三七总皂苷对富血小板血浆促进兔骨缺损愈合的影响

doi:10.12307/2022.476

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (14): 2155-2160.doi: 10.12307/2022.476

• 骨组织构建 bone tissue construction • 上一篇下一篇

三七总皂苷对富血小板血浆促进兔骨缺损愈合的影响

李世杰，马立琼，熊贤梅，张严，陈梓杰，冯俊铭，高怡加，曾展鹏

广州中医药大学第一临床医学院，广东省广州市 510405

收稿日期:2021-06-22 修回日期:2021-06-29 接受日期:2021-07-24 出版日期:2022-05-18 发布日期:2021-12-21
通讯作者: 高怡加，硕士，副主任医师，广州中医药大学第一附属医院，广东省广州市 510405
作者简介:李世杰，男，1997年生，汉族，广州中医药大学在读硕士，主要从事中医药防治骨与关节损伤方面的研究。
基金资助:
广东省自然科学基金项目(2018A030313369)，项目负责人：高怡加

Effect of panax notoginseng saponins on platelet-rich plasma promoting bone defect healing in rabbits

Li Shijie, Ma Liqiong, Xiong Xianmei, Zhang Yan, Chen Zijie, Feng Junming, Gao Yijia, Zeng Zhanpeng

The First Clinical School of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, Guangdong Province, China

Received:2021-06-22 Revised:2021-06-29 Accepted:2021-07-24 Online:2022-05-18 Published:2021-12-21
Contact: Gao Yijia, Master, Associate chief physician, the First Clinical School of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, Guangdong Province, China
About author:Li Shijie, Master candidate, the First Clinical School of Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510405, Guangdong Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Guangdong Province, No. 2018A030313369 (to GYJ)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
富血小板血浆：是一种通过离心全血所获得的血小板浓缩物，含有多种生长因子，具有加速组织再生与修复的作用。
骨缺损：指部分骨骼的缺失，小部分骨缺损机体可以自我修复，但当骨缺损长度超过缺损骨横径的1.5倍时，会出现不愈合的情况，处理起来十分棘手。治疗大段骨缺损存在着周期长、成本高、疗效不可控、感染、骨不连等并发症众多的问题。

背景：研究发现，三七总皂苷联合富血小板血浆对成骨和血管化的相关因子表达具有上调作用，可促进骨不连愈合。
目的：观察富血小板血浆经三七总皂苷干预后的生长因子释放情况，以及对兔骨缺损愈合的影响。
方法：18只新西兰大白兔随机分为三七总皂苷组、对照组、空白组3组。三七总皂苷组用三七总皂苷灌胃2周；对照组予10 mL生理盐水灌胃处理2周；空白组正常饲养。三七总皂苷组与对照组一起采血离心获得富血小板血浆，激活后用ELISA法检测不同时间节点(激活后0，2 h及1，3，5，7 d)生长因子释放浓度。1周后所有动物行桡骨骨缺损造模，三七总皂苷组与对照组植入自体富血小板血浆，通过观察术后X射线片及大体组织苏木精-伊红染色结果，比较骨缺损愈合情况。实验方案已经通过广州中医药大学第一附属医院动物实验伦理委员会批准(批准号：TCMF1-2019062)。
结果与结论：①生长因子释放情况：三七总皂苷组的血管内皮生长因子A在激活后第7天、转化生长因子β在激活后第1天、碱性成纤维细胞生长因子在激活后第3，5天释放浓度高于对照组(P < 0.01)；②X射线片检查骨缺损愈合情况：术后2个月三七总皂苷组的骨缺损愈合情况优于对照组；三七总皂苷组与对照组都明显优于空白组；术后3个月3组骨缺损均已愈合；③苏木精-伊红染色显示：三七总皂苷组骨小梁密度大于对照组；空白组劣于其余2组；④实验结果表明：三七总皂苷可以上调富血小板血浆释放生长因子的浓度；三七总皂苷干预后的富血小板血浆对促进兔骨缺损愈合更有优势。

https://orcid.org/0000-0001-6845-7443 (李世杰)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 骨缺损, 富血小板血浆, 三七总皂苷, 生长因子, 兔桡骨, 骨愈合, 骨缺损修复

