富血小板纤维蛋白修复陈旧性负重位创伤性膝关节炎模型兔的软骨缺损

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0605

摘要/Abstract

摘要：

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文题释义：
富血小板纤维蛋白：是一种被纤维蛋白紧密包裹的血小板聚合物，内部疏松多孔，并且含有多种可以促进软骨细胞分化增殖的细胞生长因子，如：肿瘤生长因子β1、胰岛素类生长因子1、血管内皮生长因子。目前研究发现，这些细胞因子是促进骨髓间充质干细胞向软骨分化的重要因素，同时其可以加速软骨细胞的增殖、生长。
陈旧性负重位软骨缺损：膝关节内侧副韧带、前交叉韧带和内侧半月板切除改变膝关节应力，同时在股骨内侧髁关节面钻孔破坏关节软骨，建立的创伤性关节炎承重面关节软骨缺损模型可在较短时间内形成作为研究膝关节损伤致骨关节炎的实验模型。

摘要
背景：富血小板纤维蛋白不仅具有抗感染及减轻炎症反应的作用，还能促进组织愈合和再生，其中所包含的多种细胞因子可以促进骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。
目的：观察富血小板纤维蛋白对负重区域陈旧创伤性兔膝关节炎软骨缺损修复的效果。
方法：选取27只6月龄新西兰大白兔(苏州大学动物实验中心提供)，参照Hulth法建立陈旧性负重位的创伤性兔膝关节炎软骨缺损(深3.0-4.0 mm，直径4 mm)。3周后，原手术切口进入，磨除陈旧缺损内纤维肉芽组织，将制备好的填充物填入缺口，共3个处理组，富血小板纤维蛋白组、骨髓间充质干细胞组、空白组。在修复缺损后4，8，12周，取出关节，进行大体观察和组织学观察，ICRS大体评分和Wakitani’s组织学评分进行修复效果的评估。
结果与结论：①大体观察：植入后4，8，12周后，空白组软骨组织出现大范围磨损，纤维结缔组织和骨赘增生，关节腔出现粘连；富血小板纤维蛋白组缺损处外观光滑，新生组织与周边正常组织相似；骨髓间充质干细胞组的修复各阶段较富血小板纤维蛋白组差；②组织学变化：苏木精-伊红染色、阿利新蓝染色、番红O 染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色显示，富血小板纤维蛋白组兔膝关节软骨细胞逐渐增多，软骨细胞可见Ⅱ型胶原的表达；空白组软骨细胞出现全层退化；骨髓间充质干细胞组软骨细胞数量较少；③富血小板纤维蛋白组各个时间点的ICRS大体评分和Wakitani’s组织学评分明显优于空白组(P < 0.01)和骨髓间充质干细胞组(P < 0.05)；④结果提示，富血小板纤维蛋白能够很好地修复创伤性骨关节炎所致的负重位的陈旧软骨缺损，其修复能力显著优于单纯的骨髓间充质干细胞。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0002-5587-7358(邹承达)

关键词: 软骨缺损, 创伤性关节炎, 富血小板纤维蛋白, 骨髓间充质干细胞, Hulth法, 陈旧性, ICRS评分, 组织物填充, 组织构建

Abstract:

