2.1 实验动物数量分析   纳入家兔共12只，实验过程中无脱失，均进入结果分析，4周后12只家兔无死亡。

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长期以来，临床上传统的结扎、缝合、电凝、可吸收性止血夹及止血带等止血方法，不仅加大了医务工作者的手术难度，而且会影响手术视野，形成医疗事故隐患。目前，医疗市场上的止血材料多种多样，每种对使用条件和范围都有一定的限制。通常使用的止血材料如纤维蛋白黏胶、再生纤维素、明胶海绵等，因其有一定的不良反应，不能快速被人体吸收，增添了手术风险。目前，国内使用的以淀粉为原料制备的微孔多聚糖止血材料，是由美国MedaforInc公司研制的一种术中止血材料(商品名Arista^TM)，用于出血创面时形成凝胶状混合物，可达到即刻止血的功效^[1-3] 。国内有关于微孔多聚糖应用于动物实验和临床止血研究的报道，但价格昂贵限制了其临床应用。因此，研制一种安全、有效、使用方便且成本低廉的止血材料显得尤为必要。课题组成员研发的利用植物淀粉，经交叉乳化制备而成的具有自主知识产权的多微孔多聚糖止血材料^[4] ，是对传统止血方法、止血材料的一次技术突破和创新。实验旨在通过建立家兔出血模型，观察多微孔多聚糖作用于软组织出血创面达到完全止血的时间。