Abstract: BACKGROUND: Panax notoginseng saponins combined with platelet-rich plasma can up-regulate the expression of factors related to osteogenesis and vascularization, and promote bone healing.
OBJECTIVE: To observe the release of growth factors from platelet-rich plasma after intragastric administration of panax notoginseng saponin and its effects on bone defect healing in rabbits.
METHODS: Eighteen New Zealand white rabbits were randomly divided into three groups: PNS group, control group and blank group. PNS group was treated with panax notoginseng saponins by gavage for 2 weeks. Control group was given 10 mL of normal saline by gavage for 2 weeks. Blank group were fed normally. Platelet-rich plasma was obtained by centrifugation in the PNS group together with the control group. After activation, growth factor release was detected by ELISA at different time points (0, 2 hours, 1, 3, 5, and 7 days after activation). One week later, the model of radial bone defect was established in each rabbit. PNS and control groups were implanted with autologous platelet-rich plasma. The bone defect healing of the three groups was compared based on the results from X-ray examination, gross observation, and hematoxylin-eosin staining. The study protocol was approved by the Experimental Animal Ethics Committee of the First Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine (approval No. TCMF1-2019062).
RESULTS AND CONCLUSION: The release of growth factors: In the PNS group, the release concentrations of vascular endothelial growth factor A on the 7th day, transforming growth factor-β on the 1st day, basic fibroblast growth factor on the 3rd and 5th days after activation were higher than those of the control group (P < 0.01). Bone defect healing: Two months after operation, X-ray examination results showed that better bone healing was observed in the PNS group than the control group, and bone healing in these two groups was significantly better than that in the blank group. Three months after operation, bone defects were healed in all the three groups. Hematoxylin-eosin staining results showed that the trabecular density was higher in the PNS group than the control group, and was worst in the blank group. All these findings indicate that the intervention of Panax notoginseng saponins can up-regulate the concentration of growth factors released from platelet-rich plasma, which has more advantages in promoting the healing of rabbit bone defects than the use of platelet-rich plasma alone.

Key words: bone defect, platelet-rich plasma, panax notoginseng saponins, growth factor, rabbit radius, bone healing, bone defect repair

中图分类号:

李世杰, 马立琼, 熊贤梅, 张严, 陈梓杰, 冯俊铭, 高怡加, 曾展鹏. 三七总皂苷对富血小板血浆促进兔骨缺损愈合的影响[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(14): 2155-2160.

Li Shijie, Ma Liqiong, Xiong Xianmei, Zhang Yan, Chen Zijie, Feng Junming, Gao Yijia, Zeng Zhanpeng. Effect of panax notoginseng saponins on platelet-rich plasma promoting bone defect healing in rabbits[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(14): 2155-2160.

图/表（结果） 8

2.1 实验动物数量分析 18只兔被随机分为3组，空白组1只兔子咬开缝合线致术口感染，对症处理后仍愈合不良而剔除，后期补做，其余兔子未出现术区脓肿、感染、术口不愈合等情况。动物实验流程见图2。

2.2 三七总皂苷组和对照组生长因子释放浓度差异在激活后0，2 h及1，3，5，7 d，三七总皂苷组、对照组富血小板血浆中4种生长因子释放累计质量浓度，见表2与表3。

血小板衍生生长因子BB的释放情况，三七总皂苷组与对照组在激活后差异无显著性意义(P > 0.05)；转化生长因子β的释放，在激活后1 d，三七总皂苷组大于对照组(P < 0.01)；血管内皮生长因子A的释放，在激活后7 d，三七总皂苷组高于对照组(P < 0.01)，但在此之前时间节点的释放浓度比较差异无显著性意义；碱性成纤维细胞生长因子的释放，在激活后3，5 d三七总皂苷组高于对照组(P < 0.01)。除了三七总皂苷组的血管内皮生长因子A，其余生长因子，均在激活后前期达到最大释放浓度，后期开始减少。绘制折线图，横坐标为时间截点，纵坐标为生长因子释放的累计质量浓度，见图3。

2.3 兔骨缺损大体观察、X射线及苏木精-伊红染色结果 3组兔子行为学观察结果无明显差异。
分别在术后2，3个月行X射线片检查，观察骨缺损的愈合情况，见图4。再依据Lane-sandhu标准进行评分，结果见表4。

