miR-20调控人乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞的定向分化

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1761

摘要/Abstract

摘要：

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文题释义：
miRNAs：是单链非编码小分子RNA，长度为19-25个核苷酸，能够广泛参与生物体内细胞增殖、分化、凋亡以及细胞周期调控等过程。
乳牙牙髓干细胞的分化功能：人乳牙牙髓干细胞主要从脱落乳牙中分离得到，具有多向分化潜能以及高度的增殖能力。人乳牙牙髓干细胞在适当条件下可分化为牙本质细胞、成骨细胞、脂肪细胞以及神经细胞等多种细胞。

摘要
背景：研究发现miR-20在促进骨髓间充质干细胞以及炎症牙周膜干细胞的成骨分化中具有重要意义，但其在牙髓干细胞向神经元细胞分化中的调节功能尚未完全阐明。
目的：探讨miR-20调控骨形态发生蛋白信号通路诱导人乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞定向分化的机制。
方法：从人脱落乳牙中分离纯化乳牙牙髓干细胞并进行神经诱导分化，观察诱导分化期间细胞形态变化，检测Nestin、NSE、miR-20、BMP2的表达。将乳牙牙髓干细胞分为如下5组：阴性对照组(转染阴性对照序列)、miR-20 mimic组(转染miR-20模拟物48 h)、miR-20 inhibitor组(转染miR-20 抑制物48 h)、通路抑制剂组(骨形态发生蛋白通路抑制剂处理细胞10 d)、联合组(转染miR-20模拟物并且在转染后24 h在培养基中添加通路抑制剂处理细胞10 d)。各组乳牙牙髓干细胞在神经诱导分化第12天，采用Real-time PCR 和Western blot检测BMP2、BMPR2、Nestin和NSE的mRNA和蛋白水平，免疫荧光染色观察Ⅲβ-tubulin的表达，高尔基染色检测神经元细胞树突棘数目。
结果与结论：①乳牙牙髓干细胞随时间的延长逐渐分化为神经元样细胞，Nestin表达在分化期间先增高后降低，NSE、miR-20和BMP2表达水平逐渐升高；②与阴性对照组相比，miR-20 mimic组BMP2、BMPR2、Ⅲβ-tubulin、Nestin和NSE水平上调并且诱导神经元树突棘生成；而miR-20 inhibitor组和通路抑制剂组BMP2、BMPR2、Ⅲβ-tubulin、Nestin和NSE蛋白表达下调并抑制神经元树突棘生成；骨形态发生蛋白通路抑制剂能逆转miR-20对乳牙牙髓干细胞神经分化的诱导。③上述结果表明，miR-20能够通过激活骨形态发生蛋白信号通路从而诱导乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞定向分化。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0002-1209-1128(邓轩)

