中国组织工程研究 ›› 2012, Vol. 16 ›› Issue (6): 1019-1023.doi: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.06.016
• 干细胞培养与分化 stem cell culture and differentiation • 上一篇 下一篇
岑妍慧,何国珍,黄 波,黄荣师,贾 微,彭 岳,玉光强
Cen Yan-hui, He Guo-zhen, Huang Bo, Huang Rong-shi, Jia Wei, Peng Yue, Yu Guang-qiang
摘要:
背景:关于胰腺干细胞在胰腺组织中的分布情况,以及如何有效的将其分离、体外优化培养,目前仍有一定的困难。 目的:从新生昆明小鼠胰腺组织中分离出胰腺干细胞,在体外条件下培养观察其形态学和生物学特征,并进行初步鉴定。 方法:取新生SPF级昆明小鼠的胰腺组织,使用Ⅴ型胶原酶消化,采用Percoll不连续密度梯度离心,使胰腺组织内、外分泌部细胞分离,分布在3个不同的密度界面;收集各界面的细胞,以无血清、添加碱性成纤维细胞生长因子和表皮细胞生长因子的DMEM培养基培养。 结果与结论:通过细胞形态学和细胞生长特性的观察,结合双硫腙染色证实:采用Percoll不连续密度梯度离心,第一、二密度界面的细胞来源于胰腺内分泌部;第三密度界面细胞来源于胰腺外分泌部。分别从胰腺内、外分泌部获取胰腺组织细胞,在体外培养观察发现均存在一类大、圆、单个核的细胞,呈集落样附壁生长,具有较活跃的分裂增殖能力,碱性磷酸酶染色阳性,表达胰腺干细胞的特异性标志巢蛋白,即为胰腺干细胞;随着体外培养时间的延长,分别表达PDX-1和CK-19,呈现向胰腺内分泌部细胞和外分泌部细胞分化的趋势。
中图分类号: