骨髓间充质干细胞条件培养液对瘢痕成纤维细胞生物活性的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.07.005

中国组织工程研究 ›› 2014, Vol. 18 ›› Issue (7): 1009-1014.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.07.005

• 皮肤粘膜组织构建 skin and mucosal tissue construction • 上一篇下一篇

骨髓间充质干细胞条件培养液对瘢痕成纤维细胞生物活性的影响

武艳，张春雷，刘阳，李洪志，于晶，包海花，郭冉，袁晓环

牡丹江医学院，黑龙江省牡丹江市 157011

修回日期:2013-12-12 出版日期:2014-02-12 发布日期:2014-02-12
通讯作者: 袁晓环，博士，教授，硕士生导师，牡丹江医学院医药研究中心，黑龙江省牡丹江市 157011
作者简介:武艳，女，1982年生，黑龙江省牡丹江市人，汉族，博士，讲师，主要从事组织损伤与修复方面的研究。
基金资助:
黑龙江省卫生厅科研课题(2011-291)；牡丹江医学院科学技术研究项目(ZS201302)

Effects of bone marrow mesenchymal stem cell conditioned medium on bioactivity of scar fibroblasts

Wu Yan, Zhang Chun-lei, Liu Yang, Li Hong-zhi, Yu Jing, Bao Hai-hua, Guo Ran, Yuan Xiao-huan

Mudanjiang Medical University, Mudanjiang 157011, Heilongjiang Province, China

Revised:2013-12-12 Online:2014-02-12 Published:2014-02-12
Contact: Yuan Xiao-huan, M.D., Professor, Master’s supervisor, Mudanjiang Medical University, Mudanjiang 157011, Heilongjiang Province, China
About author:Wu Yan, M.D., Lecturer, Mudanjiang Medical University, Mudanjiang 157011, Heilongjiang Province, China
Supported by:
the Heilongjiang Provincial Health Bureau Scientific Research Projects of China, No. 2011-291; Scientic Research Project of Mudanjiang Medical University, No. ZS201302

摘要/Abstract

摘要：

背景：间充质干细胞移植可通过多种调节机制促进皮肤创伤修复，抑制瘢痕形成，目前多数学者认为间充质干细胞分泌的生物活性因子起主要作用。
目的：观察骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞增殖能力及胶原合成的影响。
方法：分离培养人骨髓间充质干细胞和增生性瘢痕成纤维细胞，制备骨髓间充质干细胞条件培养液。将12，24，48 h收集的条件培养液孵育体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞24 h，并与空白对照组比较，采用CCK-8实验检测增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性，Real-time PCR检测增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。
结果与结论：与空白对照组相比较，在24 h和48 h收集的骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用(P < 0.01)，对其胶原的合成也具有显著的抑制作用(P < 0. 01)。结果表明骨髓间充质干细胞条件培养液可通过分泌抗纤维化的生物活性因子抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原产生，为细胞疗法策略减轻瘢痕提供了新的理论支持。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

全文链接：

关键词: 组织构建, 成纤维细胞, 骨髓间充质干细胞, 增生性瘢痕, 瘢痕成纤维细胞, 生物活性因子, 细胞治疗

Abstract:

BACKGROUND: Mesenchymal stem cell transplantation promoted skin repair in trauma via various regulatory mechanisms and inhibited scar formation. At present, many scholars believed that bioactive factors secreted by mesenchymal stem cells played an important role.
OBJECTIVE: To investigate the effects of bone marrow mesenchymal stem cell conditioned medium on the proliferation and collagen synthesis of hypertrophic scar fibroblasts.
METHODS: Human bone marrow mesenchymal stem cells and hypertrophic scar fibroblasts were isolated and cultured, and bone marrow mesenchymal stem cell conditioned medium was prepared. Hypertrophic scar fibroblasts were cultured in vitro with 12, 24, and 48 hour-collected conditioned medium for 24 hours, which was compared with blank control group. The proliferation of cells was determined by CCK-8. Type I and type III collagen expression in hypertrophic scar fibroblasts was detected using real-time PCR.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the blank control group, 24 and 48 hour-collected conditioned medium significantly inhibited the proliferation of hypertrophic scar fibroblasts (P < 0.01), and also suppressed collagen synthesis of hypertrophic scar fibroblasts (P < 0.01). Results suggested that bone marrow mesenchymal stem cell conditioned medium inhibited the proliferation and collagen synthesis of hypertrophic scar fibroblasts by secreting anti-fibrotic bioactive factors, which may provide new theoretical supports for cell therapy to reduce cutaneous scarring.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

