富集自体外周血单个核细胞移植治疗肝硬化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.36.011

中国组织工程研究 ›› 2013, Vol. 17 ›› Issue (36): 6449-6454.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.36.011

• 干细胞移植 stem cell transplantation • 上一篇下一篇

富集自体外周血单个核细胞移植治疗肝硬化

朱英，郎帅，丛庆伟，赵钢

大连医科大学附属第一医院，辽宁省大连市 116011

收稿日期:2013-05-16 修回日期:2013-08-01 出版日期:2013-09-03 发布日期:2013-09-03
通讯作者: 赵钢，教授，硕士生导师，大连医科大学附属第一医院，辽宁省大连市 116011 朱英，博士，教授，硕士生导师，大连医科大学附属第一医院，辽宁省大连市 116011 zhuyingsh52@126.com
作者简介:朱英☆，女，1965年生，江苏省无锡市人，汉族，上海中医药大学毕业，博士，教授，硕士生导师，主任医师，主要从事肝病诊治研究。 zhuyingsh52@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目(81273925)*

Peripheral blood mononuclear cell transplantation for liver cirrhosis

Zhu Ying, Lang Shuai, Cong Qing-wei, Zhao Gang

First Affiliated Hospital of Dalian Medical University, Dalian 116011, Liaoning Province, China

Received:2013-05-16 Revised:2013-08-01 Online:2013-09-03 Published:2013-09-03
Contact: Zhao Gang, Professor, Master’s supervisor, First Affiliated Hospital of Dalian Medical University, Dalian 116011, Liaoning Province, China Zhu Ying, M.D., Chief physician, Professor, Master’s supervisor, First Affiliated Hospital of Dalian Medical University, Dalian 116011, Liaoning Province, China zhuyingsh52@126.com
About author:Zhu Ying☆, M.D., Chief physician, Professor, Master’s supervisor, First Affiliated Hospital of Dalian Medical University, Dalian 116011, Liaoning Province, China zhuyingsh52@126.com
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81273925*

摘要/Abstract

摘要：

背景：与骨髓移植相比较，外周血干细胞移植有其自身的优点，外周血中干细胞资源多、收集方便易行、无需麻醉、创伤小、易被患者接受、安全性高、患者的造血系统易恢复等。
目的：观察自体外周血单个核细胞对失代偿期肝硬化患者的治疗作用及安全性。
方法：选择2010年11月至2011年7月于大连医科大学附属第一医院住院的4例失代偿期肝硬化患者，其中乙型肝炎后失代偿期肝硬化3例，自身免疫性肝病后失代偿期肝硬化1例，年龄31-67岁，平均年龄44岁。经粒细胞集落刺激因子动员后采集外周血干细胞，行肝动脉插管自体外周血单个核细胞移植治疗。
结果与结论：外周血单个核细胞采集、肝动脉内干细胞移植过程中及移植后无发热、出血、恶心等不良反应发生，行自体外周血单个核细胞移植第 1，3，6个月后，纳差、乏力、食欲、腹胀等临床症状得到不同程度的改善。实验室检测肝功能和肝纤维化指标得到一定程度的改善。

关键词: 干细胞, 外周血干细胞移植, 肝硬化, 治疗结果

Abstract:

BACKGROUND: Compared with bone marrow transplantation, peripheral blood stem cell transplantation has its own advantages, including rich resources of stem cells from the peripheral blood, convenient and easy collection, without anesthesia, small trauma, easily accepted, high safety, and easy to restore the patient’s hematopoietic system.
OBJECTIVE: To observe the function and safety of autologous peripheral blood mononuclear cells in the treatment of patients with decompensated cirrhosis.
METHODS: Four patients with decompensated liver cirrhosis were selected from November 2010 to July 2011 in the First Affiliated Hospital of Dalian Medical University, aged 31-67 (averagely 44 years). Among them, three cases had hepatitis B, and another one had autoimmune liver disease. Peripheral blood stem cells were collected after being mobilized by granulocyte colony stimulating factor. Then, autologous peripheral blood stem cells were transplanted via a hepatic artery catheter.
RESULTS AND CONCLUSION: There were no adverse reactions such as fever, bleeding and nausea after peripheral blood stem cell collection and hepatic artery transplantation. Symptoms such as fatigue, poor appetite and abdominal distension gradually improved at 1, 3 and 6 months after transplantation. Liver function and liver fibrosis indexes were improved to some extent after transplantation.

