冻存脐带间充质干细胞向成骨细胞的分化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.36.009

中国组织工程研究 ›› 2013, Vol. 17 ›› Issue (36): 6436-6442.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.36.009

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冻存脐带间充质干细胞向成骨细胞的分化

陈妍¹，潘丽杰¹，袁杰¹，李天侠²

哈尔滨医科大学附属口腔医学院，¹口腔预防保健科，²口腔修复科，黑龙江省哈尔滨市 150001

收稿日期:2012-10-19 修回日期:2013-01-10 出版日期:2013-09-03 发布日期:2013-09-03
通讯作者: 袁杰，博士，哈尔滨医科大学附属口腔医学院口腔预防保健科，黑龙江省哈尔滨市 150001 dryuanjie@126.com 李天侠，博士，哈尔滨医科大学附属口腔医学院口腔修复科，黑龙江省哈尔滨市 150001 drlitianxia@126.com
作者简介:陈妍★，女，1987年生，黑龙江省哈尔滨市人，汉族，2013年哈尔滨医科大学毕业，硕士，医师，主要从事干细胞相关基础研究。 532402444@qq.com
基金资助:
黑龙江省教育厅科学技术项目(12511224)*

Differentiation of cryopreserved umbilical cord mesenchymal stem cells into osteoblasts

Chen Yan¹, Pan Li-jie¹, Yuan Jie¹, Li Tian-xia²

¹Department of Oral Health Sciences, College of Stomatology, Harbin Medical University, Harbin 150001, Heilongjiang Province, China; ²Department of Prosthodontics, College of Stomatology, Harbin Medical University, Harbin 150001, Heilongjiang Province, China

Received:2012-10-19 Revised:2013-01-10 Online:2013-09-03 Published:2013-09-03
Contact: Yuan Jie, M.D., Department of Oral Health Sciences, College of Stomatology, Harbin Medical University, Harbin 150001, Heilongjiang Province, China drlitianxia@126.com Li Tian-xia, M.D., Department of Prosthodontics, College of Stomatology, Harbin Medical University, Harbin 150001, Heilongjiang Province, China drlitianxia@126.com
About author:Chen Yan★, Master, Physician, Department of Oral Health Sciences, College of Stomatology, Harbin Medical University, Harbin 150001, Heilongjiang Province, China 532402444@qq.com
Supported by:
the Science and Technology Project of Heilongjiang Province Education Department, No. 12511224*

摘要/Abstract

摘要：

背景：在骨组织工程中，脐带间充质干细胞是的一种新兴的种子细胞。目前认为低温冻存是长期保存细胞的有效方法。
目的：探究冻存的脐带间充质干细胞能否被诱导分化成成骨细胞。
方法：采用组织块贴壁法从脐带的华尔通氏胶组织中分离出间充质干细胞。然后，用倒置显微镜观察原代细胞的细胞形态。脐带间充质干细胞的免疫表型和细胞周期用流式细胞仪检测。在冻存6个月后，复苏第2代脐带间充质干细胞进行冻存复苏，并传代培养至12代。对第12代的脐带间充质干细胞进行成骨诱导，它的成骨能力分别通过碱性磷酸酶活性检测，骨钙素和骨涎蛋白的免疫荧光检测以及茜素红染色检测来确定。
结果与结论：原代脐带间充质干细胞呈现典型的成纤维细胞样形态。流式细胞仪显示培养的细胞高表达间充质干细胞的表面标志CD73、CD105和CD90，但是不表达造血细胞的表面标志CD34和CD45。复苏后细胞的存活率是90%。细胞周期显示P8的细胞有75%处于G₀/G₁期，25%处于S+G₂M期。经成骨诱导液处理的第12代细胞显示出比对照组更高的碱性磷酸酶活性(P < 0.01)。此外，在成骨诱导液中诱导的细胞对骨钙素和骨涎蛋白的染色呈阳性，并形成矿化了结节。冻存后的脐带间充质干细胞仍保持了它们的生物学特性，并且在成骨诱导液中能被诱导分化成成骨细胞。

关键词: 干细胞, 细胞分化, 成骨细胞, 骨钙素

Abstract:

