2.1   各组关节软骨大体观察   正常组关节软骨表面色泽明亮，光滑，无裂隙，无关节积液和骨赘形成；模型组关节软骨呈黄色，表面粗糙，出现软骨缺损、侵蚀、溃疡，关节骨赘形成，有大量的关节腔积液；自体纯化富血小板血浆组关节软骨呈淡黄色，表面较模型组光滑，局部纤维化，部分轻度骨赘形成，关节腔有少量积液形成；异体纯化富血小板血浆组关节软骨呈黄色，表面粗糙，软骨缺损严重，延伸至深层的软骨，形成溃疡，暴露软骨下骨，关节骨赘形成严重，有大量的关节腔积液，见图2。



自体纯化富血小板血浆组关节软骨宏观评级较模型组低(Z=-3.554，P < 0.01)，其骨赘情况亦较模型组改善(Z= -3.427，P < 0.01)，且与正常组比较差异无显著性意义(Z= -3.000，P > 0.05)。异体纯化富血小板血浆组关节软骨及骨赘与模型组相比改善均不明显(P=0.317，0.178)，且自体纯化富血小板血浆组的关节软骨及骨赘宏观评级均优于异体纯化富血小板血浆组(P均< 0.01)。就关节液宏观评级而言，自体纯化富血小板血浆组、异体纯化富血小板血浆组与模型组相比较差异无显著性意义(Z=-1.936，P=0.053；Z= -1.875，P=0.061)，而自体纯化富血小板血浆组关节液情况优于异体纯化富血小板血浆组(Z=-2.697，P < 0.01)。各组大体标本宏观评级见表1-3。











2.2   各组软骨组织学观察   正常组大部分软骨表面平滑，部分表面不规则，软骨细胞排列整齐，细胞大小一致，细胞基质染色均匀，潮线完整；模型组软骨表面不规则，出现裂隙，细胞排列结构欠规则，与正常组相比，软骨细胞层明显变薄，细胞数量减少，局部软骨细胞聚集成簇，潮线被破坏；自体纯化富血小板血浆组软骨表面较模型组光滑，无裂隙、溃烂形成，细胞排列欠规则，部分软骨细胞固缩，脂质变性细胞增多，部分出现局部细胞聚集成簇，基质染色轻度减少，部分潮线紊乱；异体纯化富血小板血浆组软骨细胞表面粗糙，出现裂隙，部分深达钙化带，软骨细胞层变薄，排列不规则，局部软骨细胞聚集成簇，甚至细胞数量过少，基质染色中度减少，潮线完整性被破坏，见图3。



与模型组相比，自体纯化富血小板血浆组在软骨结构、基质染色、细胞、潮线等各方面均明显改善，各项评分均低于模型组(P均< 0.05)。与模型组相比，异体纯化富血小板血浆组对软骨结构有改善(P < 0.05)，但其对细胞排列、基质染色、潮线的改善不明显，评分与模型组相比差异无显著性意义(Z= -0.620，P=0.535；Z= -1.586，P=0.143；Z=-1.464，P=0.143)。自体纯化富血小板血浆组的软骨结构、细胞、基质染色评分均优于异体纯化富血小板血浆组(P < 0.05)。从改良Mankin’s评分总分可见：自体纯化富血小板血浆组、异体纯化富血小板血浆组改良Mankin’s评分较模型组均有降低(Z=-3.419、P < 0.01；Z= -2.53，P < 0.05)，但自体纯化富血小板血浆组降低得更为明显，且自体纯化富血小板血浆组与异体纯化富血小板血浆组评分存在差异(Z=-3.419，P < 0.01)。各组改良Mankin’s评分见图3、表4。



