脂肪间充质干细胞混合成骨细胞与羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸复合后的体内异位成骨效应

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0522

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (21): 3304-3309.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0522

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脂肪间充质干细胞混合成骨细胞与羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸复合后的体内异位成骨效应

田学涛¹，王显勋²，王小伟²

¹江汉大学附属医院(武汉市第六医院)创伤科，湖北省武汉市 430015；²湖北省第三人民医院骨科，湖北省武汉市 430033

修回日期:2018-03-04 出版日期:2018-07-28 发布日期:2018-07-28
通讯作者: 王小伟，硕士，主治医师，湖北省第三人民医院骨科，湖北省武汉市 430033
作者简介:田学涛，男，1978年生，湖北省天门市人，汉族，2014年华中科技大学毕业，硕士，副主任医师，主要从事创伤骨科方面的研究。
基金资助:
湖北省卫生计生科研项目(WJ2015MB128)

In vivo ectopic osteogenesis of adipose-derived mesenchymal stem cells/osteoblasts combined with hydroxyapatite/chitosan/polylactic acid

Tian Xue-tao¹, Wang Xian-xun², Wang Xiao-wei²

¹Department of Traumatology, Affiliated Hospital of Jianghan University (Wuhan No. 6 Hospital), Wuhan 430015, Hubei Province, China; ²Department of Orthopedics, the Third People’s Hospital of Hubei Province, Wuhan 430033, Hubei Province, China

Revised:2018-03-04 Online:2018-07-28 Published:2018-07-28
Contact: Wang Xiao-wei, Master, Attending physician, Department of Orthopedics, the Third People’s Hospital of Hubei Province, Wuhan 430033, Hubei Province, China
About author:Tian Xue-tao, Master, Associate chief physician, Department of Traumatology, Affiliated Hospital of Jianghan University (Wuhan No. 6 Hospital), Wuhan 430015, Hubei Province, China
Supported by:
the Research Project for Health and Family Plans in Hubei Province, No. WJ2015MB128

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
异位成骨动物模型：近年来随着骨组织工程学的迅速发展，应用骨组织工程技术治疗骨缺损为当前发展趋势，异位成骨动物模型相对于原位成骨可以减少实验中影响成骨的变量，能评估成骨诱导材料的效果。异位成骨动物模型的建立方法从最早的皮下和肌肉小袋植入模型，到后来的肾被膜以及腹腔内植入模型，各有特点，选择一个合适的模型对实验的成功有着密切的关系。
羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸：是一种由羟基磷灰石、壳聚糖和聚乳酸通过原位生成法和溶液共混法制备的三元纳米复合支架材料，具有良好的生物相容性、优良的机械性能、有效的表面活性与降解速率可调控等特性。此外，还具有骨传导性、骨诱导性并能与骨组织发生骨性结合，是一种新兴的组织工程支架。

摘要
背景：成骨细胞缺乏是骨组织工程面临的关键问题，而间充质干细胞联合成骨细胞移植能够获得理想效果。
目的：观察脂肪间充质干细胞与成骨细胞复合羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸支架材料在体内的异位成骨效应。
方法：酶消化法和贴壁法分离原代脂肪间充质干细胞、成骨细胞，并进行鉴定。取成骨细胞、脂肪间充质干细胞、成骨细胞+脂肪间充质干细胞混合细胞(比例为1︰1)，分别复合羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸骨修复材料，体外复合培养48 h后，植入SD大鼠背部皮下，作为实验组，以单纯材料植入作为对照组。术后8周取出标本，进行大体观察、组织学观察并计算新骨生成率。
结果与结论：①脂肪间充质干细胞经成脂、成软骨、成骨诱导后，油红O染色、甲苯胺蓝染色和茜素红染色均为阳性；流式细胞仪检测脂肪间充质干细胞中CD147、CD90、CD105、CD44呈阳性表达(> 80%)，而CD117、CD34、CD31、CD45则呈阴性表达(< 5%)；②第3代成骨细胞茜素红染色、碱性磷酸酶染色均为阳性；③植入8周后大体观察可见材料中有软组织长入，难以分离；④植入8周后组织学观察可见各组均有新骨形成，与其他材料组比较，脂肪间充质干细胞+成骨细胞+羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸组成骨分数最高，差异有显著性意义(P < 0.05)；⑤结果表明，脂肪间充质干细胞可促进成骨细胞复合羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸支架材料的异位成骨。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-0957-0742(田学涛)

