型肌营养不良症动物：8周龄mdx小鼠10只，体质量20 g左右，6月龄SPF级雄性mdx小鼠60只，体质量25-30 g，购于美国Maine州的Jackson实验室。所有实验用鼠均饲养于中山大学实验动物中心SPF级隔离系统。喂养经消毒处理的普通颗粒型饲料和水，12 h光照时间，22-28 ℃常温环境，每周更换垫料2次。②C57BL/6正常鼠：正常雄性C57BL/6小鼠30只，SPF级，6月龄，体质量25-30 g，购于中山大学实验动物中心，饲养条件同上。实验过程中对动物的处置符合2009年《Ethical issues in animal experimentation》相关动物伦理学标准的条例。
实验方法：
mdx鼠脂肪干细胞培养、纯化和扩增：取8周龄mdx鼠，处死后无菌条件下分离皮下脂肪，剪切后胶原酶消化，离心获得原代细胞，在饱和湿度、体积分数为5%CO₂、37 ℃标准环境下培养。多次换液除去未贴壁细胞，待细胞生长铺满瓶底后用胰蛋白酶消化传代培养。
重组杆状病毒转染mdx鼠脂肪干细胞：杆状病毒作为载体携带了micro-dystrophin基因，是最小片段的具备基本功能的dystrophin基因。取生长良好，细胞形态均一的第5代脂肪干细胞进行基因修饰，调整杆状病毒的剂量，使感染复数值为20 pfu/cell。采用常规方法进行转染，倒置荧光显微镜观察细胞表达绿色荧光情况，观察细胞形态和死亡情况。
实验分组：30只C57BL/6正常小鼠作为正常对照组，60只mdx鼠随机分为治疗组和假治疗组，每组30只。治疗组予以尾静脉移植脂肪干细胞，假治疗组和正常对照组予以尾静脉注射等量生理盐水。
mdx鼠放疗预处理和经尾静脉移植脂肪干细胞：所有实验动物均接受60Co伽马射线的照射，目的在于清空实验动物的骨髓，利于移植的干细胞在骨髓中定植。放疗预处理在中山大学附属肿瘤医院进行，照射剂量为6.5 Gy，照射时间为10 s左右。
放疗后24-48 h内开始细胞移植，移植细胞浓度为1×10⁹ L^-1，经尾静脉注射0.2 mL经杆状病毒转染的mdx鼠来源脂肪干细胞悬液，注射过程要缓慢，注射顺利、细胞无外渗为移植成功。
血清中激酸激酶水平检测：在移植后4，8，12周(每个时间点6只小鼠)，采用摘除眼球的方法获取mdx鼠血液，常规生化检测血清中激酸激酶水平。
肌肉病理形态观察和dystrophin蛋白表达水平检测：在细胞移植后4，8，12，16周处死小鼠(每个时间点6只小鼠)，解剖分离小鼠胫前肌、腓肠肌，液氮冷冻固定，冰冻切片后常规苏木精-伊红染色观察肌肉病理形态，免疫荧光染色观察dystrophin蛋白表达。
免疫荧光染色观察细胞移植后有无新生血管、肌肉、神经纤维：利用GFP作为细胞示踪的标记，α-BTX显示乙酰胆碱受体，NF标记神经纤维，CD34显示血管内皮细胞，采用免疫荧光染色的方法观察细胞移植能否形成干细胞来源的血管、肌肉和神经纤维，以及上述3种结构之间的关系。
主要观察指标：①细胞移植后血清激酸激酶水平、肌肉病理形态及dystrophin蛋白表达水平。②细胞移植后血管、肌肉和神经再生情况。
统计学分析：使用SPSS 19.0进行数据统计分析，血清肌酸激酶水平和肌细胞核中移比例数据均采用t 检验， P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

3.1 脂肪干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症的可行性干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症具有先天的优势，肌细胞在发育过程中是由多个细胞融合形成的多核巨细胞，当成熟的肌纤维受损后，其修复方式是由肌肉组织中的成肌细胞(具有干细胞特性)与受损肌纤维融合来完成的。当体内再生修复的能力不能抵抗肌纤维的持续受损后，Duchenne型肌营养不良症患者才表现出明显的临床症状。理论上来说，只要有源源不断的携带有正常dystrophin基因的干细胞融合到受损肌纤维中，完全可能重建dystrophin表达并修复肌纤维损伤。目前认为干细胞移植是最有希望治愈Duchenne型肌营养不良症的方法。
