2.1   各组骨髓间充质干细胞的增殖、活性和迁移能力分析  将第4代骨髓间充质干细胞以2.0×104/孔种植在24孔培养板中，分别培养1，4，7 d后使用CCK-8法测定骨髓间充质干细胞的增殖情况，见图1A。结果表明：随着培养时间的延长，各组细胞增殖均发生明显增加。在种植当天(即第1天)时，各组间骨髓间充质干细胞的吸光度值差异无显著性意义(P > 0.05)。但是，在第4，7天，体外冲击波+富血小板血浆组与其他组比较差异均有显著性意义；富血小板血浆组细胞增殖也均优于对照组和体外冲击波组(P < 0.05)。单纯体外冲击波处理组与未处理对照组相比，在第4天时未见明显变化，但这种差异在第7天时变得显著(P < 0.05)。以上结果提示体外冲击波和富血小板血浆处理均有利于细胞增殖，尤其是联合两种处理方式时可显著促进骨髓间充质干细胞在体外增殖。
在培养3 d后进行钙黄绿素/碘化丙啶活-死细胞染色，见图1B，荧光图片清楚地显示，各组细胞均多为绿染的活细胞，红染的死细胞数量极少。结果显示不管是体外冲击波处理还是与富血小板血浆共培养，均不会降低细胞活性。




此外，用Transwell法对各组骨髓间充质干细胞的迁移能力进行研究。与对照组和体外冲击波组相比，富血小板血浆组和体外冲击波+富血小板血浆组透孔室底部的迁移细胞数量明显更多，见图2A，B。富血小板血浆组和体外冲击 波+富血小板血浆组之间细胞迁移数差异也有显著性意义  (P < 0.05)。



2.2   各组骨髓间充质干细胞的成骨能力   除了影响骨髓间充质干细胞的数量和活性外，成骨分化是骨再生的关键指标。经体外成骨诱导培养14 d后，体外冲击波+富血小板血浆组的碱性磷酸酶活性显著高于对照组(P < 0.001)、体外冲击波组(P < 0.01)和富血小板血浆组(P < 0.05)。同时，体外冲击波组和富血小板血浆组的碱性磷酸酶活性也显著高于对照组，说明不管是体外冲击波还是富血小板血浆处理都可以显著上调骨髓间充质干细胞的碱性磷酸酶活性，见图3A，B。茜素红染色是一种用于矿化的组织学染色，它可以识别沉积的钙结节。大体图像显示体外冲击波和/或富血小板血浆处理组的钙沉积斑点较对照组更明显。对茜素红染色结果进行半定量分析进一步证实了这一变化：即在富血小板血浆组和体外冲击波+富血小板血浆组检测到明显的钙沉积量，见图3C，D。
成骨诱导培养7，14 d后，体外冲击波 +富血小板血浆组的Runx2和OCN基因表达量均较其他组明显上调，差异有显著性意义；而体外冲击波组和富血小板血浆组Runx2和OCN的基因表达量也显著高于对照组；成骨相关基因表达的差异仅在第14天时富血小板血浆组高于体外冲击波组   (P < 0.05)，以上研究结果说明体外冲击波和/或富血小板血浆处理可以促进骨髓间充质干细胞成骨相关基因的表达，见图3E，F。



成骨诱导培养处理7，14 d可见Runx2和OCN的蛋白表达逐渐增加。与PCR结果一致的是体外冲击波+富血小板血浆组Runx2和OCN成骨相关蛋白表达量均显著高于另外3组；富血小板血浆组成骨相关蛋白表达也高于对照组和体外冲击波组，差异有显著性意义；而单纯体外冲击波处理组直到第14天时才较对照组有更多的Runx2和OCN蛋白表达(P < 0.05)，见图4。



2.3   骨质疏松造模及术后一般情况   各组白兔术后3 h清醒，手术一侧的肢体活动欠佳，手术切口约在术后1周愈合，表皮缝线自动脱落，均无明显炎症反应，实验过程中无死亡。与假手术组相比，双侧卵巢切除组在术后10个月雌激素水平明显下降(P < 0.001)，Micro-CT检测显示桡骨远端骨量降低(P < 0.05)，见图5A，B，说明骨质疏松模型建模成功。