Key words: stem cells, peripheral blood stem cell transplantation, liver cirrhosis, treatment outcome

中图分类号:

R394.2

朱英，郎帅，丛庆伟，赵钢. 富集自体外周血单个核细胞移植治疗肝硬化[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(36): 6449-6454.

Zhu Ying, Lang Shuai, Cong Qing-wei, Zhao Gang . Peripheral blood mononuclear cell transplantation for liver cirrhosis[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(36): 6449-6454.

图/表（结果） 3

2.1 参与者数量分析 4例肝硬化患者均进入结果分析，没有脱落。

2.2 临床症状改善情况外周血单个核细胞采集、肝动脉内干细胞移植过程中以及移植后均无发热、出血、恶心等不良反应发生，行自体外周血单个核细胞移植第1，3，6个月后，纳差、乏力、食欲、腹胀等临床症状得到不同程度的改善。

2.3 外周血单个核细胞移植前后肝功能比较 见表1。谷草转氨酶水平：移植后1，3个月低于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)，移植后6个月明显低于移植前，差异有非常显著性意义(P < 0.01)。

谷丙转氨酶水平：移植后1，3，6个月低于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)。

胆碱酯酶水平：移植后1，3，6个月低于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)。

总胆红素水平：移植后1，3，6个月与移植前比较无明显降低。

直接胆红素水平：移植后1，3，6个月与移植前比较无明显降低。

白蛋白水平：移植后3个月明显高于移植前，差异有非常显著性意义(P < 0.01)，移植后6个月高于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)。

凝血酶原时间：移植后1，3，6个月与移植前比较有明显减少，差异有非常显著性意义(P < 0.01)。

2.4 外周血单个核细胞移植前后血清纤维化指标 见表2。

透明质酸酶水平：移植后1，3，6个月低于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)。

前Ⅲ型胶原水平：移植后1个月低于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)，移植后3，6个月明显低于移植前，差异有非常显著性意义(P < 0.01)。

Ⅳ型胶原水平：移植后1，3个月低于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)，移植后6个月明显低于移植前，差异有非常显著性意义(P < 0.01)。

层粘连蛋白水平：移植后1，3，6个月低于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)。

由表3可见，患者行外周血单个核细胞移植后1，3，6个月门静脉及脾脏前后径、左右径、上下径比移植前下降，但差异无显著性意义(P > 0.05)。

参考文献

[1] Jiang Y, Villeneuve PJ, Fenton SS,et al. Liver transplantation and subsequent risk of cancer: findings from a Canadian cohort study. Liver Transpl. 2008;14(11):1588-1597.

[2] Haridass D, Narain N, Ott M. Hepatocyte transplantation: waiting for stem cells. Curr Opin Organ Transplant. 2008; 13(6):627-632.

[3] Snykers S, De Kock J, Rogiers V,et al. In vitro differentiation of embryonic and adult stem cells into hepatocytes: state of the art.Stem Cells. 2009;27(3):577-605.

[4] 丁鹏,冯忠堂,杨智勇,等.趋化因子SDF-1体外趋化骨髓基质细胞迁移的实验研究[J].中华神经医学杂志,2007,6(3):225-227,237.

[5] Shen LH, Li Y, Chen J,et al. Therapeutic benefit of bone marrow stromal cells administered 1 month after stroke. J Cereb Blood Flow Metab. 2007;27(1):6-13.

[6] 杨丽萍,马俊勋,袁菊芳,等.HGF,EGF对体外培养大鼠肝脏干细胞增殖的实验研究[J].实验动物与比较医学,2009,29(6): 361-365.

[7] Parekkadan B, van Poll D, Megeed Z,et al. Immunomodulation of activated hepatic stellate cells by mesenchymal stem cells. Biochem Biophys Res Commun. 2007;363(2):247-252.