2.3   各组关节软骨免疫组化分析
2.3.1   骨形态发生蛋白2免疫组化   光镜下软骨细胞骨形态发生蛋白2免疫组化阳性表达为软骨细胞核、质或膜有棕色颗粒附着。正常组软骨细胞分布均匀，骨形态发生蛋白2在过渡层见中可见部分软骨细胞胞质浅染色，浅表层、放射层、钙化层均未见明显阳性细胞；模型组表面粗糙，软骨分层不明显，细胞排列紊乱，局部细胞聚集成簇，仅在过渡层见中可见少量胞质极浅染色；自体纯化富血小板血浆组表面规则，软骨细胞排列整齐，在软骨过渡层和放射层可见大量细胞胞质内有棕褐色颗粒，浅表层及钙化层表达相对较弱；异体纯化富血小板血浆组表面欠规则，局部细胞聚集成簇，在浅表层及过渡层见可见大量软骨细胞的胞质中有棕褐色颗粒，放射层可见少量胞质浅染，钙化层无表达。各组骨形态发生蛋白2免疫组化染色见图4。




据图像分析系统计算各组骨形态发生蛋白2平均吸光度值，自体纯化富血小板血浆组表达量最高，模型组表达量最低，自体纯化富血小板血浆组表达量明显高于正常组、模型组(P均< 0.01)，异体纯化富血小板血浆组高于模型组(Z=-2.415，P < 0.05)、低于自体纯化富血小板血浆组(Z= -3.361，P < 0.01)，见表5。




2.3.2   Sox9免疫组化   光镜下软骨细胞Sox9免疫组化阳性表达为软骨细胞核、质或膜有棕色颗粒附着。正常组软骨细胞排列整齐，软骨全层可见大量胞质内有棕褐色颗粒；模型组表面粗糙，细胞分层欠清，大量细胞成簇聚集，可见软骨细胞胞质内均为浅棕色着色；自体纯化富血小板血浆组浅表层、过渡层、放射带可见大量胞质棕色颗粒附着，而钙化带细胞胞质多为浅棕色颗粒附着；异体纯化富血小板血浆组软骨细胞排列紊乱，大量细胞簇形成，全层软骨细胞质均为浅棕色颗粒附着。各组Sox9免疫组化染色见图5。



据图像分析系统计算各组Sox9平均吸光度值，正常组Sox9表达量最高，模型组表达量最低，自体纯化富血小板血浆组、异体纯化富血小板血浆组表达量高于比模型组表达(Z=-3.361，P < 0.01；Z=-2.1，P < 0.05)，正常组、自体纯化富血小板血浆组、异体纯化富血小板血浆组两两比较差异无显著性意义(P > 0.05)，见表5。