BACKGROUND: Platelet-rich fibrin not only exhibits anti-infective and anti-inflammatory properties, but also can promote tissue healing. It consists of various cytokines that can promote bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) to differentiate into chondrocytes.
OBJECTIVE: To explore the effect of platelet-rich fibrin on the repair of cartilage defect of old traumatic knee arthritis in weight-bearing region of rabbits.
METHODS: Twenty-seven 6-month-old New Zealand rabbits provided by Experimental Animal Center, Soochow University, China were selected. Rabbit models of old traumatic knee arthritis cartilage defect in weight-bearing region (a depth of 3.0-4.0 mm, a diameter of 4 mm) were established by Hulth method. At 3 weeks, the granulation tissue was removed from the old defect via the original surgical incision, and the defect region was filled with the prepared filler. There were three groups, including platelet-rich fibrin, BMSCs and blank control groups. The joint was removed at 4, 8 and 12 weeks after repair for gross and histological observations. International Cartilage Repair Society scores and Wakitani’s scores were used to assess the repair outcomes.
RESULTS AND CONCLUSION: Gross observation: at 4, 8, and 12 weeks after implantation, in the blank control group, abundant worn cartilage tissues, hyperplastic fibrous connective tissue and osteophyte, and articular cavity adhesion appeared. In the platelet-rich fibrin group, defect region was smooth, and the newly born tissue was similar to the surrounding normal tissue, which was better than that in the BMSCs group. Hematoxylin-eosin staining, Alysin blue staining, safranin-O staining, and type II collagen immunohistochemical staining showed that rabbit knee chondrocytes gradually increased, and chondrocytes showed type II collagen expression in the platelet-rich fibrin group. The degenerative chondrocytes at all layers were observed in the blank control group. There were few chondrocytes in the BMSCs group. International Cartilage Repair Society scores and Wakitani’s scores in the platelet-rich fibrinogen group were significantly superior to those in the blank control group (P < 0.01) and BMSCs group (P < 0.05). These results imply that platelet-rich fibrin can repair old cartilage defects in weight-bearing region caused by osteoarthritis, and its repairing ability is better than that of simple BMSCs.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

Key words: Osteoarthritis, Knee, Cartilage, Articular, Fibrin, Tissue Engineering

中图分类号:

R457

邹承达，陈星光，宿广昊，张亚，王晓东. 富血小板纤维蛋白修复陈旧性负重位创伤性膝关节炎模型兔的软骨缺损[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(3): 409-415.

Zou Chengda, Chen Xingguang, Su Guanghao, Zhang Ya, Wang Xiaodong. Platelet-rich fibrin repairs cartilage defect in a rabbit model of old traumatic knee arthritis in weight-bearing region[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(3): 409-415.

图/表（结果） 2

2.1 实验动物数量分析 27只兔子均进入结果分析。

2.2 兔骨髓间充质干细胞的培养与鉴定骨髓间充质干细胞在培养瓶中呈长梭形，贴壁生长良好，有较强细胞增殖能力，见图1。

免疫荧光显示细胞表面标志物，CD44，CD105阳性，CD34，CD35阴性，提示所培养的细胞为骨髓间充质干细胞，见图2。

2.3 动物一般情况观察缺损修复后1-3 d，几乎所有实验兔的精神不佳，对外界刺激反应较为迟钝，24 h进食量为平时的1/2-2/3，活动量明显减少，双膝可见梭型肿胀，关节腔可以触及波动感，手术后肢力量减小，活动频次较正常侧减少，步态有跛行，手术侧肢体偶有不着地情况。3-5 d时，富血小板纤维蛋白组和骨髓间充质干细胞组兔子的状态基本恢复正常，进食量和进水量恢复正常，反应较前敏捷，但是手术侧膝关节可见异常活动度，主动活动减少，力量减小，而空白组活动度稍差。3周时空白组出现手术侧肢体活动减少，呈屈曲状，逐渐出现手术侧膝关节的肿胀，可以触及骨性增生，主动活动明显减少，被动屈伸活动明显受限，富血小板纤维蛋白组和骨髓间充质干细胞组兔子无膝关节僵硬的情况出现。此次实验中无伤口明显感染情况发生。

2.4 各组大体外观观察随着时间推移，①骨髓间充质干细胞组：4周时未见明显新生软骨组织形成，仅见少量乳白色组织覆盖缺损底部；8周时缺损依旧明显，边界变得圆钝，可见少数岛状乳白色组织突出于缺损底部，并且有少量半透明组织形成；12周时缺损持续存在，表面无光泽，缺损边界变得圆钝，基底部被乳白色的组织充填，较8周时缺损有所缩小，关节面凸凹不平，缺损边界处可见白色新生组织，与周围组织界限清晰，软骨表面出现较为明显的退变；②富血小板纤维蛋白组：4周时软骨缺损处可见有较多白色半透明状组织生成，触之柔软，表面光滑，缺损边界仍清晰可见；8周时可以发现缺损进一步修复，表面更加光滑，缺损处基本被半透明组织修复，外观有光泽，与正常软骨外观相似，缺损边界线逐渐模糊，分界开始不明显；12周时膝关节软骨缺损修复良好，大体观察和周围宿主软骨组织几乎完全相同，仅在平滑程度上较正常稍有欠缺；③空白组：4周时可见钻孔处缺损已经有部分修复，缺损处表面可见一层薄薄的白色半透明状组织，其周边同正常软骨组织有部分融合；8周时，出现较多的乳白色组织增生，其表面粗糙，与周围软骨形态不相似，部分和周围组织融合，软骨缺损关节面周围出现部分软骨的磨损，软骨变的薄厚不均匀；12周时，可见未钻孔的关节面也出现大块软骨磨损，深达骨质，可见松质骨，周围有组织增生粘连，关节活动明显受限，见图3。