[8] 王方,冯淑娴,寇俊峰,等.经门静脉或肝动脉脐带血干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的近期疗效与安全性比较[J].实用肝脏病杂志,2013,16(4):327-329.

[9] Lesko E, Majka M. The biological role of HGF-MET axis in tumor growth and development of metastasis. Front Biosci. 2008;13:1271-1280.

[10] Abdel Aziz MT, Atta HM, Mahfouz S,et al. Therapeutic potential of bone marrow-derived mesenchymal stem cells on experimental liver fibrosis. Clin Biochem. 2007;40(12):893-899.

[11] Higashiyama R, Inagaki Y, Hong YY,et al. Bone marrow-derived cells express matrix metalloproteinases and contribute to regression of liver fibrosis in mice. Hepatology. 2007;45(1):213-222.

[12] 朱英,刘平.一贯煎对DMN肝纤维化大鼠肝卵圆细胞增殖分化的影响[J].大连医科大学学报,2011,33(1):11-16.

[13] 袁璐萍.自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化的研究进展[J].浙江临床医学,2011,13(11):1279-1281.

[14] 林荣,吴兵,戴若竹,等.粒细胞集落刺激因子治疗兔急性心肌梗死的时间窗研究[J].中国医药生物技术,2007,2(4):281-285.

[15] 徐旭雯,谭德明,鲁猛厚.粒细胞集落刺激因子对小鼠急性肝衰竭的保护作用[J].中南大学学报:医学版,2006,31(4):543-547.

[16] 卢兴浩,裴雪莲,肖智伟,等.粒细胞集落刺激因子骨髓干细胞动员治疗大鼠肝损伤的实验研究[J].农垦医学,2009,31(6):487-490.

[17] 张善红,姜春萌,李荣宽,等.自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的临床研究[J].中华临床医师杂志:电子版,2012,6(4): 1016-1018.

[18] Barascuk N, Veidal SS, Larsen L,et al. A novel assay for extracellular matrix remodeling associated with liver fibrosis: An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for a MMP-9 proteolytically revealed neo-epitope of type III collagen. Clin Biochem. 2010;43(10-11):899-904.

[19] di Bonzo LV, Ferrero I, Cravanzola C,et al. Human mesenchymal stem cells as a two-edged sword in hepatic regenerative medicine: engraftment and hepatocyte differentiation versus profibrogenic potential. Gut. 2008;57(2): 223-231.

[20] 吴佳羽,尹华发.肝脏干细胞移植治疗肝硬化的研究进展[J].临床医学,2011,31(3):111-113.

[21] 邢全台,孙启龙,李栋,等.骨髓间充质干细胞向肝细胞样细胞的诱导分化[J].世界华人消化杂志, 2009,17(26): 2654-2661.

[22] Shi XL, Qiu YD, Wu XY,et al. In vitro differentiation of mouse bone marrow mononuclear cells into hepatocyte-like cells. Hepatol Res. 2005 ;31(4):223-231.

[23] Kang XQ, Zang WJ, Song TS,et al. Rat bone marrow mesenchymal stem cells differentiate into hepatocytes in vitro.World J Gastroenterol. 2005;11(22):3479-3484.

[24] Snykers S, Vanhaecke T, Papeleu P,et al. Sequential exposure to cytokines reflecting embryogenesis: the key for in vitro differentiation of adult bone marrow stem cells into functional hepatocyte-like cells.Toxicol Sci. 2006;94(2): 330-341.

[25] Wang PP, Wang JH, Yan ZP,et al. Expression of hepatocyte-like phenotypes in bone marrow stromal cells after HGF induction. Biochem Biophys Res Commun. 2004; 320(3):712-716.

[26] 张刚庆,方驰华,池达智.肝细胞生长因子诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的实验研究[J].中华外科杂志, 2005, 43(11): 716-720.

[27] 丁鹏,冯忠堂,杨智勇,等.趋化因子SDF-1体外趋化骨髓基质细胞迁移的实验研究[J].中华神经医学杂志,2007,6(3):225-227,237.