全文链接：

Key words: bone marrow, mesenchymal stem cells, culture media, conditioned, cicatrix, fibroblasts, collagen type I, collagen type III, cell proliferation, hydroxyproline

中图分类号:

R318

武艳，张春雷，刘阳，李洪志，于晶，包海花，郭冉，袁晓环. 骨髓间充质干细胞条件培养液对瘢痕成纤维细胞生物活性的影响[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(7): 1009-1014.

Wu Yan, Zhang Chun-lei, Liu Yang, Li Hong-zhi, Yu Jing, Bao Hai-hua, Guo Ran, Yuan Xiao-huan. Effects of bone marrow mesenchymal stem cell conditioned medium on bioactivity of scar fibroblasts[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(7): 1009-1014.

图/表（结果） 1

参考文献

[1] 刘杜鹃,张可佳,丁玉红,等.病理性瘢痕综合治疗的研究进展[J].中国老年学杂志,2013,33(7):1731-1733.

[2] 赵贤忠,孙记燕,葛永亮,等.瘢痕移除原位再生皮肤组织器官的研究[J].中国烧伤创疡杂志,2012,24(4):321.

[3] 张凡,邝捷,潘靖,等.病理性瘢痕的评价与联合治疗方案的选择[J].中国美容医学,2012,21(15):2008-2009.

[4] 王量,李世荣,陶灵,等.增生性瘢痕及瘢痕疙瘩的非手术治疗[J].中国美容整形外科杂志,2012,23(7):437-439.

[5] 黄丽萍,张冷, 胡希军,等.病理性瘢痕的治疗策略[J].临床军医杂志,2012,40(2):487-490.

[6] 刘文阁,金娟娟,张蓉,等.三种注射器注射治疗病理性瘢痕的疗效观察[J].中华医学美学美容杂志,2011,17(4):307-308.

[7] Gurtner GC, Werner S, Barrandon Y,et al.Wound repair and regeneration.Nature. 2008;453(7193):314-321.

[8] Larson BJ, Longaker MT, Lorenz HP.Scarless fetal wound healing: a basic science review.Plast Reconstr Surg. 2010; 126(4):1172-1180.

[9] Timmers L, Lim SK, Arslan F,et al.Reduction of myocardial infarct size by human mesenchymal stem cell conditioned medium.Stem Cell Res. 2007;1(2):129-137.

[10] Li L, Zhang Y, Li Y,et al. Mesenchymal stem cell transplantation attenuates cardiac fibrosis associated with isoproterenol-induced global heart failure.Transpl Int. 2008; 21(12):1181-1189.

[11] Ortiz LA, Gambelli F, McBride C,et al. Mesenchymal stem cell engraftment in lung is enhanced in response to bleomycin exposure and ameliorates its fibrotic effects.Proc Natl Acad Sci U S A. 2003;100(14):8407-8411.

[12] Kim SY, Lee JH, Kim HJ,et al.Mesenchymal stem cell-conditioned media recovers lung fibroblasts from cigarette smoke-induced damage.Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2012;302(9):L891-908.

[13] Jiang T, Kumbar SG, Nair LS, et al.Biologically active chitosan systems for tissue engineering and regenerative medicine.Curr Top Med Chem. 2008;8(4):354-364.

[14] Sarrazy V, Billet F, Micallef L,et al.Mechanisms of pathological scarring: role of myofibroblasts and current developments. Wound Repair Regen. 2011;19 Suppl 1:s10-15.