2.4   影像学和组织学评估节段性骨缺损的再生情况   术后12周采用Micro-CT进行影像学检查，未处理组骨再生情况最差，出现明显节段性骨不连；单纯骨髓间充质干细胞组骨再生也相对受限，出现部分再生后两断端髓腔封闭，也出现骨不连情况；骨髓间充质干细胞/体外冲击波组一侧骨皮质连续再生，另一侧皮质再生不完全；骨髓间充质干细胞/富血小板血浆组的节段性骨缺损修复较好，仅残留少量缺损；而骨髓间充质干细胞/体外冲击波+富血小板血浆组几乎完全修复，并实现髓腔再通，见图6A。各组的骨体积/总体积比值分别为(5.93±1.67)%，(10.72±2.24) %，(16.52±2.16)%，(18.26±2.27)%和(23.53±2.15)%，见图6B。
苏木精-伊红染色组织学评价显示，未处理组和单纯骨髓间充质干细胞组的骨缺损断端间隙被纤维组织填充，术后12周原始骨与纤维组织的界面清晰可见；相比之下，骨髓间充质干细胞/体外冲击波组和骨髓间充质干细胞/富血小板血浆组缺损处再生的皮质骨部分连续，可见缺损部位少量成熟骨痂；而骨髓间充质干细胞/体外冲击波+富血小板血浆组双侧皮质骨再生明显，形成连续结构，缺损区见完全骨性愈合，骨组织成熟，与周围原始骨组织结构相似，实现较好的再生，见图6C。这些结果表明，骨髓间充质干细胞、体外冲击波和富血小板血浆均可部分促进骨质疏松节段性骨缺损的再生，3者的联合使用能获得一个较为满意的骨愈合效果。



2.5   生物相容性   除了证明负载骨髓间充质干细胞的富血小板血浆移植结合体外冲击波具有优越的细胞生物相容性，该实验还检测了这种联合治疗策略用于体内治疗的安全性。与未处理组相比，骨髓间充质干细胞/体外冲击波+富血小板血浆组动物的心、肝、脾、肺、肾形态均未发生病理性改变，见图7。

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由高能创伤、感染和肿瘤切除后引起的大段骨缺损是骨科医生面临的最棘手的问题之一。在某些情况下，骨缺损治疗不佳会导致严重的并发症[1-2]。尤其是随着人口老龄化的进展和骨质疏松发病率的升高，骨质疏松性骨缺损的骨再生能力低下，更容易造成如骨不连、骨萎缩和骨畸形等并发症[3-5]。迄今为止，骨移植被认为是临床治疗骨缺损最有效的技术。然而，作为临床金标准的自体骨移植，因其供应量有限、手术复杂、供区疼痛以及潜在的感染等因素限制了应用；而同种异体骨移植因受限于一些伦理问题和高昂的费用，对一些有大段骨缺损患者来说也难以实行[6-7]。此外，骨移植替代物常表现出弱的骨诱导特性，并且容易引发炎症反应，在促进骨缺损再生的应用中也并未获得满意效果[8]。

从治疗节段性骨缺损、预防骨不连发生的角度出发，该实验采取将骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)进行体外冲击波(extracorporeal shock wave，ESW)处理，并与富血小板血浆(platelet rich plasma，PRP)共培养，检测骨髓间充质干细胞的增殖、活力、迁移及成骨分化能力的改变，并结合体内骨质疏松动物骨缺损模型进行研究，初步探索了骨髓间充质干细胞与自体富血小板血浆移植联合体外冲击波治疗骨质疏松节段性骨缺损的疗效，为临床预防骨不连的发生提供一种新选择。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