术后2个月，三七总皂苷组骨缺损部位可见较多的新骨形成，生长情况优于其余2组(P < 0.05)。对照组的生长体积大于空白组。术后3个月行X射线检查，3组骨缺损均已愈合，三七总皂苷组与对照组愈合情况优于空白组(P < 0.05)，此外，空白组存在畸形愈合情况。
术后3个月取材，大体标本观察，3组骨缺损均能愈合，空白组存在畸形愈合情况，其余2组未见明显差异。切片苏木精-伊红染色结果可见：三七总皂苷组可见大量成骨细胞，骨小梁密度较高，血管生成较多，成骨效能最好；对照组含有较多成骨细胞，骨小梁分布密集；空白组骨小梁密度较低，成骨细胞数量少，含有纤维组织填充，成骨差。见图5。

2.4 生物相容性三七总皂苷组及对照组大白兔植入的为自体富血小板血浆，生物相容性较好，均未发生不良反应。

参考文献

[1] DHILLON MS, BEHERA P, PATEL S, et al.Orthobiologics and platelet rich plasma. Indian J Orthop. 2014;48(1):1-9.
[2] MARIANI E, PULSATELLI L.Platelet Concentrates in Musculoskeletal Medicine. Int J Mol Sci. 2020;21(4):1328.
[3] EPPLEY BL, WOODELL JE, HIGGINS J.Platelet Quantification and Growth Factor Analysis from Platelet-Rich Plasma: Implications for Wound Healing. Plast Reconstr Surg. 2004;114(6):1502-1508.
[4] FRANKLIN SP, BURKE EE, HOLMES SP.The effect of platelet-rich plasma on osseous healing in dogs undergoing high tibial osteotomy. PLoS One. 2017;12(5):e0177597.
[5] 陈红艳,陈安,卢芳国,等.三七总皂苷的药理研究进展[J]. 湖南中医杂志,2019,35(1):154-157.
[6] 周海辛.三七总皂甙对创伤性下肢骨折大鼠碱性成纤维细胞因子和血管内皮生长因子表达的影响[J]. 中国临床药理学杂志,2018, 34(20):2431-2434.
[7] 柳毅,陈建治. 三七总皂苷及其诱导成骨的试验和机制[J]. 国际口腔医学杂志,2015,42(1):75-78.
[8] BOLLAND BJ, PARTRIDGE K, TILLEY S,et al.Biological and mechanical enhancement of impacted allograft seeded with human bone marrow stromal cells: potential clinical role in impaction bone grafting. Regen Med. 2006;1(4):457-467.
[9] 秦宇星, 任前贵,沈佩锋.组织工程骨技术治疗骨缺损的优越性[J]. 中国组织工程研究,2020,24(24):3877-3882.
[10] 陈柏行.含中药富血小板血浆干预骨不连的实验研究与临床回顾[D].广州:广州中医药大学,2019.
[11] 何翠欢.富血小板血浆联合仙灵骨葆胶囊治疗KOA的疗效观察及网络药理学研究[D].广州:广州中医药大学,2019.
[12] 马浩哲.富血小板血浆联合一盘珠汤促进兔腱骨结合部损伤后的修复[D].武汉:湖北中医药大学,2019.
[13] 彭钦.补肾生精法联合富血小板血浆干预兔骨缺损模型研究[D].长沙:湖南中医药大学,2020.
[14] 陈修, 徐叔云,卞如濂.药理实验方法学[M]. 2版.北京:人民卫生出版社,2002:1203.
[15] AGHALOO TL, MOY PK, FREYMILLER EG.Investigation of platelet-rich plasma in rabbit cranial defects: A pilot study. J Oral Maxillofac Surg. 2002;60(10):1176-1181.
[16] 宋子鉴,郑欣,王进,等.成年兔桡骨骨缺损模型的骨缺损长度探讨[J]. 实验动物与比较医学,2018,38(3):182-187.
[17] LANE JM, SANDHU HS.Current approaches to experimental bone grafting. Orthop Clin North Am. 1987;18(2):213-225.
[18] ZHANG L, MU W, CHEN S, et al.The enhancement of osteogenic capacity in a synthetic BMP-2 derived peptide coated mineralized collagen composite in the treatment of the mandibular defects. Biomed Mater Eng. 2016;27(5):495-505.
[19] ROFFI A, DI MATTEO B, KRISHNAKUMAR GS, et al.Platelet-rich plasma for the treatment of bone defects: from pre-clinical rational to evidence in the clinical practice. Int Orthop. 2017;41(2):221-237.
[20] DHILLON RS, SCHWARZ EM, MALONEY MD.Platelet-rich plasma therapy-future or trend? Arthritis Res Ther. 2012;14(4):219.
[21] FERNÁNDEZ-BARBERO JE, GALINDO-MORENO P, AVILA-ORTIZ G, et al.Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel. Clin Oral Implants Res. 2006;17(6):687-693.