[28] Bhakta S, Hong P, Koc O.The surface adhesion molecule CXCR4 stimulates mesenchymal stem cell migration to stromal cell-derived factor-1 in vitro but does not decrease apoptosis under serum deprivation. Cardiovasc Revasc Med. 2006;7(1):19-24.

[29] 卢宁,赵龙凤,李红,等.应用全骨髓贴壁法获取高纯度大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究[J].山西医科大学学报,2010,41(3): 277-280.

[30] Friedenstein AJ, Chailakhyan RK, Gerasimov UV. Bone marrow osteogenic stem cells: in vitro cultivation and transplantation in diffusion chambers. Cell Tissue Kinet. 1987; 20(3):263-272.

[31] 朱建宇,施伟民.小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养和鉴定[J].同济大学学报:医学版,2012,33(5): 45-48.

[32] 张怡,赵连三,唐红.小鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养[J]. 生物医学工程学杂志, 2004 , 21(5): 746-748.

[33] 王文,李静,王宗仁,等.不同分离方法与培养条件下大鼠骨髓间充质干细胞生长增殖情况比较[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2007, 11(3): 482-485,489.

[34] 庄淑波,刘毅,陈克明,等.大鼠骨髓间充质干细胞体外分离、纯化与培养适宜条件的筛选[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2007, 11(20): 3886-3991.

[35] 彭德新,陈自谦,白伟,等.不同首次换液模式对大鼠骨髓间充质干细胞培养的影响[J].临床军医杂志, 2011, 39(3): 403-406.

[36] 杨丽萍,马俊勋,袁菊芳,等. HGF, EGF对体外培养大鼠肝脏干细胞增殖的实验研究[J].实验动物与比较医学,2009,29(6): 361-365.

[37] 邝郁郁.不同浓度肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子对大鼠肝干细胞的增殖调控[J].国际病理科学与临床杂志, 2010, 30(2):106-109.

[38] 张悦,欧来良,程兆康,等.CXCR4基因修饰骨髓间充质干细胞体外迁移实验[J].生物医学工程学杂志,2009, 26(3): 595-600.

[39] Phinney DG, Kopen G, Isaacson RL,et al. Plastic adherent stromal cells from the bone marrow of commonly used strains of inbred mice: variations in yield, growth, and differentiation. J Cell Biochem. 1999;72(4):570-585.

[40] 张本斯,王凡,邓力,等.大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化与初步鉴定[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2003,12(2):161-165.

[41] Encina NR, Billotte WG, Hofmann MC. Immunomagnetic isolation of osteoprogenitors from human bone marrow stroma. Lab Invest. 1999;79(4):449-457.

[42] Zohar R, Sodek J, McCulloch CA. Characterization of stromal progenitor cells enriched by flow cytometry. Blood. 1997;90(9): 3471-3481.

[43] Conget PA, Minguell JJ. Phenotypical and functional properties of human bone marrow mesenchymal progenitor cells. J Cell Physiol. 1999;181(1):67-73.

[44] Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC,et al. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells.Science. 1999;284(5411):143-147.

[45] Miller SA, Dykes DD, Polesky HF. A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic Acids Res. 1988;16(3):1215.

[46] Hayashi SI, Watanabe J, Nakachi K,et al. PCR detection of an A/G polymorphism within exon 7 of the CYP1A1 gene. Nucleic Acids Res. 1991;19(17):4797.

[47] Snykers S, Vanhaecke T, De Becker A,et al. Chromatin remodeling agent trichostatin A: a key-factor in the hepatic differentiation of human mesenchymal stem cells derived of adult bone marrow. BMC Dev Biol. 2007;7:24.

[48] 李瀚旻,晏雪生,明安萍,等.肝脏细胞条件培养基诱导大鼠骨髓间质细胞分化为肝细胞的作用[J].中西医结合肝病杂志, 2005, 15(1): 28-30.

