[1]	蒋 欣, 乔良伟, 孙 东, 李 明, 房 军, 曲青山. 肾移植患者血清中长链非编码RNA PGM5-AS1表达及调控人肾小球内皮细胞的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 741-745.
[2]	李立强, 焦龙杏, 张 武 , 闫文涛, 李 健, 李明皓. 骨髓来源未成熟树突状细胞干预大鼠原位肝移植的排斥反应[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(13): 2025-2029.
[3]	李 玲，徐 千，魏婉慧，赵慧佳，时玉颖，刘 璐，王彦峰，叶啟发. 脑死亡模型兔炎症因子表达和肺损伤性变化[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(28): 4481-4486.
[4]	田 英，吴 洁，王双勇. 聚乙二醇免疫伪装功能的应用[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(10): 1625-1633.
[5]	郭惠玲，杜改萍，王丽强，宫玉波，闫洪欣，黄一飞. J2对同种异体穿透性角膜移植模型大鼠CD4+和CD8+T细胞免疫功能的抑制[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(5): 723-728.
[6]	叶 辉，严 浩2，钟 蕾，王 涛，邓 娟，凌士奇. 阻断血管内皮生长因子C促进角膜移植后新生淋巴管和血管的“分离生长”[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(33): 4940-4948.
[7]	涂泽松，梁立雪，邢基斯. 同种异体肌腱重建膝关节前交叉韧带：效果及免疫排斥反应[J]. 中国组织工程研究, 2016, 20(15): 2190-2196.
[8]	王 恒，陆晓和，左 炜. 角膜移植模型大鼠急性排斥期应用转化生长因子β1对肿瘤坏死因子α的影响[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(5): 778-782.
[9]	周 宇，郑鳕洋，陆瀚澜，陈 瑜，傅尚希，王立明. 肾移植后早期监测外周血视黄醇结合蛋白4的临床意义[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(46): 7472-7477.
[10]	杨晓勇，姚庆春，王 玮，齐 曼，洪希莹，刘晨妹，尹 航，刘 航，任 亮，胡小鹏，张小东. 树突状细胞共刺激分子表达与免疫抑制剂的干预[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(24): 3876-3881.
[11]	杨其顺，张 琳，张志强，姜 伟，龙 伟，裴向克. 肾移植后肺部感染治疗中免疫抑制剂的应用[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(2): 262-266.
[12]	孙 曙，李州利，蔡 明，王 强，金海龙，陈昌庆，刘志佳，孔祥瑞，李聪然，石炳毅. 白细胞介素17在肾移植排斥反应中的表达及意义[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(51): 8275-8280.
[13]	陈昌庆，石炳毅，蔡 明，赵豫波，金伯泉，王春艳，韩 永，肖 漓，周文强，李州利. 肾移植排斥反应中细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4的作用[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(5): 730-735.
[14]	于小迪，王为忠，焦婕英，郑建勇，赵正维. 青蒿琥酯对大鼠小肠移植急性排斥反应的作用[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(5): 761-766.
[15]	郭彩龙，莽源祎，张 雷. 抗免疫排斥反应中抗体药物偶联物的突破性进展[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(5): 773-778.