2.5 各组组织学观察见图4-7。

骨髓间充质干细胞组：4周时缺损明显，仅边缘部见新生软骨形成，底部有少量纤维状组织形成；8和12周时表现基本相似缺损持续存在，边缘部可见到少量新生软骨形成，缺损处以大量纤维组织填充，细胞排列较为整齐，有软骨细胞和少量Ⅱ型胶原生成。

富血小板纤维蛋白组：4周时有少量新生软骨样细胞生成，较周围正常组织稀少，且有凹陷，体积较小，排列无序，软骨下骨间有部分连续；术后8周时，新生的软骨样组织仍然有稍许凹陷，细胞比正常的小，较前有增大，排列相对无序，软骨下连续性好，番红O染色新生组织有少量异染性软骨基质形成，阿利新蓝染色有部分软骨细胞生成，Ⅱ型胶原抗体免疫组化染色可见少量Ⅱ型胶原；术后12周时，细胞排列有序，较8周是细胞更加成熟，软骨细胞及Ⅱ型胶原更加丰富。

空白组：4周时可见软骨组织与正常的组织比较相似，组织表面基本光滑，软骨细胞部分排列有序，潮线基本完整，交界处可见少量细胞簇集现象，番红O染色出现部分基质染色不均，阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色未见明显失染；8周时软骨组织表面与正常相比编的粗糙、凹凸不平，出现表层裂隙，软骨细胞列次序进一步紊乱，出现潮线中断，有地方出现核碎、核溶现象，表层细胞簇集现象更加明显，出现部分软骨细胞增生现象，软骨基质出现少量纤维化，软骨下骨质外露、软骨下骨囊性变，阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色不均匀；12周时软骨组织表层出现较大缺损区，软骨细胞次序紊乱，正常潮线消失，部分区域出现软骨下骨及骨小梁的断裂，软骨全层缺损，钙化层难以分辨，阿利新蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色有大部分层次出现失染。

2.6 各组大体评分和组织学评分 ICRS大体评分和Wakitani’s组织学评分：富血小板纤维蛋白组在各个时间段软骨表面形态方面评分明显优于空白组(P < 0.01)和骨髓间充质干细胞组(P < 0.05)。骨髓间充质干细胞组上述评分显著优于空白组(P < 0.05)，见图8，9。

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引言

在临床骨科疾病当中，关节软骨缺损属于常见症状之一，目前临床上还没有效果显著的治疗方式，由此逐渐成为临床骨科中较难治疗病症之一^[1-2]。由于关节软骨部位几乎没有血供，更检测不到神经分布和淋巴引流现象，加之软骨细胞具有代谢缓慢的特性，在分化程度上比较高，因此限制了软骨细胞的分裂能力，导致其损伤之后修复能力较差^[3]。骨髓间充质干细胞是一种多能干细胞，可以向多种细胞分化增殖。而透明软骨细胞缺乏再生能力，研究发现将骨髓间充质干细胞和不同细胞共同培养可以诱导其向共培养的细胞分化，对于骨与软骨缺损的修复有着比较明确的效果^[4-5]。研究发现在软骨附近培养骨髓间充质干细胞可以使其向软骨细胞分化^[6]。富血小板纤维蛋白是第2代血小板浓缩物，由新鲜全血经一次离心后即可制得，无外源性抗凝物质，生物安全性好^[7]。它主要是由聚合的纤维蛋白以及镶嵌其中的血小板、白细胞、生长因子、干细胞等成分所构成。富血小板纤维蛋白不仅具有抗感染及减轻炎症反应的作用，还能促进组织愈合和再生，其中所包含的多种细胞因子可以促进骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化^[8]。目前已被视为一种改善愈合和促进组织再生的新型生物材料^[9]。

