外周血单倍体造血干细胞移植治疗成人急性淋巴细胞白血病：监测微小残留病及干预复发

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0473

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (9): 1413-1418.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0473

• 干细胞移植 stem cell transplantation • 上一篇下一篇

外周血单倍体造血干细胞移植治疗成人急性淋巴细胞白血病：监测微小残留病及干预复发

万鼎铭，孙琳琳，谢新生，郭荣，曹伟杰，张素平，李丽，陈晓娜，刘郁叶

郑州大学第一附属医院血液科造血干细胞移植中心，河南省郑州市 450052

修回日期:2017-12-20 出版日期:2018-03-28 发布日期:2018-04-03
通讯作者: 万鼎铭，博士，教授，主任医师，硕士生导师，郑州大学第一附属医院血液科造血干细胞移植中心，河南省郑州市 450052
作者简介:万鼎铭，男，1963年生，河南省南阳市人，蒙古族，1998年山东医科大学毕业，博士，教授，主任医师，硕士生导师，主要从事血液病和造血干细胞移植基础和临床研究。并列第一作者：孙琳琳，女，1991年生，河南省鹤壁市人，汉族，郑州大学在读硕士，主要从事血液病和造血干细胞移植基础和临床研究。
基金资助:
河南省高等学校重点科研项目(18A320040)

Peripheral blood haploidentical hematopoietic stem cell transplantation for treatment of acute lymphoblastic leukemia in adults: monitoring minimal residual diseases to intervene recurrence

Wan Ding-ming, Sun Lin-lin, Xie Xin-sheng, Guo Rong, Cao Wei-jie, Zhang Su-ping, Li Li, Chen Xiao-na, Liu Yu-ye

Center for Hematopoietic Stem Cell Transplantation, Department of Hematology, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, Henan Province, China

Revised:2017-12-20 Online:2018-03-28 Published:2018-04-03
Contact: Wan Ding-ming, Center for Hematopoietic Stem Cell Transplantation, Department of Hematology, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, Henan Province, China
About author:Wan Ding-ming, M.D., Professor, Chief physician, Master’s supervisor, Center for Hematopoietic Stem Cell Transplantation, Department of Hematology, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, Henan Province, China. Sun Lin-lin, Master candidate, Center for Hematopoietic Stem Cell Transplantation, Department of Hematology, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, Henan Province, China. Wan Ding-ming and Sun Lin-lin contributed equally to this work.
Supported by:
the Major Scientific Research Project of Henan Provincial Universities, No. 18A320040

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
白血病微小残留病灶：是指白血病患者经诱导化疗完全缓解后(或骨髓移植后)，在体内残存有形态学上不能检测到的微量白血病细胞的状态。因此，采用灵敏度高、特异性强、经济方便的检测方法对微小残留病灶进行动态监测，对评估早期治疗反应、进行危险度分组，判断预后、预测复发，指导造血干细胞移植后复发患者治疗及个体化治疗尤为重要。
目前公认最有效的微小残留病灶检测方法：实时荧光定量PCR(qPCR)和多参数流式细胞术。①流式细胞术检测白血病微小残留病灶的基本原理是通过多参数定量分析白血病相关免疫表型(LAIPs)，从而与正常和再生的骨髓细胞区分，灵敏度可达10^-5；②qPCR技术通常选用免疫球蛋白(Ig)/T淋巴细胞受体(TCR)基因重排序列或融合基因作为基因标志，将急性淋巴细胞白血病细胞与正常细胞进行区分，灵敏度可达10^-6。随着微小残留病灶检测技术可靠性的提高和标准化的统一，白血病患者的疗效也会显著提升。