关键词: 成骨细胞, 脂肪间充质干细胞, 羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸, 干细胞

Abstract:

BACKGROUND: Osteoblast deficiency is a key problem in bone tissue engineering, and transplantation of mesenchymal stem cells combined with osteoblast can achieve ideal results.
OBJECTIVE: To investigate the in vivo ectopic osteogenesis of adipose-derived mesenchymal stem cells (ADSCs) and osteoblasts (OB) combined with hydroxyapatite (HA)/chitosan (CS)/poly(L-latic acid) (PLLA).
METHODS: ADSCs and OB were obtained by adherent method and enzymatic digestion method. ADSCs, OB and the mixture of ADSCs and OB (at a mixture ratio of 1:1) were cultured with HA/CS/PLLA, respectively. After 48 hours of in vitro culture, cell-scaffold complexes were subcutaneously implanted into the back of Sprague-Dawley rats in corresponding groups, and HA/CS/PLLA without cells was implanted as control group. The rats in each group were killed at 8 weeks postoperatively. The macroscopic and histopathological observations were performed to assess the ectopic osteogenesis potential.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) After adipogenic, chondrogenic and osteogenic induction, ADSCs were positive for oil red O, toluidine blue and alizarin red staining. Results from flow cytometry showed that ADSCs were positive for CD147, CD90, CD105 and CD44 with the rate of positivity > 80%, but negative for CD117, CD34, CD131, CD45 with the rate of positivity < 5%. (2) Passage 3 OB were positive for both alizarin red staining and alkaline phosphatase staining. (3) At 8 weeks after implantation, soft tissues grew into the complexes under gross observation. (4) At 8 weeks after implantation, ectopic bone formation was visible in each group. The bone formation was more visible in the ADSCs-OB/HA/CS/PLLA group than the other groups with significant differences (P < 0.05). To conclude, ADSCs can promote the ectopic bone formation of OB in vivo in combination with HA/CS/PLLA scaffold.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Osteoblasts, Adipose Tissue, Mesenchymal Stem Cells, Calcium Phosphates, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

田学涛，王显勋，王小伟. 脂肪间充质干细胞混合成骨细胞与羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸复合后的体内异位成骨效应[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(21): 3304-3309.

Tian Xue-tao, Wang Xian-xun, Wang Xiao-wei. In vivo ectopic osteogenesis of adipose-derived mesenchymal stem cells/osteoblasts combined with hydroxyapatite/chitosan/polylactic acid[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(21): 3304-3309.

图/表（结果） 1

2.1 细胞形态学观察及染色鉴定结果 ADSCs原代培养4-6 h后开始贴壁，细胞大小不均匀，起初为多角形，梭形，3 d后类成纤维细胞明显增多，四五天时细胞进入对数生长期，六七天时细胞融合接近80%，可消化传代(图1A)；传至第3代后细胞呈长梭形，形态均一，呈漩涡样生长(图1B)，成脂诱导后油红O染色可见红染的脂滴(图1C)，成软骨诱导后可见细胞质蓝染(图1D)，成骨诱导后茜素红染色可见红染的钙化灶(图1E)。

骨组织块法获得的成骨细胞贴于细胞瓶底部，24 h后成骨细胞从骨块中爬出，葵花样生长，细胞呈三角形、多角形或梭形(图1F)。传至第3代后细胞呈鳞形，体积较大，多伪足，继续培养可见局部多层生长，并有钙化结节生成(图1G)，培养14 d时茜素红染色可见红染的钙化灶(图1H)，碱性磷酸酶染色可见胞质咖啡样深染(图1I，J)。