[1]周明,赵晨钰,高谦,等.自体去白细胞富血小板血浆治疗膝骨关节炎的早期临床疗效观察[J].解放军医学院学报,2019,40(8):757-759,763. [2]ELIK H, DOĞU B, YıLMAZ F, et al. The efficiency of platelet-rich plasma treatment in patients with knee osteoarthritis. J Back Musculoskelet Rehabil. 2020;33(1):127-138.  [3]沈恺.富血小板血浆与透明质酸钠关节腔内注射治疗膝骨关节炎的疗效观察[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(88):104-106. [4]BURCHARD R, HUFLAGE H, SOOST C, et al. Efficiency of platelet-rich plasma therapy in knee osteoarthritis does not depend on level of cartilage damage. J Orthop Surg Res. 2019;14(1):153.  [5] 孙鲁宁,赵燕华,黄桂成,等.木瓜蛋白酶诱导膝关节骨关节炎模型兔滑膜病理变化与药物注射时间的关系[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,15(50):9311-9313. [6]沈景寿,张晶,胡毓诗,等.膝关节骨关节炎诱导性动物模型研究进展[J].中国运动医学杂志,2019,38(8):726-730. [7] PEREZ AG, LANA JF, RODRIGUES AA, et al. Relevant aspects of centrifugation step in the preparation of platelet-rich plasma. ISRN Hematol. 2014;2014:1-8. [8] ALMASRY SM, SOLIMAN HM, EL-TARHOUNY SA, et al. Platelet rich plasma enhances the immunohistochemical expression of platelet derived growth factor and vascular endothelial growth factor in the synovium of the meniscectomized rat models of osteoarthritis. Ann Anat. 2015;197: 38-49. [9] LAVERTY S, GIRARD CA, WILLIAMS JM, et al. The OARSI histopathology initiative - recommendations for histological assessments of osteoarthritis in the rabbit. Osteoarthritis Cartilage. 2010;18 Suppl 3:S53-65. [10]常琦,阮贞,王宪伟,等.骨关节炎模型大鼠血清骨保护素及软骨下骨降钙素基因相关肽、神经生长因子表达及Mankin评分变化[J].中国老年学杂志,2019,39(4):909-913. [11] KNOP E, PAULA LED, FULLER R. Platelet-rich plasma for osteoarthritis treatment. Revista Brasileira de Reumatologia (English Edition). 2016;56(2):152-164. [12] WU J, HUANG JF, QIN XX, et al. Platelet-rich plasma inhibits Wnt/beta-catenin signaling in rabbit cartilage cells activated by IL-1beta. Int Immunopharmacol. 2018; 55:282-289. [13] ASJID R, FAISAL T, QAMAR K, et al. Platelet-rich Plasma-induced Inhibition of Chondrocyte Apoptosis Directly Affects Cartilage Thickness in Osteoarthritis. Cureus. 2019;11(11): e6050. [14] KHATAB S, VAN BUUL GM, KOPS N, et al. Intra-articular Injections of Platelet-Rich Plasma Releasate Reduce Pain and Synovial Inflammation in a Mouse Model of Osteoarthritis. Am J Sports Med. 2018;46(4): 977-986. [15]陈尉,张国如,何健东等.富血小板血浆调节滑膜炎保护软骨细胞[J].中国组织工程研究,2020,24(29):4643-4649. [16]李弯月,钱宝延,庄卫生,等.自体富血小板血浆注射联合电针治疗膝骨关节炎的疗效观察[J].中国康复,2020,35(3):143-146. [17]黄凯华,吴志浩,张子亮,等.透明质酸、富血小板血浆及两者联合应用对膝骨关节炎的疗效评估[J].中国骨质疏松杂志,2019,25(12):1707-1711. [18] 吕敏.同种异体富血小板血浆标准化制备的研究[D].西安:第四军医大学,2013. [19] 高伟.同种异体富血小板血浆对兔骨缺损修复作用的实验研究[D].石家庄:河北医科大学,2017. [20] LIAO X, LIANG JX, LI SH, et al. Allogeneic Platelet-Rich Plasma Therapy as an Effective and Safe Adjuvant Method for Chronic Wounds. J Surg Res. 2020; 246: 284-291. [21] JO CH, SHIN JS, LEE SY, et al. Allogeneic platelet-rich plasma for rotator cuff repair. Acta Ortop Bras. 2017; 25(1): 38-43. [22] GREIMERS L, DRION PV, COLIGE A, et al. Effects of Allogeneic Platelet-Rich Plasma (PRP) on the Healing Process of Sectioned Achilles Tendons of Rats: A Methodological Description. J Vis Exp. 2018;(133):55759. [23] KANWAT H, SINGH DM, KUMAR CD, et al. The effect of intra-articular allogenic platelet rich plasma in Dunkin-Hartley guinea pig model of knee osteoarthritis. Muscles Ligaments Tendons J. 2018;7(3):426-434. [24] MONCHARMONT P. Platelet component transfusion and alloimmunization: Where do we stand?[J]. Transfus Clin Biol, 2018; 25(3): 172-178. [25] TRAN JQ, MUENCH MO, HEITMAN JW, et al. Allogeneic major histocompatibility complex antigens are necessary and sufficient for partial tolerance induced by transfusion of pathogen reduced platelets in mice. Vox Sang. 2019;114(3): 207-215. [26]朱瑜琪,王智耀,张帅等.细胞因子与膝骨关节炎关节软骨损伤的修复[J].中国组织工程研究,2017,21(36):5873-5878. [27]史文涛,戴瑶,毕士奇,等.不同状态BMP-2对体外EMSCs成骨分化的作用[J].中国矫形外科杂志,2019,27(3):261-267. [28] VAN BEUNINGEN HM, GLANSBEEK HL, VAN DER KRAAN PM, et al. Differential effects of local application of BMP-2 or TGF-beta 1 on both articular cartilage composition and osteophyte formation. Osteoarthritis Cartilage. 1998;6(5): 306-317.