[15] Parekkadan B, Milwid JM.Mesenchymal stem cells as therapeutics.Annu Rev Biomed Eng. 2010 ;12:87-117.

[16] Németh K, Leelahavanichkul A, Yuen PS,et al.Bone marrow stromal cells attenuate sepsis via prostaglandin E(2)-dependent reprogramming of host macrophages to increase their interleukin-10 production.Nat Med. 2009; 15(1):42-49.

[17] Zanone MM, Favaro E, Miceli I,et al.Human mesenchymal stem cells modulate cellular immune response to islet antigen glutamic acid decarboxylase in type 1 diabetes.J Clin Endocrinol Metab. 2010;95(8):3788-3797.

[18] Jackson WM, Nesti LJ, Tuan RS.Mesenchymal stem cell therapy for attenuation of scar formation during wound healing.Stem Cell Res Ther. 2012;3(3):20.

[19] Li L, Zhang Y, Li Y,et al.Mesenchymal stem cell transplantation attenuates cardiac fibrosis associated with isoproterenol-induced global heart failure.Transpl Int. 2008; 21(12):1181-1189.

[20] Chen L, Tredget EE, Wu PY,et al. Paracrine factors of mesenchymal stem cells recruit macrophages and endothelial lineage cells and enhance wound healing.PLoS One. 2008; 3(4):e1886.

[21] Smith AN, Willis E, Chan VT,et al.Mesenchymal stem cells induce dermal fibroblast responses to injury.Exp Cell Res. 2010;316(1):48-54.

[22] Mayer H, Bertram H, Lindenmaier W,et al.Vascular endothelial growth factor (VEGF-A) expression in human mesenchymal stem cells: autocrine and paracrine role on osteoblastic and endothelial differentiation.J Cell Biochem. 2005;95(4):827-839.

[23] Fu X, Fang L, Li X,et al.Enhanced wound-healing quality with bone marrow mesenchymal stem cells autografting after skin injury.Wound Repair Regen. 2006;14(3):325-335.

[24] Lozito TP, Kuo CK, Taboas JM,et al.Human mesenchymal stem cells express vascular cell phenotypes upon interaction with endothelial cell matrix.J Cell Biochem. 2009;107(4): 714-722.

[25] Yew TL, Hung YT, Li HY,et al.Enhancement of wound healing by human multipotent stromal cell conditioned medium: the paracrine factors and p38 MAPK activation.Cell Transplant. 2011;20(5):693-706.

[26] Hsiao ST, Asgari A, Lokmic Z,et al.Comparative analysis of paracrine factor expression in human adult mesenchymal stem cells derived from bone marrow, adipose, and dermal tissue.Stem Cells Dev. 2012;21(12):2189-2203.

[27] Schievenbusch S, Strack I, Scheffler M,et al.Profiling of anti-fibrotic signaling by hepatocyte growth factor in renal fibroblasts.Biochem Biophys Res Commun. 2009;385(1): 55-61.

[28] Inagaki Y, Higashi K, Kushida M,et al.Hepatocyte growth factor suppresses profibrogenic signal transduction via nuclear export of Smad3 with galectin-7.Gastroenterology. 2008;134(4):1180-1190.

[29] Mou S, Wang Q, Shi B,et al.Hepatocyte growth factor suppresses transforming growth factor-beta-1 and type III collagen in human primary renal fibroblasts.Kaohsiung J Med Sci. 2009;25(11):577-587.

[30] Liechty KW, Kim HB, Adzick NS,et al.Fetal wound repair results in scar formation in interleukin-10-deficient mice in a syngeneic murine model of scarless fetal wound repair.J Pediatr Surg. 2000;35(6):866-872.

[31] Reitamo S, Remitz A, Tamai K,et al.Interleukin-10 modulates type I collagen and matrix metalloprotease gene expression in cultured human skin fibroblasts.J Clin Invest. 1994;94(6): 2489-2492.

[32] Bevan D, Gherardi E, Fan TP,et al.Diverse and potent activities of HGF/SF in skin wound repair.J Pathol. 2004; 203(3):831-838.