引言

材料方法

设计：回顾性病例分析。

时间及地点：2010年11月至2011年7月在大连医科大学附属第一医院完成。

对象：选择 2010年11月至2011年7月接受自体外周血单个核细胞治疗的肝硬化住院患者4例，男3例，女1例，年龄31-67岁，平均年龄44岁。其中肝炎后肝硬化3例，自身免疫性肝病后肝硬化1例，肝功能Child Pugh分级为A级或B级，患者治疗前均明确诊断肝硬化^[1]。所有接受外周血单个核细胞治疗患者均签署知情同意书。

纳入标准：①各种原因(乙肝、丙肝、酒精性、免疫、遗传代谢)所致的肝硬化失代偿期成年患者。②能配合治疗和随访的住院患者。

排除标准：①有活动性消化道大出血、严重感染、现症的肝性脑病等并发症者。②重度脾大(直径>17 cm)者。③妊娠期、哺乳期女性。

肝硬化失代偿期患者4例基本资料：

方法：

外周血单个核细胞的动员与采集：患者入院，完善检查后，予粒细胞集落刺激因子连续注射5 d，进行外周血单个核细胞的动员，同时监测外周血白细胞数，期间观察有无不良反应。外周血白细胞数达到一定数量后，进行采集，单次循环后立即留取浓集的外周血单个核细胞，检测数量1.5×10¹¹-3.0×10¹³ L^-¹，CD34⁺细胞的数量2×10⁶/kg。外周血单个核细胞采集后常温保存，4 h内行移植术。经股动脉插管至肝固有动脉，注射对比剂，观察肝内血管情况并排除占位病变后，将20 mL的外周血单个核细胞注入，穿刺点加压包扎，术后行肝动脉插管，常规护理及观察有无不良反应及预防感染。

肝硬化失代偿期患者4例外周血单个核细胞移植治疗方式：

疗效观察：

临床症状、体征：注意观察患者腹水、食欲、体力、腹胀等症状的改善情况及不良反应发生情况。

复查实验室指标：移植后1，3，6个月检测肝功能指标(谷草转氨酶、凝血酶原时间、胆碱酯酶、总胆红素、直接胆红素、白蛋白、谷丙转氨酶)，肝纤维化指标(透明质酸酶、前Ⅲ型胶原、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白)。

影像学检查：移植后1，3，6个月进行磁共振检查，观察门静脉直径及脾脏前后径、左右径、上下径。

统计学分析：应用 SPSS 13.0软件分析结果，数据以x(_)±s表示，治疗前后比较采用配对t 检验，分类资料采用单因素方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

讨论

肝硬化已经成为全球关注的健康问题之一，由于其发展过程隐匿、缓慢，不易被早期发现、早期诊断、早期治疗，延误了疾病的最佳治疗时期，发现时常已发展到失代偿期肝硬化，甚至出现严重的并发症，如消化道出血、肝性脑病、肝肾综合征等，给治疗带来了很大的困难。近年来国内外的专家正在积极探讨治疗肝硬化的新方法，干细胞移植为治疗肝硬化带来了希望^[1-12]。干细胞凭借其自身强大的增殖能力和多潜能、定向分化的能力，受到了更多国内外研究者的关注，干细胞移植已被用于治疗多个系统的疾病，如血液系统、神经系统、糖尿病神经病变、遗传疾病，也为各种原因引起的肝硬化和肝癌的治疗带来了新的方法。目前，用于移植治疗肝硬化的干细胞主要来源于有：①胚胎干细胞。②骨髓干细胞，又分为造血干细胞和骨髓间充质干细胞。③脐带干细胞。④外周血干细胞。国内已有一些医院把干细胞用于治疗肝硬化，患者的肝脏功能和临床症状有了一定程度的改善。这次研究探讨外周血单个核细胞移植治疗肝硬化的临床应用。外周血干细胞比其他来源的干细胞有其自身优点：采集方便、无需麻醉、创伤小、易被患者接受、安全性较高、造血系统恢复较快，因此得到了更广泛的研究。

