基于细胞生物学方法比较5种不同组织来源间充质干细胞的特征

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1834

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (33): 5334-5340.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1834

• 干细胞培养与分化 stem cell culture and differentiation • 上一篇下一篇

基于细胞生物学方法比较5种不同组织来源间充质干细胞的特征

刘超^1，2，张丽君¹，陶昊³，杜心洁¹，王芮²，李文菁²，丁淑梅²，王怡²，姜磊²，黄玉香²

¹临沂市妇女儿童医院，山东省临沂市 276000；²青岛奥克生物开发有限公司，山东省青岛市 266000；³青岛大学附属医院，山东省青岛市 266000

修回日期:2019-05-20 出版日期:2019-11-28 发布日期:2019-11-28
通讯作者: 黄玉香，博士，青岛奥克生物开发有限公司，山东省青岛市 266000
作者简介:刘超，1990年生，山东省青岛市人，汉族，2017年安徽医科大学毕业，硕士，主要从事细胞生物学和分子生物学研究。并列第一作者：张丽君，1965年生，汉族，主任医师，主要从事妇科肿瘤相关研究。
基金资助:
山东省重点研发计划项目(2018GSF118121)，项目负责人：张丽君

Comparing biological characteristics of five kinds of mesenchymal stem cells

Liu Chao^{1, 2}, Zhang Lijun¹, Tao Hao³, Du Xinjie¹, Wang Rui², Li Wenjing², Ding Shumei², Wang Yi², Jiang Lei², Huang Yuxiang²

¹Linyi Women and Children Hospital, Linyi 276000, Shandong Province, China; ²Allcare Biomedical Development, Qingdao 266000, Shandong Province, China; ³The Affiliated Hospital of Qingdao University, Qingdao 266000, Shandong Province, China

Revised:2019-05-20 Online:2019-11-28 Published:2019-11-28
Contact: Huang Yuxiang, MD, Allcare Biomedical Development, Qingdao 266000, Shandong Province, China
About author:Liu Chao, Master, Linyi Women and Children Hospital, Linyi 276000, Shandong Province, China; Allcare Biomedical Development, Qingdao 266000, Shandong Province, China. Zhang Lijun, Chief physician, Linyi Women and Children Hospital, Linyi 276000, Shandong Province, China. Liu Chao and Zhang Lijun contributed equally to this work.
Supported by:
The Major Research & Development Project of Shandong Province, No. 2018GSF118121 (to ZLJ)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
MTT法测量细胞增殖：活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶能够使外源MTT还原为不可溶状态，通过酶标仪检测490 nm波长处的吸光度值，间接反映活细胞的数量和活力。
碘化丙啶检测细胞周期：在细胞周期的不同阶段，细胞内的DNA含量不同，碘化丙啶能够嵌入到DNA中，并且在激发光的作用下释放红色荧光，通过检测荧光的强弱间接反映细胞内DNA的含量和所处的细胞周期阶段。

摘要
背景：间充质干细胞的来源以及分离方法越来越多样，充分认识到这些间充质干细胞的异同，将有助于间充质干细胞在临床中更加合理规范的应用。
目的：比较不同组织来源间充质干细胞的生物学特征。
方法：采集剖宫产产妇在生育后脱落的脐带、胎盘以及部分脂肪组织，采用胰酶消化法或组织块贴壁法培养出底蜕膜间充质干细胞、绒毛膜间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带胎盘连接处间充质干细胞、脐带间充质干细胞，所用的干细胞培养基有3种：含胎牛血清的干细胞培养基、含脐血裂解物的干细胞培养基、含无血清添加物的干细胞培养基。检测不同培养条件下的细胞直径、表面标志物以及多向分化能力，检索GEO数据库分析不同间充质干细胞的基因表达情况。
结果与结论：①不同培养条件影响细胞大小和细胞周期，其中无血清培养体系培养的间充质干细胞直径偏小，而脐血裂解物干细胞培养基能够增加胎盘源间充质干细胞的直径；②5种间充质干细胞有类似的表面标志物，都具有成骨、成软骨和成脂肪分化能力，其中脂肪间充质干细胞成脂肪分化能力更强；③脂肪间充质干细胞相比于与其他4种干细胞在基因表达上存在较大差异，具有更复杂细胞基质成分。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID:0000-0001-7577-6178(刘超)