1.1   设计   重复测量实验。骨髓间充质干细胞在体外冲击波处理和富血小板血浆共培养条件下增殖活性、迁移和成骨分化功的体外观察实验，以及观察将负载骨髓间充质干细胞的富血小板血浆结合体外冲击波治疗骨质疏松性节段性骨缺损的体内骨再生效果。
1.2   时间及地点   实验于2019年8月至2020年12月在湖北民族大学附属民大医院中心实验室完成。
1.3   材料   低糖DMEM培养基、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶-EDTA(Gibco公司)；青-链霉素(华北制药集团有限责任公司)；骨髓间充质干细胞 (Cyagen公司，批号RBXMX-01001)；细胞计数试剂盒(CCK-8)和钙黄绿素/碘化丙啶试剂盒(Beyotime Biotechnology公司)；兔骨髓间充质干细胞成骨诱导培养基 (Hyclone公司)；碱性磷酸酶检测试剂盒(上海碧云天)；反转录试剂盒、实时荧光定量PCR 试剂盒(Takara公司)；Runx2、OCN抗体(Abcam公司)；荧光二抗、荧光染料、苏木精-伊红染料和钙黄绿素荧光双标(Sigma公司)；冲击波治疗仪(PiezoClast EMS，德国RICHARD WOLF GmbH公司)；光学显微镜(DSX 500，日本Olympus公司)；激光共聚焦显微镜(FV1000，日本Olympus公司)；RT-PCR仪(Rotor-Gene 3000，澳大利亚Corbett公司)；Micro-CT(SkyScan 1076 scanner，比利时Bruker公司)。
实验动物：雌性新西兰大耳白兔50只，20周龄，体质量(2.0±0.5) kg，购自湖北民族大学附属民大医院实验动物中心。该研究经湖北民族大学附属民大医院伦理委员会批准通过。所有家兔均饲养于恒温环境(22±2) ℃，湿度50%-60%，自由饮食，自然光照。
1.4   方法
1.4.1   富血小板血浆制备   采用 10 mL无菌针筒从新西兰大白兔心脏抽取 5 mL动脉血，将血液注入含枸橼酸钠抗凝管，轻轻摇晃，充分混合。将获得的血液以2 000 r/min(440×g)离心10 min，吸取上清液至界面下3 mm，再以3 000 r/min(1 000×g)离心15 min，离心管中液体分为2层：分别为贫血小板血浆及下层血小板块。将上层3/4上清液移到另一只离心管中(用于调节富血小板血浆浓度)，剩余成分振荡摇匀即为富血小板血浆，计数后备用。使用前按1∶9的比例向富血小板血浆中加入10%的CaCl2溶液激活富血小板血浆，现用现配。体外实验所用富血小板血浆来自于骨质疏松建模成功后的新西兰大白兔(5只)，体内实验所用富血小板血浆来自于骨质疏松新西兰大白兔自体。
1.4.2   体外冲击波处理骨髓间充质干细胞及体外细胞实验分组   将骨髓间充质干细胞 (1.0×109 L-1)悬浮在15 mL无菌离心管中，并将离心管置于蒸馏水中作为体外冲击波的导电介质。将冲击波焦点区域集中在离心管上，设置参数为：500次，0.1 mJ/mm2，4 Hz[9-10]。未经体外冲击波处理的骨髓间充质干细胞作为对照，经体外冲击波处理的骨髓间充质干细胞缩写为体外冲击波组，与富血小板血浆共培养的骨髓间充质干细胞缩写为富血小板血浆组，经体外冲击波处理后与富血小板血浆共培养的骨髓间充质干细胞缩写为体外冲击波+富血小板血浆组。与骨髓间充质干细胞共培养的富血小板血浆中的血小板浓度为1×1012 L-1，体积为50 μL[11]；冲击波干预时间为125 s。
1.4.3   各组骨髓间充质干细胞增殖能力、活性和迁移能力检测   将上述各组骨髓间充质干细胞以2.0×104/孔的密度种植在24孔培养板中，培养基为含体积分数为10%胎牛血清和1%青-链霉素的低糖DMEM，培养条件为37 ℃和体积分数为5% CO2环境。种植当天记为第1天，分别在第1，4，7天使用CCK-8检测试剂盒测定骨髓间充质干细胞的增殖情况，即更换1 mL新鲜低糖DMEM培养基后向每孔加入CCK-8检测液100 μL，在37 ℃和体积分数为5%CO2环境中孵育2 h，用酶标仪(450 nm)检测各样品吸光度值，共进行3次实验，每组3个样品。为观察各组骨髓间充质干细胞的活力，在细胞种植到孔板中后第3天进行钙黄绿素/碘化丙啶活-死细胞染色，并于激光共聚焦显微镜下观察拍照。采用Transwell法观察各组骨髓间充质干细胞的迁移能力，即将2.0×105/孔的骨髓间充质干细胞种植在上室中，下室为低糖DMEM培养基，培养12 h，PBS洗涤，体积分数为95%乙醇固定15 min，0.2%结晶紫染色15 min，再次用PBS洗涤，显微镜观察并计算培养板底部的细胞数。
1.4.4   各组骨髓间充质干细胞的成骨能力检测   成骨诱导14 d进行碱性磷酸酶检测和茜素红染色，成骨诱导7，14 d进行RT-PCR和Western blot检测。将骨髓间充质干细胞以2.0×104/孔的密度种植在24孔培养板中，培养24 h后细胞贴壁，更换成骨诱导培养基(含10-8 mol/L 地塞米松、10 mmol/L β-甘油磷酸钠和50 mg/L 抗坏血酸的低糖DMEM培养基)，每3 d进行1次换液。
在成骨诱导14 d后去除培养基，用200 μL提取试剂裂解细胞，以对硝基苯基磷酸酶为底物测定碱性磷酸酶活性；此外，成骨诱导14 d后用茜素红染色评价钙沉积，进行外观观察后，在含矿化结节的孔板中加入10%氯化十六烷基吡啶溶解染色，在酶标仪下(540 nm)对样品溶液进行半定量分析。
各组骨髓间充质干细胞成骨诱导7，14 d后，采用Trizol 法提取细胞总RNA，以Nano Drop对所提取的RNA进行质检，用反转录试剂盒将RNA反转录成cDNA(以GAPDH为内参)，反转录Runx2和OCN目的基因，50 ℃ 60 min，85 ℃ 5 min，16 ℃ 10 min，合成cDNA 第一链，再用Nano Drop仪器测定浓度，将其配平到50 mg/L，作为模板待用。按每孔20 μL体系加入96 孔板，进行RT-PCR 扩增。扩增条件为：95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s，60-64 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，循环25-32次；72 ℃延伸7 min，相对mRNAs表达水平以GAPDH进行标准化，并用2-ΔΔCt法计算结果，引物序列及反应体系见表1。此外，在成骨诱导培养7，14 d后，提取蛋白，Western blot检测成骨标志蛋白Runx2和OCN的表达。