BACKGROUND: Human umbilical cord mesenchymal stem cells are considered as novel seed cells in bone tissue engineering. Cryopreservation is an effective method for storing cells for a long time.
OBJECTIVE: To explore whether umbilical cord mesenchymal stem cells of cryopreservation could be induced to differentiated into osteoblasts.
METHODS: Mesenchymal stem cells were isolated from the Wharton’s jelly of human umbilical cord tissue by the tissue explant adherent method. Morphology of primitive cells was observed by inverted microscopy. Immunophenotypes and cell cycle of umbilical cord mesenchymal stem cells were measured using flow cytometry. After frozen storage for 6 months, the second passage of umbilical cord mesenchymal stem cells was thawed and subcultured to passage 12. Upon induction with osteogenic inductive medium, the osteogenic ability of passage 12 of umbilical cord mesenchymal stem cell was evaluated by alkaline phosphatase activity, the immunofluorescent analysis of osteocalcin and bone sialoprotein and the assay of alizarin red staining separately.
RESULTS AND CONCLUSION: Primary umbilical cord mesenchymal stem cells displayed a typical fibroblast-like morphology. Flow cytometry showed that the cultured cells expressed high levels of the mesenchymal stem cells surface markers CD73, CD105 and CD90, but did not express hematopoietic cells surface markers CD34 and CD45. The survival rate of umbilical cord mesenchymal stem cells after resuscitation was 90%. The cell cycle analysis indicated that 75% of the cells of passage 8 were in G₀/G₁phase and 25% in S+G₂M phase. Passage 12 cells treated with osteogenic inductive medium displayed a higher alkaline phosphatase activity compared with control cells (P < 0.01). Moreover, the cells, induced in osteogenic inductive medium, were positive for osteocalcin and bone sialoprotein staining and formed the mineralized nodules. Umbilical cord mesenchymal stem cells still maintain their biological characteristics after cryopreservation, and can be induced into osteoblasts with osteogenic inductive medium.

Key words: stem cells, cell differentiation, osteoblasts, osteocalcin

中图分类号:

R394.2

陈妍，潘丽杰，袁杰，李天侠. 冻存脐带间充质干细胞向成骨细胞的分化[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(36): 6436-6442.

Chen Yan, Pan Li-jie, Yuan Jie, Li Tian-xia. Differentiation of cryopreserved umbilical cord mesenchymal stem cells into osteoblasts[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(36): 6436-6442.

图/表（结果） 7

2.1 人脐带间充质干细胞的形态学观察 用组织块贴壁法培养细胞，5 d后可以看到有少量且分散的细胞从组织块中爬出，见图1，贴壁细胞呈纺锤形或多角型。培养14 d左右，细胞形成更规则的成纤维细胞样形态且平行排列，此时细胞可达80%-90%融合，见图2，细胞增殖迅速，三四天可传代，传代后细胞形态未见明显的改变。

2.2 人脐带间充质干细胞免疫表型的分析 从脐带的华尔通氏胶组织(Wharton’s Jell)中分离出来的细胞，传至第2代，经流式细胞仪检测，高表达CD90、CD105和CD73，不表达CD34和CD45，见图3。

2.3 人脐带间充质干细胞冻存复苏培养观察 第2代的人脐带间充质干细胞冻存6个月复苏后，锥虫蓝染色后细胞存活率可达90%。复苏的细胞24 h内贴壁，少许悬浮，贴壁细胞呈梭形或多角型，生长状态良好，3-5 d达到80%-90%融合，见图4，传代后细胞形态均一、状态良好、增殖速度较快。

2.5 碱性磷酸酶活性检测结果 成骨诱导的人脐带间充质干细胞在6 d时碱性磷酸酶值开始增高呈持续上升趋势，诱导15 d时达到峰值，之后缓慢下降，对照组细胞的碱性磷酸酶值始终低于诱导组(P < 0.01)，见图6。表明成骨诱导后15 d，人脐带间充质干细胞的碱性磷酸酶活性最强。

2.6 免疫荧光染色结果 成骨诱导14 d的第12代人脐带间充质干细胞进行免疫细胞化学检测，可观察到诱导组细胞中骨钙素和骨涎蛋白染色阳性，而在对照组细胞中未观察到阳性染色细胞，见图7-10。