由于医学伦理等各种原因，大规模对人体的病变组织进行取材，对软骨缺损修复进行更深的研究受到限制，因此建立一个合适的关节实验动物模型，用动物模型来研究疾病的发病过程、治疗方法、疗效分析，是一个最佳的方法，实验动物模型为疾病的防治研究提供了一个良好的平台^[10]。目前常见的软骨缺损动物模型修复方法均各有优缺点，现在大多学者在设计软骨缺损修复实验时，一般选用Hulth法，这种方法可以在较短的时间(一般在6周内)就可以建立一个理想的骨关节炎模型，同时其具有稳定性好、重复性好等优势^[11]。

当前实验选择27只新西兰大白兔建立承重面的陈旧性创伤性兔膝关节炎软骨缺损模型，不同于以往建模后立刻对新鲜软骨缺损的修复改为与现实情况更为一致的陈旧性软骨缺损的修复，观察富血小板纤维蛋白和骨髓间充质干细胞对其软骨缺损修复的效果并作比较。

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材料方法

1.1 设计随机对照动物实验。

1.2 时间及地点于2017年3月至12月在苏州大学附属儿童医院儿科临床实验室完成。

1.3 材料

实验动物：SPF级三四周龄雄性新西兰大白兔3只，体质量300 g，用于制备骨髓间充质干细胞；健康6月龄大白兔27只，雌雄各半，平均体质量为2.5 kg，用于构建膝关节炎软骨缺损模型，均由苏州大学动物实验中心提供，许可证号：SCXK(苏)2013-0002，实验过程对动物的处置符合2006年科学技术部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》。

实验用试剂：淋巴细胞(Ficoll)分离液(美国Sigma公司)、DMEM/F12培养液(美国Hyclo公司)、胰蛋白酶(美国Sigma公司)。胎牛血清(美国Gibco公司)、苏木精-伊红染色试剂盒(美国 Solarbio)、番红O染色(美国Solarbio)、阿利新蓝(中国阿拉丁公司)、兔Ⅱ型胶原免疫组化试剂盒 (美国Abcam公司)。

1.4 方法

1.4.1 实验分组将27只新西兰大白兔按随机数字表法分为3组，富血小板纤维蛋白组(n=9)，骨髓间充质干细胞组(n=9)，空白对照组(n=9)。

1.4.2 富血小板纤维蛋白的制备分别无菌抽取各组兔耳缘静脉血10 mL至真空负压管中，立即于3 000 r/min离心10 min，全血可分为3层，最底层为红细胞层，上层为贫血小板血浆层，中间透明层即为富血小板纤维蛋白层。将制备好的富血小板纤维蛋白用纱布吸干水分备用。

1.4.3 骨髓间充质干细胞的制备取三四周龄新西兰大白兔，耳缘静脉空气针处死，体积分数75%乙醇浸泡消毒15 min。取出股骨、胫骨，去除表面附着物，PBS清洗，剪去干骺端暴露骨髓腔，在培养皿中用针筒吸取培养液后反复冲洗骨髓腔，直至骨髓完全被冲出。将细胞悬液移入离心管，1 800 r/min离心10 min，弃上清液。培养液重悬细胞，轻加到同等体积的林巴分离液上，2 000 r/min离心20 min。吸取有核细胞层，PBS洗1次，1 200 r/min离心 5 min。将细胞接种于培养瓶中。接种骨髓间充质干细胞后的培养瓶置于体积分数5%CO₂、37 ℃的培养箱，定期换液，待细胞生长融合达90%以上，以0.25%胰蛋白酶消化 3 min，按1∶2的比例传代，传至第3代后，消化、收集细胞，加入10 μL诱导液使细胞略作溶解，再加入透明质酸制成细胞浓度为6×10¹¹ L^-1细胞悬液。用微量移液枪在24孔板中每孔接种20 μL形成细胞团结构，孵育二三小时后取出孔板，加入诱导液，继续培养，以后隔日更换2/3量诱导液，倒置显微镜下观察拍照。