关键词: 间充质干细胞, 组织块培养法, 胰酶消化法, 脐带胎盘连接处间充质干细胞, 脐带间充质干细胞, 脂肪间充质干细胞, 底蜕膜间充质干细胞, 绒毛膜间充质干细胞

Abstract:

BACKGROUND: Various methods have been introduced to isolate mesenchymal stem cells of different origins. A full understanding of similarities and differences among mesenchymal stem cells of different origins will contribute to the rational and standardized application of mesenchymal stem cells in clinical practice.
OBJECTIVE: To compare the biological characteristics of mesenchymal stem cells of different origins.
METHODS: We collected umbilical cord, placenta and part of adipose tissues that were shed from parturients after cesarean delivery, and decidua basalis-derived mesenchymal stem cells, chorionic villi-derived mesenchymal stem cells, adipose-derived mesenchymal stem cells, mesenchymal stem cells at the junction between umbilical cord and placenta, and umbilical cord mesenchymal stem cells were cultured by trypsinization or tissue explant method. There were three kinds of stem cell culture media, including stem cell culture medium containing fetal bovine serum, stem cell culture medium containing cord blood lysate, and serum-free stem cell culture medium. Cell diameter, surface markers and multi-directional differentiation ability under different culture conditions were examined. Gene expression of different mesenchymal stem cells was analyzed by retrieval of the GEO database.
RESULT AND CONCLUSION: Under different culture conditions, there were no differences in cell size and cell cycle. The diameter of mesenchymal stem cells cultured in serum-free culture system was decreased, while the diameter of placenta-derived mesenchymal stem cells cultured in the stem cell culture medium containing cord blood lysate increased. Mesenchymal stem cells of five origins had similar surface markers, osteogenic, chondrogenic and adipogenic abilities, in which adipose-derived mesenchymal stem cells have stronger adipogenic ability. Moreover, adipose-derived mesenchymal stem cells are different from other kinds of stem cells in term of gene expression, and have complex extracellular matrix.

Key words: mesenchymal stem cells, tissue explant method, trypsin digestion, mesenchymal stem cells at the junction between umbilical cord and placenta, umbilical cord mesenchymal stem cells, adipose-derived mesenchymal stem cells, decidua basalis-derived mesenchymal stem cells, chorionic villi-derived mesenchymal stem cells

中图分类号:

刘超，张丽君，陶昊，杜心洁，王芮，李文菁，丁淑梅，王怡，姜磊，黄玉香. 基于细胞生物学方法比较5种不同组织来源间充质干细胞的特征[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(33): 5334-5340.

Liu Chao, Zhang Lijun, Tao Hao, Du Xinjie, Wang Rui, Li Wenjing, Ding Shumei, Wang Yi, Jiang Lei, Huang Yuxiang. Comparing biological characteristics of five kinds of mesenchymal stem cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(33): 5334-5340.

图/表（结果） 3

2.1 间充质干细胞分化能力比较 分离得到的5种间充质干细胞，在原代时有一些不规则形态的细胞出现，特别是酶消化法分离得到的胎盘间充干细胞、脂肪间充干细胞，随着细胞传代，间充质干细胞多数呈长梭形。这5种间充质干细胞在形态上没有明显的差异。使用第5代细胞做诱导分化实验，可以看到5种间充质干细胞均具有成骨、成软骨和成脂肪分化能力，见图1，符合间充质干细胞的分化特征。在相同的诱导条件和时间下，脂肪来源间充质干细胞在成脂肪分化后细胞内有更多的脂滴形成。

2.2 间充质干细胞的细胞直径、倍增时间 实验所用的干细胞培养基有3种：含胎牛血清的干细胞培养基、含脐血裂解物的干细胞培养基、含无血清添加物的干细胞培养基。通过对细胞直径的间接测量，实验发现无血清培养体系培养的细胞显著小于其他2种培养体系培养的细胞(P < 0.05)，胎牛血清组细胞直径偏大，见图2A。在不同的培养体系中，胎牛血清组细胞增殖速度较慢，倍增时间长，见图2B、C。

