GW4869抑制骨髓间充质干细胞外泌体的释放

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0407

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (1): 26-31.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0407

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GW4869抑制骨髓间充质干细胞外泌体的释放

孙淑丽¹，肖培欣¹，丁辉²，王敬¹，刘子泉²，刘晋阳¹，王雪¹，石沙³，吕琪²，樊毫军⁴

武警后勤学院附属医院，¹救援医学研究所，⁴医教部，天津市 300162；²天津大学灾难医学研究院，天津市 300072；³武警后勤学院学员2旅，天津市 300309

修回日期:2017-09-12 出版日期:2018-01-08 发布日期:2018-01-08
通讯作者: 樊毫军，博士，主任医师，教授，武警后勤学院附属医院医教部，天津市 300162; 并列通讯作者：吕琪，博士，副教授，天津大学灾难医学研究院，天津市 300072
作者简介:孙淑丽，女，1990年生，武警后勤学院在读硕士，主要从事干细胞治疗研究。
基金资助:
天津市科技计划项目(15ZXLCSY00040)；天津市应用基础与前沿技术研究计划(15JCYBJC28500)；天津市卫生计生委科技基金项目(2015KZ125)

GW4869 inhibits the release of exosomes from bone marrow mesenchymal stem cells

Sun Shu-li¹, Xiao Pei-xin¹, Ding Hui², Wang Jing¹, Liu Zi-quan², Liu Jin-yang¹, Wang Xue¹, Shi Sha³, Lv Qi², Fan Hao-jun⁴

¹Institute of Disaster Medicine and Public Health, ⁴Division of Medical Teaching, Affiliated Hospital of Logistic University of Chinese People’s Armed Police Force, Tianjin 300162, China; ²Institute of Disaster Medicine, Tianjin University, Tianjin 300072, China; ³Student Brigade 2, Logistic University of Chinese People’s Armed Police Force, Tianjin 300309, China

Revised:2017-09-12 Online:2018-01-08 Published:2018-01-08
Contact: Fan Hao-jun, M.D., Chief physician, Professor, Division of Medical Teaching, Affiliated Hospital of Logistic University of Chinese People’s Armed Police Force, Tianjin 300162, China; Lv Qi, M.D., Associate professor, Institute of Disaster Medicine, Tianjin University, Tianjin 300072, China
About author:Sun Shu-li, Studying for master’s degree, Institute of Disaster Medicine and Public Health, Affiliated Hospital of Logistic University of Chinese People’s Armed Police Force, Tianjin 300162, China
Supported by:
Tianjin Science and Technology Plan, No. 15ZXLCSY00040; the Application Basis and Cutting-Edge Technology Research Program of Tianjin City, No. 15JCYBJC28500; the Science and Technology Foundation for the Tianjin Municipal Health and Family Planning Commission, No. 2015KZ125

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
外泌体：是一种活细胞主动分泌的微小囊泡，具有脂质双层膜结构，直径30-150 nm，内含有与细胞来源相关的脂质、蛋白质和核酸，并且能够通过生物屏障，参与细胞间信息传递，细胞信号传导，以及改变临近或远隔部位细胞或组织代谢，调节局部微环境。
GW4869：是一种中性鞘磷脂酶2抑制剂，抑制鞘磷脂分解为神经酰胺和磷脂酶D。神经酰胺等脂质可以促进多囊小体中腔内小囊泡的形成，驱动不依赖异质蛋白复合物的路径产生外泌体。GW4869抑制中性鞘磷脂酶2的活性，损害外泌体囊泡向多囊小体的出芽，减少外泌体形成。