1.4.4 骨髓间充质干细胞的免疫荧光鉴定取消化下来的第3代细胞接种于12孔板中，待其长满80%-90%时PBS洗3次，体积分数4%甲醛固定20 min，PBS洗3次，1% triton-x-100通透10 min，PBS洗3次，每次3 min。分别加入一抗(中国Bioss公司，兔抗兔IgG)1∶200的CD34、CD44、CD45、CD105，4 ℃过夜，PBS洗3次，加入二抗(中国Bioss公司，羊抗兔IgG-FITC、羊抗兔IgG-PE)室温下孵育2 h(避光)，PBS洗3次，荧光显微镜下观察拍照^[18]。

1.4.5 兔膝关节软骨缺损模型的建立及材料植入参照Hulth法，用3%戊巴比妥钠(40 mg/kg)从耳缘静脉静推麻醉^[12]。兔子伸膝位仰卧固定，备皮消毒，手术区域铺巾。取右膝关节前内侧切口，切开皮肤，逐层分离打开关节囊，将髌骨推向外侧脱位，切除内侧半月板，并且离断前交叉韧带，暴露股骨内侧髁。以4 mm钻头在股骨内侧髁钻出一个深3.0-4.0 mm，可隐约见松质骨的一个全层软骨缺损。清洗并逐层缝合伤口，完成模型的建立(3周)将已经建立模型的兔子，用相同方法暴露钻孔处缺损，组织剪和钻头磨除陈旧缺损内增生的纤维肉芽组织后，空白组不做特殊处理，富血小板纤维蛋白组填入单纯的富血小板纤维蛋白(约0.05 g)后缝合，骨髓间充质干细胞组填入单纯的骨髓间充质干细胞细胞团块(细胞浓度约1.0×10⁷L^-1)，修复前交叉韧带，逐层缝合伤口完成修复。术后单笼饲养。

1.5 主要观察指标

1.5.1 一般情况观察缺损后3周内每天观察各组兔的精神状态、对外界刺激反应，进食量，活动量、步态，双侧膝关节主动活动和被动活动的范围。

1.5.2 组织大体外观观察缺损修复后4，8，12周，每个时间点各处死3只兔，获得组织标本，对手术后的膝关节软骨面按照国际软骨修复协会(ICRS)关节软骨修复大体评分标准从缺损填充、修复软骨的颜色、缺损边缘、表面大体外观4个方面进行评分，分值从0-16分，得分越高代表修复后的大体外观越好^[13]。

1.5.3 切片制备及染色将取得的膝关节标本用体积分数4%甲醛固定，并进行脱钙、予以石蜡包埋切片后分别进行苏木精-伊红染色、番红O染色、阿利新蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色。利用Wakitani’s关节软骨缺损组织学评分标准对各标本进行组织学评分^[12]。Wakitani’s组织学评分从表面规则度、细胞形态学、基质染色(异染性)、软骨厚度、移植组织与正常软骨融合5个方面来对修复进行评分，分值从0-14分，分值越低效果越佳。

1.6 统计学分析采用SPSS 22.0软件对采集到的数据进行分析，计量数值以x(_)±s表示。计量资料采用单因素方差分析和q检验。P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

讨论

根据临床修复骨关节炎负重关节面损伤的临床实际情况对既往骨关节炎动物模型的比较，当前实验设计了以负重关节股骨内侧髁软骨陈旧缺损的骨关节炎动物模型为研究对象，来模仿常规的骨关节炎关节损伤修复的情况。对家兔这样的小动物而言，股骨内侧髁直径4 mm、深3 mm的软骨缺损是自发修复所不能完成的，而通过当前实验设计的富血小板纤维蛋白组修复骨关节炎动物模型软骨缺损的方法治疗后，取得了满意效果^[14]。