2.3 流式分析间充质干细胞表面标志 流式技术分析间充质干细胞表面标志物是鉴定间充质干细胞的重要指标，目前普遍认可间充质干细胞表达CD44、CD90、CD105和CD73，并且不表达CD45、CD34、CD14、CD79和HLA-DR^[14]。实验选择了CD105和CD44作为干细胞标志物，选择HLA-DR、CD45和CD34为阴性参照，在不同培养条件下5种间充质干细胞的CD105和CD44阳性表达率均为95%以上，阴性参照则在2%以下，见图3B。

流式数据的前向角散射值(forward scatter，FSC)参数反映细胞直径的大小，通过比较同一次实验每组前向角散射值平均荧光强度的大小，见图3A，进一步确认了不同培养条件下细胞直径的差异，其中含脐血裂解物干细胞培养基能够显著增加胎盘源间充质干细胞的直径。

2.4 间充质干细胞的细胞周期分析 通过PI染色标记细胞内的DNA含量，进而实现对细胞周期分析。分析结果显示，这5种间充质干细胞在无血清添加物培养体系中G₂期细胞所占的比例较大，见图4。

2.5 GEO数据库分析间充质干细胞蛋白表达的差异 基因表达水平能够精确区分细胞间的差异，通过检索GEO数据库，检索到2套数据GSE72597^[15](包含脐带、脐带胎盘连接处间充质干细胞)和GSE108511(包含脐带、脂肪以及胎盘间充质干细胞)，2组数据均采用GPL17586平台。以脐带间充质干细胞为参照，比较其他间充质干细胞与其蛋白表达差异，并将差异蛋白做功能注释，见图5，结果发现脂肪间充干细胞与脐带间充质干细胞有157个蛋白表达存在差异，其中76个高表达，81个低表达，见图6C，在高表达的基因中有许多细胞基质成分相关基因高表达如ABI3BP、Periostin、MFAP5等，这提示脂肪间充干细胞的细胞基质成分更复杂多样，在低表达基因中有许多细胞连接相关的膜蛋白如DSC2、PKP2等，这提示脂肪间充质干细胞相比于脐带间充质干细胞的细胞群体更疏松。脐带胎盘连接处间充质干细胞与脐带间充质干细胞有41个蛋白表达存在差异，其中21个高表达，31个低表达，见图6B，在高表达基因集合中没有显著富集的功能注释，在低表达基因集合中有许多细胞膜受体例如CXCL6、LY96等，这提示脐带胎盘连接处间充质干细胞相比于脐带间充质干细胞对一些信号刺激(如炎症因子)不敏感。胎盘间充干细胞(原GEO数据未区分底蜕膜和绒毛膜)与脐带间充质干细胞有57个蛋白表达存在差异，其中16个高表达，41个低表达，见图6A，在高表达基因中有ABI3BP、Tissue Factor、HGF、VCAM1等，在低表达基因中有DSC2、PKP2、NEDD4L等，这提示胎盘间充质干细胞的细胞群体更加疏松，细胞膜表面的离子通道更加开放。分析这3组差异蛋白的集合关系，可以看到脐带胎盘连接处间充质干细胞与脐带间充质干细胞的差异更小，见图6D。

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引言

材料方法

1.1 设计 细胞水平对比观察实验。

1.2 时间及地点 实验于2017-03-12/2018-12-20在青岛(奥克)区域细胞制备中心和临沂市妇女儿童医院完成。

1.3 材料

1.3.1 脂肪、脐带和胎盘组织 3种组织采集自青岛大学附属医院足月剖宫产的健康产妇，采集之前对产妇及其家属宣读知情同意书，并签署知情同意书，由产科医生完成3种组织采集，即脐带、胎盘和腹部脂肪组织，使用无菌瓶加入细胞培养基密封后低温运输，所有组织在12 h内完成处理。

1.3.2 脐血 采集自青岛大学附属医院足月顺产的健康产妇，在生产后收集脐带胎盘中的血液，采集之前对产妇及其家属宣读知情同意书，并签署知情同意书，由产科医生完成脐血采集，使用抗凝血袋保存运输。经反复冻融后制成脐血裂解物。