参考文献

[1] Pittenger MF, Mackay AM, Beck SC, et al. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science. 1999;284(5411):143-147.
[2] Li ZY, Chen L, Liu L, et al. Odontogenic potential of bone marrow mesenchymal stem cells. J Oral Maxillofac Surg. 2007;65(3):494-500.
[3] Secco M, Zucconi E, Vieira NM, et al. Multipotent stem cells from umbilical cord: cord is richer than blood! Stem Cells.2008; 26(1):146-150.
[4] Wang L, Tran I, Seshareddy K, et al. A comparison of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells and human umbilical cord-derived mesenchymal stromal cells for cartilage tissue engineering. Tissue Eng Part A. 2009;15(8):2259-2266.
[5] 吕江涛,田少奇,孙康,等.血小板裂解液对人脐带间充质干细胞体外成骨分化的影响[J].中国组织工程研究,2012,16(41): 7637-7641.
[6] 张镇,田少奇,张才龙,等.携带人骨形态发生蛋白2可诱导慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞的成骨[J].中国组织工程研究, 2012,16(14):2545-2549.
[7] 曲志国,野向阳,林辉,等.人脐带间充质干细胞诱导成骨及治疗骨缺损[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,15(45):8503- 8507.
[8] Kadner A, SP Hoerstrup, J Tracy, et al. Human umbilical cord cells: a new cell source for cardiovascular tissue engineering. Ann Thorac Surg.2002;74:S1422–S1428.
[9] Wang L, Ott L, Seshareddy K, et al. Musculoskeletal tissue engineering with human umbilical cord mesenchymal stromal cells. Regen Med. 2011;6(1):95-109.
[10] Can A, Karahuseyinoglu S. Concise review: human umbilical cord stroma with regard to the source of fetus-derived stem cells. Stem Cells. 2007;25(11):2886-2895.
[11] Peng J, Wang Y, Zhang L, et al. Human umbilical cord Wharton's jelly- derived mesenchymal stem cells differentiate into a Schwann-cell phenotype and promote neurite outgrowth in vitro. Brain Res Bull. 2011;84(3):235-243.
[12] 刘忠,李素萍,杨宏友,等.人脐带间充质干细胞体外分化成骨细胞的研究[J].中国输血杂志, 2011,24(5):376-382.
[13] 扎拉嘎胡,陈莉,兰晓霞,等.脐带间充质干细胞向成骨细胞分化的潜能[J].中国组织工程研究与临床康复,2010,14(40): 7439-7442.
[14] 何绍清,罗振宇,刘秋英,等.人脐带间充质干细胞分离培养及向脂肪与成骨细胞的分化[J].中国组织工程研究与临床康复,2010, 14(14):2492-2496.
[15] 孙国栋,李志忠,王晶,等.人脐带间充质干细胞的分离培养及向成骨成脂分化的实验研究[J]. 西安交通大学学报:医学版,2010, 14(2):143-147.
[16] 赵磊,王文加,付常皓,等.人脐带间充质干细胞的分离培养及成脂成骨分化[J].中国老年学杂志,2010,29(17):2460-2462.
[17] 野向阳,李相军,徐岩,等.人脐带间充质干细胞体外成骨及其免疫学特征[J]. 国组织工程研究与临床康复,2009,13(36): 7029- 7033.
[18] Hsieh JY, Fu YS, Chang SJ, et al. Functional module analysis reveals differential osteogenic and stemness potentials in human mesenchymal stem cells from bone marrow and Wharton's jelly of umbilical cord. Stem Cells Dev. 2010;19(12): 1895-1910.
[19] Han Y, Chai J, Sun T, et al. Differentiation of human umbilical cord mesenchymal stem cells into dermal fibroblasts in vitro. Biochem Biophys Res Commun. 2011;413(4):561-565.
[20] Karahuseyinoglu S, Cinar O, Kilic E, et al. Biology of stem cells in human umbilical cord stroma: in situ and in vitro Surveys. Stem Cells. 2007;25(2):319-331.
[21] De Bruyn C, Najar M, Raicevic G, et al. A rapid, simple, and reproducible method for the isolation of mesenchymal stromal cells from Wharton’s jelly without enzymatic treatment. Stem Cells. 2011;20(3):547-557.
[22] Peng J, Wang Y, Zhang L, et al. Human umbilical cord Wharton's jelly- derived mesenchymal stem cells differentiate into a Schwann-cell phenotype and promote neurite outgrowth in vitro. Brain Res Bull. 2011;84(3):235-243.
[23] Tong CK, Vellasamy S, Tan BC, et al. Generation of mesenchymal stem cell from human umbilical cord tissue using combination of enzymatic and mechanical disassociation method. Cell Biol Int. 2011;35(3):221-226.
[24] Chen MY, Lie PC, Li ZL, et al. Endothelial differentiation of Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells in comparison with bone marrow-derived mesenchymal stem cells. Exp Hematol. 2009;37(5):629-640.
[25] Wang HS, Hung SC, Peng ST, et al. Mesenchymal stem cells in the Wharton’s jelly of the human umbilical cord. Stem Cells. 2004;22(7):1330-1337.
[26] Yu J, Deng Z, Shi J, et al. Differentiation of Dental Pulp Stem Cells into Regular-Shaped Dentin-Pulp Complex Induced by Tooth Germ Cell Conditioned Medium. Tissue Eng. 2006; 12(11):3097-3105.
[27] Huang CH, Tseng WY, Yao CC, et al. Glucosamine promotes osteogenic differentiation of dental pulp stem cells through modulating the level of the transforming growth factor-beta type I receptor. J Cell Physiol. 2010;225(1):140-151.
[28] Lindroos B, Mäenpää K, Ylikomi T, et al. Characterisation of human dental stem cells and buccal mucosa fibroblasts. Biochem Biophys Res Commun. 2008;368(2):329-335.
[29] Phuc PV, Nhung TH, Loan DT, et al. Differentiating of banked human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells into insulin-secreting cells. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2011; 47(1):54-63.