摘要
背景：异基因造血干细胞移植后复发是影响急性淋巴细胞白血病患者长期生存的主要问题。早期干预、预防移植后复发可以提高无病生存率、总体生存率，降低移植后死亡率。通过分子生物学技术监测微小残留病是目前广泛可靠、切实可行的方法。
目的：动态监测成人急性淋巴细胞白血病患者外周血单倍体造血干细胞移植后微小残留病指标，探讨其预测早期复发的意义。
方法：选择2011年6月至2017年6月在郑州大学第一附属医院行外周血单倍体造血干细胞移植治疗的急性淋巴细胞白血病患者53例，检测移植后1，3，6，12个月微小残留病指标变化，观察微小残留病水平与移植后复发的关系。
结果与结论：①微小残留病阳性组与阴性组的无病生存率分别为20.0%和65.8%，总生存率分别为50.8%和68.9%，差异均有显著性意义；②移植后骨髓微小残留病阳性患者16例，进行干预治疗后，4例患者微小残留病转阴，至今未复发；③血液学复发患者11例，分别给予酪氨酸激酶抑制剂靶向治疗、化疗、供者淋巴细胞输注和二次移植，最终血液学复发死亡，从发现微小残留病阳性到血液学复发的中位时间为100(7-190) d，期间给予干预，可延长复发时间；④1例患者拒绝治疗，最终复发死亡；⑤结果表明，急性淋巴细胞白血病患者外周血单倍体造血干细胞移植后动态监测微小残留病水平，预防早期复发，及时给予干预治疗，可以提高移植后无病生存率、总体生存率，延长复发时间。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0003-4931-3596(万鼎铭)；0000-0002-9526-2526(孙琳琳)

关键词: 微小残留病, 急性淋巴细胞白血病, 干细胞, 外周血单倍体造血干细胞移植, 流式细胞术, 供者淋巴细胞输注, RQ-PCR, BCR/ABL融合基因, 酪氨酸激酶抑制剂

Abstract:

BACKGROUND: Recurrence of acute leukemia after hematopoietic stem cell transplantation is one of the major problems affecting the long-term survival of patients. Early intervention to prevent ALL recurrence after transplantation can improve disease-free survival, overall survival and reduce post-transplant mortality. Monitoring of minimal residual disease (MRD) by flow cytometry and PCR-based molecular biology techniques is a widely reliable and practicable method.
OBJECTIVE: To dynamically monitor the MRD level of acute lymphoblastic leukemia after peripheral blood haploidentical hematopoietic stem cell transplantation and to explore its implications for predicting early relapse.
METHODS: A retrospective study was conducted in 53 patients with acute lymphoblastic leukemia who had underwgone peripheral blood haploidentical hematopoietic stem cell transplantation at the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University from June 2011 to June 2017. The patients were followed up for postoperative 1, 3, 6, 12 months to observe the relation between MRD levels and relapse after transplantation.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) The disease-free survival rate of MRD positive group and MRD negative group were 20.0% and 65.8%, respectively; and the overall survival rates were 50.8% and 68.9% in the two groups, respectively. There were significant differences between two groups. (2) Among 16 MRD positive patients accepting clinical intervention after transplantation, 4 patients presented with MRD negative and had no recurrence. (3) Eleven hematologic recurrence patients were given tyrosine kinase inhibitor-targeted therapy, chemotherapy, donor lymphocytes Infusion and secondary transplantation, but they eventually died. The median time from the discovery of MRD positive to hematologic recurrence was 100 (7-190) days, and during this period. Clinical intervention was confirmed to extend the recurrence time. In this study, one case refused clinical intervention, and eventually died of recurrence. Our findings indicate that dynamic monitoring of the MRD level in acute lymphoblastic leukemia patients after peripheral blood haploidentical transplantation can predict recurrence, by which the patients can be given early intervention to reduce the risk of recurrence and improve disease-free survival and overall survival.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Hematopoietic Stem Cell Transplantation, Leukemia, Biphenotypic, Acute, Recurrence, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

万鼎铭，孙琳琳，谢新生，郭荣，曹伟杰，张素平，李丽，陈晓娜，刘郁叶. 外周血单倍体造血干细胞移植治疗成人急性淋巴细胞白血病：监测微小残留病及干预复发[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(9): 1413-1418.

Wan Ding-ming, Sun Lin-lin, Xie Xin-sheng, Guo Rong, Cao Wei-jie, Zhang Su-ping, Li Li, Chen Xiao-na, Liu Yu-ye. Peripheral blood haploidentical hematopoietic stem cell transplantation for treatment of acute lymphoblastic leukemia in adults: monitoring minimal residual diseases to intervene recurrence[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(9): 1413-1418.

