基于HOXA10调控网络探讨骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠薄型子宫内膜

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1605

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (9): 1397-1402.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1605

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基于HOXA10调控网络探讨骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠薄型子宫内膜

王一飞，宋阳，关永格，许春燕

广州中医药大学，广东省广州市 510006

修回日期:2018-11-23 出版日期:2019-03-28 发布日期:2019-03-28
通讯作者: 宋阳，博士，教授，广州中医药大学，广东省广州市 510006
作者简介:王一飞，女，1992年生，山东省日照市人，汉族，2016年广州中医药大学毕业，硕士，主要从事妇产科方面的研究。
基金资助:
广东省自然科学基金(2017A030310454)，项目负责人：许春燕；广东省科技计划项目(2017A020215119)，项目负责人：关永格；广东省普通高校特色创新项目(2017KTSCX041)，项目负责人：宋阳

Bone marrow mesenchymal stem cell transplantation in a rat model of thin endometrium based on HOXA10 regulatory network

Wang Yifei, Song Yang, Guan Yongge, Xu Chunyan

Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China

Revised:2018-11-23 Online:2019-03-28 Published:2019-03-28
Contact: Song Yang, MD, Professor, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China
About author:Wang Yifei, Master, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, Guangdong Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Guangdong Province, No. 2017A030310454 (to XCY); the Scientific Research Plan Project of Guangdong Province, No. 2017A020215119 (to GYG); the Characteristic Innovation Project of Colleges and Universities in Guangdong Province, No. 2017KTSCX041 (to SY)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
薄型子宫内膜：是指黄体中期超声检查子宫内膜时，厚度值显示小于7 mm，当内膜厚度低于该厚度时，妊娠率可受显著影响。年龄、感染史、避孕药史以及宫腔手术史等因素均可导致薄型子宫内膜疾病的发生，产生闭经、月经量少等相应临床表现，影响女性的生育生殖，现代医学对薄型子宫内膜疾病的治疗仍处于积极的探索中。
miR-196b：研究表明miR-196b在骨髓间充质干细胞成骨分化过程及其相关转导通路中起重要调控作用，在细胞内上调或下调其表达会改变靶基因的表达水平，进而显著改变下游基因的表达和干细胞分化能力。miR-196b是HOXA10的周边基因，血管内皮生长因子、白血病抑制因子及整合素αvβ3是评估子宫内膜状态的常用蛋白，是HOXA10的下游基因，因此作者提出以HOXA10基因为关键转录因子的调控网络猜想，拟通过免疫组化法及qRT-PCR检测大鼠子宫内膜相关蛋白表达水平及基因转录情况，分析猜想网络中各因素之间的相关性，初步探讨骨髓间充质干细胞宫腔移植对薄型子宫内膜大鼠的作用机制。

摘要
背景：薄型子宫内膜疾病是现阶段临床治疗中的一个难题，研究发现骨髓间充质干细胞移植技术具有其独特的疗效和优势，但是关于作用机制方面的研究尚较少开展。
目的：基于以HOXA10为中心的调控网络，探讨骨髓间充质干细胞移植对薄型子宫内膜大鼠的作用机制。
方法：将21只SPF级成年雌性SD大鼠(购于广州中医药大学动物实验中心)随机分成3组：对照组、模型组、骨髓间充质干细胞组，每组7只；后2组采用体积分数为95%乙醇充盈宫腔制备薄型子宫内膜模型，对照组用生理盐水充盈宫腔；抽出乙醇和生理盐水后，骨髓间充质干细胞组大鼠宫腔内注入第3代骨髓间充质干细胞悬液1 mL(细胞浓度为1×10¹⁰ L^-1)，对照组和模型组大鼠宫腔内注入等体积生理盐水。观察2个动情周期后取出子宫，采用苏木精-伊红染色定量分析内膜厚度，免疫组化法检测内膜波形蛋白、角蛋白、血管内皮生长因子、白血病抑制因子及整合素αvβ3的表达，qRT-PCR法检测HOXA10、miR-196b基因表达。
结果与结论：①模型组和骨髓间充质干细胞组大鼠子宫内膜薄于对照组(P < 0.05)，骨髓间充质干细胞组大鼠子宫内膜厚于模型组(P < 0.05)；②模型组和骨髓间充质干细胞组子宫内膜中波形蛋白、角蛋白、血管内皮生长因子、白血病抑制因子及整合素αvβ3蛋白平均吸光度值低于对照组(P < 0.05)，骨髓间充质干细胞组以上5种蛋白平均吸光度值高于模型组(P< 0.05)；③模型组和骨髓间充质干细胞组大鼠子宫组织HOXA10基因相对转录水平低于对照组(P < 0.05)，miR-196b基因相对转录水平高于对照组(P < 0.05)；骨髓间充质干细胞组HOXA10基因相对转录水平高于模型组(P < 0.05)，miR-196b基因相对转录水平低于模型组(P < 0.05)；④miR-196b与HOXA10基因表达呈现负相关(P < 0.05)，HOXA10与各蛋白表达呈现不同程度正相关(P < 0.05)，miR-196b基因与各蛋白表达呈现不同程度负相关(P < 0.05)；⑤结果提示，骨髓间充质干细胞移植可一定程度上改善薄型子宫大鼠内膜厚度及相关蛋白水平，可能原因为miR-196b负性调节HOXA10基因，HOXA10基因进一步促进血管内皮生长因子、白血病抑制因子及整合素αvβ3蛋白的表达有关。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-9125-8239(王一飞)