引言

材料方法

设计：分子水平、细胞水平体外观察。

时间及地点：于2011年9月至2012年7月在哈尔滨医科大学附属第一医院细胞移植实验室完成。

材料：

标本采集：采集足月妊娠剖宫产健康胎儿的脐带，来源于哈医科大学附属第一医院妇产科，经产妇及家属知情同意，实验过程符合医学伦理学标准。

冻存脐带间充质干细胞向成骨细胞分化实验的主要试剂及仪器：

实验方法：

人脐带间充质干细胞的分离、传代培养：将脐带在无菌条件下放入含有100 U/mL青霉素和100 g/L的链霉素的DMEM/F12培养液中，4 h内处理。用组织块贴壁法分离人脐带间充质干细胞。取脐带纵向剪开，剔除动静脉血管，PBS冲净，取华尔通氏胶(Wharton’s Jell)，剪碎至1.0 mm³大小的组织块，将组织块置于25 cm²培养瓶中培养，加入适量的DMEM/F12培养基(含体积分数为10%胎牛血清、20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子、 100 U/mL青霉素和100 g/L的链霉素)，每日在倒置显微镜下观察，当原代细胞融合达80%- 90%时，采用0.25%胰蛋白酶消化，PBS冲洗，离心，按1∶2传代培养。

人脐带间充质干细胞免疫表型的流式细胞仪分析：取第 2 代的贴壁细胞，常规消化，制成细胞浓度为1×10⁹ L^-¹的悬液，在100 μL/管悬液中分别加入CD90(Thy1)- FITC、CD73-PE、CD105-FITC、CD45-PE和CD34-APC抗体20 μL及其相应同型对照，流式细胞仪检测细胞表型。

人脐带间充质干细胞的冻存复苏及复苏率的检测：取经形态学和表面抗原鉴定的第2代细胞，常规消化，去除上清后缓慢加入含10%DMSO+体积分数20%胎牛血清+70%DMEM/F12冻存保护剂。然后进行梯度冻存，置4 ℃ 20-30 min，-20 ℃ 1 h，再置 -80 ℃ 过夜，次日投入-196 ℃液氮保存，6个月后取出冻存管，37 ℃水浴箱中快速解冻，并加入含体积分数10%FBS的DMEM/F12基础培养液混悬，离心去除DMSO，接种至培养瓶内培养，待细胞达到80%-90%融合后，常规消化，以1∶2传代进一步扩增。同时将1滴细胞悬液与2滴锥虫蓝液混合后，滴入细胞计数板，2 min后，在显微镜下计数至少200个细胞。