图/表（结果） 1

2.1 研究对象入组流程图 见图1。

2.2 造血重建时间 53例外周血单倍体造血干细胞移植急性淋巴细胞白血病患者中，中性粒细胞植入平均中位时间为12(9-15) d，血小板植入平均中位时间为15(12-18) d。

2.3 移植后并发症 移植后，26例出现移植物抗宿主病，10例出现出血性膀胱炎，13例出现细菌或/和真菌感染。

2.4 移植后微小残留病阴性患者的预后 移植后骨髓微小残留病持续阴性者37例，血液学持续完全缓解状态，其中19例发生移植物抗宿主病(10例肠道移植物抗宿主病，8例皮肤移植物抗宿主病，1例肝脏移植物抗宿主病），8例患者发生出血性膀胱炎，该组患者的1年无病生存率为65.8%(图2)，1年总体生存率为68.9%(图3)。

2.5 移植后微小残留病阳性患者的预后 移植后骨髓微小残留病阳性患者16例。①移植后流式细胞术检测微小残留病阳性并干预组：9例急性淋巴细胞白血病患者出现微小残留病阳性或血液学复发，其中2例在0.5%-1.0%水平的患者，分别给予“减停免疫抑制剂、地西他滨去甲基化治疗”后微小残留病转阴，未再复发。1例在0.5%-1.0%水平的患者拒绝治疗，最终复发死亡。6例患者血液学复发的同时合并微小残留病阳性，其中1例化疗，4例化疗联合供者淋巴细胞输注，1例二次移植，最终均复发死亡；②移植后BCR/ABL基因阳性并干预组：7例费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病患者单倍体造血干细胞移植后BCR/ABL基因表达水平转阳给予干预，其中2例应用酪氨酸激酶抑制剂，1例联合减停免疫抑制剂，4例联合化疗和酪氨酸激酶抑制剂治疗。2例患者BCR/ABL基因表达水平转阴，5例患者未转阴并出现血液学复发，距离复发时间100(7-190)d；③7例患者发生移植物抗宿主病(5例皮肤移植物抗宿主病，2例肠道移植物抗宿主病)，6例患者发生出血性膀胱炎，该组患者的1年无病生存率为20.0%(图2)，1年总体生存率为50.8%(图3)。

参考文献

[1] Hart DP, Peggs KS. Current status of allogeneic stem cell transplantation for treatment of hematologic malignancies. Clin Pharmacol Ther. 2007;82(3):325-329.

[2] 王健民. 急性白血病异基因造血干细胞移植后复发的机制及防治策略[J]. 中华血液学杂志,2013,34(8):649-650.

[3] 吴穗晶,杜欣,翁建宇,等. 异基因造血干细胞移植后复发的临床分析[J]. 实用医学杂志,2011,27(14):2614-2615.

[4] 邱阳,刘越坚,郭慧淑,等. 流式细胞术在159例急性白血病免疫分型中的应用[J]. 中国实验诊断学,2009,13(1):103-105.

[5] 张之南,沈悌. 血液病诊断及疗效标准[M]. 北京:科学出版社, 2007.

[6] 中华医学会血液学分会干细胞应用学组. 中国异基因造血干细胞移植治疗血液系统疾病专家共识(Ⅰ)——适应证、预处理方案及供者选择(2014年版)[J]. 中华血液学杂志,2014,35(8):775-780.

[7] Huang XJ, Liu DH, Liu KY, et al. Haploidentical hematopoietic stem cell transplantation without in vitro T-cell depletion for the treatment of hematological malignancies. Bone Marrow Transplant. 2006;38(4):291-297.

[8] Ji SQ, Chen HR, Wang HX, et al. G-CSF-primed haploidentical marrow transplantation without ex vivo T cell depletion: an excellent alternative for high-risk leukemia. Bone Marrow Transplant. 2002;30(12):861-866.

[9] 万鼎铭,康轶青,孙慧,等. 改良BU/CY预处理方案行异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床研究[J]. 中国实用内科杂志, 2009,29(7):648-649.

[10] 施继敏,景晶,罗依,等. 异基因造血干细胞移植后并发出血性膀胱炎的高危因素和防治措施[J]. 中华器官移植杂志,2011, 32(3): 148-151.