[1]	张 超, 吕 欣. 髋臼骨折固定后的异位骨化：危险因素、预防及其治疗进展[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(9): 1434-1439.
[2]	吴 训, 孟娟红, 张建运, 王 亮. 浓缩生长因子修复兔髁突全层软骨损伤[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1166-1171.
[3]	李 静, 谢建山, 崔慧林, 曹锡梅, 杨艳萍, 李海荣. 不同毛色小鼠背部皮肤中甘油二酯激酶ζ和蛋白激酶CβⅡ的表达和定位[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1196-1200.
[4]	陈继铭, 吴晓静, 刘田丰, 陈海聪, 黄成硕. 水飞蓟素对四氯化碳致小鼠肝损伤和骨代谢的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1224-1228.
[5]	谭婧玉, 刘海文. 成骨细胞特异因子2基因家族的全基因组鉴定、分类及进化分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(8): 1243-1248.
[6]	伦志刚, 金 晶, 王添艳, 李爱民. 过氧化物还原酶6干预骨髓间充质干细胞增殖及体外向神经谱系诱导分化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1014-1018.
[7]	段丽芸, 曹晓沧. 人胎盘间充质干细胞来源细胞外囊泡调节肠炎小鼠肠黏膜胶原的沉积[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1026-1031.
[8]	管 倩, 栾 佐, 叶 豆, 杨印祥, 汪兆艳, 王 倩, 姚瑞芹. 人少突胶质前体细胞传代过程中形态学的变化[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1045-1049.
[9]	王正东, 黄 娜, 陈婧娴, 郑作兵, 胡鑫宇, 李 梅, 苏 晓, 苏学森, 颜 南. 丁酸钠抑制氟中毒可诱导小胶质细胞活化及炎症因子表达增多[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1075-1080.
[10]	孔德胜, 何晶晶, 冯宝峰, 郭瑞云, Asiamah Ernest Amponsah, 吕 飞, 张舒涵, 张晓琳, 马 隽, 崔慧先. 间充质干细胞修复大动物模型脊髓损伤疗效评价的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1142-1148.
[11]	史洋洋, 秦英飞, 吴福玲, 何 潇, 张雪静. 胎盘间充质干细胞预处理预防小鼠毛细支气管炎[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 991-995.
[12]	樊全宝, 罗惠娜, 王丙云, 陈胜锋, 崔连旭, 江文康, 赵明明, 王静静, 罗冬章, 陈志胜, 白银山, 刘璨颖, 张 晖. 低氧培养犬脂肪间充质干细胞的生物学特性[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1002-1007.
[13]	耿 瑶, 尹志良, 李兴平, 肖东琴, 侯伟光. hsa-miRNA-223-3p调控人骨髓间充质干细胞成骨分化的作用[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(7): 1008-1013.
[14]	宋成杰, 常恒瑞, 石明鑫, 孟宪中. 侧方入路腰椎融合治疗后的生物力学稳定性的研究与进展[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(6): 923-928.
[15]	谢 阳, 张淑江, 刘梦兰, 罗 映, 杨 洋, 李作孝. 雷帕霉素保护实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脊髓神经元的作用途径[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 695-700.