摘要
背景：间充质干细胞来源外泌体与间充质干细胞本身具有相似的功能，但外泌体释放的调控机制依然不是很清楚。
目的：探讨中性鞘磷脂酶抑制剂GW4869对骨髓间充质干细胞来源外泌体释放的抑制作用及其对细胞增殖的影响。
方法：将骨髓间充质干细胞分为正常对照组，GW4869处理24 h组和GW4869撤药24 h组(GW4869预处理24 h，撤药后继续培养24 h)，分别收集各组条件培养基，采用超速离心法提取外泌体，Western blot法鉴定外泌体表面标志蛋白CD63、TSG101的表达，Nano-sight检测外泌体粒径分布及浓度，BCA法测定外泌体总蛋白水平，活细胞成像系统观察GW4869对骨髓间充质干细胞增殖的影响。
结果与结论：①Western blot显示外泌体阳性表达标志蛋白CD63、TSG101；②纳米示综分析证实释放的外泌体大小约114 nm；③与正常对照组相比，GW4869处理24 h组和GW4869撤药24 h组外泌体释放减少差异有显著性意义(P < 0.01)，而GW4869预处理24 h组和GW4869撤药24 h组差异无显著性意义(P > 0.05)；④与正常对照组相比，GW4869及其溶剂二甲基亚砜对骨髓间充质干细胞增殖影响差异无显著性意义(P > 0.05)；⑤结果表明，GW4869可以显著抑制骨髓间充质干细胞外泌体的释放，并且在撤药24 h内依然保持抑制作用，GW4869对骨髓间充质干细胞增殖无影响。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-4174-4431(孙淑丽)

关键词: 外泌体, GW4869, 骨髓间充质干细胞, 干细胞

Abstract:

BACKGROUND: Bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) and BMSCs-derived exosomes have similar functions, but the regulatory mechanism underlying the release of exosomes is still unclear.
OBJECTIVE: To investigate the role of GW4869, an inhibition of neutral sphingomyelinase 2, in the release of exosomes in BMSCs and the influence of GW4869 on BMSCs proliferation.
METHODS: Rat BMSCs were divided into three groups: normal control group, 24-hour GW4869 treatment group and withdrawal of GW4869 for 24 hours group (24-hour GW4869 treatment followed by 24-hour successive culture with drug withdrawal). Cultured cells were collected to extract exosomes by ultracentrifugation. Western blot was used to detect exosome-associated proteins CD63 and tumor susceptibility gene 101 (TSG101). The concentration and size distribution of exosomes were measured using nanoparticle tracking analysis. BCA was used to test the level of total proteins in exosomes. Live cell imaging system was used to observe the influence of GW4869 on BMSCs proliferation.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Western blot results showed that exosomes expressed marker proteins such as CD63, TSG101. (2) Findings from the nanoparticle tracking analysis confirmed that the size of released exosomes was about 114 nm. (3) Significantly reduced release of exosomes was found in the two treatment groups compared with the normal control group (P < 0.01), but there was no significant difference between 24-hour GW4869 treatment group and withdrawal of GW4869 for 24 hours group (P > 0.05). (4) No significant difference in the proliferation of BMSCs was found among the three groups (P > 0.05). To conclude, 24-hour W4869 can inhibit the release of exosomes by BMSCs and this inhibitory effect is still sustained within 24 hours after drug withdrawal. However, GW4869 has no influence on the proliferation of BMSCs.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Bone Marrow, Mesenchymal Stem Cells, Exosomes, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

孙淑丽，肖培欣，丁辉，王敬，刘子泉，刘晋阳，王雪，石沙，吕琪，樊毫军. GW4869抑制骨髓间充质干细胞外泌体的释放[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(1): 26-31.

Sun Shu-li, Xiao Pei-xin, Ding Hui, Wang Jing, Liu Zi-quan, Liu Jin-yang, Wang Xue, Shi Sha, Lv Qi, Fan Hao-jun. GW4869 inhibits the release of exosomes from bone marrow mesenchymal stem cells[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(1): 26-31.

图/表（结果） 1

2.1 骨髓间充质干细胞来源外泌体阳性表达外泌体表面标志蛋白CD63、TSG101 外泌体分离及鉴定目前尚缺乏标准化流程，对前期文献总结发现大多数研究者会采用Western blot、电镜、NTA及BCA等多种方法中的2个或更多相结合的方法鉴定^[11]。CD63属于外泌体表面四跨膜蛋白超家族蛋白，TSG101为物质选择和内部出芽过程所必须的异质蛋白复合物之一，二者均为目前鉴定外泌体最常用的蛋白分子。Western blot 结果显示：超速离心提取物阳性表达CD63和TSG101，骨髓间充质干细胞裂解物为阳性对照(图1)。