[11] 万鼎铭,周雪芳,谢新生,等. 异基因造血干细胞移植后肠球菌相关性腹泻的临床分析[J]. 郑州大学学报:医学版,2014,49(2): 284-287.

[12] 万鼎铭,张诚,谢新生,等. 单倍体相合造血干细胞移植治疗高危白血病[J]. 中国组织工程研究与临床康复,2011,15(19): 3485-3488.

[13] 窦青瑜,许兰平,刘代红,等. 四色流式细胞术检测造血干细胞移植后急性B淋巴细胞白血病相关免疫表型及临床意义分析[J]. 中国实用内科杂志,2008,28(9):729-731.

[14] Chinese Society Of Hematology Chinese Medical Ass，中华医学会血液学分会干细胞应用学组. 中国异基因造血干细胞移植治疗血液系统疾病专家共识(Ⅱ)——移植后白血病复发(2016年版)[J]. 中华血液学杂志,2016,37(10):846-851.

[15] Lee S, Kim DW, Cho B, et al. Risk factors for adults with Philadelphia-chromosome-positive acute lymphoblastic leukaemia in remission treated with allogeneic bone marrow transplantation: the potential of real-time quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction. Br J Haematol. 2003;120(1):145-153.

[16] 舒晓艳,闫侠芳,董磊,等. 异基因造血干细胞移植后白血病复发的危险因素分析和治疗[J]. 中国实验血液学杂志,2016,24(4): 1137-1142.

[17] Yan CH, Xu LP, Wang FR, et al. Causes of mortality after haploidentical hematopoietic stem cell transplantation and the comparison with HLA-identical sibling hematopoietic stem cell transplantation. Bone Marrow Transplant. 2016;51(3): 391-397.

[18] 石连霞. 急性淋巴细胞白血病微小残留病诊断研究进展[J]. 临床检验杂志,2016,34(9):682-685.

[19] Terwey TH, Hemmati PG, Nagy M, et al. Comparison of chimerism and minimal residual disease monitoring for relapse prediction after allogeneic stem cell transplantation for adult acute lymphoblastic leukemia. Biol Blood Marrow Transplant. 2014;20(10):1522-1529.

[20] Bar M, Wood BL, Radich JP, et al. Impact of minimal residual disease, detected by flow cytometry, on outcome of myeloablative hematopoietic cell transplantation for acute lymphoblastic leukemia. Leuk Res Treatment. 2014;2014: 421723.

[21] Zhao XS, Liu YR, Zhu HH, et al. Monitoring MRD with flow cytometry: an effective method to predict relapse for ALL patients after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. Ann Hematol. 2012;91(2):183-192.

[22] 周立昕,宫蔷,陈洁平. 异基因造血干细胞移植后伊马替尼维持治疗对Ph+ALL疗效的Meta分析[J]. 重庆医学,2014,43(34): 4584-4588.

[23] Wassmann B, Pfeifer H, Stadler M, et al. Early molecular response to posttransplantation imatinib determines outcome in MRD+ Philadelphia-positive acute lymphoblastic leukemia (Ph+ ALL). Blood. 2005;106(2):458-463.

[24] 刘启发,周淑芸. 供者淋巴细胞输注对异基因造血干细胞移植后白血病复发的防治作用[J]. 中华血液学杂志,2002,23(4): 220-222.

[25] Yan CH, Liu DH, Liu KY, et al. Risk stratification-directed donor lymphocyte infusion could reduce relapse of standard-risk acute leukemia patients after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. Blood. 2012;119(14): 3256-3262.

[26] Freytes CO, Lazarus HM. Second hematopoietic SCT for lymphoma patients who relapse after autotransplantation: another autograft or switch to allograft. Bone Marrow Transplant. 2009;44(9):559-569.

[27] Dhédin N, Huynh A, Maury S, et al. Role of allogeneic stem cell transplantation in adult patients with Ph-negative acute lymphoblastic leukemia. Blood. 2015;125(16):2486-2496.

[28] Beldjord K, Chevret S, Asnafi V, et al. Oncogenetics and minimal residual disease are independent outcome predictors in adult patients with acute lymphoblastic leukemia. Blood. 2014;123(24):3739-3749.