设计：动物止血时间观察实验。

近年来，国内外文献相继报道了关于动物实验和临床外科手术中使用从淀粉中提取的多聚糖止血材料，其具有止血效果好、止血时间短、可明显缩短手术时间等特 点^{[1, 6-10]} 。牛雯等^[7]观察来源于变性淀粉的可吸收性多聚糖止血材料PerClot对颅骨愈合的影响。实验在12只健康成年新西兰兔顶骨各钻2个圆形缺损孔洞，共24个。按照填充材料的不同随机分别为对照组、PerClot组和骨蜡组，8个/组。PerClot组和骨蜡组缺损处覆盖淀粉型可吸收多聚糖止血粉和骨蜡，对照组不使用任何材料。术后6周处死动物，取原缺损边缘扩展至少1.5 cm范围的颅骨，大体观察骨质愈合情况进行愈合评分，应用图像分析软件测量骨小梁和骨缺损面积。结果显示缺损处愈合评分越小愈合越好，PerClot组缺损处愈合评分明显低于对照组(P < 0.05)，骨蜡组缺损处愈合评分与对照组比较无差异(P > 0.05)；与对照组比较，PerClot组骨小梁面积明显增高(P < 0.05)，缺损面积明显降低(P < 0.05)。可见PerClot可吸收多聚糖止血粉还具有促兔颅骨愈合作用。随着微创手术的广泛开展，各种新型医用止血敷料不断出现，性能也越来越优良，许多大型医药公司致力于研发医用可吸收性止血材料，愈来愈多的新型止血材料被应用于临床胸、腹腔镜手术中^[11-15] 。国内学者对从天然植物马铃薯淀粉中提取高分子微孔多聚糠止血材料的文献报道甚少，目前，国内使用的从马铃薯淀粉中提取的微孔多聚糖主要是由美国进口的一种止血材料。微孔多聚糖不含多肽或蛋白质，为无菌的白色粉末，具有良好的亲水性，能使血液快速脱水形成血凝块，阻止血液渗出，在体内可以迅速降解、吸收，同时局部组织反应小，使用过程中并没有增加感染的风 险[^{16-18 ]} 。但临床应用该产品价格昂贵，增加了患者的经济负担。因此，研究一种具有自主知识产权、价格便宜的多微孔多聚糖止血产品是国内学者面对的课题。
医疗市场上的止血材料多种多样，有些止血材料已被临床医生广泛使用。文献报道理想的现场急救用止血材料应具备以下特点^[19-20] ：①可直接用于出血创面并能在2 min内控出血。②使用时不需要混合或其他准备工作。③使用简便，价格便宜。④可以长期储存。⑤无组织损伤和感染风险。目前，国内外学者对止血材料的研究主要集中在无机类和高分子多糖类止血材料，因为这两种止血材料较为接近上述要求。高分子多糖类止血材料有来源于甲壳动物虾、蟹的甲壳、昆虫的甲壳、真菌和植物细胞壁及植物淀粉，其中具有代表性来源于甲壳类的有壳聚糖和淀粉类的微孔多聚糖。壳聚糖止血材料形态及品种多样，有壳聚糖粉末、溶液、水凝胶及多孔材料，可广泛应用于各类伤口的止血，目前对壳聚糖的止血机制尚未完全清楚，文献报道壳聚糖对于广泛出血创面的止血效果还是有限[21]。国内广泛应用于临床和实验研究的微孔多聚糖主要有Arista^TM和PerClot^TM两种，分别由美国Medafor Inc和Starch Medical Inc公司提供，2006年通过美国FDA认证，被广泛应用于急救和临床手术中^[22] 。微孔多聚糖从马铃薯淀粉中提取，不含多肽或蛋白质，具有良好的安全性，不存在过敏及病毒传播的危险^[23] 。王白石等^[23]探讨微孔多聚糖材料在体表创腔的止血效果。实验随机选择需置入皮肤软组织扩张器患者80例，术中共制备皮下腔隙142个。将患者随机分为2组：A组为使用微孔多聚糖材料组，B组为空白对照组。收集临床术后前3 d引流量、术后总引流量和拔管天数等数据，按照创腔单位面积引流量进行统计学比较结果：使用微孔多聚糖材料组在术后前3 d创腔单位面积引流量(0.275±0.126) mL/cm²，术后创腔单位面积总引流量(0.458±0.207) mL/cm²，而对照组分别为(0.472± 0.222) mL/cm²和(0.722±0.303) mL/cm²，两组对照结果存在统计学差异。两组置管时间无显著差异。说明微孔多聚糖材料对临床体表创腔的止血作用安全而有效。AristaTM是一种交联乳化淀粉，通过乳化交联过程将纯化的马铃薯淀粉制成直径为50-100 µm表面带有裂隙的球状颗粒；PerClot^TM是羧甲基淀粉钠，亦来源于马铃薯淀粉，通过取代淀粉葡萄糖环上的1，4羟基使具有较强的亲水性^[8] 。Arista^TM和PerClot^TM两种止血粉颗粒可应用于外科各种手术创面的止血，均取得了理想的止血效果^[24-25] 。超微结构显示Arista^TM和PerClot^TM止血粉为表面带有裂隙结构的微球，裂隙扩大了微球的表面积，是其增强吸水能力的重要结构，但裂隙向微球内延伸有限^[26] 。余雪松等^[26]制备一种多孔止血淀粉，观察其在动物体内的生物相容性。将甘薯淀粉在淀粉酶作用下水解，并经交联、表面活性处理后，制成多孔止血淀粉。选取健康KM小鼠60只随机分成实验组和对照组，每组30只。所有动物在右股划出长约1 cm，深约0.5 cm的条形切口，实验组将1 g无菌多孔止血淀粉填入其中，对照组不填塞。埋植后2，4，6，8，14 d，2组各取6只，观察一般状况，检测血常规、肝肾功能及体液免疫学指标，并观察局部组织形态学变化。结果显示制备的多孔止血淀粉为球径约15 μm大小的白色球状颗粒，表面布满直径约为1 μm的小孔，小孔由表面向中心深入，孔的容积占颗粒体积50%左右。实验组和对照组血生化和免疫学等指标无显著差异(P > 0.05)，肝肾组织切片显示无明显炎症反应，手术区肌肉组织第2天有少量炎性细胞浸润，4 d后无明显炎症反应，未见明显纤维细胞包膜。动物体内实验显示，多孔止血淀粉无急慢性毒性、无排斥反应、无免疫反应、无过敏反应，具有良好的生物相容性。如何采用一种新的方法制备一种含有真空内腔的，使微球的表面积进一步扩大，进一步增加其吸水性且价格便宜的微孔多聚糖，是国内学者所面临的重大课题。