[33] Moore KW, de Waal Malefyt R, Coffman RL,et al. Interleukin-10 and the interleukin-10 receptor.Annu Rev Immunol. 2001;19:683-765.

[34] Sato Y, Ohshima T, Kondo T. Regulatory role of endogenous interleukin-10 in cutaneous inflammatory response of murine wound healing.Biochem Biophys Res Commun. 1999;265(1): 194-199.

[35] Gruber R, Kandler B, Holzmann P,et al.Bone marrow stromal cells can provide a local environment that favors migration and formation of tubular structures of endothelial cells.Tissue Eng.2005;11(5-6):896-903.

[36] Kaigler D, Krebsbach PH, Polverini PJ,et al. Role of vascular endothelial growth factor in bone marrow stromal cell modulation of endothelial cells.Tissue Eng.2003;9(1): 95-103.

[37] Kato J, Tsuruda T, Kita T,et al.Adrenomedullin: a protective factor for blood vessels.Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2005; 25(12):2480-2487.

[38] Renault MA, Roncalli J, Tongers J,et al.The Hedgehog transcription factor Gli3 modulates angiogenesis.Circ Res. 2009;105(8):818-826.

引言

皮肤瘢痕是皮肤受到较严重的创伤时，一种不理想的修复结果，其共同特征是真皮内胶原大量增多，细胞外基质过度沉积，其确切发病机制迄今仍不清楚。尽管到目前为止病理性瘢痕的治疗手段很多^[1-6]，但没有一种非常满意的治疗方法，因此，寻找到一种有效的抑制瘢痕形成或治疗瘢痕方法是研究人员和临床工作者的迫切希望，也是广大患者的期望。以往研究发现间充质干细胞修复皮肤创伤的主要作用机制包括发挥免疫调节作用、分泌的一氧化氮中和活性氧、分泌抗纤维化的细胞因子和生长因子、提升皮肤成纤维细胞的功能、促进血管再生及血管稳定以及分化为各种皮肤细胞等。综合以上间充质干细胞在促进皮肤创伤修复方面的作用机制表明，间充质干细胞如能对瘢痕发挥作用，其抗纤维化的作用可能多种机制并存。骨髓间充质干细胞可通过分泌抗纤维化的生物活性因子调节成纤维细胞的增殖、抑制胶原的累积而产生抗纤维化的作用。这一理论为理解干细胞在皮肤创伤修复与愈合中的作用机制提供一个新的视角，同时也为以细胞疗法为策略减轻瘢痕的方法提供新的理论支持。

瘢痕是人体创伤修复过程中必然的产物，可以发生于身体的任何组织，通常指当皮肤受到较重创伤后，愈合过程中引起的正常皮肤组织外观形态和组织病理学改变的统称，增生性瘢痕是真皮纤维化疾病的一种，主要表现为以胶原为主要成分的细胞外基质大量沉积^[7-8]。瘢痕可引发各种并发症，诸如外形的破坏及功能活动障碍等，给患者的生理和心理带来巨大痛苦。然而病理性瘢痕的发生机制至今还不清楚，因此在治疗上难以取得突破。

近年来一些国内外研究表明，间充质干细胞可通过分泌各种细胞活性因子促进创伤修复愈合，并且在治疗肺纤维化、抑制心脏瘢痕形成等研究中已取得较大进展^[9-12]。然而采用间充质干细胞移植治疗皮肤瘢痕的研究尚未见报道。这次研究以体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophic scar fibroblasts，HSFB)作为实验对象，观察骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原合成的影响，为探讨间充质干细胞在治疗增生性瘢痕或抑制其形成方面提供实验和理论依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

全文链接：

材料方法

设计：体外细胞学观察实验。

时间及地点：实验于2013年1至6月在牡丹江医学院完成。

材料：皮肤瘢痕组织取自9例(男5例，女4例，年龄7-53岁)同期住院患者手术切除的瘢痕疙瘩(以往没有接受过任何治疗)，瘢痕疙瘩的位置分别位于肩膀、胸部及背部，经病理组织学检查确诊。骨髓为非血液系统疾病成人行髂骨骨髓穿刺检查的骨髓。