1.3.3 实验试剂及仪器 胎牛血清(Gibico公司，货号：16000044)；无血清添加物(Helios公司，货号：HPCPLCRL50)；干细胞基础培养基(达科为公司)；FITC标记的鼠抗人CD44、CD45和HLA-DR抗体，PE标记的鼠抗人CD34和CD105抗体(BD公司)；地塞米松、β-磷酸甘油、2-磷酸抗坏血酸、L-抗坏血酸、丙酮酸钠、转化生长因子β、ITS、胰岛素、异丁基黄嘌呤、消炎痛(Sigma公司)；CO₂培养箱(Thermo公司)；流式细胞仪(Beckman公司)；荧光倒置显微镜(Olympus公司)；离心机(Beckman公司)。

1.3.4 干细胞培养基 ①胎牛血清干细胞培养基(胎牛血清组)：25 mL胎牛血清加入到500 mL干细胞基础培养基；②脐血裂解物干细胞培养基(脐血裂解物组)：25 mL脐血裂解物加入到500 mL干细胞基础培养基；③无血清添加物干细胞培养基(无血清添加物组)：25 mL无血清添加物加入到500 mL干细胞基础培养基。

1.4 实验方法

1.4.1 胎盘底蜕膜、绒毛膜间充质干细胞分离培养 使用PBS冲洗胎盘组织，剥离羊膜后，分别从底蜕膜、绒毛膜剪取组织块，PBS多次冲洗，至组织块泛白为止，剪碎组织块至肉糜状，加入2 g/L胰酶和3 g/L胶原酶消化液，在37 ℃消化30 min，加入等体积细胞培养基中和胰酶，使用100 μm细胞筛过滤细胞消化液，取细胞滤液，4 ℃ 1 000 r/min离心10 min，干细胞培养基重悬后接种细胞培养皿，在37 ℃，体积分数为5%CO₂培养箱中培养。

1.4.2 脐带和脐带胎盘连接处间充质干细胞分离培养 分别剪取脐带、脐带胎盘连接组织，使用PBS冲洗血迹，脐带沿纵轴剖开剔除血管。使用剪刀将组织块剪碎成1.0-2.0 mm³大小的组织小块，并均匀分散在细胞培养皿中，放入细胞培养箱中静置1 h，加入干细胞培养基，在37 ℃，体积分数为5%CO₂培养箱中培养。

1.4.3 脂肪间充质干细胞分离培养 将脂肪组织剪碎至肉糜状，加入等体积2 g/L胶原酶Ⅰ(工作质量浓度为1 g/L)，37 ℃消化30 min。将消化液在4 ℃ 1 000 r/min离心10 min，弃上清液，加入干细胞培养基重悬细胞，接种到细胞培养皿，在37 ℃，体积分数为5%CO₂培养箱中培养。

1.4.4 脐血添加物制备方法 ①取抗凝脐血至离心管中，1 500 r/min离心15 min，取上层血小板血浆到一个新的离心管中，在-80 ℃冰箱冻存过夜；②取出-80 ℃冻存血浆，40 ℃水浴快速解冻，将解冻血浆重新冻存到-80 ℃冰箱内，重复解冻1次；③将2次冻融的血小板血浆，15 ℃ 15 000×g离心20 min。使用0.22 μm滤器过滤后作为最终添加物。

1.4.5 间充质干细胞诱导分化

(1)成骨诱导分化：成骨诱导分化培养基为含有10 mol/L地塞米松、10 mmol/L β-磷酸甘油、0.05 mmol/L 2-磷酸抗坏血酸和体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基。取第5代细胞，按照1.0×10⁴/cm²接种于12孔板内，待细胞融合度70%-80%时更换成骨诱导分化培养基，每周换液2次，培养21 d左右，茜素红染色：PBS冲洗1次，体积分数为95%乙醇室温固定30 min，0.2%茜素红S染色30 min，显微镜下观察。

(2)成软骨诱导分化：成软骨诱导分化培养基为含有 0.1 μmol/L地塞米松、50 mg/L L-抗坏血酸、1 mmol/L丙酮酸钠、10 μg/L转化生长因子β、50 g/L ITS、体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基。取第5代细胞，按照1.0×10⁴/cm²接种于12孔板内，待细胞融合度70%-80%时更换成软骨诱导分化培养基，每周换液2次，培养14 d后，阿新蓝染色：PBS冲洗1次，体积分数为95%乙醇室温固定30 min，1%阿新蓝染色30 min，显微镜下观察。