膝骨关节炎是中老年人常见的慢性退行性骨关节疾病，目前的治疗方法多样，近年来纯化富血小板血浆逐渐被应用于膝骨关节炎的治疗[1-4]。目前用于科研及临床的纯化富血小板血浆多来源于自体血液，但对于体弱者或合并血液疾病的患者，采集自体血制备纯化富血小板血浆不可取，同时人体存在个体差异，制备而得的纯化富血小板血浆质量不同，这将影响纯化富血小板血浆的临床疗效，那么治疗膝骨关节炎能否使用异体纯化富血小板血浆呢？实验在兔膝骨关节炎早期分别关节内注射自体、同种异体纯化富血小板血浆，比较二者治疗膝骨关节炎的效果，初步探索同种异体纯化富血小板血浆能否代替自体纯化富血小板血浆，为后续同种异体纯化富血小板血浆标准化制备提供一些理论依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

1.1   设计   对比观察动物实验。
1.2   时间及地点   实验于2017年4月至2018年1月在西南医科大学动物实验中心完成。
1.3   材料  
1.3.1   实验动物   从西南医科大学实验动物中心(合格证号SCXK[川]2013-065)采购清洁级新西兰健康大耳兔34只，雌雄不拘，兔龄3个月，体质量(2.48±0.21) kg。实验兔均于西南医科大学动物饲养室单笼喂养，温度 22-26 ℃，湿度维持在 40%-60%之间，饲养过程中保证充足的饲料、清洁的饮水，每天清理排泄物。
1.3.2   主要试剂   PAS缓冲液、苏木精、伊红、二甲苯、体积分数70%，85%，95%，100%乙醇(西南医科大学中心实验室提供)；10%甲醛溶液(西南医科大学附属医院病理科提供)；10%EDTA脱钙液、5%木瓜蛋白酶、0.03 mmol/L L-半胱氨酸、3.2%柠檬酸钠溶液、10% 氯化钙溶液、骨形态发生蛋白2免疫组化试剂盒、Sox9免疫组化试剂盒(北京索莱宝科技有限公司提供)。
1.3.3   主要仪器   Bio Ⅱ A型生物安全柜(西班牙)；TDZ5-WS型低速离心机(中国上海)；TKY-BMB病理组织包埋机(泰康医疗设备有限公司，中国湖北)；HW-1500A病理组织切片机(汇沃科技有限公司，中国深圳)；TK-218V型恒温摊片烤片机(泰维医疗科技有限责任公司，中国湖北)；OLYMPUS CH-20型光学显微镜、OLYMPUS Spot M20-35S型显微成像仪(OLYMPUS公司，日本)。
1.4   实验方法

1.4.1   建立膝骨关节炎模型   采用关节内注射木瓜蛋白酶、L-半胱氨酸混合溶液建立兔膝骨关节炎模型，该方案建立模型简便易行、周期短，且可靠性高[5-6]。将5%木瓜蛋白酶、    0.03 mmol/L L-半胱氨酸(即配即用)按照2∶1体积比混匀，静置30 min，用0.22 µm的滤膜过滤后留取待用。分别于第1，3，5天关节内注射5%木瓜蛋白酶、0.03 mmol/L L-半胱氨酸混合溶液(0.1 mL/kg)，共注射3次。于首次注射木瓜蛋白酶后2周随机选取2只实验兔处死，观察兔右膝关节病变，以判定造模是否成功。

1.4.2   纯化富血小板血浆制备及活化方式   异体纯化富血小板血浆组实验兔编号1-8，1号兔制备得到的纯化富血小板血浆用于8号兔，2号兔制备得到的纯化富血小板血浆用于1号兔，以此类推。该实验中总共注射3次纯化富血小板血浆，每次0.5 mL，每次均为现配现用，避免其在保存过程中变质，纯化富血小板血浆的制备时间为各组兔接受纯化富血小板血浆注射的当天，即确定造模成功当天、2周后、4周后。

取兔耳中心动脉近端1/3处为穿刺点采集动脉血   5.0-6.0 mL，将采集所得的动脉血转移至15 mL无菌离心管(含3.2%柠檬酸钠溶液0.8 mL)，参考PEREZ等[7]提出的制备方案，遵循二次离心原则制备纯化富血小板血浆，第一次相对低速离心(100×g，1 050 r/min，离心半径8 cm)，舍弃红细胞层后进行第二次相对高速离心(400×g，2 100 r/min，离心半径8 cm)，两次离心时长均为10 min；富血小板血浆层沉积在管底，留取0.5 mL血浆与富血小板血浆层震荡均匀，即得到纯化富血小板血浆(图1)。关节腔注射之前，将纯化富血小板血浆与10%氯化钙溶液按照9∶1比例进行活化[8]。