[22] BETSHOLTZ C, JOHNSSON A, HELDIN CH, et al.cDNA sequence and chromosomal localization of human platelet-derived growth factor A-chain and its expression in tumour cell lines. Nature. 1986; 320(6064):695-699.
[23] XIE H, CUI Z, WANG L, et al. PDGF-BB secreted by preosteoclasts induces angiogenesis during coupling with osteogenesis. Nature Med. 2014;20(11):1270-1278.
[24] CRANE JL, CAO X.Bone marrow mesenchymal stem cells and TGF-βsignaling in bone remodeling. J Clin Invest. 2014;124(2):466-472.
[25] CHEN G, DENG C, LI YP.TGF-β and BMP Signaling in Osteoblast Differentiation and Bone Formation. Int J Biol Sci. 2012;8(2):272-288.
[26] HARRY LE, PALEOLOG EM. From the cradle to the clinic: VEGF in developmental, physiological, and pathological angiogenesis. Birth Defects Res C Embryo Today. 2003;69(4):363-374.
[27] HU K, OLSEN BR.Osteoblast-derived VEGF regulates osteoblast differentiation and bone formation during bone repair. J Clin Invest. 2016;126(2):509-526.
[28] ALDRIDGE SE, LENNARD TW, WILLIAMS JR, et al.Vascular endothelial growth factor receptors in osteoclast differentiation and function. Biochem Biophys Res Commun. 2005;335(3):793-798.
[29] FELBER K, ELKS PM, LECCA M,et al.Expression of osterix Is Regulated by FGF and Wnt/β-Catenin Signalling during Osteoblast Differentiation. PLoS One. 2015;10(12):e0144982.
[30] 任前贵,王瞾,张坤.仿生控释BMP-2和VEGF的PELA微球支架对骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的Wnt/β-catenin通路的影响[J]. 中国生物制品学杂志,2018,31(10):1118-1121+1125.
[31] 秦宇星,任前贵,沈佩锋,等, 组织工程技术治疗骨缺损:应用于临床还有多远?[J].中国组织工程研究,2021,25(29):4703-4708.
[32] TANG R, WANG S, YANG J,et al.Application of platelet-rich plasma in traumatic bone infections. Expert Rev Anti Infect Ther. 2021;19(7):867-875.
[33] 任军,赵岩,肖彬,等.富血小板血浆促进胫骨骨折模型兔的骨愈合[J].中国组织工程研究,2020,24(35):5595-5599.
[34] MALHOTRA A, PELLETIER M, OLIVER R, et al.Platelet-Rich Plasma and Bone Defect Healing. Tissue Eng Part A. 2014;20(19-20):2614-2633.
[35] KOBAYASHI E, FLÜCKIGER L, FUJIOKA-KOBAYASHI M, et al.Comparative release of growth factors from PRP, PRF, and advanced-PRF. Clin Oral Investig. 2016;20(9):2353-2360.
[36] 庄雅雯,曾奕明,陈云峰,等.不同激活剂对人富血小板血浆释放曲线的影响[J].中华结核和呼吸杂志,2018,41(11):868-872.
[37] 张猛,谢松涛,贺西京,等.富血小板血浆复合移植骨用于肱骨髁部骨缺损修复治疗的临床探索[J].局解手术学杂志,2018,27(1):20-24.
[38] FERNANDEZ DE GRADO G, KELLER L, IDOUX-GILLET Y, et al., Bone substitutes: a review of their characteristics, clinical use, and perspectives for large bone defects management. J Tissue Eng. 2018;9: 2041731418776819.
[39] MIJIRITSKY E, ASSAF HD, PELEG O, et al.Use of PRP, PRF and CGF in Periodontal Regeneration and Facial Rejuvenation-A Narrative Review. Biology (Basel). 2021;10(4):317.