(3)成脂诱导分化：成脂诱导分化培养基为含有10^-6 mol/L地塞米松、10 mg/L胰岛素、0.5 mmol/L异丁基黄嘌呤(IBMX)、200 μmol/L消炎痛和体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基。取第5代细胞，按照1.0×10⁴/cm²接种于12孔板内，待细胞融合度70%-80%时更换成脂肪诱导分化培养基，每周换液2次，培养14 d左右(镜下见到细胞中出现油滴)，油红O染色镜检：PBS冲洗2次，体积分数为95%乙醇室温固定30 min，油红O室温染色30 min，显微镜下观察。

1.4.6 间充质干细胞倍增时间分析

(1)采用MTT法测量细胞增殖：取第5代不同组织来源间充质干细胞，按1×10⁴/cm²接种到24孔板中，干细胞培养基每3 d半量换液1次。分别于前8 d收集细胞，在收集细胞前加入MTT (5 g/L) 200 μL孵育4 h，弃上清，加入1 mL二甲基亚砜放置37 ℃培养箱至少30 min，充分溶解后上酶标仪(490 nm)测吸光度值。

(2)根据公式计算细胞倍增时间^[11-12]：倍增时间的定义T=?t?lg²/(lgN_t-lgN₀) (N_t为任意对数增长期的观测值，N₀为初始测量值)。根据生长曲线选择第3天到第4天指数增长阶段，计算细胞倍增时间。

1.4.7 间充质干细胞的表面标志分析 取第5代细胞，加入0.15%无EDTA胰酶消化细胞，使用干细胞完全培养基中和胰酶后，取1.0×10⁶个细胞，离心，加入10 mL PBS洗涤1次，离心，加入适量PBS调整细胞浓度为1.0×10⁹L^-1，根据实验需要取100 μL细胞加入FITC-IG1和PE-IG1作为阴性对照管，其余细胞分成5管分别加入流式抗体FITC-CD44、FITC-CD45、FITC-HLA-DR、PE-CD34、PE-CD105，在4 ℃避光条件下标记30 min，标记完成后加入2 mL PBS，离心，加入200 μL PBS重悬细胞，上机检测。

1.4.8 间充质干细胞的细胞周期分析 取第5代细胞(1.0×10⁶)，用1 mL预冷PBS洗1遍，轻轻弹击离心管底以适当分散细胞，避免细胞成团，加入1 mL预冷的体积分数为70%乙醇中，轻轻吹打混匀，4 ℃固定2 h或更长时间(固定12-24 h可能效果更佳)，1 000 r/min离心3-5 min，弃上清，细胞沉淀用1 mL预冷PBS洗1遍。每个样品用0.5 mL染色缓冲液(或PBS)重悬，加入10 μL PI染色液(50×)、20 μL RNase A(25×)，37 ℃避光温浴30 min，上流式细胞仪检测。

1.4.9 间充质干细胞的直径测量 取第5代细胞，使用0.2%胰酶消化，当细胞完全分散后，取2滴细胞消化液涂布到载玻片下，静置3 min，在显微镜20倍镜下拍照，并根据图片比例测量细胞直径，每种细胞测量100个细胞的直径。

1.5 主要观察指标 干细胞分化能力、细胞倍增时间、细胞周期、细胞直径以及流式表型。

1.6 统计学分析 使用R语言(3.5.1版本)作为数据处理、分析和可视化工具，差异显著性使用t 检验方法，P < 0.05时为差异有显著性意义，GEO数据分析使用GEOquery包和limma包，GO富集分析使用clusterProfiler包^[13]，流式数据使用Flowjo(10.0.7版本)软件分析，细胞周期使用Flowjo软件分析，并选择Watson模型拟合。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