1.4.5   各组骨髓间充质干细胞对骨质疏松性桡骨节段性骨缺损再生的影响   体内实验使用5月龄雌性新西兰大白兔共40只。用3%戊巴比妥(50 mg/kg)进行全身麻醉后，进行局部皮肤消毒、铺单，行下腹部正中切口暴露子宫，沿输卵管向远侧寻找卵巢，结扎后行双侧卵巢切除术，假手术组探得卵巢后不做切除即关腹。术后10个月检测血清雌激素水平和Micro-CT检测桡骨远端的骨体积分数，确定骨质疏松建模成功。建模成功后，在全麻状态下行左上肢桡骨外侧切口，逐层暴露皮下组织和肌肉，露出桡骨，用骨钻在桡骨中下段造成一个15 mm的节段性骨缺损，并移除靠近缺损两端的骨膜，以防止骨膜骨化。将新西兰大白兔分为5组，每组8只：①骨缺损未做处理组；②骨缺损处植入含2.0×106 骨髓间充质干细胞的1 mL PBS(骨髓间充质干细胞组)；③骨缺损处植入含2.0×106 骨髓间充质干细胞的1 mL PBS，然后给予体外冲击波干预(骨髓间充质干细胞/体外冲击波组)；④骨缺损处植入含2.0×106 骨髓间充质干细胞的1 mL 富血小板血浆(骨髓间充质干细胞/富血小板血浆组)；⑤骨缺损处植入含2.0×106 骨髓间充质干细胞的1 mL 富血小板血浆，然后给予体外冲击波干预(骨髓间充质干细胞/体外冲击波+富血小板血浆组)。体外冲击波均从术后1周开始，每周1次，每次总剂量为2 000次，强度0.1 mJ/mm2，频率4 Hz，共6周。术后逐层缝合切口。每只兔子被单独关在笼子里，用标准的食物喂养。术后肌注青霉素(1.5 mg/kg)，连续3 d，预防感染。
在术后12周处死实验动物，收集桡骨样本，进行Micro-CT检测，定量分析新生骨体积与总体积比值(BV/TV，%)。此外，桡骨标本固定在体积分数为4%甲醛溶液中，然后在莫尔斯溶液中脱钙，经分级乙醇脱水，石蜡包埋，制备5 μm厚度切片行苏木精-伊红染色观察新骨形成。
1.4.6   安全性分析   在术后12周处死动物，收集内脏标本，将心、肝、脾、肺、肾标本固定在体积分数为4%甲醛溶液中，石蜡包埋，制备5 μm厚度切片行苏木精-伊红染色观察组织学形态。
1.5   主要观察指标   ①富血小板血浆与体外冲击波联合处理后骨髓间充质干细胞的增殖活性、迁移和成骨分化能力；②负载骨髓间充质干细胞的富血小板血浆移植结合体外冲击波治疗策略对骨质疏松节段性骨缺损大鼠骨再生的影响。
1.6   统计学分析   采用SPSS 25.0统计软件进行数据处理。计量资料符合正态分布，以x±s表示，多组间均数比较，如满足正态性及方差齐性则采用单因素方差分析，方差不齐采用Tamhane’s T2多重比较；不满足正态性则采用非参数检验。显著性水平α=0.05。P < 0.05 为差异有显著性意义。所有实验至少独立重复3次。