关键词: 薄型子宫内膜, 骨髓间充质干细胞, 子宫内膜厚度, miR-196b, 血管内皮生长因子, 白血病抑制因子, 整合素αvβ3, 广东省自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Thin endometrial diseases are a challenge in clinical treatment at present. Scholars have found that bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) transplantation has its unique curative effect and advantages, but few studies have been conducted on pathway or gene control.
OBJECTIVE: To observe the effect of BMSCs transplantation in rats with thin endometrium based on the HOXA10 regulatory network.
METHODS: Twenty-one adult female Sprague-Dawley rats of SPF grade (provided by the Animal Experimental Center, Guangzhou University of Chinese Medicine in China) were randomly divided into three groups (n=7/group): control group, model group, and BMSCs group. In the latter two groups, a thin endometrium model was prepared in each rat by filling the uterine cavity with 95% ethanol. In the control group, normal saline was injected to fill the uterine cavity of rats. After extraction of ethanol or normal saline, the rats in the BMSCs group were injected intrauterinely with 1 mL of BMSCs suspension (1×10¹⁰ cells/L), and those in the control and model groups were given the same volume of normal saline. After two estrous cycles, the uterus of each rat was removed. Hematoxylin-eosin staining was used to measure the thickness of the endometrium. Immunohistochemistry was used to detect the expression of vimentin, keratin, vascular endothelial growth factor, leukemia inhibitory factor and integrin αvβ3. qRT-PCR was used to detect the relative transcription of HOXA10 and miR-196b.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the control group, the endometrial thickness of the rats were significantly thinner in the model and BMSCs groups (P < 0.05), while the endometrial thickness in the BMSCs group was thicker than that in the model group (P < 0.05). (2) The mean absorbance values of endometrial vimentin, keratin, vascular endothelial growth factor, leukemia inhibitory factor and integrin αvβ3 were highest in the control group, higher in the BMSCs group and lowest in the model group, and there were significant differences between groups (P < 0.05). (3) The relative transcript level of HOXA10 gene in the model and BMSCs group was significantly lower than that in the control group, while the relative transcript level of HOXA10 gene in the BMSCs group was significantly higher than that in the model group (P < 0.05). The relative transcript level of miR-196b in the model and BMSCs groups was significantly higher than that in the control group (P < 0.05), while the relative transcript level of miR-196b in the BMSCs group was lower than that in the model group (P < 0.05). (4) HOXA10 was negatively correlated with miR-196b gene, HOXA10 was positively correlated with the protein expression to different extents, and miR-196b gene was negatively correlated with the protein expression to different extents. These findings suggest that BMSCs transplantation can improve the endometrial thickness and relevant protein levels of thin endometrium rats to some extent, which may be attributed to the negative regulation of HOXA10 gene by miR-196b, and HOXA10 gene further promotes the expression of vascular endothelial growth factor, leukemia inhibitory factor and integrin αvβ3 proteins.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Endometrium, Bone Marrow, Mesenchymal Stem Cell Transplantation, Vascular Endothelial Growth Factors, Leukemia Inhibitory Factor, Integrin alphaVbeta3, Tissue Engineering

中图分类号:

王一飞，宋阳，关永格，许春燕. 基于HOXA10调控网络探讨骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠薄型子宫内膜[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(9): 1397-1402.