[29] Kern W, Schoch C, Haferlach T, et al. Monitoring of minimal residual disease in acute myeloid leukemia. Crit Rev Oncol Hematol. 2005;56(2):283-309.

[30] Craig FE, Foon KA. Flow cytometric immunophenotyping for hematologic neoplasms. Blood. 2008;111(8):3941-3967.

[31] 张博,赵晓甦,秦亚溱,等. 急性T淋巴细胞白血病异基因造血干细胞移植后WT1基因表达及其与预后关系[J]. 中华血液学杂志, 2015,36(8):642-646.

[32] Zhao XS, Yan CH, Liu DH, et al. Combined use of WT1 and flow cytometry monitoring can promote sensitivity of predicting relapse after allogeneic HSCT without affecting specificity. Ann Hematol. 2013;92(8):1111-1119.

[33] Nishiwaki S, Miyamura K, Kato C, et al. Impact of post-transplant imatinib administration on Philadelphia chromosome-positive acute lymphoblastic leukaemia. Anticancer Res. 2010;30(6):2415-2418.

引言

材料方法

1.1 设计 回顾性病例分析。

1.2 时间及地点 于2011年6月至2017年8月在郑州大学第一附属医院完成。

1.3 对象 选择2011年6月至2017年6月在郑州大学第一附属医院行外周血单倍体造血干细胞移植的急性淋巴细胞白血病患者53例，移植后动态监测微小残留病，急性淋巴细胞白血病诊断采用MICM(形态学、免疫学、细胞遗传学和分子生物学)标准。男33例，女20例，中位年龄36(14-58)岁；急性B淋巴细胞白血病37例，急性T淋巴细胞白血病16例；费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病14例，费城染色体阴性的急性淋巴细胞白血病39例。上述患者的疗效判断标准按照张之南等主编的《血液病诊断及疗效标准》第三版^[5]，移植适应证及供者选择符合中国专家共识指南^[6]。

纳入标准：①符合急性淋巴细胞白血病诊断标准；②年龄≥14岁；③无HLA相合同胞及相合非血缘供者；④于郑州大学第一附属医院血液科造血干细胞移植中心行外周血单倍体造血干细胞移植。

排除标准：①合并严重心肝肾功能损害及严重慢性消耗性疾病以及其他影响生存疾病的患者；②患者或家属拒绝单倍体移植，要求其他方法治疗者。

供者情况：53例HLA单倍体相合造血干细胞移植供者为父母、子女或同胞(兄弟姐妹)，HLA高分辨配型：9位点相合10例，8位点相合17例，7位点相合15例，6位相合5例，5位点相合6例。

1.4 方法

1.4.1 预处理方案 外周血单倍体预处理方案选用“改良BU/CY+ATG”方案^[7-9]：阿糖胞苷4 g/(m²•d )( -10 d至-9 d)；白舒菲0.8 mg/(kg•d )(-8 d至-6 d)，每6 h一次；环磷酰胺1.8 g/(m²•d )(-5 d至-4 d)；卡莫司汀250 mg/(m²•d )(-3 d)；兔抗人胸腺T细胞免疫球蛋白(即复宁)2.5 mg/(kg•d ) (-5 d至-2 d)。给药方式均为静脉滴注。

1.4.2 造血干细胞动员和采集 供者接受重组人粒细胞集落刺激因子5.0-7.5 μg/(kg•d )，每12 h皮下注射1次，连续5 d(自移植-5 d 19：30起至移植0 d 7：30，共注射10次)。应用COBE Spectra血细胞分离机采集外周血造血干细胞，动态监测供者血常规和外周血形态性质分类及CD34⁺细胞计数，患者采集完立即回输，回输过程中给予心电监护，注意患者生命体征变化。回输单个核细胞中位数5.6(4.2-7.0)×10⁸/kg。CD34⁺细胞中位数5.0(3.2-6.8)× 10⁸/kg。