1.4.3   实验分组及干预措施   34只健康新西兰兔适应性喂养1周后，采用随机数字表法随机抽取其中8只作为正常组，余下26只建立膝骨关节炎模型。于首次注射木瓜蛋白酶后2周随机选取2只实验兔处死，观察兔右膝关节病变，确定成功造模后，采用随机数字表法将24只兔分为模型组(n=8)、自体纯化富血小板血浆组(n=8)、异体纯化富血小板血浆组(n=8)。正常组与模型组不接受任何治疗；自体纯化富血小板血浆组、异体纯化富血小板血浆组分别接受膝关节腔注射  0.5 mL自体纯化富血小板血浆、同种异体纯化富血小板血浆，每2周1次，共3次。
1.5   主要观察指标
1.5.1   大体标本观察   末次干预治疗后2周，以空气栓塞法处死各组实验兔，以右侧股骨内侧为切口，逐层打开兔膝关节腔，大体观察关节液及关节软骨面情况，参考OARSI关节软骨、骨赘、关节液宏观评级系统评级[9]。
1.5.2   股骨端软骨病理学评价   将股骨和胫骨在距关节面约1 cm处离断，取股骨端置于体积分数10%甲醛溶液中固定 24 h后取出，用流水冲洗标本一两小时后，将标本浸入10% EDTA脱钙液脱钙2个月，每周定期更换脱钙液，脱钙完全(大头针刺入标本无阻力)后，浸蜡包埋、切片，乙醇逐级脱水，行苏木精-伊红染色，病理组织切片观察实施盲法及双人观测，观察内容参考Mankin’s评分标准评分[10]。
免疫组化测定：石蜡切片脱蜡脱水，并进行一系列的抗原修复、封固、滴加第一抗体和第二抗体、显色、脱水、封固，行免疫组化检测，使用光学显微镜在400倍视野下观察，观察骨形态发生蛋白2、Sox9在各组软骨细胞中的表达分布及变化情况，并采用Image Pro Plus 6.0图像分析软件计算各组骨形态发生蛋白2、Sox9的平均吸光度值，分别计算平均吸光度值，再取其平均值作为单张切片的最终测量值；为避免主观因素影响，观察时对评估者实施盲法。

1.6   统计学分析   统计分析使用IBM SPSS Statistics 22.0软件进行，所得计量资料采用x±s、M(P25，P75)表示，多组间计量资料比较，满足正态性和方差齐性的条件下，使用单因素方差分析(One way-ANOVA)，两组间比较使用 SNK-q检验；如不满足正态性、方差齐性，多组间比较则使用Kruskal-Wallis检验，两两比较采用Mann-Whitney检验；多组间等级资料比较使用Kruskal-Wallis检验，两两比较采用Mann-Whitney检验。以P < 0.05为差异有显著性意义，P < 0.01为差异有非常显著性意义。