HA/CS/PLLA材料呈乳白色，被制成3 mm×3 mm×3 mm的圆柱状中空材料以便于植入体内(图1K-N)。

2.2 ADSCs表面抗原表达 CD147、CD90、CD105、CD44呈阳性表达(> 80%)，而CD117、CD34、CD31、CD45则呈阴性表达(< 5%)，见图2。

2.3 ADSCs和成骨细胞的增殖能力 随着培养时间的延长，细胞数逐渐增多，吸光度值增高；ADSCs呈“S”形增殖曲线，第1，2天为平台期，第3-5天为对数生长期，第6天以后细胞密度较大，细胞间接触抑制生长，进入平台期。而成骨细胞呈直线生长，第1，2天为平台期，第3-8天细胞基本呈线性生长，见图3。

2.4 大体观察结果 10只SD大鼠全部存活并进入结果分析，术后伤口愈合良好，无炎性反应，伤口一期愈合，期间进食正常。植入4周后可见材料有软组织长入，包裹，难以分离(图1L，M)。

2.5 苏木精-伊红染色观察组织学形态

ADSCs+成骨细胞+HA/CS/PLLA组：术后8周，移植物已完全被新生的编制骨替代，形成明显软骨陷窝，视野下可见大量钙化的骨组织，并形成骨髓腔，HA/CS/PLLA已被降解、吸收(图4A)。

成骨细胞+HA/CS/PLLA组：术后8周，移植物有新生编制骨及大量软骨形成，软骨基质较多，在钙化的骨组织中仍有未完全骨化的软骨。HA/CS/PLLA材料内有大量的纤维、血管、脂肪等结缔组织长入，支架开始降解(图4B)。

ADSCs+HA/CS/PLLA组：术后8周，支架材料表面及周边纤维组织内可见带状、条索状骨组织，内部可见软骨陷窝和软骨基质，周边有大量成骨细胞及未成熟的骨组织(图4C)。

HA/CS/PLLA组：术后8周，支架材料表面及周边纤维组织内可见岛状骨组织，支架材料降解较少，可见少量软骨细胞，周边可见少量成骨细胞和纤维组织(图4D)。

2.6 图像分析结果 各组术后8周植入物新骨形成差异明显，ADSCs+成骨细胞+HA/CS/PLLA组成骨分数为(33.8± 3.11)%，成骨细胞+HA/CS/PLLA组为(21.4±3.24)%，两组间比较差异有显著性意义(P < 0.05)；HA/CS/PLLA组为(2.89±0.91)%，ADSCs+HA/CS/PLLA组成骨分数为(13.2± 1.59)%，与ADSCs+成骨细胞+HA/CS/PLLA组比较差异也有显著性意义(P < 0.05)。

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引言

材料方法

1.1 设计 体外和体内分组对照观察实验。

1.2 时间及地点 实验于2014年6月至2016年12月在江汉大学医学院完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 用于体内实验的成年雄性SD大鼠10只，体质量200-250 g，由武汉大学动物实验中心提供；用于体外成骨细胞、ADSCs培养的新生24 h内的SD大鼠20只，由武汉大学动物实验中心提供。

1.3.2 实验材料和试剂 HA/CS/PLLA材料由中国科技大学微尺度实验室制备^[6]，将支架材料制成3 mm×3 mm×5 mm大小平铺于培养皿，环氧乙烷消毒后使用。胎牛血清、胰蛋白酶-EDTA(Hyclone，美国)；DMEM/HIGH GLUCOSE (1×)500 mL(Thermo Fisher Scientific，美国)；Ⅰ型胶原酶、Ⅱ型胶原酶、羟基磷灰石、壳聚糖、聚乳酸(Sigma，美国)；DP70荧光倒置显微镜(Olympus，日本)。