1.4.3 移植物抗宿主病的预防和治疗 应用甲氨蝶呤+环孢素A+吗替麦考酚酯三联预防移植物抗宿主病，具体用法如下：-9 d开始给予环孢素A 3 mg/(kg•d)持续24 h静脉滴注，定期监测环孢素A浓度，根据浓度调整剂量；移植后+1 d给予甲氨蝶呤15 mg/m²，静脉滴注，移植后+3 d、+6 d给予甲氨蝶呤10 mg/m²，静脉滴注；从预处理开始给予吗替麦考酚酯15 mg/(kg•d)口服至移植后+50 d；部分患者于移植0 d，4 d加用巴利昔单抗(舒莱)20 mg，静脉滴注。

1.4.4 肝静脉闭塞病的预防 应用前列腺素E1(前列地尔)20 μg，静脉注射，从预处理开始至移植后28 d，并给予二氯醋酸二异丙胺(40-80 mg/d)、门冬氨酸鸟氨酸(2.5-5.0 g/d)及还原型谷胱甘肽(1.2-1.4 g/d)三联保肝药物应用，定期监测肝功能，及时调整保肝药物应用。

1.4.5 出血性膀胱炎的防治 于-5 d，-4 d给予环磷酰胺1.8 g/(m²•d)，静脉滴注，同时给予美司那(总量为环磷酰胺的2倍)，静脉滴注，并辅以水化碱化尿液、呋塞米20 mg静脉注射，保持尿量在2 500 mL以上，预防出血性膀胱炎^[10]。

1.4.6 间质性肺炎的预防 预处理前9 d至预处理前3 d给予更昔洛韦5 mg/(kg•d)，预防CMV病毒感染，每周定期监测CMV-DNA定量，所有移植后患者定期复查上述指标，并于移植后半年内间断应用人免疫球蛋白。

1.4.7 胃肠道菌群失调的防治 预处理药物的应用及广谱抗生素预防性的应用，会导致消化道黏膜的受损、消化道微环境的破坏、益生菌定植的改变等，最终引起肠球菌相关性腹泻。移植患者进入移植仓后，所有经口食物均消毒，适量饮食，避免暴饮暴食。如果出现腹泻，立即给予粪便培养，应用调节肠道菌群药物，必要时给予敏感抗生素应用^[11]。

1.4.8 感染的防治 移植前对呼吸道、口腔、耳鼻喉、皮肤、肛周等部位全面检查，必要时请相关科室会诊。药浴后进入百级无菌层流病房，给予口腔护理，预防口腔感染及溃疡，硼酸粉坐浴预防肛周感染。每周监测EBV和CMV病毒定量、降钙素原、C-反应蛋白、G实验、GM实验等炎症指标，如果出现感染，完善相关细菌培养+药敏试验、胸部CT，及时经验性应用广谱抗生素，根据检查结果和患者症状调整抗生素^[12]。

1.4.9 植入情况及移植后疗效 连续3 d中性粒细胞≥ 0.5×10⁹ L^-1，连续7 d在不输注血小板的前提下，血小板≥ 20×10⁹ L^-1，为中性粒细胞和血小板植入的标准。移植后1，3，6，12个月查骨髓形态学、白血病残留病灶及PCR-BCR/ABL融合基因^[12]。

微小残留病灶的检测方法：①对所有外周血单倍体造血干细胞移植后急性淋巴细胞白血病患者，以初治白血病免疫表型结果为基础通过流式细胞术检测微小残留病^[13]；②对所有外周血单倍体造血干细胞移植后费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病患者，利用分子聚合酶链式反应(PCR)实时定量检测BCR/ABL融合基因表达水平。

微小残留病阳性：①所有急性淋巴细胞白血病患者单倍体造血干细胞移植后流式细胞术检测结果≥ 0.5%为阳性；②费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病患者单倍体造血干细胞移植后BCR/ABL阳性。

完全缓解(CR)定义：①白血病症状和体征消失，无髓外白血病依据；②外周血中性粒细胞绝对值≥1.5×10⁹ L^-1，血小板≥100×10⁹ L^-1，白细胞分类中无白血病细胞；③骨髓象：原始淋巴+幼稚淋巴细胞≤5%且红细胞及巨核细胞系正常。

分子生物学缓解(molecular complete remission，mCR)定义：费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病患者RQ-PCR检测骨髓BCR/ABL融合基因阴性。