2.2 外泌体的粒径分布及浓度 Nanosight检测外泌体的粒径分布范围以及微粒浓度结果见图2。悬液中的微粒多峰分布，微粒大小为(120.9±42.9) nm，大部分粒子都处于外泌体直径的范围(30-150 nm)，含量最多的粒子直径约为114 nm，浓度为1.8×10¹¹微粒/L。Western blot结果示超速离心获得的沉淀阳性表达外泌体表面标志蛋白CD63和TSG101，纳米示综分析结果证实大部分微粒子都处于外泌体直径的范围(30-150 nm)，因此基本可以认为超速离心获得的沉淀为骨髓间充质干细胞释放的外泌体。

2.3 GW4869对骨髓间充质干细胞外泌体释放的影响 用BCA法测定各处理组骨髓间充质干细胞条件培养基提取外泌体蛋白水平，见图3。GW4869处理组和GW4869撤药24 h组外泌体蛋白水平均显著低于正常对照组(F=108.7，P < 0.01)，而GW4869预处理组和GW4869撤药24 h组差异无显著性意义(t=2.75，P > 0.05)。

2.4 GW4869对骨髓间充质干细胞增殖的影响 JULI-stage活细胞成像系统对各处理组细胞每隔2 h采集一次图像，连续116 h的数据分析结果见图4。与正常对照组相比，GW4869处理组和溶剂二甲基亚砜对细胞增殖的影响差异无显著性意义(P > 0.05)。

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引言

外泌体是活细胞分泌的直径30-150 nm的脂质双分子层囊泡^[1]。越来越多的研究已经证明外泌体是细胞间信息传递的工具，它在正常的生理过程中担当重要角色，如泌乳、炎症、细胞增殖、免疫反应等，同样与疾病的发生发展密切相关，如血栓形成、糖尿病、动脉粥样硬化、肝脏疾病、神经退行性疾病及肿瘤^[2]。间充质干细胞是具有自我复制和分化潜能的成体干细胞，很多研究已经表明间充质干细胞来源外泌体与间充质干细胞本身具有相似的功能，在修复受损组织、抑制炎性应答、调节免疫系统等方面发挥重要作用，具有广阔的应用前景，但机制依然不是很清楚^[3]。另有研究表明，间充质干细胞来源外泌体在不同的肿瘤模型中可以促进或抑制肿瘤生长^[4]，骨髓间充质干细胞来源的胞外囊泡能够增强慢性淋巴细胞白血病B细胞的迁移能力，帮助白血病细胞免受自发凋亡或药物诱导的细胞凋亡^[5]。

外泌体形成的潜在机制包括依赖内吞体分选转运复合体(endosomal sorting complex required for transport，ESCRT)途径和不依赖ESCRT路径，后者由部分脂质驱动，例如神经酰胺、溶血磷脂酸^[6]。GW4869是一种中性鞘磷脂酶2(nSMase2)抑制剂，抑制鞘磷脂分解为神经酰胺和磷脂D。已有研究表明，抑制或消除中性鞘磷脂酶2，可以抑制细胞释放外泌体^[7-9]。实验旨在探讨GW4869能否抑制Wistar大鼠骨髓间充质干细胞外泌体的释放及撤药24 h后的抑制效果，以期为探讨骨髓间充质干细胞来源外泌体在疾病治疗中的作用提供理论基础，并为肿瘤、白血病等治疗提供新的临床思路。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 细胞学体外实验。