江苏奥科生物科技有限公司联合江苏大学、解放军第97医院科研人员研发的多微孔多聚糖止血材料，它来源于纯化的马铃薯淀粉，产品为粉末状，粉末中不含任何动物或人源性成分，为非生物活性颗粒。3 000倍扫描电子显微镜下见颗粒呈圆形、椭圆形，直径20-120 µm，其内有真空状内腔；3 500倍扫描电子显微镜见颗粒表面有2.0- 3.0 µm的小孔分布，微孔表面有一层“晕罩”，微孔与颗粒真空内腔相通。与Arista^TM和PerClot^TM止血粉相比较，真空内腔使微粒的表面积增加，微孔表面的“晕罩”具有阻挡血液中有型成分作用，使微粒内的空腔保持负压的状态，微粒的吸水性更强，止血效果更佳。将多微孔多聚糖喷洒于活动性出血的软组织创面，能迅速吸收血液中的水分，并将血液中体积大于微孔孔径的有形成分(如血小板、红细胞、血蛋白、凝血酶和纤维蛋白等)聚集在颗粒表面，形成“糊状凝胶”黏附于出血创面表面形成止血痂，阻止血液渗出；同时通过使血液浓缩，加速内源性凝血过程，缩短凝血时间，激活正常血小板在局部形成凝血块，沉积纤维蛋白，随后形成的纤维蛋白血凝块具有快速止血作用，进一步限制了出血，达到迅速止血的效果。家兔软组织出血创面止血实验表明，出血创面长3 cm、深0.5 cm时，应用多微孔多聚糖止血粉止血后，创面成功止血，止血时间为(15.25±1.04)s；出血创面长3 cm、距皮肤1.0 cm深达肌肉层时，应用多微孔多聚糖止血粉止血后，止血时间为(11.25±1.89) s。最短止血时间为10 s，最长止血时间为17 s。软组织创伤止血显效率为87.5%，有效率为100%。家兔软组织创面喷洒多微孔多聚糖 24 h肌组织轻度水肿、小血管扩张、间质内可见少数散在中性粒细胞浸润；7 d时炎症消退，肌组织表面轻度纤维化、完全吸收，接近正常组织，细胞无损伤。
国内相关文献报道，进口微孔多聚糖 Arista^TM止血材料在腹腔镜脾切除、肝脏切除残肝断面术中及神经外科等手术中得到广泛应用，并且具有快速、可靠的止血作用，其止血效果优于医用生物蛋白胶^[27-30] 。郑朝旭等^[27]观察微孔多聚糖止血球在腹腔镜脾切除的止血效果。试验选择临床确诊为特发性血小板减少性紫癜且有脾切除手术指征的患者50例，随机分成医用生物蛋白胶组(n=25)和微孔多聚糖止血球组(n=25)，由同一主刀医生进行脾切除，两组术中分别常规用5 mL医用生物蛋白胶或1 g微孔多聚糖止血球喷洒于脾蒂断面钉合线及脾窝创面。记录术中出血量、喷洒医用生物蛋白胶或微孔多聚糖止血球后渗血停止的时间，测定术后24，48 h引流液量。两组患者的一般资料均无显著性差异。医用生物蛋白胶组和微孔多聚糖止血球组术中出血量分别为(90.8±85.8) mL和(82.2±101.0) mL (t=0.325，P=0.747)，喷洒医用生物蛋白胶或微孔多聚糖止血球后创面渗血停止时间分别为(2.1±1.8) min和(1.2±0.8) min(t=2.470，P=0.017)，术后24 h引流量分别为(85.9±45.7) mL和(52.3±37.9) mL(t=2.833，P=0.007)，术后48 h引流量分别为(37.6±18.8) mL和(22.4±17.7) mL (t=2.948，P=0.005)。医用生物蛋白胶组术后1例疑胰尾损伤，保守治疗成功。余两组患者均未出现严重并发症。证实微孔多聚糖止血球在腹腔镜脾切除术中具有快速、可靠的止血作用，其效果优于医用生物蛋白胶。谢斌等^[28]观察微孔多聚糖止血球控制肝切除后残肝断面渗血及活动性出血的效果及安全性。试验选择因肝脏肿瘤、肝内胆管结石需施行肝叶(段)切除术的患者60例，随机分为标准组、试验组1、试验组2、对照组，每组各15例。标准组采用常规外科手术方法(结扎、电凝)止血，试验组1使用微孔多聚糖止血球作为术中止血剂，试验组2使用止血纱布＋微孔多聚糖止血球作为术中止血剂，对照组使用止血纱布作为止血剂。观察止血时间、术中及术后3 d内的输血量及术后引流量。结果显示标准组断面止血时间(2.98± 1.05) min，术中输血量(400±200) mL，术后3 d内输血量(400±200) mL，引流量(350±100) mL；试验组1断面止血时间(3.10±0.85) min，术中输血量(400±200) mL，术后3 d内输血量(200±0) mL，引流量(200±100) mL；试验组2断面止血时间(3.20±1.52) min，术中输血量(200±200) mL，术后3 d内输血量(200±0) mL，引流量(50±100) mL；对照组断面止血时间为(5.22±1.82) min，术中输血量(600±200) mL，术后3 d内输血量(400±200) mL，引流量(400±150) mL。对照组止血成功率33%低于标准组和试验组(P < 0.05)；各组均无不良反应发生。证明微孔多聚糖止血球可以迅速、安全、有效地控制肝切除后残肝断面渗血情况，结合止血纱布应用疗效更佳，且使用简便。黄永安等^[29]观察新型止血材料AristaTM控制神经外科手术中活动性出血及局部渗血的效果，并探讨其在神经外科手术的适应证。试验选择神经外科手术治疗患者48例，按随机数字表法分为试验组24例和对照组24例，试验组术中使用Arista^TM止血，对照组采用明胶海绵压迫止血，观察并比较两组止血时间及效果。结果显示48例患者出血部位的止血均获成功，试验组止血时间为(1.88±0.74) min，对照组为(3.38±0.92) min，两组比较差异有显著性意义(Z=4.711，P=0.001)，表明新型止血材料Axista^TM可以强效迅速控制神经外科手术中出现的活动性出血及局部渗血，且优于明胶海绵压迫止血和常规手术操作技术。
江苏奥科生物科技有限公司联合研发的多微孔多聚糖止血材料，通过动物实验研究表明该产品达到与国外同类产品的止血效果，而且价格便宜，是一种具有自主知识产权的理想止血材料，有望替代进口产品在临床上应用。