关节软骨持续破坏超过自身有限的增殖修复能力，是骨关节炎发生发展的重要原因之一。关节内注射富血小板血浆是膝骨关节炎的一项现代治疗技术，活化后纯化富血小板血浆可有效促进软骨细胞的增殖、修复能力，调控关节内炎症反应。实验采用关节注射纯化富血小板血浆治疗兔膝骨关节炎，通过大体标本、病理组织学观察证实了纯化富血小板血浆确能有效修复膝骨关节炎关节软骨损伤，并改善骨赘及关节液形成。
纯化富血小板血浆含有大量起抗分解剂和抗炎剂作用的生长因子[11]，如刺激滑膜成纤维细胞合成透明质酸的血小板生长因子；抑制NF-κB基因活化的白细胞介素1受体拮抗剂，他参与细胞凋亡和炎症过程；抑制软骨降解的转化生长因子β，他主要调节和增强组织金属蛋白酶抑制剂的基因表达的因子；此外，还有控制软骨的生长、稳定软骨的胰岛素样生长因子1等，以调控软骨细胞和软骨下骨的代谢，维持蛋白聚糖的合成与降解之间的稳态，并刺激软骨细胞的增殖。膝关节软骨细胞体外实验显示，添加富血小板血浆后有效抑制了Wnt/β-catenin信号传导，软骨细胞的增殖能力明显增强[12]。膝骨关节炎小鼠模型的体内实验显示，关节腔注射富血小板血浆可有效降低软骨细胞的分解代谢活性，使软骨细胞凋亡的速率减慢，以此保护关节软骨的组织形态[13]。此外，有研究者利用小鼠膝骨关节炎模型发现，关节内注射富血小板血浆可通过调节巨噬细胞亚型来减轻患肢疼痛及滑膜炎症[14]。陈尉等[15]通过细胞学实验发现，富血小板血浆处理能够通过降低滑膜细胞炎症而发挥保护软骨的作用；不少临床研究也报道了富血小板血浆对膝骨关节炎的治疗价值[16-17]。
目前用于临床治疗的富血小板血浆多采用自体血制备，但已有研究者发现同种异体纯化富血小板血浆用于修复骨缺损取得良好疗效[18-19]。一项随机对照临床试验将同种异体富血小板血浆与标准护理联合运用于慢性难治性伤口处置，显示经异体富血小板血浆治疗的伤口炎症渗出明显减少，愈合时间显著缩短[20]。JO等[21]在对肩袖损伤行关节镜下损伤修复时还使用了同种异体富血小板血浆，结果发现未引起任何局部或一般的并发症，且在临床和结构等方面具有与自体富血小板血浆相当的功效。一项同种异体富血小板血浆修复大鼠跟腱损伤的研究报道显示，单次注射同种异体纯化富血小板血浆可有效促进跟腱原纤维胶原蛋白沉积，同时增强跟腱的拉伸强度[22]。
在针对豚鼠膝骨关节炎的动物实验中，KANWAT等[23]将同种异体富血小板血浆注射至患肢膝关节腔内，经治疗后关节滑膜炎明显改善，滑膜血管减少，且短期分析中膝关节滑液软骨寡聚基质蛋白水平显著降低，但是短期观察到的富血小板血浆有益作用在长期观察中无法再现，因此同种异体富血小板血浆对膝骨关节炎关节软骨的影响仍然模棱两可。此次实验结果显示，自体纯化富血小板血浆组较模型组的软骨修复、骨赘及关节液有改善，而异体纯化富血小板血浆组较模型组却无明显改善；苏木精-伊红染色软骨切片结果显示：自体纯化富血小板血浆组组、异体纯化富血小板血浆组组较模型组有改善，但自体纯化富血小板血浆组改善更为明显，这与大体标本观察结果一致，表明自体、同种异体纯化富血小板血浆均能在一定程度上改善膝骨关节炎软骨细胞的增殖能力，促进软骨细胞修复，但自体纯化富血小板血浆的治疗效果更为明显。血小板具有高度的免疫原性[24]，接受同种异体血小板治疗极易诱发同种免疫，进而导致接受者出现移植排斥反应。相关研究表明，同种抗体的产生绝大多数针对主要组织相容性抗体(MHC)抗原，少数针对抗人血小板抗原的抗体(HPA)，虽然血小板表达的Ⅰ类MHC抗原水平低，但白细胞上可发现高水平的MHC抗原，尽管富血小板血浆中的白细胞明显减少，但始终不能完全消除同种免疫MHC的风险抗原[25]。此次实验为膝关节腔内局部使用同种异体纯化富血小板血浆，究竟是否存在局部免疫排斥反应，由于未检测相关血小板抗体等，故尚不明确。
如今多种细胞因子已被证实参与软骨细胞的合成代    谢[26]，骨形态发生蛋白2可有效诱导人间充质干细胞软骨形成[27]，被认为是关节软骨的保护因素；Sox9是调控软骨发生、发育的核心转录因子，主要调控软骨细胞分化，因此骨形态发生蛋白2、Sox9与软骨细胞再生、骨关节炎关系密切。此次实验免疫组化结果显示，模型组骨形态发生蛋白2、Sox9表达量最低，考虑原因为膝骨关节炎模型软骨损伤后软骨细胞增殖、修复能力差；关节内注射自体纯化富血小板血浆后骨形态发生蛋白2、Sox9表达量升高，且在软骨过渡层和放射层均有大量表达，说明纯化富血小板血浆可能通过上调骨形态发生蛋白2、Sox9的表达提高软骨细胞的增殖能力，促进软骨损伤修复；而异体纯化富血小板血浆治疗后骨形态发生蛋白2、Sox9的表达量虽然有所增高，但骨形态发生蛋白2主要表达在软骨细胞过渡层，与自体纯化富血小板血浆组相比其表达量存在差异，大体标本和组织学评分结果也显示异体纯化富血小板血浆组较模型组无明显改善。既往有研究发现，向正常鼠关节腔反复注射骨形态发生蛋白2鼠关节面出现骨赘形成，且晚期膝骨关节炎骨赘中存在骨形态发生蛋白2强烈表达[28]。因此，骨形态发生蛋白2在骨关节炎软骨细胞中表达具有不同的意义，该因子在健康软骨表达量很低，在软骨损伤、骨关节炎软骨中表达增加，首先考虑是骨形态发生蛋白2在损伤刺激后作为修复反应上调，但也不能排除骨形态发生蛋白2刺激骨关节炎损伤进一步发展的可能；因此推测异体纯化富血小板血浆组骨形态发生蛋白2的表达集中于过渡层，不能有效改善损伤软骨的修复，还可能诱导关节面骨赘形成，但该推断是否成立还需进一步研究证实。
目前富血小板血浆的临床治疗方案尚未统一、规范，各研究中富血小板血浆的注射次数、间隔时间、单次用量不尽相同，而此次实验就富血小板血浆的半衰期特点，共注射3次，每次间隔2周的治疗方案，但是实验结果仅在末次注射2周后取材观察所得，没有进行长期实验结果观察，这在一定程度上局限了实验分析。此外，实验主要存在以下不足：纳入的样本数量偏少；由于研究条件受限，该实验未能对组织标本血小板抗体检测，导致未能明确自体、同种异体纯化富血小板血浆治疗膝骨关节炎存在疗效差异的根本原因，这些都将在后续研究中进一步改进、完善。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