1.2 时间及地点 于2016年11月至2017年5月在武警后勤学院附属医院救援医学研究所完成。

1.3 材料 Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(赛业生物技术有限公司)；干细胞基础培养基、干细胞专用胎牛血清、双抗、L-谷氨酰胺、0.25%Trypsin-0.04%EDTA (赛业生物技术有限公司)；GW4869(Sigma公司)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)；兔源CD63、TSG101多克隆抗体、HRP标记山羊抗兔IgG二抗(Proteintech公司)；二甲基亚砜(北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司)；JULI-stage 活细胞成像系统(韩国NanoEntek公司)；超速离心机(美国Beckman公司)；Nano-sight NS300仪器(德国Malvern公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 骨髓间充质干细胞培养及分组 将骨髓间充质干细胞随机分为正常对照组，GW4869处理24 h组和GW4869撤药24 h组(GW4869预处理24 h，撤药后继续培养24 h)。Wistar大鼠骨髓间充质干细胞培养于完全培养基中(基础培养基加入体积分数为10%胎牛血清、100 U/mL青霉素溶液、0.1 g/L链霉素溶液、2 mmol/L L-谷氨酰胺)，在37 ℃、体积分数为5% CO₂及饱和湿度的培养箱中进行细胞培养。待细胞融合至80%左右时，弃完全培养基，PBS洗涤2遍，0.25%Trypsin-0.04%EDTA消化细胞，按照1×10⁶个活细胞/T75培养瓶的密度接种细胞，接种24 h待细胞贴壁后，GW4869撤药24 h组PBS洗涤3遍，更换为终浓度为10 μmol/L GW4869(0.29%二甲基亚砜溶剂)的完全培养基继续培养，正常对照组和GW4869处理24 h组PBS洗涤3遍后继续用完全培养基培养。24 h后各组细胞均用PBS洗涤3遍，正常对照组和GW4869撤药24 h组更换为不含胎牛血清的条件培养基(不含胎牛血清，其余成分相同)，GW4869处理组更换为终浓度为10 μmol/L GW4869 (0.29%二甲基亚砜溶剂)的不含胎牛血清的条件培养基，继续培养24 h后收集各组条件培养基。

1.4.2 外泌体提取 收集各组条件培养基，采用超速离心方法提取外泌体^[10]。具体步骤简述如下：将收集到的条件培养基置于50 mL离心管中，4 ℃，500×g离心10 min，去除死细胞沉淀；收集离心后所得上清置于另一50 mL离心管中，4 ℃，2 000×g离心20 min进一步去除细胞碎片及大分子蛋白；再次收集上清于50 mL离心管中，4 ℃，10 000×g离心30 min，收集上清并通过0.22 μm细胞滤器，去除直径大于0.22 μm的物质；收集上清于超速离心管中，4 ℃，120 000×g条件下超速离心70 min，弃上清；PBS重悬沉淀后再次4 ℃，120 000×g离心70 min，弃上清，得到外泌体沉淀，50 μL PBS重悬外泌体。-80 ℃保存备用。

1.4.3 Western blot检测外泌体标志蛋白CD63、TSG101的表达 取正常对照组骨髓间充质干细胞条件培养基分离纯化的外泌体15 μL，加入5 μL 4×蛋白上样缓冲液，保持95 ℃变性5 min。用含1%PMSF的RIPA裂解5×10⁶个骨髓间充质干细胞，提取细胞蛋白作为阳性对照。SDS-聚丙烯酰胺凝胶(10%)电泳，将SDS-聚丙烯酰胺凝胶及PVDF膜置于半干转膜仪中转膜50 min，5%脱脂奶粉室温封闭1 h，一抗(兔源CD63、TSG101多克隆抗体1︰1 000稀释) 4 ℃孵育过夜。TBST洗膜，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG二抗(1︰1 000稀释)室温孵育1 h，TBST洗膜，曝光、显影。

1.4.4 Nano-sight检测外泌体浓度及粒径分布 使用Nanosight-NS300仪器对正常对照组骨髓间充质干细胞条件培养基提取的外泌体行纳米颗粒示综分析(nanoparticle tracking analysis，NTA)，检测外泌体浓度及粒径分布。无菌PBS将外泌体样本稀释100倍，用注射泵加载到Nanosight-NS300仪器中，识别和跟踪做布朗运动的每个粒子中心，用NTA 3.2软件采集并分析数据。

1.4.5 总蛋白含量测定 使用BCA蛋白质定量试剂盒测量各处理组条件培养基提取的外泌体总蛋白量。BSA为蛋白标准品，依据试剂盒说明书进行操作。

1.4.6 活细胞成像系统检测细胞增殖 骨髓间充质干细胞按照2×10⁵个/孔的密度接种于6孔板中，分别加入完全培养基，含0.29%二甲基亚砜的完全培养基，终浓度为10 μmol/L GW4869(0.29%二甲基亚砜溶剂)的完全培养基。将6孔板置于活细胞成像系统，调节曝光强度和曝光时间，直至出现清晰图像，设置程序为58 cycle×2 h。采用STAT软件分析图像数据，根据细胞生长密度作出细胞生长曲线。