细胞周期的测定：取冻存6个月复苏后传至8代的人脐带间充质干细胞，常规消化，体积分数70%冷乙醇4 ℃固定并透膜24 h，10 mg/L的Rnase A 37 ℃孵育30 min，加入50 mg/L碘化丙啶4 ℃避光孵育5 min，以流式细胞仪检测分析细胞周期。

成骨细胞的诱导：取冻存6个月复苏后传至12代的人脐带间充质干细胞，消化制成单细胞悬液，以细胞浓度5×10⁸ L^-¹接种于25 cm²培养瓶中，常规培养24 h后，诱导组换成成骨诱导培养基0.1 μmol/L地塞米松、 10 mmol/L β-甘油磷酸钠、50 μmol/L抗坏血酸、含体积分数10 % FBS的DMEM/F12，诱导21 d，对照组细胞始终采用DMEM/F12完全培养基培养，每隔三四天换液1次。

碱性磷酸酶活性测定：取第12代的人脐带间充质干细胞，以1×10³/孔的细胞密度接种96孔板，分别成骨诱导3，6，9，12，15，18，21 d，用 PBS洗3次，室温加0.2% Triton X-100裂解液30 min，倒置显微镜下观察到细胞裂解后，再用碱性磷酸酶试剂盒检测各组细胞的碱性磷酸酶活性，空白管调零，520 nm处酶标仪测各孔吸光度(A)值，每次实验组和对照组各取4孔进行碱性磷酸酶活性检测。按下列公式换算为金氏单位/g(每克组织蛋白在37 ℃与基质作用15 min产生1 mg酚为一个金氏单位)^[16-17]。

免疫细胞化学检测：取成骨诱导14 d的人脐带间充质干细胞，40 g/L多聚甲醛液室温固定2 h，PBS洗3次，用SABC法(streptavidin-biotin complex)检测骨钙素和骨涎蛋白蛋白的表达。应用的抗体有：骨钙素(兔抗人，1∶200)和骨涎蛋白(兔抗人，1∶500)。应用的二抗：用FITC标记的山羊抗兔二抗(1∶200)，细胞核用DAPI染色。未诱导的人脐带间充质干细胞作为对照组。

茜素红染色：取成骨诱导21 d细胞，PBS冲洗2次，体积分数95%乙醇固定30 min，双蒸水冲洗3次。0.1%茜素红-Tris-HCl(pH 8.3)于37 ℃下染色30 min。倒置显微镜下观察，拍照。

主要观察指标：①细胞流式技术检测细胞表型。②细胞复苏后的存活率。③流式细胞仪检测分析细胞周期。④检测碱性磷酸酶活性的变化。⑤荧光免疫细胞化学染色检测与骨细胞相关标志分子基因和蛋白的表达。⑥检测矿化结节形成。

统计学分析：碱性磷酸酶活性测定所得数据以x(_)±s表示。组间均数比较采用配对t 检验。当P < 0.05认为差异有显著性意义。

讨论

脐带是分娩后的废弃物，采集时对产妇及新生儿无任何危害及损伤，引起感染的概率低，并且鲜有引起移植物抗宿主病^[16]。许多研究已表明脐带间充质干细胞表达部分胚胎干细胞的标志，是一种更原始的干细胞，而且不涉及法律和伦理方面的争议^[17-19]。这些优点为人脐带间充质干细胞在骨组织工程领域提供更为广泛的应用前景。

这项研究选用组织块贴壁法，不仅避免了污染，提高细胞提取成功率；而且防止了酶处理对细胞的损伤，更好的保持了细胞的生物活性和功能^[20-21]。实验中从脐带华通胶中提取出的间充质干细胞贴壁生长，呈现典型的成纤维样细胞形态^[22]。流式细胞仪检测结果显示，贴壁细胞高表达间充质干细胞的表面抗原CD73、CD90和CD105，而不表达造血细胞表面抗原CD34和CD45，这说明从脐带分离出的细胞符合间充质干细胞的表达特征，且不具有造血细胞特性^[23-24]。

此研究将第2代经形态学及表面抗原鉴定的人脐带间充质干细胞冻存于液氮中6个月，复苏率高达90%且细胞生长状态良好，证明低温冻存不会影响人脐带间充质干细胞的生物活性，而且是长期保存人脐带间充质干细胞的理想方法。流式细胞仪分析细胞周期显示有75%的P8人脐带间充质干细胞处于G₀/G₁期，25%处于S+G₂M，提示绝大部分细胞为早期细胞，保留着自我更新和增殖能力，表明低温冻存不会影响人脐带间充质干细胞的干细胞特性。