引言

富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)是一种离心全血而获得的血小板浓缩物，含有多种生长因子，如血小板衍生生长因子、转化生长因子β、血管内皮生长因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及胰岛素样生长因子等，众多生长因子可以促进组织修复，近年来被广泛地应用于治疗难愈性创面、骨髓炎、口腔颌面部小范围骨缺损、肌腱损伤等疾病[1-3]。动物实验表明，富血小板血浆可以促进动物骨缺损模型的愈合，提高骨折愈合后的骨强度[4]。
三七总皂苷(panax notoginseng saponins，PNS)是中药三七的主要成分，具有清除自由基及抗氧化应激、改善细胞能量代谢、抗炎、改善组织血流等广泛的药理作用[5]。在骨组织修复过程中，三七总皂苷可以促进骨组织中血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的表达，诱导血管形成从而促进骨折的愈合[6]，还可以增进骨髓基质干细胞的成骨分化及增殖、破骨细胞的分化，加速骨缺损的修复[7]。这与中药三七一直都被视为“伤科要药”所契合。
大段骨缺损一直是临床的难题，其治疗周期长、成本高、并发症众多，对患者造成严重影响。当缺损长度超过骨横径的1.5倍时，常发生缺损部位的延迟愈合或不愈合。治疗骨缺损的传统办法有自体骨移植与异体骨移植、骨搬移延长术和诱导膜技术等，但大都存在着供源有限、不可控因素多、需要二次或多次手术等缺陷[8-9]。
中药的介入往往可以增强富血小板血浆的治疗效果。研究发现，三七总皂苷联合富血小板血浆对成骨和血管化的相关因子表达具有上调作用，可促进骨不连愈合[10]。此外，富血小板血浆结合口服中药的治疗方法，在对炎症反应的调控、肌腱与骨组织的修复上均优于单纯富血小板血浆治疗[11-13]。关于中药对富血小板血浆影响的研究，多是用富血小板血浆联合中药汤剂与富血小板血浆进行疗效对比，并没有检测中药干预后对富血小板血浆生长因子释放的影响。此次实验通过对兔子进行三七总皂苷灌胃处理，抽血制备富血小板血浆，对比其生长因子释放与未经中药干预的区别，并观察三七总皂苷干预后对富血小板血浆修复兔骨缺损的疗效影响。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，t检验与单因素方差分析。
1.2 时间及地点实验于2020年8月至2021年4月在广州中医药大学第一附属医院SPF级实验动物中心完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物新西兰大白兔18只，从广东省实验动物中心购买，许可证号：SYXK(粤)2018-0001，兔子体质量为1.8-2.2 kg，兔龄6个月，雌雄不限。实验方案已经通过广州中医药大学第一附属医院动物实验伦理委员会批准(批准号：TCMF1-2019062)。
1.3.2 实验药物血塞通软胶囊(主要成分是三七总皂苷，昆明华润圣火药业有限公司，国药准字：Z19990022，每粒装0.33 g，含三七皂苷60 mg)；青霉素(华北制药股份有限公司生产，160万U/瓶，国药准字H1320656)；戊巴比妥钠溶液(西格玛奥德里奇上海贸易有限公司)；氯化钙(广州赛国生物科技有限公司)；牛凝血酶(广州威佳科技有限公司)。
1.3.3 主要实验器材 ELISA试剂盒(广州康凯信生物科技有限公司)；离心机(TDZ5-WS，上海卢湘仪离心仪器有限公司)；小型骨科电锯(上海信晟光电技术有限公司)；石蜡包埋机(德国Ieica公司)；全自动染色机(BR-001，上海澜澈生物科技有限公司)；光学显微镜(CKX53SF-R，日本奥林巴斯Olympus设备有限公司)；恒温培养箱(4111，赛默飞世尔科技中国有限公司)。
1.4 实验方法
1.4.1 实验动物分组实验动物饲养无差异，给兔子编号后，用随机数字表法分为3组：三七总皂苷组，对照组，空白组，每组各6只。药物剂量根据《药理实验方法学》体表面积折算表换算后[14]，三七总皂苷组予72 mg/kg血塞通+10 mL生理盐水进行灌胃处理，每日1次，持续2周；对照组予 10 mL生理盐水灌胃处理，每日1次，持续2周。空白组正常饲养。
1.4.2 富血小板血浆的制备全过程严格遵守无菌操作要求。三七总皂苷组和对照组动物从耳背中央动脉采血15 mL，加入10%枸橼酸钠生理盐水溶液1 mL抗凝。将血液放入15 mL离心管。采用Aghaloo法[15]制备富血小板血浆，第1次离心转速为1 500 r/min，离心时长为10 min，将离心后白膜层以上血浆抽取置于另外一离心管中，2次离心，设置转速为 3 000 r/min，离心10 min，所得上清液为贫血小板血浆，抽取弃置，剩余为富血小板血浆，吹打均匀，均分为2份，置于-70 ℃冰箱保存。做其中一份用于测定生长因子释放情况，另一份用于骨缺损治疗。