文题释义：
纯化富血小板血浆：富血小板血浆是由外周血经多次离心后所得，活化后的富血小板血浆释放多种生长因子、细胞因子，具有修复软骨病变、调控炎症反应等作用。富血小板血浆中按照白细胞和纤维蛋白含量的不同可分为以下4类：纯富血小板纤维蛋白、富白细胞富血小板纤维蛋白、纯化富血小板血浆、富白细胞富血小板血浆。富血小板血浆已逐渐应用于临床骨科、烧伤整形科等领域，但用于骨关节炎的修复大多数研究者仍推荐纯化富血小板血浆。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

纯化富血小板血浆逐渐应用于膝骨关节炎，可目前用于科研及临床的纯化富血小板血浆多来源于自体血液，同种异体治疗膝骨关节炎的相关研究甚少。实验旨在探索同种异体纯化富血小板血浆能否代替自体纯化富血小板血浆，为后续同种异体纯化富血小板血浆标准化制备提供一些理论依据；研究在兔膝骨关节炎早期分别关节内注射自体、同种异体纯化富血小板血浆，从观察膝关节的大体标本、软骨组织病理学改变，以及免疫组化等角度，比较自体、同种异体纯化富血小板血浆治疗膝骨关节炎效果。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

	阅读次数
	全文
	摘要