为证实冻存复苏多次传代后的人脐带间充质干细胞仍具有向成骨细胞分化的能力，对冻存复苏传至第12代人脐带间充质干细胞进行了成骨诱导。目前认为，碱性磷酸酶和钙结节的形成是向成骨细胞分化的标志^[25-26]；而并且有研究显示骨钙素和骨涎蛋白是成骨细胞分化的晚期标志，在硬组织再生方面扮演重要的角色^[27-29]。实验针对以上指标进行验证，结果显示：成骨诱导的人脐带间充质干细胞碱性磷酸酶活性明显升高(P < 0.01)，骨钙素和骨涎蛋白免疫化学荧光染色及茜素红染色的结果呈阳性，这些证据均表明冻存复苏多次传代后的人脐带间充质干细胞具有成骨分化潜能。

总之，该实验验证了低温冻存可作为长期保存人脐带间充质干细胞一种有效方法，节约了成本，避免因长时间培养引起的细胞衰老，减少了细胞浪费。重要的是，复苏后的人脐带间充质干细胞保持了生物活性，具备较强的增殖能力和向成骨细胞分化能力，这为人脐带间充质干细胞在骨组织工程的研究和合理应用提供了可能性。

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[1]	蒲锐, 陈子扬, 袁凌燕. 不同细胞来源外泌体保护心脏的特点与效应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 1-.
[2]	林清凡, 解一新, 陈婉清, 叶振忠, 陈幼芳. 人胎盘源间充质干细胞条件培养液可上调缺氧状态下BeWo细胞活力和紧密连接因子的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 4970-4975.
[3]	张秀梅, 翟运开, 赵杰, 赵萌. 类器官模型国内外数据库近10年文献研究热点分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1249-1255.
[4]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.
[5]	史洋洋, 秦英飞, 吴福玲, 何潇, 张雪静. 胎盘间充质干细胞预处理预防小鼠毛细支气管炎[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 991-995.
[6]	梁学奇, 郭黎姣, 陈贺捷, 武杰, 孙雅琪, 邢稚坤, 邹海亮, 陈雪玲, 吴向未. 泡状棘球绦虫原头蚴抑制骨髓间充质干细胞向成纤维细胞的分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 996-1001.
[7]	樊全宝, 罗惠娜, 王丙云, 陈胜锋, 崔连旭, 江文康, 赵明明, 王静静, 罗冬章, 陈志胜, 白银山, 刘璨颖, 张晖. 低氧培养犬脂肪间充质干细胞的生物学特性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1002-1007.
[8]	耿瑶, 尹志良, 李兴平, 肖东琴, 侯伟光. hsa-miRNA-223-3p调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1008-1013.
[9]	伦志刚, 金晶, 王添艳, 李爱民. 过氧化物还原酶6干预骨髓间充质干细胞增殖及体外向神经谱系诱导分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1014-1018.
[10]	朱雪芬, 黄成, 丁健, 戴永平, 刘元兵, 乐礼祥, 王亮亮, 杨建东. 胶质细胞神经营养因子诱导骨髓间充质干细胞向功能性神经元分化的机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1019-1025.
[11]	段丽芸, 曹晓沧. 人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡调节肠炎小鼠肠黏膜胶原的沉积[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1026-1031.
[12]	裴丽丽, 孙贵才, 王弟. 丹酚酸B抑制骨髓间充质干细胞氧化损伤及促进分化为心肌样细胞[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1032-1036.
[13]	邹刚, 徐志, 刘子铭, 李豫皖, 杨继滨, 金瑛, 张骏, 葛振, 刘毅. 人脱细胞羊膜支架促进Scleraxis修饰人羊膜间充质干细胞体外成韧带分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1037-1044.
[14]	管倩, 栾佐, 叶豆, 杨印祥, 汪兆艳, 王倩, 姚瑞芹. 人少突胶质前体细胞传代过程中形态学的变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1045-1049.
[15]	李偲, 赵婷, 谭戈, 郑雨林, 张若男, 吴艳, 唐俊明. 血小板源生长因子BB可促进骨骼肌成肌细胞增殖、分化与迁移[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1050-1055.