大段骨缺损的修复仍然是临床实践中的一个巨大挑战。以细胞为基础的组织工程技术创造了新的机会和潜在的临床应用前景[12-14]。骨髓间充质干细胞因其高度的自我增殖能力和多向分化潜能被公认为是骨组织工程研究中首选的种子细胞[15-17] 。但是，对于大块骨缺损，单纯使用骨髓间充质干细胞并不能获得完全的再生，这就需要考虑引入其他治疗手段增强骨髓间充质干细胞成骨分化能力的同时加速骨愈合[18]。尤其是在骨质疏松状态下，体内的骨髓间充质干细胞不仅数量不足，而且成骨分化能力减弱，骨质疏松微环境破骨活性病理性增高、成骨能力不足，相比于正常状态下的骨缺损更难以愈合[4-5]。

富血小板血浆是全血经离心后得到的血小板浓缩物。以往研究表明富血小板血浆中含有大量机体组织生长和修复所需的生长因子，如血小板源性生长因子、转化生长因子、血管内皮生长因子及胰岛素样生长因子等[19-21]。富血小板血浆在骨缺损局部微环境中释放的一系列生长因子具有不同作用，促进骨髓间充质干细胞成骨分化、诱导局部血管形成，从而可加速骨折和软组织的愈合[7，22]。此外，富血小板血浆中的白细胞可以清除局部病原体和坏死组织，增强局部抗感染能力；纤维蛋白为修复细胞提供良好支架，刺激组织再生。富血小板血浆中的各种成分相互之间可以发挥协同效应，促进骨折的愈合[23-24]。体外冲击波是能量突然释放而产生的高能量压力波，具有压力瞬间增高和高速传导的特性[25]。自从20世纪90年代开始，临床医生开始将体外冲击波应用于骨科疾病的治疗，既往研究发现体外冲击波具有刺激成骨的作用，在促进骨折愈合、治疗骨不连方面取得了较好的疗效[26-27]。目前已有较多关于将骨髓间充质干细胞移植、富血小板血浆注射、体外冲击波应用于骨再生的研究，但就将骨髓间充质干细胞、富血小板血浆和体外冲击波结合应用于治疗骨质疏松节段性骨缺损、预防骨不连的研究尚未见报道。

鉴于对以上研究结果分析，该研究探索了骨髓间充质干细胞与自体富血小板血浆移植联合体外冲击波治疗骨质疏松节段性骨缺损的疗效。首先，对骨髓间充质干细胞进行了体外冲击波预处理，然后与富血小板血浆共培养，根据实验结果可以发现，骨髓间充质干细胞具有较强的增殖能力，单纯体外冲击波处理骨髓间充质干细胞可以促进其增殖和成骨分化，且并不会影响细胞活性，这与文献中报道的一       致[9，28-30]。而与富血小板血浆共培养的骨髓间充质干细胞，其增殖、迁移能力和成骨分化潜能获得显著提高，甚至这种增强作用比单纯体外冲击波处理更明显。由于体外冲击波对细胞增殖、分化、黏附、迁移等细胞行为的有益影响，在体内骨组织再生领域引起了广泛的关注。以往的一些实验研究已经证明，体外冲击波通过上调骨生长因子和骨形态发生蛋白，以及细胞外信号调节激酶、p38激酶信号和Wnt/β-catenin信号的活性来促进骨愈合[31-32]。富血小板血浆富含生长因子和纤维蛋白，其中血小板源性生长因子可促进骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化。此外，转化生长因子β可促进骨髓间充质干细胞、成骨细胞的增殖和分化[33-35]。富血小板血浆填充支架不仅提供了丰富的生长因子，而且为细胞黏附提供了更多的生物活性表面[36]。因此，无论是单独体外冲击波处理还是与富血小板血浆共培养，骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化潜能均获得提高。