很多研究已证实干细胞可以转化为肝细胞和胆管细胞，外周血干细胞与骨髓造血干细胞相似，功能上相差无几，经过动员后的外周血干细胞与正常骨髓里的干细胞的数量相当，甚至高于骨髓。同时干细胞都表现为淋巴样的单核母细胞，没有明确的形态学特征，故现在大多数研究将CD34⁺细胞作为干细胞，并利用其生物学特性进行临床应用。动员后采集外周血干细胞可以获得更加丰富的单个核细胞和CD34⁺细胞，而且凭其自身的优点有着广泛的应用前景，也为终末期肝病的治疗带来了曙光^[13-17]。应用自体外周血单个核细胞移植治疗肝硬化失代偿期患者，研究结果发现，治疗安全且不良反应小，可明显改善临床症状。

移植前后肝功能指标的比较：①谷草转氨酶水平：移植后1，3个月低于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)，移植后6个月明显低于移植前，差异有非常显著性意义(P < 0.01)。②谷丙转氨酶水平：移植后1，3，6个月低于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)。③胆碱酯酶水平：移植后1，3，6个月低于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)。④总胆红素水平：移植后1，3，6个月与移植前比较无明显降低。⑤直接胆红素水平：移植后1，3，6个月与移植前比较无明显降低。⑥白蛋白水平：移植后3个月明显高于移植前，差异有非常显著性意义(P < 0.01)，移植后6个月高于移植前，差异有显著性意义(P < 0.05)。⑦凝血酶原时间：移植后1，3，6个月与移植前比较有明显减少，差异有非常显著性意义(P < 0.01)。以上结果表明经过自体外周血单个核细胞移植后，患者肝功能有一定程度的改善。肝炎后肝硬化患者的肝功能指标与自身免疫性肝病后肝硬化患者之间比较，未见明显差异。

谷草转氨酶、谷丙转氨酶存在于肝细胞中，当肝细胞受到损伤时细胞内的谷草转氨酶、谷丙转氨酶释放入血，使其在血清中增多，4例患者在外周血移植6个月后谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性明显下降，表明受损的肝脏得到明显的修复。肝脏能合成除了组织因子及VW因子外的所有凝血因子，凝血酶原时间反应血浆的凝血时间，也能判断肝病的预后，凝血酶原时间较移植前明显缩短，表明肝脏的合成功能得到恢复。白蛋白反映肝脏的合成功能，比移植前明显上升；表明肝脏得到了明显修复。总胆红素、直接胆红素比移植前未见明显变化，胆红素是衰老的红细胞被肝、脾和骨髓的单核-吞噬细胞分解和破坏的产物，肝硬化患者的脾大和脾脏功能亢进，造成红细胞破坏过多，胆红素的升高，肝硬化患者肝纤维组织弥漫性增生，并形成再生结节和假小叶，导致正常肝小叶结构和血管解剖的破坏，失去了肝脏正常的解剖结构，造成了胆红素的排泄通道不通畅，移植后总胆红素、直接胆红素未见明显改变，考虑的原因有肝硬化是一个缓慢、长期形成的一个过程，干细胞移植可能数量相对少，移植的干细胞没有一个监测系统，尚无法确定到达肝脏干细胞的数量，肝脏的结构恢复也是一个长期的过程，胆红素的排泄未得到改善。一方面脾功能亢进未得到明显改善，导致红细胞破坏过多，胆红素生成增加，对受损的肝脏来说还是不能够很好的代谢。肝脏受损伤后，合成蛋白的能力下降，胆碱酯酶的活性也随着下降，也是判断肝脏功能恢复的一个重要指标，本研究中4例患者的胆碱酯酶逐渐的上升，受损的肝脏已得到了明显的恢复，干细胞移植增加了肝细胞的数量。