复发定义：已达到完全缓解的患者外周血中再次出现原始细胞；或骨髓中不能用其他原因解释的原始细胞> 5%；或白血病髓外浸润、进展。

分子生物学复发定义：费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病患者再次在骨髓或外周血中检测到BCR/ABL融合基因表达^[14]。

1.4.10 干预方案 对微小残留病阳性患者给予减停免疫抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂应用、化疗、供者淋巴细胞输注、二次移植等^[15]。

1.5 主要观察指标 ①初治时、移植后1，3，6，12个月微小残留病水平变化；②移植后复发情况；③移植相关并发症及死亡率。

1.6 统计学分析 应用SPSS 21.0软件对样本资料进行统计描述。生存分析采用Kaplan-Meier生存曲线，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

异基因造血干细胞移植是目前可能治愈血液系统恶性肿瘤的主要治疗方法，近年来，移植后无病生存率、总生存率不断提高，移植相关死亡率显著下降，主要得益于预处理方案、移植物抗宿主病防治及对症支持治疗的改善，但原发病的复发率并未显著降低，是移植后最主要的致死原因。根据国际骨髓移植登记组(CIBMTR)的资料显示^[16]，复发在非血缘和同胞相合移植后的死因中分别占33%和47%。北京大学血液病研究所的资料显示，单倍型和同胞相合移植后的复发相关死亡率在死因中分别占32%和42%^[17]。早期预测移植后复发，尽早给予临床干预，对降低移植后复发死亡率，具有重要意义。通过动态监测急性淋巴细胞白血病患者外周血单倍体造血干细胞移植后微小残留病指标变化，对降低移植后复发死亡率，提高无病生存率及总体生存率具有重要意义。

近来随着检测技术不断进步，可以使用特异性、非特异性基因或其他分子标记，监测微小残留病在移植后的动态改变，实现移植后复发的风险预测^[18]。例如通过实时定量PCR技术监测费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病患者单倍体造血干细胞移植后BCR-ABL表达水平，能对费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病复发的概率做出评估。对于费城染色体阴性且无染色体改变的急性淋巴细胞白血病患者通过流式细胞术检测微小残留病。本研究联合流式细胞术识别白血病相关异常免疫表型和实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病患者BCR/ABL融合基因表达水平，可以早期干预复发。

单倍体造血干细胞移植后微小残留病持续阴性组：无病生存率为65.8%，总体生存率为68.9%。移植后微小残留病阳性组：无病生存率为20.0%，总体生存率为50.8%，移植后微小残留病阴性组的无病生存率及总体生存率均比阳性组高，且差异有显著性意义(P均< 0.05)。上述结果可以说明移植后动态监测微小残留病指标变化，对识别移植后早期复发有积极意义，微小残留病阳性患者采用抢先干预治疗可延长复发时间，明显减少复发率，提高总体生存率^[19-21]。

本研究显示费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病患者单倍体造血干细胞移植后微小残留病阳性患者给予酪氨酸激酶抑制剂干预后^[22]，获得分子生物学缓解，无病生存率明显高于微小残留病持续阳性未给予干预治疗患者，这与Wassmann等^[23]前瞻性多中心研究发现异基因造血干细胞后微小残留病阳性患者采用伊马替尼治疗可以提高无病生存率的结论是一致的。从微小残留病阳性至血液学复发的中位时间为100(7-190) d，说明提高了治疗效果，延长了复发时间，也与北京大学人民医院血研所监测费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病患者BCR/ABL水平，适时启动酪氨酸激酶抑制剂干预性治疗，可降低血液学复发，改善无病生存率的结论相似。

移植后微小残留病在0.5%-1.0%水平患者，给予减停免疫抑制剂、白细胞介素2、干扰素，诱导及增强移植物抗白血病的作用，微小残留病灶转阴，并完全缓解，但移植后血液学复发患者，给予化疗、供者淋巴细胞输注和二次移植^[24-26]，最终未缓解并死亡。