近年来，细胞移植成为多种难治性疾病的潜在治疗方法，而选择一种合适的种子细胞至关重要。已研究发现的能够用于细胞移植的种子细胞有很多种，脂肪干细胞因其来源丰富，获取简单，体外增殖能力强，体内外具有多向分化潜能，是再生医学研究理想的种子细胞^[6-7]。
研究表明，脂肪干细胞在体外具有多向分化能力，能够分化为肌管[8]。将正常人来源的脂肪干细胞与Duchenne型肌营养不良症患者来源的成肌细胞共培养后，发现两种细胞能够融合，并形成dystrophin阳性的肌管[9]。而将正常人的脂肪干细胞与Duchenne型肌营养不良症患者的肌管共培养也显示脂肪干细胞能够融合入肌管，并重建患者肌管的dystrophin表达^[10]。这些实验表明脂肪干细胞既能够互相融合形成肌管，又能够融入已经存在的肌纤维，是相当有潜力的用于移植治疗Duchenne型肌营养不良症的种子细胞。
在之前的研究中，课题组已经验证来源于正常小鼠的脂肪干细胞取材方便，容易纯化，增殖能力强，具有成骨、成脂、成肌、成神经元、成内皮细胞等多向分化潜能。细胞增殖到第20代仍未发现有明显的细胞老化和增殖减慢的现象，容易获得临床治疗所需的细胞数量。这些结果都表明，脂肪干细胞是良好的用于移植治疗Duchenne型肌营养不良症的选择之一。
在实验中主要从血清激酸激酶水平、肌肉病理改变和dystrophin表达来评价细胞移植后是否有疗效。结果发现经尾静脉移植干细胞后，细胞能够迁移到肌肉组织中，重建肌纤维dystrophin表达和减轻肌肉病理损伤，进而使血清激酸激酶水平下降。这些结果和之前的研究结果相符[11-12]，表明脂肪干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症动物模型是有效的和可行的。而且，最长的观察时间是4个月，仍然有症状改善的表现，对于自然寿命只有2年不到的小鼠来说，干细胞移植的疗效可以认为是长期存在的。
3.2 脂肪干细胞移植后参与肌肉、血管、神经的再生各种组织在受到损伤之后，都会出现修复，这个过程一般称之为组织再生。越是分化程度低的组织，其再生能力越强。干细胞因其强大的自我更新和多向分化能力，是机体再生的重要组成部分。如上所述，脂肪干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症后，肌肉组织也出现一定程度的再生。但是细胞移植后的再生并不是单纯的肌纤维损伤修复，而是包括肌肉、血管和神经在内的复杂过程。
在实验研究中，利用GFP进行细胞示踪，来观察干细胞进入机体后的情况。结果显示，来源于干细胞的肌纤维(GFP阳性)多呈簇状分布，与dysrtophin阳性纤维分布类似。在纵切面染色中，GFP阳性的肌纤维也呈现出簇状分布的斑片状绿色荧光，部分干细胞来源的肌纤维可表达完整的乙酰胆碱受体，提示修复后的肌纤维具备接受神经纤维支配并发挥收缩功能的能力。
其他成体间质干细胞的研究也支持作者的观点^[13-14]。骨髓间充质干细胞移植治疗放疗后小鼠的结果表明，移植治疗2周后在胫前肌检测到来自供体的细胞核，并且供体细胞核大多位于新生肌纤维中央或是成熟肌纤维周边，提示外源的细胞经历了漫长的分化过程，最终分化并融入发生变性的肌纤维。这些研究结果表明，干细胞直接分化或是融合入受损肌纤维是细胞移植后肌肉再生的重要方式，是促进肌肉再生的主要因素。