肝脏纤维化程度也有一定程度好转，对4例患者移植后的纤维化指标监测，结果表明患者行外周血单个核细胞移植后1，3，6个月透明质酸酶、前Ⅲ型胶原、Ⅳ型胶原、层粘连蛋白比移植前明显降低。肝纤维化的4项指标在移植后1个月就有了显著的变化，在移植3个月、6个月时肝纤维化指标持续下降，考虑可能是：①外周血单个核细胞向肝细胞分化并发挥了肝细胞的功能。②外周血单个核细胞可以通过旁分泌作用所分泌的因子来调节星形细胞，减少细胞外基质的产生，抑制了肝硬化的发展。③抑制了肝细胞的炎症反应。肝炎后肝硬化患者较自身免疫性肝病后肝硬化的肝纤维化指标下降程度大、速度快，考虑为这3个病例为乙肝后肝硬化患者，移植后为患者监测乙肝病毒量，3个患者的病毒量均在10⁴以下，乙肝病毒量较低，对肝细胞的损伤程度轻，引起的肝脏炎症反应轻，而自身免疫性肝病患者为自身免疫性肝炎和原发性胆汁性肝硬化重叠型，患者病因复杂，发病机制尚未明确，肝细胞炎症反应大，自身免疫处于异常状态，肝脏结构破坏严重。该病例发现脾脏增大有6年病史，未给予任何治疗，4年前出现三系进行性下降，本次入院行腹部核磁示肝硬化后明确诊断，可能该病例未进行及时治疗对外周血干细胞移植效果有一定的影响。

患者行外周血单个核细胞移植1，3，6个月较移植前比较，门静脉直径及脾脏前后径、左右径、上下径无明显变化。移植后的肝功能指标有明显改善，而肝脏影像学门静脉的直径及脾脏前后径、左右径、上下径无明显减小，考虑原因可能是移植的单个核细胞已有部分向肝细胞转化，但数量可能相对不足，无法在短时间内改变肝脏解剖结构。国内有学者的研究表明干细胞移植后肝脏的最大横截面积变大，该研究的病例较多，更有统计学意义，本研究探讨的病例数少，可能不是较全面。干细胞移植治疗肝病在临床上已应用，移植的途径较多，有门静脉、肝动脉、外周静脉、肝内脾内、腹腔等，任何一种途径都有其优缺点，哪种途径能使移植的干细胞发挥最大的作用使其疗效最佳，在临床上尚未定论。选择移植途径可以考虑以下因素，患者易接受的手术方式，患者身体承受能力，病变的程度和治疗目的，移植的空间足够大、利于干细胞的存活等。

外周血干细胞移植治疗肝病还存在一些尚待解决的问题^[18-20]：①干细胞体外分离培养、鉴定等技术尚未成熟^[21-40]。②移植细胞的种类、数量、方式、部位、最佳时期的探讨。③干细胞移植的适应证和禁忌证。④需要建立一个有效的追踪体系，以便观察干细胞的定位。⑤需要更大规模的随机研究及更长时间的随访观察，以判断干细胞移植的短期及长期疗效。⑥肝脏微循环对干细胞定殖、分化的影响。⑦需要移植过程中各个环节的质量控制，形成规范化的临床治疗方案，从而起到治疗终末期肝病的作用^[41-48]。

文章快阅

延伸阅读

急慢性肝衰竭病死率高，其治疗一直是全球性难题，目前比较有效的治疗手段是肝移植和肝细胞移植。原位肝移植是治疗终末期肝病的最佳选择，但由于供体器官紧缺，许多患者在等待肝移植时死亡，同时移植后并发症如免疫排斥反应等因素也限制了其应用。肝细胞移植治疗难治性肝病虽取得了一定的疗效，但由于肝细胞在体外不能大量繁殖且传代后不能保持其原有特性而难以推广应用。相比之除下，肝脏干细胞具有长时间持续增生的能力，在肝脏严重损伤的情况下可大量增生并分化成肝细胞和胆管上皮细胞，能在体外扩增达到临床所需的细胞数量，且移植后在体内也能增生。因此应用肝脏干细胞移植治疗晚期肝脏损伤避免了原位肝移植和肝细胞移植的所难以解决的问题。

肝干细胞主要包括骨髓干细胞、胚胎干细胞和外周血干细胞。研究表明，骨髓干细胞移植在严重损伤肝脏中可分化为肝脏实质细胞，对肝脏功能恢复具有重要作用，但骨髓干细胞移植在实际应用中存在许多问题，如采集不方便，需多部位穿刺骨髓抽髓，移植后易造成感染、出血等并发症。胚胎干细胞移植涉及伦理方面的问题难以解决。而外周血造血干细胞容易获得，体外操作技术相对成熟，在干细胞移植中有着更好的应用价值。