1.5 主要观察指标 ①Western blot鉴定外泌体表面相关抗原；②NTA鉴定外泌体的粒径分布和浓度；③BCA法测定外泌体总蛋白浓度；④活细胞成像系统观察骨髓间充质干细胞增殖情况。

1.6 统计学分析 利用SPSS 22.0软件对数据处理分析，计量资料以x(_)±s的形式表示，采用单因素方差分析，组间比较采用LSD法。P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

在绵羊网织红细胞中最初发现外泌体时，认为其作用是将细胞不需要的物质运输出细胞的“垃圾桶”^[12]。到 1996 年发现外泌体与抗原递呈反应有关，参与免疫系统的生物免疫作用^[13]。直至近日发现外泌体在细胞通讯方面起到至关重要的作用^[14]。外泌体中的一些生物学物质例如核酸和蛋白质与人类疾病的发生密切相关，作为生物标志物在疾病的诊断、分型和治疗中也具有重要价值。在过去几年中，这一领域的研究发展迅速，但对外泌体形成及释放机制依然知之甚少，外泌体的提取及鉴定方法依然缺乏标准化流程。

目前为止，外泌体的提取主要基于以下5种技术，基于差速超速离心技术，基于大小的技术，基于免疫亲和捕获的技术，基于外泌体沉淀和基于微流体的技术^[15]。超速离心主要由几个离心步骤组成，旨在去除细胞、大囊泡和碎屑并沉淀外泌体，由于其操作简单，没有样品预处理，提取纯度相对较高，是目前最常用的提取方法(81%)^[11^，^16-17]。其他方法在未来的研究及临床应用中具有很强的应用潜能。本实验采用超速离心与0.22 μm细胞滤器相结合的方法提取外泌体，去除大于0.22 μm的物质，尽最大可能提高外泌体的纯度，减少下游实验测量外泌体总蛋白的误差。由于超速离心法提取外泌体获得的样本量相对有限，GW4869抑制其释放后所得样本量更低，故本实验仅对正常对照组的外泌体进行鉴定。Western blot结果显示超速离心获得的沉淀阳性表达外泌体表面标志蛋白CD63和TSG101，纳米示综分析结果证实大部分微粒子都处于外泌体直径的范围(30-150 nm)，因此基本可以认为超速离心获得的沉淀为骨髓间充质干细胞释放的外泌体。

用终浓度为10 μmol/L的中性鞘磷脂酶抑制剂GW4869处理骨髓间充质干细胞24 h，观察其对骨髓间充质干细胞外泌体释放的影响，并监测其撤药24 h内的作用效果。结果表明GW4869对骨髓间充质干细胞增殖无显著影响，但可以抑制骨髓间充质干细胞外泌体的分泌量，并且在撤药24 h内依然保持抑制作用。前期学者在小鼠Oli-neu细胞^[8]，HEK293细胞和N2a细胞中进行的研究已经表明，中性鞘磷脂酶2的抑制或消耗可以通过损害外泌体囊泡到多囊小体(multivesicular bodies，MVBs)的出芽而降低外泌体的释放^[18-19]。Essandoh等^[20]用GW4869预处理RAW264.7巨噬细胞，2 h后脂多糖诱导细胞损伤，24 h后发现GW4869预处理组RAW264.7巨噬细胞释放的外泌体和炎性细胞因子(肿瘤坏死因子α，白细胞介素1β，白细胞介素6)均显著低于0.005%二甲基亚砜预处理的对照组；在小鼠体内，于内毒素处理或盲肠结扎/穿刺手术前1 h注射GW4869，12 h后发现GW4869预处理组小鼠血清中的外泌体和炎症细胞因子低于PBS注射的对照组。因此，其推测在脓毒症中GW4869阻断外泌体释放会阻断脓毒症引起的炎症反应，进而改善心功能，提高生存率。而Phuyal等^[21]研究表明中性鞘磷脂酶2抑制或消耗不会降低PC-3细胞中外泌体的释放，抑制鞘糖脂合成神经酰胺虽然也不能改变外泌体的释放量，但改变了释放的外泌体成分，因此其课题组推测中性鞘磷脂酶2在多囊小体腔内囊泡生物起源中的作用似乎有细胞依赖性。本实验结果与前者一致，中性鞘磷脂酶2抑制剂GW4869可以减少骨髓间充质干细胞外泌体释放，这种抑制作用并不是由细胞增殖变化引起。