富血小板纤维蛋白是一种被纤维蛋白紧密包裹的血小板聚合物，内部疏松多空，并且含有多种可以促进软骨细胞分化增殖的细胞生长因子，如：肿瘤生长因子β1、胰岛素类生长因子1、血管内皮生长因子。目前研究发现，这些细胞因子是促进骨髓间充质干细胞向软骨分化的重要因素，同时其可以加速软骨细胞的增殖、生长^[15-17]。国内对于富血小板纤维蛋白的应用主要集中于牙周组织或其他非关节软骨组织的修复：张文丽等^[18]研究发现富血小板纤维蛋白复合骨髓间充质干细胞对修复兔牙槽骨缺损有较好的效果；杨勇等^[19]以富血小板纤维蛋白复合兔脂肪来源的干细胞为实验组修复兔软骨缺损，发现富血小板纤维蛋白的修复优于单纯脂肪来源的干细胞。Bahmanpour等^[20]将富血小板纤维蛋白包裹基质细胞衍生因子1后进行兔关节软骨全层缺损的修复研究，结果显示实验组兔膝关节的国际软骨修复协会评分高于对照组。

当前实验发现同单纯骨髓间充质干细胞组相比单纯富血小板纤维蛋白组有着更好的修复效果，这表明细胞因子在软骨修复过程中有着重要的作用，它可以促进骨髓内的干细胞向软骨细胞诱导分化，同时因为其内部有着纤维结构相当于一个支架的作用。而骨髓间充质干细胞组软骨修复不如富血小板纤维蛋白的原因为：①单纯的骨髓间充质干细胞向软骨分化的能力有限；②缺少诱导生成软骨细胞的必需细胞因子；③随着时间推移，少量的修复不足以抵抗骨关节炎的一些刺激因素对软骨的持续破坏，软骨基质分解代谢超过了合成代谢的速度，持续的软骨缺损使修复受限^[21-23]。当前实验中12周时因骨关节炎致炎因素的持续存在，空白组出现了大量的软骨退变，有修复的实验对象软骨退变不明显，但是也发现周边的软骨组织光滑度下降，说明关节内移植修复后可显著延迟骨关节炎的进展，但是并不能完全的完全中止其进程，所以骨关节炎的治疗必须是综合性的，外科手术不能替代内科治疗^[24-26]。在修复软骨的同时必须辅以药物治疗和适当功能锻炼，不负重CPM机锻炼是修复早期必需的、有效的方法^[27]。同时，发现外科手术对于关节炎是一个诱发因素，因为关节囊的破坏，纤维增生的修复也会导致关节炎，故需要进一步探索可注射性材料或者关节镜^[28-30]。

总之，单纯的富血小板纤维蛋白能够很好修复创伤导致骨关节炎所致的负重位的陈旧软骨缺损，其修复能力较单纯的骨髓间充质干细胞修复效果更好。但骨关节炎是一个持续恶化的疾病，虽然短期内修复的效果较为理想，但随着时间的推移，其关节面软骨有再次损失的趋势，同时因为切除了半月板，膝关节上下软骨面之间的缓冲垫被取出，使两个关节面在活动时直接摩擦，也会再次磨损新生软骨，所以重建半月板缓冲垫需要进一步研究。在实验中也发现修复组织中有许多和正常软骨形态结构有所差异的细胞数量较多，这可能与新生软骨尚未完全成熟，观察时间较短有关?同时不同的研究中富血小板纤维蛋白的制备方法各有异同，尚无一个标准的方法，需要进一步研究。此外，对于富血小板纤维蛋白的生物力学及其具体的作用方式仍需进一步研究。

综上所述，兔膝关节内侧副韧带、前交叉韧带和内侧半月板切除改变膝关节应力，同时在股骨内侧髁关节面钻孔破坏关节软骨，建立起来的创伤性关节炎承重面关节软骨缺损动物模型可在较短时间内形成作为研究膝关节损伤致骨关节炎的实验模型。富血小板纤维蛋白对于兔膝关节炎陈旧性的软骨缺损有一定的修复效果，表明细胞因子对于关节软骨缺损的修复有一定的作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程