该项研究通过对外周血造血干细胞的动员、分离及肝内移植，拟解决如下问题：外周血干细胞在不同种肝病中治疗作用疗效评价；自体外周血干细胞在肝脏定植的数量与肝脏功能恢复的关系；自体外周血干细胞体外培养增殖分化的动态变化；外周血干细胞经基因修饰后移植的治疗效果评价；外周血干细胞不同标记物的表达意义和不同示踪方法的比较；选择最佳的外周血干细胞移植途径；干细胞相关因子在移植中发挥的不同作用；外周血干细胞移植后分化细胞的功能研究；调控干细胞的过度增殖研究。

通过该项研究的实施，预计达到如下结果: 针对不同因素所致肝病，应用自体、同种异体和异种外周血干细胞移植的可行性，同时解决干细胞来源和排斥问题，为今后临床外周血干细胞在肝病的中移植应用建立良好的实验基础，为中国在急慢性肝脏功能衰竭治疗领域中的研究做出贡献。

富集自体外周血单个核细胞移植治疗肝硬化

Peripheral blood mononuclear cell transplantation for liver cirrhosis

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 3

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	林清凡, 解一新, 陈婉清, 叶振忠, 陈幼芳. 人胎盘源间充质干细胞条件培养液可上调缺氧状态下BeWo细胞活力和紧密连接因子的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 4970-4975.
[2]	蒲锐, 陈子扬, 袁凌燕. 不同细胞来源外泌体保护心脏的特点与效应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 1-.
[3]	张秀梅, 翟运开, 赵杰, 赵萌. 类器官模型国内外数据库近10年文献研究热点分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1249-1255.
[4]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.
[5]	史洋洋, 秦英飞, 吴福玲, 何潇, 张雪静. 胎盘间充质干细胞预处理预防小鼠毛细支气管炎[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 991-995.
[6]	梁学奇, 郭黎姣, 陈贺捷, 武杰, 孙雅琪, 邢稚坤, 邹海亮, 陈雪玲, 吴向未. 泡状棘球绦虫原头蚴抑制骨髓间充质干细胞向成纤维细胞的分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 996-1001.
[7]	樊全宝, 罗惠娜, 王丙云, 陈胜锋, 崔连旭, 江文康, 赵明明, 王静静, 罗冬章, 陈志胜, 白银山, 刘璨颖, 张晖. 低氧培养犬脂肪间充质干细胞的生物学特性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1002-1007.
[8]	耿瑶, 尹志良, 李兴平, 肖东琴, 侯伟光. hsa-miRNA-223-3p调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1008-1013.
[9]	伦志刚, 金晶, 王添艳, 李爱民. 过氧化物还原酶6干预骨髓间充质干细胞增殖及体外向神经谱系诱导分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1014-1018.
[10]	朱雪芬, 黄成, 丁健, 戴永平, 刘元兵, 乐礼祥, 王亮亮, 杨建东. 胶质细胞神经营养因子诱导骨髓间充质干细胞向功能性神经元分化的机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1019-1025.
[11]	段丽芸, 曹晓沧. 人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡调节肠炎小鼠肠黏膜胶原的沉积[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1026-1031.
[12]	裴丽丽, 孙贵才, 王弟. 丹酚酸B抑制骨髓间充质干细胞氧化损伤及促进分化为心肌样细胞[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1032-1036.
[13]	邹刚, 徐志, 刘子铭, 李豫皖, 杨继滨, 金瑛, 张骏, 葛振, 刘毅. 人脱细胞羊膜支架促进Scleraxis修饰人羊膜间充质干细胞体外成韧带分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1037-1044.
[14]	管倩, 栾佐, 叶豆, 杨印祥, 汪兆艳, 王倩, 姚瑞芹. 人少突胶质前体细胞传代过程中形态学的变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1045-1049.
[15]	王正东, 黄娜, 陈婧娴, 郑作兵, 胡鑫宇, 李梅, 苏晓, 苏学森, 颜南. 丁酸钠抑制氟中毒可诱导小胶质细胞活化及炎症因子表达增多[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1075-1080.