Wang Yifei, Song Yang, Guan Yongge, Xu Chunyan. Bone marrow mesenchymal stem cell transplantation in a rat model of thin endometrium based on HOXA10 regulatory network[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(9): 1397-1402.

图/表（结果） 3

2.1 实验动物数量分析 经过2个动情周期观察，于30只SPF级雌性大鼠中选取具有正常动情周期的21只大鼠纳入实验研究，造模技术成熟，过程中无大鼠感染或死亡，造模后观察2个动情周期，分析21只大鼠子宫组织蛋白表达等指标。

2.2 各组大鼠子宫内膜厚度变化 与对照组比较，模型组大鼠子宫内膜变薄(P=0.000)，骨髓间充质干细胞组子宫内膜厚度薄于对照组(P=0.003)，但与模型组相比，骨髓间充质干细胞组子宫内膜厚度增加(P=0.034)，见图1。

2.3 苏木精-伊红染色结果 对照组子宫内膜、肌层和浆膜层均匀完整，内膜腺上皮及腔上皮细胞完整，呈单层立方状，排列紧密，部分见空泡，间质均匀无水肿，血管及腺体正常；模型组子宫壁全层均变薄，皱襞减少，腺上皮及内膜上皮细胞多呈扁平状，腺体减少或萎缩；骨髓间充质干细胞组子宫内膜表面呈波浪形，腺上皮及腔上皮细胞完整，呈单层立方状，排列紧密，间质可见轻度纤维组织增生，见图2。

2.4 免疫组化法检测各组大鼠子宫内膜相关蛋白的表达 与对照组相比，模型组子宫内膜中波形蛋白、角蛋白、血管内皮生长因子、白血病抑制因子及整合素αvβ3蛋白平均吸光度值降低(P=0.000)，骨髓间充质干细胞组波形蛋白、角蛋白、血管内皮生长因子、白血病抑制因子及整合素αvβ3蛋白平均吸光度值低于对照组(P=0.000)，但与模型组相比，骨髓间充质干细胞组波形蛋白、角蛋白、血管内皮生长因子、白血病抑制因子及整合素αvβ3蛋白的平均吸光度值增多(P=0.003，0.000，0.001，0.002，0.000)，见表2。

2.5 qRT-PCR法检测各组HOXA10、miR-196b基因相对转录水平 与对照组比较，模型组大鼠子宫组织HOXA10基因相对转录水平降低(P=0.000)，骨髓间充质干细胞组HOXA10基因相对转录水平低于对照组(P=0.002)，但与模型组相比，骨髓间充质干细胞组HOXA10基因相对转录水平增加(P=0.002)；与对照组相比，模型组大鼠子宫组织miR-196b基因相对转录水平增加(P=0.000)，骨髓间充质干细胞组miR-196b基因相对转录水平高于对照组(P= 0.000)，但与模型组相比，骨髓间充质干细胞组miR-196b基因相对转录水平下降(P=0.008)，见表3。

2.6 各组基因、蛋白转录量相关性分析 采用Spearman检验，HOXA10与miR-196b基因呈高度负相关(r=-0.862，P=0.000)。HOXA10与血管内皮生长因子、白血病抑制因子、整合素αvβ3呈高度正相关(r=0.825，0.827，0.918，P值均为0.000)；miR-196b与血管内皮生长因子、白血病抑制因子、整合素αvβ3呈高度负相关(r=-0.895，-0.858，-0.826，P值均为0.000)，见表4。

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引言

薄型子宫内膜是指黄体中期即排卵后6-10 d，超声检查子宫内膜厚度值小于7 mm^[1-2]，近期Meta分析结果显示，当内膜厚度小于7 mm时妊娠率明显下降^[3]。导致薄型子宫内膜产生的原因主要包括年龄、感染史、避孕药史、生殖器结核病史以及宫腔手术史等，以上原因可导致子宫内膜基底层损伤，内膜难以再生，胚胎着床失败，对女性的生育能力产生严重的影响^[4-8]。薄型子宫内膜患者主要包括闭经、月经周期正常但月经量少、不易受孕或即便受孕后习惯性流产等临床表现^[9-10]。现阶段对薄型子宫内膜的主要治疗方式有子宫内膜微创术、雌激素控制、粒细胞集落刺激因子、血管活性药物治疗(阿司匹林、枸橼酸西地那非等)^[11-17]。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)是一种具有子宫内膜干细胞潜能的干细胞^[18]，近年来因取材方便、不存在免疫排异、不牵涉伦理问题等优势而开始成为干细胞研究中的热点^[19]，妇科方向主要通过研究该类细胞迁移、免疫调节、增强子宫内膜厚度等特性，探讨其治疗薄型子宫内膜，改善内膜损伤，促进内膜修复的效果^[20]。

miRNA广泛存在于子宫内膜中，其中miR-196b是HOXA10的周边基因^[21]，血管内皮生长因子、白血病抑制因子及整合素αvβ3是评估子宫内膜状态的常用蛋白，是HOXA10的下游基因，因此作者提出以HOXA10基因为关键转录因子的调控网络猜想，拟通过免疫组化法及qRT-PCR检测大鼠子宫内膜相关蛋白表达水平及基因转录情况，分析猜想网络中各因素之间的相关性，结合该网络初步探讨骨髓间充质干细胞宫腔移植对薄型子宫内膜大鼠的作用机制，以期为薄型子宫内膜相关临床疾病及实验研究提供一定的参考。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 随机分组动物实验。

1.2 时间及地点 实验于2017年6月至2018年3月在广州中医药大学第一附属医院完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 未交配8-10月龄SPF级雌性SD大鼠30只，选取具有正常动情周期的大鼠21只，体质量(230±20) g，用于薄型子宫内膜模型制备；3周龄SPF级雄性SD大鼠2只，体质量(55±5) g，用于骨髓间充质干细胞的原代提取。实验动物均购于广州中医药大学动物实验中心，动物许可证号：SCXK(粤)2017-2018。动物在SPF级实验室统一饲养，实验结束后将动物统一处死，该项目已获广州中医药大学第一附属医院批准(伦理号：TCMF1-2017025)。

1.3.2 实验试剂及药物 小鼠波形蛋白(Vimentin)单克隆抗体(Abcam公司，货号ab8069)；小鼠角蛋白(Pan Keratin)单克隆抗体(Abcam公司，货号ab8068)；兔整合素αvβ3多克隆抗体(Abcam公司，货号ab190729)；SDS、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、Tris、脱脂奶粉(BIOFROXX公司)；过硫酸铵、四甲基乙二胺(TEMED)(北京普利莱基因技术有限公司)；DEPC(Sigma公司)；Premix EX Taq^TM (Probe qPCR)(TaKaRa公司，货号RR390B)；Prime Script^TMRT reagent Kit(TaKaRa公司，货号RR047A)；miRcute miRNA提取分离试剂盒(天根公司，货号DP501)；福爱乐医用胶(北京福爱乐科技发展有限公司，批号20161013)。

1.3.3 实验仪器 电泳、电转系统(美国Bio-rad公司)；脱色摇床(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)；数码凝胶图像分析系统(杭州朗基科学仪器有限公司)；旋涡振荡器(海门市麒麟医用仪器厂)；自动酶标仪(深圳雷杜生命科学股份有限公司，型号RT-6000)；荧光定量仪(ABI公司，型号7300)；PCR仪(BIO-RAD公司，型号C1000)。

1.4 实验方法

1.4.1 骨髓间充质干细胞培养 3周龄雄性SD大鼠2只，麻醉后于无菌条件取下双侧股骨，置入盛有α-MEM的培养皿中，无菌眼科剪剪断股骨一端，用注射器反复冲洗骨髓腔，待骨头发白后，用移液枪将吹出物吹成悬液，吸取悬液至15 mL离心管中，1 500 r/min离心5 min，弃上层清液，用配置好的α-MEM培养液重悬细胞并计数，重悬后的细胞以(1.0-2.0)×10⁷/cm²的密度接种到25 cm²培养瓶，标记为原代，置于体积分数为5%CO₂和100%饱和湿度、37 ℃温度条件下的恒温细胞培养箱中进行培养，根据细胞贴壁情况，一般可于培养24-48 h后进行首次换液，以后每2 d或3 d换液，细胞融合至70%-80%时，胰酶消化并酌情选择比例进行传代。