1.4 实验方法

1.4.1 ADSCs的分离、培养 新生24 h内的10只SD大鼠麻醉后处死、消毒，固定于操作台上，于下腹部切开皮肤，环形切开后向下拉，暴露腹股沟，换新的器械切取腹股沟处脂肪组织，放入加有PBS的培养皿内，转入超净台操作。用剪刀将取出的脂肪组织充分剪碎，加入0.1%Ⅰ型胶原酶2 mL，放入恒温箱消化1 h，然后振荡消化(200 r/min)30 min，过200目滤网，1 000 r/min离心5 min，完全吸弃上清将细胞沉淀重悬于PBS中，调整细胞浓度为1×10⁵ L^-¹，接种到培养瓶中培养。每3 d换液1次，细胞生长至80%融合时，0.25%胰蛋白酶消化传代^[7]。

1.4.2 成骨细胞的分离、培养 新生24 h内的10只SD大鼠麻醉后处死、消毒，无菌条件下取出头盖骨，用含双抗的PBS反复洗涤，除去脂肪组织及残留血，将颅骨剪成1-3 mm²碎片，0.25%胰蛋白酶2 mL预消化15 min，清除纤维组织，再以0.1%Ⅱ型胶原酶10 mL 37 ℃消化20 min，去除上清液，将消化后的小骨块植入细胞瓶内，倒置放入细胞孵化箱，2 h后向培养瓶内加入2 mL新鲜培养液，待骨块贴壁后，缓慢翻转培养瓶，继续培养，每2 d换液1次，细胞生长至80%融合时，0.25%胰蛋白酶消化传代。

1.4.3 流式细胞仪检测ADSCs的细胞表型 根据文献[7]方法，利用流式细胞仪检测第3代贴壁ADSCs表面标记物CD147、CD90、CD105、CD44、CD117、CD34、CD31、CD45的表达。

1.4.4 ADSCs的诱导分化能力和成骨细胞的鉴定 根据文献[8]的方法分别进行成脂、成软骨、成骨诱导，诱导21 d后分别进行油红O染色、甲苯胺蓝染色和茜素红染色。成骨细胞体外培养14 d后进行茜素红染色和碱性磷酸酶染色。

1.4.5 细胞增殖活性 取第1代ADSCs和成骨细胞，调整细胞浓度为1.5×10⁷ L^-¹，分别接种于96孔板，每孔100 μL，置于37 ℃细胞孵化箱内，采用MTT法检测培养第1-9天的增殖情况。每孔加入5 g/L MTT 100 μL，细胞培养箱中孵育4 h后倒去培养液，将板晾干，加入二甲基亚砜100 μL，酶标仪测定各孔吸光度值(A值)。

1.4.6 ADSCs、成骨细胞与HA/CS/PLLA材料的复合培养和植入 环氧乙烷消毒后的HA/CS/PLLA材料放入PBS中备用，将扩增后的第3代ADSCs、成骨细胞消化、离心后，分别制备成细胞浓度为5×10⁹ L^-¹的细胞悬液及细胞浓度为5×10⁹ L^-¹的细胞混合悬液(ADSCs与成骨细胞比例为1︰1)，接种于支架材料上，每个材料接种10 μL细胞悬液，置于37 ℃恒温细胞培养箱中3 h以利于细胞充分黏附，然后缓慢加入新鲜培养液，复合培养72 h后植入动物体内。

取10只成年雄性SD大鼠，3%戊巴比妥腹腔注射麻醉，体积分数为75%乙醇消毒、铺巾，无菌条件下切开背部皮肤，植入复合物。大鼠左头侧背部皮下植入ADSCs+成骨细胞+HA/CS/PLLA复合物，左尾侧背部皮下植入成骨细胞+ HA/CS/PLLA复合物，右头侧背部皮下植入ADSCs+HA/ CS/PLLA复合物，右尾侧背部皮下单纯植入HA/CS/PLLA材料。每只大鼠背部植入4块材料，植入后严密缝合创口。