急性排斥反应可以导致移植物的急性或慢性失功能，是实体器官移植的主要障碍。介导急性排斥反应的核心是活化的T淋巴细胞。一般认为，T细胞应答及其效应是介导急性排斥反应发生的主要机制。T细胞对异体抗原的识别引起排斥反应。这一免疫反应可以分为3个阶段：①异体抗原被受体的初始T细胞识别。②T细胞活化、增殖。③效应阶段，即移植物损伤。可见T细胞的活化、增殖在急性排斥反应中起着重要作用。T淋巴细胞凋亡或无能是诱导机体免疫耐受或无反应性的主要机制，在机体免疫调节和免疫治疗中发挥着重要的意义^[1] 。
在移植的过程中，氧自由基的释放，补体的激活，细胞因子的释放潜在的导致了T细胞的激活。T细胞的活化增殖是移植物急性排斥反应发生的关键^[2-3] 。对于排斥反应的研究主要着重于阻断内源性危险信号即减少T细胞活化来达到抑制移植排斥反应的重要策略。
近年来国内外学者对抗移植排斥反应的药物进行了大量的研究，包括环孢素A，他克莫司，霉酚酸酯，特异性单克隆抗体等^[4] 。尽管这些药物均在临床上应用，但由于这些药物的安全范围小，毒副反应大，在杀伤活化T细胞的同时伤及正常T细胞，导致机体免疫功能下降，
诱发移植后肿瘤的发生，严重影响存活率。借助于分子生物学的发展，以T淋巴细胞活化、增殖的信号通路为靶点，成为开发、筛选新的免疫抑制药物的新策略。
徐强等^[5]对土茯苓及其成分落新妇甙的作用机制进行了深入的探讨，发现落新妇甙能选择性地作用于因抗原攻击活化的淋巴细胞，促进活化的T淋巴细胞凋亡从而消除其功能，但对肝细胞及正常的淋巴细胞则无作用^[6] 。鉴于落新妇甙的特点，在此基础上，实验将此药用于抑制急性肺移植排斥反应中，观察落新妇甙对肺移植后活化T细胞的作用。
目前落新妇甙已经在各个领域中均有应用研究。赵金平等^[7]通过对胸主动脉移植的大鼠实验发现，落新妇甙能有效抑制自体移植物平滑肌细胞的增殖并减轻炎症细胞的浸润，从而抑制移植血管发生动脉粥样硬化。宋少华等^[8]通过肾移植动物实验发现，落新妇甙能够有效减轻肾脏缺血再灌注损伤，其保护作用可能与抑制缺血-再灌注后趋化因子1及白细胞介素6和白细胞介素1β的产生有关。幕宁等^[9-10]发现落新妇甙通过促进白细胞介素10表达保护小鼠缺血再灌注损伤肝脏，有效改善肝功能和肝脏病理损。同时宋少华等^[11]还采用体外条件培养法得到小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞,加入脂多糖刺激细胞成熟，不同浓度落新妇甙处理细胞后发现，落新妇苷能够剂量依赖性地抑制体外培养小鼠骨髓来源树突状细胞的成熟,并对其免疫功能具有一定的负性调节作用。
CD69、CD25、CD71的表达是T细胞不同活化阶段的标志，器官移植后测定CD3⁺细胞CD69、CD25、CD71的表达可特异性的反应受体体内T细胞的免疫功能状态，理论上可作为预测和诊断急性排斥反应的敏感指标。实验在大鼠左侧原位移植模型基础上，分成对照组和落新妇甙组，观察落新妇甙对大鼠肺移植后活化T细胞的动态变化，以探讨落新妇甙对大鼠移植肺活化T细胞的作用，为落新妇甙抑制排斥反应的机理研究提供理论支持。

肺移植的排斥反应发生率较高，移植后第1年，急性排斥反应的发生率约为54%。如何选择有效的免疫抑制剂是肺移植医师面临的重大挑战^[14] 。
在众多体外试验中，落新妇甙及其类似物在以下层面显示了典型的选择性免疫抑制特色^[15-18] ：选择性地抑制T 细胞免疫反应的效应相而不影响诱导相；选择性地抑制浸润至炎症组织的T 淋巴细胞而不影响其他组织细胞；选择性地抑制活化的T细胞(活化的Jurkat 细胞、疾病模型脾T细胞、炎症组织浸润T细胞) 而不影响非活化的T 细胞及正常淋巴细胞；选择性地抑制Th1细胞而不影响Th2细胞。这种选择性未见其他相关的报道，不仅有助于相关药物的研制，对于开辟新型选择性免疫抑制疗法也将具有重要意义。