1.4.2 实验分组、模型制备、骨髓间充质干细胞移植 选取具有正常动情周期的21只雌性SD大鼠随机分为3组，每组7只，即模型组、对照组、骨髓间充质干细胞组。对照组用生理盐水充盈宫腔，模型组和骨髓间充质干细胞组参照文献[22]方法造模，腹腔注射10%水合氯醛(3 mL/kg)麻醉，暴露子宫，使用0号缝合丝线活结结扎子宫两端，宫腔内注射体积分数为95%乙醇充盈宫腔，约5 min后将乙醇抽出，换用生理盐水冲洗宫腔一两次。然后骨髓间充质干细胞组大鼠宫腔内注入第3代骨髓间充质干细胞悬液1 mL(细胞浓度为1×10¹⁰L^-1)，对照组和模型组大鼠宫腔内注入等体积生理盐水，注射完成后退出注射器针头，用医用胶迅速封闭针头穿刺孔，防止移植液或生理盐水外渗，缝合肌层后于肌层撒0.5 g青霉素钠粉剂后缝合皮肤，缝合完成后大鼠置于电热毯上复苏。造模技术成熟，无大鼠感染或死亡，观察2个动情周期后取材。

1.5 主要观察指标

1.5.1 苏木精-伊红染色观察子宫内膜厚度 石蜡包埋大鼠子宫组织，应用石蜡切片机连续切片，切片厚度为4 μm，苏木精-伊红染色后每张切片在100倍高倍镜下拍照，随机选取5个视野，用Image pro-plus图像处理软件测量子宫内膜厚度，取5个视野的平均值。

1.5.2 免疫组化检测大鼠子宫内膜角蛋白、波形蛋白、血管内皮生长因子、白血病抑制因子及整合素αvβ3的表达 石蜡切片制作完成后二甲苯脱蜡2次，10 min/次，依次经梯度乙醇、纯水和PBS清洗各1次，5 min/次，体积分数为3%过氧化氢室温湿盒孵育10 min，体积分数为10%正常山羊血清室温湿盒封闭30 min，一抗4 ℃孵育过夜，二抗湿盒内孵育30 min，DAB显色，苏木精复染，分化数秒后经梯度乙醇脱水，二甲苯透明2次，10 min/次，中性树胶封固，拍照后应用Image pro-plus图像处理软件测量并分析切片平均吸光度值。

1.5.3 qRT-PCR法检测HOXA10、miR-196b基因相对量 转录引物设计合成见表1。提取子宫组织RNA，37 ℃消化30 min，65 ℃灭活10 min的体系配置反应液对目标基因进行反转录反应，最后进行荧光定量PCR反应，将所得结果用Ct值表示，样本的相对转录量采用2^-^??Ct对目的基因进行分析。

1.6 统计学分析 采用SPSS 19.0统计软件进行分析，计量资料以x(_)±s表示，组间差异应用单因素方差分析(ANOVA)，Levene检验方差齐性，若方差齐，采用LSD法进行两两比较，若方差不齐，则使用Dunnett’s T3法进行两两比较；不服从正态分布时，采用非参数统计的秩和检验，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

在接受体外受精-胚胎移植治疗的患者中，薄型子宫内膜者约占2.4%^[23]，其具体的发病机制现阶段并不完全清楚，可能是原发性的，也可能是由于宫腔操作史、宫腔炎症或长期服用复方避孕药等引起的继发性内膜损伤。为了改善薄型子宫内膜患者的妊娠率，有很多学者从药物治疗、机械刺激、高压氧治疗、生物电刺激等方面进行过探索性研究^[24]。针对薄型子宫内膜患者，积极采取有效的预防措施和寻找有效的治疗方法具有十分重要的意义^[25]。