YAMAKAWA等[11]研究显示骨髓间充质干细胞的增殖能力与富血小板血浆的浓度呈正相关，在培养5 d后不同浓度富血小板血浆中的骨髓间充质干细胞增殖速率是对照组的2-4倍，并且显著提高了碱性磷酸酶活性。将骨髓间充质干细胞(8×106)和富血小板血浆(血小板100×1010 L-1)植入到大鼠股骨干6 mm缺损中，观察8周后影像学检查虽然发现骨髓间充质干细胞+富血小板血浆组新骨形成分数为46.9%，显著高于骨髓间充质干细胞组(10.9%)和富血小板血浆组 (12.5%)，但是并未完成缺损的充分修复和髓腔再通，未达到一个完全的骨再生。XIE等[37]也证明富血小板血浆可以显著促进骨髓间充质干细胞的增殖、碱性磷酸酶活性和钙结节沉积，0.5 mL的富血小板血浆植入到家兔桡骨15 mm长节段性骨缺损中，4周时骨折端周围可见少量骨痂，但是在8，12周时骨折端骨化，缺损中心不连，髓腔阻塞。此外，CHEN等[10]研究表明体外冲击波处理可以显著促进骨髓间充质干细胞的碱性磷酸酶活性和钙结节沉积，并通过上调ColⅠ、Osterix、Runx2、ALP的表达而促进骨髓间充质干细胞成骨分化。骨缺损支架植入后第8周，体外冲击波处理组的缺损区域似乎更完整，与宿主骨非常相似，但是过渡界面仍然清晰可见。既往这些研究表明，无论是骨髓间充质干细胞与富血小板血浆还是骨髓间充质干细胞与体外冲击波这些两两联合的治疗方式对骨缺损虽有一定效果，但是使缺损完全修复、髓腔再通、恢复原始骨骼结构尚不能完全实现。这些结果与作者的研究结果相似，即骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞/体外冲击波组和骨髓间充质干细胞/富血小板血浆组能一定程度促进缺损处的骨再生，但是难以达到完全修复和髓腔再通。在植入骨髓间充质干细胞的基础上，外加富血小板血浆似乎比体外冲击波有一个更好的骨修复趋势，即骨髓间充质干细胞/富血小板血浆组的骨体积分数为(18.26±2.27)%，略高于骨髓间充质干细胞/体外冲击波组(16.52±2.16)%。上述既往研究只是在小动物的部分缺损或者健康动物模型上进行研究，还未在骨质疏松大白兔大段骨缺损模型上进行探究，尚有一定局限性。该研究建立骨质疏松新西兰大白兔模型，并制备桡骨节段性骨缺损模型，当联合体外冲击波与富血小板血浆处理骨髓间充质干细胞时，这种骨修复的协同强化作用得以放大，明显优于单一的处理方式，并在体内桡骨节段性骨缺损模型中获得了几乎完全的骨再生与髓腔再通。

综上所述，体外冲击波联合负载骨髓间充质干细胞的富血小板血浆移植可以明显促进骨质疏松节段性骨缺损的修复，并预防骨不连的发生，这也为以干细胞为基础的骨缺损综合治疗策略提出了新的思路与挑战。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

文题释义：
富血小板血浆：抽取患者自身血液，通过离心提取的富血小板血浆具有相对较高浓度的各种生长因子，不仅为组织修复提供了“浓缩的营养”，还为组织修复搭建了更好的修复环境，能有效促进和加速组织修复。
体外冲击波：是一种通过物理学机制介质传导的机械性脉冲压强波，具有促进骨折愈合的功能。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

骨质疏松患者骨再生能力低下，其骨缺损更容易造成如骨不连、骨萎缩和骨畸形等并发症。目前临床上的自体或异体骨移植以及骨移植替代物的使用虽获得一定效果，但受限于供体量、移植排斥以及高昂的费用等。从治疗骨质疏松节段性骨缺损、预防骨不连发生的角度出发，将骨髓间充质干细胞进行体外冲击波处理，并与富血小板血浆共培养，可以显著提高干细胞的增殖、活力、迁移及成骨分化能力，并在体内骨质疏松动物骨缺损模型中加速骨再生与髓腔再通，为临床预防骨不连的发生提供一种新选择。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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