1.4.3 动物造模为了避免三七总皂苷灌胃后对骨缺损愈合产生重叠影响，三七总皂苷组与对照组兔子富血小板血浆制备完成后，正常饲养1周，再行骨缺损造模处理。全过程严格遵守无菌操作要求。各组兔用3%戊巴比妥钠溶液(1 mL/kg)经耳缘静脉缓慢注射麻醉，麻醉成功后，备皮，聚维酮碘溶液消毒3次，放置于无菌手术巾上，对术区再次进行消毒，铺洞巾。切开皮肤，钝性分离皮下组织，充分暴露桡骨，用生理盐水浸润，使用小型骨科电动摆锯沿桡骨垂直方向造成中段完全骨折，骨缺损都保持在1 cm，生理盐水冲洗。提前将兔的自体富血小板血浆放入37.0 ℃恒温水浴锅，解冻后迅速加入牛凝血酶+氯化钙溶液(1 mL浓度为10%氯化钙溶液中加入1 000 U的牛凝血酶)50 μL激活，成凝胶状后表示激活成功，植入骨缺损处，见图1。三七总皂苷组、对照组兔在骨缺损处植入自体激活后的富血小板血浆，空白组兔的骨缺损造模成功后不予干预。缝合，再次皮肤消毒，纱布绷带简单包扎。因尺骨完整具有支持作用，不予固定。术后分笼饲养，正常活动，每只动物每日1次肌注青霉素40万U预防感染，持续3 d。

1.4.4 富血小板血浆激活后不同时间节点释放生长因子的浓度测定取三七总皂苷组与对照组的富血小板血浆加入24孔培养板，每孔0.5 mL，加入牛凝血酶+氯化钙激活液 50 μL，晃动培养板，置于37 ℃恒温培养箱孵育，分别在激活后0，2 h及1，3，5，7 d吸出富血小板血浆形成凝胶后析出的液体，置于-70 ℃冰箱保存，于第7天取完最后一批样品。将所有样品采用双抗体夹心酶联免疫分析法(ELISA)测定血管内皮生长因子A、血小板衍生生长因子BB、转化生长因子β、碱性成纤维细胞生长因子的释放浓度。
1.4.5 骨缺损动物模型观察指标术后2，3个月分别对3组兔行术区桡骨X射线检查，根据Lane-sandhu X射线评分标准评估其愈合情况[17-18]，见表1。

术后3个月对所有实验动物静脉注射过量3%戊巴比妥钠溶液处死。取材各组标本，经固定、脱钙、包埋后，以骨缺损为中心纵行切片，4 μm连续切片，经苏木精-伊红染色液染色，制成病理切片，光镜下进行组织学形态观察。
1.5 主要观察指标 ①三七总皂苷组和对照组兔富血小板血浆中生长因子释放情况；②兔骨缺损大体观察、X射线片及苏木精-伊红染色结果。
1.6 统计学分析实验数据用SPSS 23.0软件处理，以x±s表示，使用t检验与单因素方差分析，P < 0.05表示差异有显著性意义。