流式细胞术是利用白血病相关免疫表型检测微小残留病，它在急性淋巴白血病尤其是急性B淋巴细胞白血病中的预测意义较急性髓系白血病敏感性高、特异性强。但移植后不同抗体的组合、各监测时间点、界值尚未统一标准^[27-28]，急性淋巴白血病患者在治疗过程中、复发时可能会出现白血病相关免疫表型的改变，这就可能导致了结果的假阴性^[29-30]。国内有相关报道：流式细胞术联合WT1基因监测微小残留病可提高其敏感性与特异性，但移植后复发的监测，是否可以降低其假阴性，还有待进一步研究^[31-32]，Nishiwaki等^[33]研究结果显示：费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病患者给予外周血造血干细胞移植后立即给予伊马替尼维持治疗及移植后微小残留病阳性给予酪氨酸激酶抑制剂治疗，尽管前者微小残留病阴性持续时间长，但移植后两组患者微小残留病一旦转为阳性，最终都会血液学复发。因此移植后费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病患者何时选用酪氨酸激酶抑制剂治疗，选择何种酪氨酸激酶抑制剂，疗效如何等一系列问题还需要大规模的随机对照研究来证实。

总之，急性淋巴细胞白血病患者外周血单倍体造血干细胞移植后动态监测微小残留病水平，预防早期复发，及时干预治疗，可以提高移植后无病生存率、总体生存率、延长复发时间。另外，本研究病例数较少，需进一步大样本前瞻性研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

外周血单倍体造血干细胞移植治疗成人急性淋巴细胞白血病：监测微小残留病及干预复发

Peripheral blood haploidentical hematopoietic stem cell transplantation for treatment of acute lymphoblastic leukemia in adults: monitoring minimal residual diseases to intervene recurrence

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 1

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	帅芝琴, 陈家蒙, 刘滔滔, 胡安玲, 李利生, 余丽梅, 徐尚福. 干细胞及其来源外泌体防治血管再狭窄的研究现状与问题[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 138-144.
[2]	李仲康, 郑嘉华, 田彦鹏, 黄向华. 间充质干细胞治疗卵巢早衰的最新进展及机制[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 145-152.
[3]	王书韵, 谢君辉, 余学锋. 间充质干细胞治疗糖尿病肾病的作用与机制[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 153-158.
[4]	林苗远, 李豫皖, 刘毅, 陈贝, 张莉. 组织工程皮肤的研究热点及应用价值[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 159-166.
[5]	麦丽萍, 何国东, 陈少贤, 朱杰宁, 侯兴华, 张梦珍, 李晓红. 乙醛脱氢酶3B1在人骨髓间充质干细胞自然衰老过程中的表达[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 40-44.
[6]	杨腾云, 李彦林, 刘德健, 王国梁, 郑竹君. 转化生长因子β3诱导外周血源性间充质干细胞成软骨分化的量效关系[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 45-51.
[7]	孟德峰, 李长仔, 吴春涛. LINC02532靶向miR-145影响胰腺癌干细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 52-58.
[8]	黄涛, 程志坚, 贾志强, 赵晓光, 王磊, 翟文静, 周永新. miR-146a调控脂肪间充质干细胞成骨分化的机制[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 70-75.
[9]	刘璐, 杨宇明, 商艾晨, 刘翠, 孙策, 王静. CD44⁺膀胱癌干细胞中角蛋白6B的表达和调控[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 76-83.
[10]	孙孟军, 郭建美, 周更苏, 董泽飞, 郑春贵, 曹翠丽. DNA拓扑异构酶Ⅱ在ICR小鼠神经干细胞中的表达及意义[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 84-89.
[11]	敬劲, 赵珊笛, 陈龙, 彭双麟, 唐辉, 郭代金, 曾馨仪, 肖金刚. 骨质疏松症小鼠脂肪干细胞结合双相磷酸钙陶瓷修复骨质疏松症小鼠颅骨缺损#br#[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 90-95.
[12]	胥雪玲, 刘军, 杨爱华, 王惠芳, 郭丹丹, 刘雪梅, 徐岩. 高糖诱导人肾小管上皮细胞高表达干细胞因子[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 96-100.
[13]	崔帅帅, 杨晓红. miRNA在骨髓间充质干细胞自我更新、多向分化及命运和功能调控中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 101-106.
[14]	康悦, 刘洁. 环状RNA在间充质干细胞成骨分化中的生物学作用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 107-112.
[15]	冯志国, 孙海飚, 韩晓强. 长链非编码RNA对骨相关细胞增殖、分化、凋亡的调控[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(1): 113-120.