取材均得到患者的知情同意，并经医院伦理委员会批准。

实验方法：

骨髓间充质干细胞的分离、培养：无菌条件下穿刺人髂后上嵴，抽取骨髓3 mL，加入等量的不含血清的DMEM 培养液，吹打制成单细胞悬液，采用直接贴壁法培养^[13]，将细胞接种在含体积分数为10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL链霉素的DMEM培养液中，置37 ℃，体积分数为5%CO₂培养箱中培养。24 h后更换培养液，弃去非贴壁细胞，以后视细胞生长状态每2 d或3 d换液1次。待细胞生长融合达80%后消化传代。实验中所用细胞为第3-5代细胞。

骨髓间充质干细胞条件培养液的收集：选取第3-5代对数生长期的骨髓间充质干细胞，待融合达80%-90%，血清饥饿24 h。胰酶消化，制成单细胞悬液，并以1×10⁵细胞/孔接种于直径为12孔板的塑料细胞培养皿中，加入1 mL无血清DMEM培养液培养12，24，48 h后收集上清，用0.22 μm滤膜过滤，即得到骨髓间充质干细胞条件培养液，-20 ℃保存。

增生性瘢痕成纤维细胞的培养：采用组织块法进行原代培养，将手术中取下的增生性瘢痕组织在无菌培养皿中漂洗，切去表皮并将标本切成 1 mm³左右的小块，放置于直径6 cm培养皿内，并摆放均匀。待组织贴壁后，加入含体积分数为10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL链霉素的DMEM完全培养液3 mL，置37 ℃，体积分数为5% CO₂培养箱中培养。3 d后换液，之后每2 d或3 d更换培养液1次，显微镜下观察，待细胞基本爬满瓶底后，用0.25%胰蛋白酶消化后，按1∶3的比例传代培养。

骨髓间充质干细胞对增生性瘢痕成纤维细胞作用的形态学观察：取第3-5代对数生长期的增生性瘢痕成纤维细胞以1×10⁵细胞/孔接种于6孔培养板无血清培养，每孔接种 1 mL，置CO₂培养箱培养24 h后，进行分组。

空白对照组：增生性瘢痕成纤维细胞中加入无血清培养基1 mL。

条件培养液组：增生性瘢痕成纤维细胞中加入于12，24，48 h收集的骨髓间充质干细胞条件培养液1 mL；继续培养24 h，于倒置显微镜下观察、照相。

细胞增殖状况检测：用CCK-8(Cell Counting Kit-8 assay)染色法检测细胞增殖情况。取对数生长期的成纤维细胞，以2×10³个/孔接种于96孔培养板，每孔接种200 μL，每组8复孔，无血清培养24 h。然后弃去培养基，按分组加无血清培养基和于12，24，48 h收集的条件培养液200 μL继续培养24 h，每孔加入20 μL CCK-8溶液，在细胞培养箱内继续孵育1 h，用酶标仪检测在450 nm波长下测定吸光度。

瘢痕成纤维细胞胶原合成的检测：将细胞接种于24孔板，浓度为1×10⁸ L^-1，每孔1 mL。置于37 ℃体积分数为5%CO₂孵箱中培养12 h后，更换无血清培养基，培养24 h。弃去培养基，分别加入无血清培养基或于12，24，48 h收集的骨髓间充质干细胞条件培养液，每孔5个复孔，继续培养24 h。收集培养液，严格按照羟脯氨酸测试盒说明书的要求检测羟脯氨酸的含量。

Real-time PCR检测各组Ⅰ型和Ⅲ型胶原的基因表达：取第3-5代对数生长期的增生性瘢痕成纤维细胞以5×10⁵细胞/孔接种于6孔培养板中，无血清培养24 h后，弃去培养基。各组分别加入无血清培养基或于12，24，48 h收集的骨髓间充质干细胞条件培养液，继续培养24 h。再进行RNA提取、cDNA转录及Real-time PCR 检测。