讨论

富血小板血浆在骨组织工程技术中具有良好的前景，应用越来越广泛。对于骨缺损的修复，富血小板血浆主要有以下两种作用：①被激活后的富血小板血浆可以通过胞吐作用释放多种生长因子，刺激成骨，加速骨修复[19-20]；②富血小板血浆凝胶是典型的多孔性结构，结构特点符合组织工程支架材料的要求，有助于诱导成骨[21]。
富血小板血浆被激活后所释放的众多生长因子对组织修复起着重要的作用。其中，血小板衍生生长因子具有A，B两种亚基，相互组合后可以形成AA，BB，AB三种异构体[22]。血小板衍生生长因子BB由发挥信号细胞作用的破骨细胞前体细胞分泌，促进骨膜形成，在骨生长与重塑中协调血管形成，支持骨生长[23]。转化生长因子β可以促进成骨细胞的增殖与分化，调节骨基质的合成，协调骨吸收和骨形成[24-25]。血管内皮生长因子可以促进骨化中心附近的血管内皮细胞的迁移、增殖、分化[26]，刺激成骨细胞分化，促进破骨细胞的分化与存活[27-28]。碱性成纤维细胞生长因子通过刺激破骨细胞而增强骨吸收，并促进成骨细胞的增殖与分化[29]。在组织修复过程中，单一生长因子修复作用远不及多种生长因子联合作用[30-31]。富血小板血浆所含生长因子的比例与人体相符，具有最优的协同作用[32]。
诸多动物实验表明，富血小板血浆在骨修复过程中具有积极促进作用。在兔胫骨骨折的愈合过程中，富血小板血浆可持续影响碱性磷酸酶水平，对骨折愈合起促进作用 [33]。对比自体骨移植材料，富血小板血浆仍然可以促进羊股骨缺损的愈合，富血小板血浆联合自体骨移植，对骨缺损修复具有显著促进的作用[34]。富血小板血浆在骨、软骨和肌腱修复方面存在着巨大的潜力，对于骨缺损、骨延迟愈合、肌腱损伤来说，富血小板血浆是一种很好的促进愈合的物质。
此次实验的结果表明，经三七总皂苷灌胃干预后获得的富血小板血浆，在激活后的部分时间节点释放血管内皮生长因子A、转化生长因子β、碱性成纤维细胞生长因子的浓度均高于对照组；血小板衍生生长因子BB在整个释放过程中与对照组比较无统计学差异。有研究表明，富血小板血浆释放最多的生长因子是血小板衍生生长因子AA[35]。此次实验只检测了血小板衍生生长因子中对骨修复影响较大的血小板衍生生长因子BB，故三七总皂苷干预对血小板衍生生长因子的释放有待进一步研究。总体而言，三七总皂苷的干预，对富血小板血浆生长因子释放是具有上调意义。
此外，三七总皂苷组与对照组富血小板血浆所释放的生长因子基本都在激活后的前期达到最大累计释放浓度，后期开始减少，这与富血小板血浆生长因子释放规律的研究相吻合，富血小板血浆在激活后生长因子的释放是快速的，后期逐渐衰减[35-36]。
有临床研究表明，在治疗肱骨髁部骨缺损时，富血小板血浆结合自体骨移植可以加速患者愈合时间，但1年后与自体骨移植相比，疗效无统计学意义[37]。富血小板血浆在临床上的具体疗效目前仍缺乏数据支持，这可能因为富血小板血浆释放生长因子的速度较快，不够持久，从而影响了结局指标[38]。遗憾的是，三七皂苷干预在对富血小板血浆生长因子的释放时间上，并没有特别突出的延长作用。
生长因子对组织愈合的最佳浓度及何种生长因子相互组合疗效最好目前尚无定论[31]，但在对兔骨缺损愈合的结果观察中发现，术后2个月X射线片检查结果表明三七总皂苷组的愈合情况优于对照组，且两者愈合情况都明显优于空白组。术后3个月再次行X射线片检查，可见3组骨缺损均已愈合，取材染色后发现，三七总皂苷组的骨形成情况优于对照组。实验结果印证了富血小板血浆对骨缺损愈合的促进作用[34]，也表明三七总皂苷干预后的富血小板血浆对骨缺损的修复，尤其是微观结构的改变，具有更好的效果。
富血小板血浆相较于其他组织移植材料，具有无免疫排斥、对个体创伤小、方便获取、成本低等优势，此次实验表明三七总皂苷干预后的富血小板血浆对促进兔骨缺损愈合更有优势，相信中药干预后的富血小板血浆作为骨替代或者辅助联合治疗材料的前景可观。
此次实验对兔子的行为学观察只观察到术后3个月，观察期间无明显差异，但能否进行更长时间及更具针对性的行为学观察，作为实验更有力的证据，这是实验所需要改进的。关于中药干预富血小板血浆对骨缺损的治疗研究仍需要大样本数据的研究，如其他中药对富血小板血浆生长因子的释放会产生怎样的影响，以及现在有很多新型的血小板浓缩物质，如富血小板纤维蛋白、浓缩生长因子等，它们的半衰期更长，释放生长因子更多[39]，中药干预后能否对其产生更好的疗效，这些都是未来所需要关注的。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