良好的血液供应是维持组织结构和功能的基本要求，当血供不足时会加重已经存在的炎性损伤。已有研究表明脂肪干细胞就是来源于脂肪组织中血管壁成分，天然具有向血管内皮细胞分化，促进新生血管形成，改善血供的能力^[15-16]。在本实验中也观察到干细胞来源形成的新生血管，表明细胞移植后能够促进血管生成，改善肌肉组织的血液循环。此外，发现干细胞来源的血管多为肌纤维间隙中的微血管，很少参与到较大的动脉，意味着细胞移植对整块肌肉的血供可能影响不大，但是对微循环的改善作用较为明显。
课题组在之前的研究中发现，脂肪干细胞在体外多种诱导条件的作用下，可以分化为神经元和神经胶质细胞[17]。在脂肪干细胞移植治疗运动神经元病的实验研究表明，经脑室植入的细胞能迁移到脊髓中并分化为神经元^[18]。这些研究结果都提示，尽管神经再生一直是再生医学的难点所在，但经静脉移植的脂肪干细胞有可能形成神经纤维进而支配肌肉组织。而干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症后，新生的肌纤维必须有神经的支配才能够收缩进而发挥功能。在这些研究基础之上，推测移植的干细胞可能形成神经纤维参与到上述过程中。为此，用GFP作为外源性干细胞的标记，神经微丝作为神经末梢的标记，在肌肉中寻找来源于干细胞的神经纤维。结果显示，在细胞移植后16周的肌肉中，有少数神经纤维呈GFP阳性表达，意味着这些神经纤维由植入的干细胞参与形成。尽管观察到的干细胞来源的神经纤维较少，但是仍然提示神经再生也是干细胞移植后发挥功能的重要原因之一。

脂肪干细胞移植后Duchenne型肌营养不良症模型鼠肌肉再生修复并不仅仅是肌纤维的再生，而是包括了肌纤维、神经末梢和血管的复杂过程。其中，肌纤维再生是促进肌肉修复的直接因素；新生血管形成为肌肉再生提供了良好的血液供应和微循环环境；而神经末梢的再生是修复的肌纤维能够产生收缩进而发挥功能的重要保证。
3.3 神经肌肉再生单位的概念和结构研究发现干细胞移植后的肌肉再生修复并不是分散在整块肌肉进行，而是集中在某些干细胞聚集的区域。在这些区域中，不仅仅有簇状分布的dystrophin阳性肌纤维，还包括神经末梢和新生血管。在这些实验结果的基础上，作者提出一个假设，认为脂肪干细胞移植后的肌肉再生不仅仅是单纯的肌纤维再生，而是以“神经肌肉再生单位”的形式进行。
所谓“神经肌肉再生单位”，其结构是：一簇由干细胞移植后形成的再生的肌纤维，逐渐成熟后呈dystrophin阳性并表达乙酰胆碱受体；支配这簇肌纤维的新生神经纤维(可能有植入的干细胞参与)来传递神经冲动，使肌纤维能够收缩进而发挥功能；周围有干细胞参与形成的新生血管来营养。这样一个由肌纤维、神经肌肉接头、神经末梢和血管组成的结构，就是作者假设中的神经肌肉再生单位。这一结构可能完全由干细胞分化形成，更大的可能是在机体原有受损结构的基础上经干细胞促进其再生后形成。
综上所述，脂肪干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良症尽管还有很多值得研究和探讨的问题，但是仍然是有希望治愈Duchenne型肌营养不良症的方法之一。对于目前存在的问题加以研究，将推进细胞移植在临床的应用。而且，脂肪干细胞不仅能够应用于治疗Duchenne型肌营养不良症，也可以用于治疗其他的遗传性疾病和难治性肌病，从而为这些目前尚无有效治疗方法的疾病带来新的希望。

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Effect of adipose stem cell transplantation on the neuromuscular regeneration unit of Duchenne muscular dystrophy mice

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