课题组前期在干细胞治疗烟雾吸入伤方面做了大量研究，发现间充质干细胞对于烟雾吸入伤有良好的治疗作用^[22-28]。烟雾吸入伤后移植干细胞可以调节肺部及全身免疫微环境，降低继发炎症对肺部的损伤。将携带荧光素酶基因标记的人骨髓间充质干细胞注入NOD/SCID小鼠体内，活体观察其在烟雾吸入伤小鼠中的动态分布，发现干细胞虽在肺部驻留时间较正常对照组长，但并没有在肺部定植分化^[27]。在烟雾吸入伤大鼠体内移植同种异体骨髓间充质干细胞得出同样的结果^[28]。因此推测干细胞通过旁分泌途径发挥治疗作用。与此同时，国内外学者对干细胞治疗肺损伤的机制也做了很多探索。Zhu等^[29]发现间充质干细胞条件培养基可以通过分泌可溶性因子例如角质细胞生长因子，恢复蛋白通透性，减少肺泡炎性因子，改善大肠杆菌内毒素诱导的急性肺损伤；随后其发现间充质干细胞释放的胞外囊泡也能减轻大肠杆菌内毒素诱导的C57小鼠急性肺损伤。研究表明，间充质干细胞来源外泌体与间充质干细胞本身具有相似的功能，但干细胞外泌体是否发挥全部治疗作用依然未知。

外泌体在疾病中的作用具有双面性，一方面干细胞来源外泌体在皮肤伤口愈合^[30-32]，骨再生^[33]，血管损伤修复^[34]，心肌缺血再灌注损伤修复等方面具有很强的治疗潜力^[35]；然而在另一些疾病，特别是肿瘤中，细胞主动释放大量外泌体，改变受体细胞表型，在促进肿瘤生长和转移中起到了关键作用^[36]。研究人员将骨髓间充质干细胞来源外泌体添加到慢性淋巴细胞白血病B细胞培养基中，发现慢性淋巴细胞白血病B细胞的迁移能力增强，自发凋亡减少，对几种化疗药物的化学耐药性增加^[5]。间充质非小细胞肺癌细胞分泌外泌体促进化疗耐药性^[37]。A549肺癌细胞分泌的外泌体可以诱导促炎型干细胞，其白细胞介素6，白细胞介素8分泌显著增高；在小鼠肿瘤模型中，促炎型干细胞促肿瘤作用显著增强^[38]。

干细胞来源外泌体内容物包括细胞因子和生长因子，信号脂质，mRNA和miRNA，主要参与细胞间信息传递、细胞信号传导，以及改变临近或远隔部位细胞或组织代谢，影响组织对损伤、感染和疾病的反应^[39]。作者关注外泌体释放过程所必需的分子，如多囊小体起源、多囊小体靶向包膜、以及与胞膜融合及这些分子在复杂过程中所发挥的特殊作用，并设计了GW4869抑制干细胞外泌体释放的体外实验，希望通过减少外泌体形成、释放，为进一步探讨干细胞对烟雾吸入伤的治疗机制及观察外泌体在治疗烟雾吸入伤中的作用提供理论基础，并希望通过减少外泌体形成、释放，为肿瘤、白血病等疾病的治疗提供新的策略。但是本实验仅研究了GW4869抑制骨髓间充质干细胞来源外泌体的释放，BCA法测得其总蛋白减少，外泌体成分有无发生变化未做进一步研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

GW4869抑制骨髓间充质干细胞外泌体的释放

GW4869 inhibits the release of exosomes from bone marrow mesenchymal stem cells

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