三七总皂苷对富血小板血浆促进兔骨缺损愈合的影响

Effect of panax notoginseng saponins on platelet-rich plasma promoting bone defect healing in rabbits

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 8

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	薛亚东, 周新社, 裴立家, 孟繁宇, 李键, 王金子. 自体髂骨块联合钛板重建Paprosky Ⅲ型髋臼骨缺损为假体提供坚强的初始固定#br#[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(9): 1424-1428.
[2]	孔亚敏, 严隽陶, 马丙祥, 李华伟. 推拿振法干预坐骨神经损伤模型大鼠MyoD表达及肌卫星细胞的增殖与分化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1160-1166.
[3]	吴聪, 贾全忠, 刘伦. 成年关节软骨碎块化后转化生长因子β1表达与软骨细胞迁移的关系[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1167-1172.
[4]	王宝娟, 郑曙光, 张琪, 李田洋. 苗药熏蒸治疗膝骨关节炎模型兔可延缓细胞外基质的破坏[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1180-1186.
[5]	王琴, 沈呈, 廖静, 杨烨. 达格列净干预改善糖尿病肾病模型大鼠的肾脏损伤[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1216-1222.
[6]	肖阳, 龚立琼, 费静, 李雷激. 电针干预面神经损伤模型兔面神经核团中神经生长因子及其受体的表达[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1253-1259.
[7]	阚厚铭, 范利君, 陈学泰, 申文. 富血小板血浆在神经病理性疼痛中的应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1286-1292.
[8]	吴冰霜, 汪志, 唐懿, 唐晓俞, 李棋. 前交叉韧带重建：从腱骨止点到腱骨愈合的研究进展[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(8): 1293-1298.
[9]	吴玮玥, 郭晓东, 包崇云. 工程化外泌体在骨修复再生中的应用[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1102-1106.
[10]	刘峰, 彭宇环, 罗良平, 吴本清. 植物源性碱性成纤维细胞生长因子维持人胚胎干细胞的生长与分化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(7): 1032-1037.
[11]	彭坤. 骨质疏松性骨折治疗效果的改善：研究现状及策略分析[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(6): 980-984.
[12]	徐静, 严永敏, 蔡梦洁. miR-373下调转化生长因子βⅡ型受体表达抑制肝星状细胞活化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(5): 756-761.
[13]	谭国忠, 涂欣冉, 郭黎洋, 钟嘉琳, 张阳, 江千舟. 3D打印明胶/海藻酸钠/58S生物玻璃骨缺损修复支架的生物安全性评价[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(4): 521-527.
[14]	王海龙, 李龙, 伊力哈木·托合提, 刘旭, 那次克道尔吉, 陈洪涛, 崔泳. MiR-106b-5p调控老年骨质疏松性骨折的分子网络[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(2): 239-244.
[15]	陈宇婷, 贺飞明, 向伟, 王超, 曹薇薇, 王维山, 刘伟. 转化生长因子β1及Ras同源基因家族成员A在软骨细胞分化过程中对细胞形态和细胞骨架的影响[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(14): 2144-2149.