1.4.7 组织形态学检测 术后第8周取出植入物，去除周围脂肪及纤维组织，PBS冲洗。所有标本在100 g/L多聚甲醛溶液中固定48 h，乙醇梯度脱水、石蜡包埋、切片。每个标本制作3张切片，厚度为5 μm，进行苏木精-伊红染色，Olympus光学显微镜下观察。每张切片选择3个非重复视野，并应用IPP6.2形态学图像分析系统来计算新骨生成率。

1.5 主要观察指标 ①ADSCs的培养及鉴定结果；②ADSCs和成骨细胞的增殖活性；③细胞支架复合物植入大鼠皮下的组织形态学观察及新骨形成率。

1.6 统计学分析 数据以x(_)±s表示，用SPSS 19.0软件进行配对t 检验分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

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讨论

ADSCs因其独特的优势近年来被广泛用于骨组织工程，然而ADSCs本身并不具备成骨能力，可经过体外成骨诱导表现出成骨细胞特征^[9-10]。大量研究证实，ADSCs复合生物性能良好的支架材料可有效修复骨缺损模型^[11-17]，实验所使用的HA/CS/PLLA是磷酸钙生物材料的一种，也具有良好的生物相容性和骨诱导性^[4-5^，^18]。

体外分离和获取新生SD大鼠腹部皮下脂肪来源的ADSCs，经体外诱导后成功向成脂肪、成软骨、成骨方向分化，证实了其具有多向分化潜能。此外，ADSCs在体外具有很强的增殖能力。成骨细胞同样是组织工程中的种子细胞，实验将ADSCs、成骨细胞在体外与HA/CS/PLLA材料复合培养构建组织工程骨，并将其植入到成年SD大鼠背部皮下，以空白材料支架作为对照。术后8周，组织学检查结果显示所有标本均能观察到新骨的形成，空白材料对照组也有少量新骨生成，表明HA/CS/PLLA材料具有骨诱导性，与文献[19]报道相符；ADSCs+HA/CS/PLLA组较空白材料对照组成骨量多，说明材料可吸收周边间充质干细胞进行诱导成骨。成骨细胞+HA/CS/PLLA组可产生大量新骨，而加入ADSCs的混合细胞组的成骨量最多，说明ADSCs+成骨细胞+HA/CS/PLLA组可明显促进新生骨的形成。

ADSCs促进成骨细胞的成骨机制目前尚不明确，推断其可能原因是由于HA/CS/PLLA在体内降解性较好，降解后能形成大量钙、磷离子，这些离子的沉积有利于促进软骨钙化成骨^[20]。此外，HA/CS/PLLA在体内可有效吸收周边间充质干细胞聚集，促进成骨细胞的黏附、增殖及分泌基质，形成新骨。大量研究已证实，ADSCs在体外经成骨诱导液诱导后表现出成骨细胞的某些特征，而在体内ADSCs也能在适宜的成骨细胞信号分子和微环境下可转化为成骨细胞^[21-27]。实验中的骨组织工程材料HA/CS/PLLA可能为ADSCs的体内成骨分化提供了适宜的成骨微环境。有学者将成骨细胞与血管内皮细胞等比例混合接种到组织工程骨中，发现混合细胞组较单纯细胞组具有更好的骨缺损修复能力，有效缩短了骨愈合时间^[28]。实验所应用的ADSCs可能在某种程度上发挥着与血管内皮细胞相似的作用，即ADSCs在体内分泌大量的血管生成因子，促进支架材料的血管化进程；同时ADSCs也能分泌一些抗凋亡因子及其他细胞因子改善复合支架内细胞生长和分化的微环境^[29]，从而更有利于新骨生长。此外，ADSCs也能吸引周边成骨前体细胞参与新骨的形成^[7]。因此，ADSCs促进成骨细胞体内成骨的原因，一方面可能是ADSCs的种入增加了成骨“微环境”的干细胞数目，另一方面可能是由于ADSCs在机体内分泌大量的细胞外基质促进了成骨细胞的矿化，或促进机体微血管的形成，使成骨细胞更好的发挥成骨作用。