目前国内使用的微孔多聚糖主要是由国外进口的一种止血材料，价格昂贵。因此，研制一种安全、有效、使用方便且成本低廉的止血材料显得尤为必要。实验创新性将具有自主知识产权的多微孔多聚糖止血材料，应用于软组织创伤止血，实验证明该产品达到与国外同类产品相同的止血效果，而且价格便宜。

基金资助：
镇江市政府331工程资助

医疗市场上的止血材料多种多样，有些止血材料已被临床医生广泛使用。文献报道理想的现场急救用止血材料应具备以下特点：①可直接用于出血创面并能在2min内控出血。②使用时不需要混合或其他准备工作。③使用简便，价格便宜。④可以长期储存。⑤无组织损伤和感染风险。目前，国内外学者对止血材料的研究主要集中在无机类和高分子多糖类止血材料，因为这两种止血材料较为接近上述要求。高分子多糖类止血材料有来源于甲壳动物虾、蟹的甲壳、昆虫的甲壳、真菌和植物细胞壁及植物淀粉，其中具有代表性来源于甲壳类的有壳聚糖和淀粉类的微孔多聚糖。壳聚糖止血材料形态及品种多样，有壳聚糖粉末、溶液、水凝胶及多孔材料，可广泛应用于各类伤口的止血，目前对壳聚糖的止血机制尚未完全清楚，文献报道壳聚糖对于广泛出血创面的止血效果还是有限。国内广泛应用于临床和实验研究的微孔多聚糖主要有AristaTM和PerClotTM两种，分别由美国Medafor Inc和Starch Medical Inc公司提供，2006年通过美国FDA认证，被广泛应用于急救和临床手术中。微孔多聚糖从马铃薯淀粉中提取，不含多肽或蛋白质，具有良好的安全性，不存在过敏及病毒传播的危险。AristaTM是一种交联乳化淀粉，通过乳化交联过程将纯化的马铃薯淀粉制成直径为50-100 µm表面带有裂隙的球状颗粒；PerClotTM是羧甲基淀粉钠，亦来源于马铃薯淀粉，通过取代淀粉葡萄糖环上的1，4羟基使具有较强的亲水性。AristaTM和PerClotTM两种止血粉颗粒可应用于外科各种手术创面的止血，均取得了理想的止血效果。超微结构显示AristaTM和PerClotTM止血粉为表面带有裂隙结构的微球，裂隙扩大了微球的表面积，是其增强吸水能力的重要结构，但裂隙向微球内延伸有限。如何采用一种新的方法制备一种含有真空内腔的，使微球的表面积进一步扩大，进一步增加其吸水性，且价格便宜的微孔多聚糖，是国内学者所面临的重大课题。

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