在器官移植的过程中，氧自由基的释放，补体的激活，细胞因子的释放潜在的导致了受体T细胞的激活。活化T细胞是介导移植排斥的重要细胞，是移植物急性排斥反应发生的关键，而闭塞性支气管炎是组织肺移植长期存活的最主要并发症^[19] 。选择性清除活化T细胞而保留静息细胞，能控制移植排斥反应发生，减少药物的毒副作用。有文献报道监测外周血T淋巴细胞亚群的变化，用CD3⁺评估机体免疫抑制的水平，可能是预测排斥反应更为敏感的指标，并且能为寻求理想的免疫抑制状态提供重要的参考依据^[20] 。细胞免疫应答是从T 细胞的TCR 识别APCs 的MHC-抗原肽复合物，并激活T 细胞开始的。TCR复合体是由参与抗原识别的T 细胞受体α、β链异二聚体与γδεζ链组成的CD3 复合体偶联形成的。TCR的α、β链因胞内区较短，无信号传导功能，信号传导主要由胞内区较长的CD3分子完成。
CD69、CD25、CD71的表达是T细胞不同活化阶段的标志，器官移植术后测定CD3⁺细胞CD69、CD25、CD71的表达可特异性的反应受体体内T细胞的免疫功能状态，理论上可作为预测和诊断急性排斥反应的敏感指标^[21] 。它们的表达具有时间依赖性。CD69属于Ca2+依赖性Ⅱ型凝集素样超家族跨膜受体，是与细胞因子基因表达有关的信号转导分子。有报道T细胞被激活3.0~4.0 h后，CD69表达上调，是T淋巴细胞活化后最早表达的膜蛋白分子，标志T细胞早期活化^[22] 。CD69与配体的结合激活相关酪氨酸激酶，使胞内Ca ²⁺浓度上调，从而诱导白细胞介素2表达，并上调CD25的表达^[23] 。汪慧英等^[24]通过观察体内、外实验观察在受到刺激后1 h，小鼠嗜酸性细胞表面CD69即可表达，并发现CD69既可以作为激活的表面标记物，同时又可以诱导嗜酸性细胞的凋亡。
CD25是白细胞介素2受体α链，由T细胞表明的TCR/CD3受激活后的信息转导通路诱导产生，于活化后16~18 h表达，是T细胞活化中期的标志，而β链和γ链为组成性表达，它们与α链共同组成白细胞介素2受体。该受体与自分泌或旁分泌的白细胞介素2结合，诱导T细胞增殖，同时也是T细胞表达CD71的条件。CD71为转铁蛋白受体，它主要表达处于增殖期的T细胞，CD71的表达直接反映了T淋巴细胞的增殖、母细胞化的程度。是T细胞晚期活化的标志。CD25是白细胞介素2受体，主要表达于由G₁期转向S期的活化状态的T细胞膜上^[25] 。CD25的阳性率直接反映了T淋巴细胞的活化程度。
目前体外的研究已证实抗CD71 McAb可特异地阻断T细胞早期发育的增殖和分化，抗CD25 McAb亦已开始应用于临床并显示出广阔的应用前景^[26-27] 。Richater等^[28]研究证明：在人供体肺实质中存在着大量信使巨噬细胞和活化的淋巴细胞。其中主要是T细胞和NK细胞起作用。在肝移植中也有同样的发现，大量的CD8⁺T细胞以及NK细胞都从供体被转移到受体上^[29] 。除此之外，最近的关于肝肾肺移植热缺血模型的报道表明，裸鼠，CD4CD8敲除鼠，CD4⁺衰竭鼠同非免疫缺陷鼠相比再灌注损伤要明显轻些。de Perrot等^[31]也观察到：裸鼠同对照的非免疫移植鼠相比，在活体外肝灌注模型中灌注2 h后再灌注损伤更轻。因此，T细胞在再灌注损伤中起到了重要的作用。他用裸鼠(rnu/rnu)和杂合鼠(rnu/+)来观察T细胞在IR损伤中的作用发现，在灌注后12 h后，受体T细胞迅速地浸润了移植肺，上调了CD25(T细胞活化的标志)分子的表达。T细胞并没有参与早期的再灌注损伤。但是，在灌注后12 h，T细胞介导了再灌注损伤，并释放了大量的肿瘤坏死因子γ到肺组织中。这一发现对再灌注损伤的预防和治疗有着重要的意义^[31] 。因此得出结论：①再灌注后T细胞浸润了移植肺。②受体T细胞介导了再灌注损伤。③在肺移植模型再灌注后，受体T细胞在再灌注后立即在移植肺中积聚，并在再灌注后  12 h内介导了再灌注损伤，其表面的CD25分子的表达也有上调。
由于CD69、CD25、CD71的表达是T细胞不同活化阶段的标志，器官移植术后测定CD3⁺细胞CD69、CD25、CD71的表达可特异性的反应受体体内T细胞的免疫功能状态，因此本实验在设计上，采用检测不同时间段外周血CD3⁺细胞CD69、CD25、CD71的表达，来观察落新妇甙对移植肺活化T细胞影响的动态变化。
落新妇甙能明显导致肺移植后活化T细胞的失活或无能，能有效控制移植排斥反应发生，减少药物的毒副作用。其诱导活化T细胞的失活或无能可能和诱导活化T细胞凋亡及参与活化T淋巴细胞凋亡的信号通路有关，将在下一步实验中予以证实。　

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