Real-time PCR 检测体系如下：10 μL SYBR Premix、上、下游引物各1 μL(10 μmol/L)、2 μL cDNA和6 μL ddH₂O，共计20 μL。

主要观察指标：骨髓间充质干细胞条件培养液干预后瘢痕成纤维细胞形态学、增殖情况以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。

统计学分析：实验计量资料以x(_)±s表示，采用SPSS 13.0软件进行数据分析，组间均数差异比较采用单因素方差分析，以P < 0. 05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

全文链接：

讨论

关于人体皮肤的损伤与修复、科学研究有很多报告。当人体皮肤遭受外伤或其他原因破坏时，伤口修复过程同时开始，包括止血、炎症、肉芽组织形成和重塑阶段，最终形成皮肤瘢痕。这一过程与成纤维细胞、单核-巨噬细胞、内皮细胞、肥大细胞、淋巴细胞等多种修复细胞的功能活动有关，其中成纤维细胞是主要的修复细胞，它可以和其他类型的修复细胞以及细胞外基质共同参与创伤愈合修复的过程^[14]，因此成纤维细胞的生物学行为被认为是创伤愈合与瘢痕形成过程的决定性因素，了解瘢痕成纤维细胞的生物学特性对于揭开增生性瘢痕具有重要意义。

干细胞移植作为一种新兴的生物学治疗方法，间充质干细胞是其重要的成员之一，具有来源广泛、取材方便、低免疫原性以及可自体移植等优势^[15]。目前已有研究证实间充质干细胞可通过多种调节机制包括发挥免疫调节作用^[16-17]、分泌的一氧化氮中和活性氧^[18]、分泌抗纤维化的细胞因子和生长因子^[19-20]、提升皮肤成纤维细胞的功能^[21]、促进血管再生和血管稳定以及分化为各种皮肤细胞等^[22-24]，在创伤愈合过程中发挥其治疗作用。但大多学者认为，间充质干细胞在此过程中主要是通过分泌的各种生物活性因子而发挥作用^[25-26]。研究发现间充质干细胞条件培养基中含有多种与组织修复、血管生成、细胞存活及抗炎等作用相关的生物活性物质。其所含有的肝细胞生长因子、白细胞介素10、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子A、肾上腺髓质素等具有抑制成纤维细胞增殖分化^[27-28]、胶原合成^[29-30]，促进细胞外基质重塑^[31]，提高组织再上皮化^[32]，抗炎^[33-34]，促进血管再生等作用^[35-38]。是否间充质干细胞分泌的生物活性因子也可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞，从而对皮肤瘢痕的修复发挥作用至今尚无明确的研究报道。

本研究采取组织块贴壁法成功培养出了瘢痕成纤维细胞。在显微镜下观察，细胞多为长梭形或分枝状，少部分呈多角形，且未见多边形的上皮细胞混杂。而将骨髓间充质干细胞条件培养液作为刺激因子孵育瘢痕成纤维细胞后，24 h和48 h收集的培养液对瘢痕成纤维细胞的作用更为明显，使细胞的数目更少，突起更短，形状变的更不规则，排列更为混乱。这种情况可能是因为在24 h和48 h收集的培养液中比12 h收集的培养液中所含的生物活性因子浓度更高，因此对瘢痕成纤维细胞的作用更强。

实验通过用CCK-8检测间充质干细胞分泌的生物活性物质对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用。结果显示，与空白对照组相比较，于12 h收集骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖抑制较小，而于24 h和48 h收集的骨髓间充质干细胞条件培养液能显著抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖，同上述原理相似，也可能是由于后者的骨髓间充质干细胞条件培养液中生物活性因子的浓度更高一些，即可以说间充质干细胞分泌的生物活性物质对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有作用并呈浓度依赖性。

羟脯氨酸是胶原合成过程中所必需的一种氨基酸，对于羟脯氨酸的检测可以在一定程度上揭示胶原的含量改变。对羟脯氨酸检测的实验结果表明，经过骨髓间充质干细胞条件培养液的处理后，羟脯氨酸的含量明显下降，验证了骨髓间充质干细胞条件培养液可以抑制细胞外胶原堆积的假设。但由于羟脯氨酸检测的实验并不能揭示胶原蛋白数量上的减少是由于蛋白表达水平的下降还是因为其蛋白的降解速度变快而引起的。针对这一可能性，采用Real-time PCR和在基因水平上对Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达进行研究。实验结果表明，两种胶原的mRNA在骨髓间充质干细胞条件培养液干预后其表达明显下降，尤其是于24 h和48 h收集的条件培养液组，与空白对照组相比较差异显著(P < 0.01)，这提示骨髓间充质干细胞条件培养液可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞的胶原合成。

综上所述，该研究提供了这样的信息，骨髓间充质干细胞条件培养液分泌生物活性因子能够抑制成纤维细胞增殖分化及胶原产生，那么在皮肤瘢痕形成过程中，骨髓间充质干细胞的移植则有可能通过干预成纤维细胞、改变细胞外基质的构成，从而促进创面愈合并且抑制瘢痕形成。这为干细胞在防治增生性瘢痕方面的应用研究提供了理论基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

全文链接：

骨髓间充质干细胞条件培养液对瘢痕成纤维细胞生物活性的影响

Effects of bone marrow mesenchymal stem cell conditioned medium on bioactivity of scar fibroblasts

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 1

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	蒲锐, 陈子扬, 袁凌燕. 不同细胞来源外泌体保护心脏的特点与效应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 1-.
[2]	万然, 史旭, 刘京松, 王岩松. 间充质干细胞分泌组治疗脊髓损伤的研究进展[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1088-1095.
[3]	王诗琦, 张金生. 中医药调控缺血缺氧微环境对骨髓间充质干细胞增殖、分化及衰老的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1129-1134.
[4]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.
[5]	梁学奇, 郭黎姣, 陈贺捷, 武杰, 孙雅琪, 邢稚坤, 邹海亮, 陈雪玲, 吴向未. 泡状棘球绦虫原头蚴抑制骨髓间充质干细胞向成纤维细胞的分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 996-1001.
[6]	耿瑶, 尹志良, 李兴平, 肖东琴, 侯伟光. hsa-miRNA-223-3p调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1008-1013.
[7]	伦志刚, 金晶, 王添艳, 李爱民. 过氧化物还原酶6干预骨髓间充质干细胞增殖及体外向神经谱系诱导分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1014-1018.
[8]	朱雪芬, 黄成, 丁健, 戴永平, 刘元兵, 乐礼祥, 王亮亮, 杨建东. 胶质细胞神经营养因子诱导骨髓间充质干细胞向功能性神经元分化的机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1019-1025.
[9]	裴丽丽, 孙贵才, 王弟. 丹酚酸B抑制骨髓间充质干细胞氧化损伤及促进分化为心肌样细胞[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1032-1036.
[10]	聂慧娟, 黄织春. 转化生长因子β1诱导心肌成纤维细胞转分化过程中Hedgehog信号通路的作用机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 754-760.
[11]	陈俊毅, 王宁, 彭称飞, 朱伦井, 段江涛, 王烨, 贝朝涌. 脱钙骨基质与慢病毒介导沉默P75神经营养因子受体转染骨髓间充质干细胞构建组织工程骨[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 510-515.
[12]	张振坤, 李喆, 李亚, 王莹莹, 王亚苹, 周馨魁, 马珊珊, 关方霞. 海藻酸盐基水凝胶/敷料在创面愈合中的应用：持续、动态与顺序释放[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(4): 638-643.
[13]	姜涛, 马磊, 李志强, 寿玺, 段明军, 吴硕, 马创, 魏琴. 血小板衍生生长因子BB诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3937-3942.
[14]	孙建威, 杨新明, 张瑛. 孟鲁司特联合骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤模型大鼠[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3962-3969.
[15]	张立书, 刘安琪, 何小宁, 金岩, 李蓓, 金钫. Alpl基因影响骨髓间充质干细胞治疗溃疡性结肠炎[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(25): 3970-3975.