骨髓间充质干细胞移植是近年新兴起的治疗薄型子宫内膜的一种再生医学手段。有研究显示骨髓间充质干细胞可向子宫内膜迁移^[26]，能够增加子宫内膜厚度，具有治疗薄型子宫内膜的潜能。辅助生殖技术的进步使得优质取卵的成功率日益增高^[27]，但单纯应用辅助生殖技术，仍有2/3的薄型子宫内膜患者出现低胚胎种植率与高胚胎丢失率的妊娠结局^[28-29]。国外学者Nagori等^[30]对1例因宫腔粘连而致不孕的患者行刮宫术，然后将患者自体骨髓移植入宫腔，术后结合雌激素治疗，该患者子宫内膜的厚度由治疗前的3.2 mm增加至8 mm，并经试管婴儿(IVF)成功妊娠。骨髓间充质干细胞除可增加子宫内膜厚度，另一方面还可通过调节免疫相关细胞因子表达改善薄型内膜容受性^[26]。在此次研究中，采用骨髓间充质干细胞宫腔移植的方式治疗薄型子宫内膜大鼠，苏木精-伊红染色定量分析子宫内膜厚度，免疫组化、qRT-PCR法检测多种与子宫内膜容受性标志物相关的蛋白或基因，结果显示骨髓间充质干细胞可在受损伤部位迁移、增殖，分化为子宫内膜上皮细胞，一定程度上可解决内膜过薄和内膜容受性差的问题，体现了其效果和价值。近期有研究发现通过将附着有干细胞的胶原蛋白材料移植入宫腔，促进功能层内膜重建，成功使5例重度Asherman综合征患者内膜显著增厚，获得妊娠并分娩^[31]。干细胞治疗薄型子宫内膜虽取得了一定的进展，但该治疗方式尚不完全成熟，关于干细胞用量、是否应用载体和进入人体途径与部位及在体内的分化潜能、致瘤性等问题仍需大量的实验深入研究^[32]。

研究表明miRNA参与子宫内膜周期性改变及疾病的病理性改变^[33]，说明miRNA在子宫内膜蜕膜化过程中起相应的调控作用。miR-196b已被证实在骨髓间充质干细胞成骨分化过程及其相关转导通路中起重要调控作用^[34-35]，在细胞内上调或下调其表达会改变靶基因的表达水平，进而显著改变下游基因的表达和干细胞分化能力。HOXA10基因是胚胎着床和子宫内膜蜕膜化必不可少的条件^[36]，在子宫内膜的增殖与分化、子宫内膜容受性的建立、胚胎的定位及黏附、血管通透性的增强中发挥着重要作用^[37]。HOXA10是miR-196b的相邻基因，miR-196b位于9号染色体的HOXA集群上，pri-miR-196b的表达水平与miR-196b的相邻基因HOXA10高度相关^[37]。此项研究结果显示，HOXA10的表达与miR-196b之间存在相关性，这与Popovic等^[38]的研究结果具有一致性，miR-196b与HOXA10基因转录呈现负相关，这与余晓芬^[39]研究结果具有一致性。因此，提示miR-196b可一定程度上负性调节HOXA10基因。血管内皮生长因子属血小板源性因子家族的生长因子，当血管内皮生长因子表达不足时，着床部位血管生成减少，导致早期绒毛生成不良，子宫内膜容受性下降^[40]；白血病抑制因子是白细胞介素6家族中的一员，目前普遍认定其为介导人类胚泡着床的重要细胞因子^[41]；整合素αvβ3可在子宫内膜中表达，其表达量在黄体生成素峰值出现后会显著增加，在妊娠失败患者中检测值呈显著降低趋势^[42]。此研究结果显示，HOXA10与各子宫内膜容受性标志物呈现一定的正相关，与马彩辉等^[43]研究结果具有一致性，说明血管内皮生长因子、白血病抑制因子以及整合素αvβ3作为评估子宫内膜常用蛋白，与HOXA10之间的关系密不可分。由研究结果中HOXA10基因与下游基因呈现出不同程度的正相关性，推论得出HOXA10基因可对子宫内膜容受性相关蛋白的表达产生正向的调节与反馈。

综上所述，骨髓间充质干细胞移植可一定程度上改善大鼠薄型子宫内膜厚度及蛋白水平，可能原因为miR-196b负性调节HOXA10基因，HOXA10基因进一步促进血管内皮生长因子、白血病抑制因子及整合素αvβ3蛋白的表达。由于薄型子宫内膜的修复过程极为复杂，可能有多种信号通路参与其中产生作用，此次研究关于HOXA10调控网络的猜想验证样本量有限，还需进一步完善实验方案得出更深层次的探讨结果。

基于HOXA10调控网络探讨骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠薄型子宫内膜

Bone marrow mesenchymal stem cell transplantation in a rat model of thin endometrium based on HOXA10 regulatory network

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