间充质干细胞广泛分布在人体的组织中，可以从脂肪^[16]、骨髓^[17]、牙髓^[18]、脐带和胎盘中分离提取间充质干细胞^[19]，这些间充质干细胞的采集不存在伦理问题。脂肪、骨髓组织的采集过程中会对人体造成一定损伤。相比于诱导多能干细胞^[20]，间充质干细胞不需要经过基因编辑，基因更加稳定，在临床应用更加安全。脐带和胎盘采集过程不会对人造成损伤，是间充质干细胞的理想来源。但是间充质干细胞的规范应用需要基于对间充质干细胞的充分认识，只有充分认识到不同组织来源间充质干细胞的异同，才可以更好的确定临床适用证。

实验结果显示，脂肪间充质干细胞具有更强的成脂肪分化能力，Rebelatto等^[21]发现脂肪间充质干细胞相比于骨髓间充质干细胞高表达脂肪酸结合蛋白FABP4，这可能是脂肪间充质干细胞成脂肪分化能力强的一个主要原因。分析GEO数据库，作者发现脐带胎盘连接处间充质干细胞与脐带间充质干细胞差异更小，而脂肪间充质干细胞在蛋白表达上与其他4种间充质干细胞存在较大差异，可能是因为脂肪间充质干细胞相比于其他4种间充质干细胞，发育时间更长并且分化程度高。

分离以及培养间充质干细胞的方法多种多样，不同的分离方法可能会特异性的选择某一亚群细胞，而细胞培养基成分差异以及胰酶消化传代的不同，导致不同的培养方法以及不同的细胞代次之间都会有显著的差异^[22]，有研究发现随着传代次数的增加，细胞内DNA发生随机突变增加^[22-23]，因此间充质干细胞在临床应用中一般选择5代以内。实验中发现不同的培养基(含胎牛血清的干细胞培养基、含脐血裂解物的干细胞培养基、含无血清添加物的干细胞培养基)可以显著影响间充质干细胞的细胞直径和细胞增殖，无血清培养基培养的间充质干细胞体积较小，而脐血裂解物培养基能够特异性增加胎盘源间充质干细胞的体积。Neurohr等^[24]在酵母研究中发现当细胞体积变大时，会稀释细胞质中与细胞周期相关的蛋白，导致细胞G₁期增加，G₂期减少，在作者的研究结果中基本符合这一规律。进一步的研究发现间充质干细胞体积越大越容易引起血栓^[25]，而在无血清培养体系中的间充质干细胞体积最小，因此无血清培养体系可能更适合临床应用。

间充质干细胞表面标志物就像是干细胞的身份证，但是常规的表面标志物只是间充质干细胞的共性，这些标志物表达稳定能够很好鉴定间充质干细胞，但是并不能区分这5种间充质干细胞，有研究表明通过特异性标志物富集到的间充质干细胞可能拥有更好的临床适用证，在分析的GEO数据中，可以看到胎盘源间充质干细胞相比于脐带间充质干细胞高表达CD106(VCAM1)，有报道CD106⁺绒毛间充质干细胞能更好刺激血管形成^[26]。类似的还有CD146⁺阳性胎盘来源间充质干细胞拥有更强的成骨能力^[27]，CD184⁺阳性干细胞群体有更好的趋化性^[28]，当在细胞内过表达CD184时能够增强干细胞趋向受损组织的能力^[29-30]。因此对干细胞表面标志物的深入研究，能够寻找功能特异性的间充质干细胞亚群，更好的区分不同间充质干细胞，并指导间充质干细胞在临床应用中更加精准。

总结：脂肪间充质干细胞与其他4种间充质干细胞存在明显差异，脂肪间充质干细胞具有更强的成脂肪分化能力，能够产生更多的细胞基质成分，在基因表达层面，脐带连接处间充质干细胞与脐带间充质干细胞的差异最小。在不同的培养条件下5种间充质干细胞的细胞大小存在差异，无血清添加物培养的间充质干细胞直径更小，而脐血裂解物培养的间充质干细胞能够增加胎盘源间充质干细胞的体积。对常规的间充干细胞表面标志物分析，没有鉴定到5种间充质干细胞存在明显的差异。在临床应用中为更好地区分不同组织来源的间充质干细胞，需要在干细胞表面标志物以及组学层面有更深入的研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

基于细胞生物学方法比较5种不同组织来源间充质干细胞的特征

Comparing biological characteristics of five kinds of mesenchymal stem cells

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