实验研究初步表明ADSCs可促进成骨细胞复合生物工程材料的异位成骨。同时，也验证了HA/CS/PLLA作为骨组织工程材料具有良好的生物相容性，能提供适宜的微环境促进成骨细胞和ADSCs的体内成骨。脂肪组织在机体内存储量大，亦可再生，因此ADSCs作为骨组织工程中的种子细胞较其他间充质干细胞更具优势，其在体内成骨的机制仍需进一步研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

脂肪间充质干细胞混合成骨细胞与羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸复合后的体内异位成骨效应

In vivo ectopic osteogenesis of adipose-derived mesenchymal stem cells/osteoblasts combined with hydroxyapatite/chitosan/polylactic acid

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[1]	蒲锐, 陈子扬, 袁凌燕. 不同细胞来源外泌体保护心脏的特点与效应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 1-.
[2]	林清凡, 解一新, 陈婉清, 叶振忠, 陈幼芳. 人胎盘源间充质干细胞条件培养液可上调缺氧状态下BeWo细胞活力和紧密连接因子的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 4970-4975.
[3]	张秀梅, 翟运开, 赵杰, 赵萌. 类器官模型国内外数据库近10年文献研究热点分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1249-1255.
[4]	侯婧瑛, 于萌蕾, 郭天柱, 龙会宝, 吴浩. 缺氧预处理激活HIF-1α/MALAT1/VEGFA通路促进骨髓间充质干细胞生存和血管再生[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 985-990.
[5]	史洋洋, 秦英飞, 吴福玲, 何潇, 张雪静. 胎盘间充质干细胞预处理预防小鼠毛细支气管炎[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 991-995.
[6]	梁学奇, 郭黎姣, 陈贺捷, 武杰, 孙雅琪, 邢稚坤, 邹海亮, 陈雪玲, 吴向未. 泡状棘球绦虫原头蚴抑制骨髓间充质干细胞向成纤维细胞的分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 996-1001.
[7]	樊全宝, 罗惠娜, 王丙云, 陈胜锋, 崔连旭, 江文康, 赵明明, 王静静, 罗冬章, 陈志胜, 白银山, 刘璨颖, 张晖. 低氧培养犬脂肪间充质干细胞的生物学特性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1002-1007.
[8]	耿瑶, 尹志良, 李兴平, 肖东琴, 侯伟光. hsa-miRNA-223-3p调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1008-1013.
[9]	伦志刚, 金晶, 王添艳, 李爱民. 过氧化物还原酶6干预骨髓间充质干细胞增殖及体外向神经谱系诱导分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1014-1018.
[10]	朱雪芬, 黄成, 丁健, 戴永平, 刘元兵, 乐礼祥, 王亮亮, 杨建东. 胶质细胞神经营养因子诱导骨髓间充质干细胞向功能性神经元分化的机制[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1019-1025.
[11]	段丽芸, 曹晓沧. 人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡调节肠炎小鼠肠黏膜胶原的沉积[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1026-1031.
[12]	裴丽丽, 孙贵才, 王弟. 丹酚酸B抑制骨髓间充质干细胞氧化损伤及促进分化为心肌样细胞[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1032-1036.
[13]	邹刚, 徐志, 刘子铭, 李豫皖, 杨继滨, 金瑛, 张骏, 葛振, 刘毅. 人脱细胞羊膜支架促进Scleraxis修饰人羊膜间充质干细胞体外成韧带分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1037-1044.
[14]	管倩, 栾佐, 叶豆, 杨印祥, 汪兆艳, 王倩, 姚瑞芹. 人少突胶质前体细胞传代过程中形态学的变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1045-1049.
[15]	王正东, 黄娜, 陈婧娴, 郑作兵, 胡鑫宇, 李梅, 苏晓, 苏学森, 颜南. 丁酸钠抑制氟中毒可诱导小胶质细胞活化及炎症因子表达增多[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1075-1080.