关键词: 人乳牙牙髓干细胞, 神经元细胞, miR-20, 神经向诱导分化, 骨形态发生蛋白信号通路, Ⅲβ-tubulin, 神经元细胞树突棘, 海南省自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: In recent years, microRNA-20 (miR-20) has been found to plays an important role in promoting the osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells and inflammatory periodontal ligament stem cells. However, whether it can regulate the differentiation of dental pulp stem cells into neurons has not been fully clarified.
OBJECTIVE: To investigate the mechanism by which miR-20 regulates the differentiation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth towards neuronal cells through bone morphogenetic protein signaling pathway.
METHODS: Stem cells from human exfoliated deciduous teeth were separated and purified. Cell morphology was observed during cell induction and differentiation. Nestin, neuron-specific enolase, miR-20 and bone morphogenetic protein-2 expressions were detected. The stem cells from human exfoliated deciduous teeth were divided into five groups: negative control group (transfected with negative control sequence), miR-20 mimic group (transfected with miR-20 mimic for 48 hours), miR-20 inhibitor group (transfected with miR-20 inhibitor for 48 hours), pathway inhibition group (treated with bone morphogenetic protein pathway inhibitor for 10 days), and combined treatment group (transfected with miR-20 mimic for 24 hours and then treated with bone morphogenetic protein pathway inhibitor for 10 days). Subsequently, the expressions of bone morphogenetic protein-2, bone morphogenetic protein receptor type 2, Nestin and neuron-specific enolase were detected using real-time PCR and western blot assay at 12 days of neuronal induction. Immunofluorescence was adopted to determine the expression of III β-tubulin. Golgi staining was performed to detect the number of dendritic spines in neurons.
RESULTS AND CONCLUSION: The stem cells from human exfoliated deciduous teeth were gradually differentiated into neuron-like cells. During the differentiation period, the expression of Nestin was increased and then decreased, but the expression levels of neuron-specific enolase, miR-20 and bone morphogenetic protein-2 were gradually increased. Compared with the negative control group, miR-20 overexpression up-regulated the levels of bone morphogenetic protein-2, bone morphogenetic protein receptor type 2, III β-tubulin, Nestin and neuron-specific enolase as well as induced generation of neuronal dendritic spines. But inhibition of miR-20 or bone morphogenetic protein pathway down-regulated the protein expression of bone morphogenetic protein-2, bone morphogenetic protein receptor type 2, III β-tubulin, Nestin and neuron-specific enolase and inhibited the generation of dendritic spines in neurons. At the same time, bone morphogenetic protein inhibitor reversed the inducement of stem cells from human exfoliated deciduous teeth to neurons caused by miR-20. Thus, miR-20 can induce the differentiation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth towards neuron-like cells through activating the bone morphogenetic protein signaling pathway.

Key words: stem cells from human exfoliated deciduous teeth, neuronal cells, miR-20, neural differentiation, bone morphogenetic protein signaling pathway, III β-tubulin, neuronal cell dendritic spine, Natural Science Foundation of Hainan Province

中图分类号:

邓轩，阳芳，唐西清，赵焱. miR-20调控人乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞的定向分化[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(21): 3329-3335.

Deng Xuan, Yang Fang, Tang Xiqing, Zhao Yan. MicroRNA-20 regulates directional differentiation of stem cells from human exfoliated deciduous teeth[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(21): 3329-3335.

图/表（结果） 2

2.1 人乳牙牙髓干细胞向神经元诱导分化的形态变化及标志物表达 人乳牙牙髓干细胞体积较小、轮廓清晰，大多数为梭形或多角形，少部分为卵圆形，高表达Vinmentin、CD44和CD29。在神经分化诱导培养基中培养第3天，细胞胞体收缩，变为神经球样且成团生长。在神经分化诱导培养基中培养第12天，突起成网状且相互连接，核大而圆，位于细胞中央，为神经元样细胞，见图1A。Nestin表达在分化期间先升高后降低，在诱导第6天表达最高，见图1B-D。NSE蛋白及mRNA表达水平随着培养时间延长而上调，见图1E-G。

2.2 人乳牙牙髓干细胞中miR-20和BMP2的表达水平 在神经诱导分化第3天后miR-20表达逐步上调，BMP2 mRNA和蛋白表达随着培养时间延长逐渐上调且在培养第9天其表达趋于平缓，见图2。总体而言，二者表达呈时间依赖性上升。

2.3 miR-20通过骨形态发生蛋白信号通路诱导人乳牙牙髓干细胞分化为神经元 Nestin和NSE分别为神经干细胞和神经元的特异标志物。在诱导分化第12天，Real-time PCR检测显示：与阴性对照组相比，miR-20 mimic组和联合组miR-20表达显著上调，miR-20 inhibitor组miR-20表达显著下调，通路抑制剂组miR-20表达无明显变化。Western blot检测结果发现：与阴性对照组相比，miR-20 mimic组BMP2、BMPR2、Nestin和NSE蛋白表达显著上调，miR-20 inhibitor组和通路抑制剂组BMP2、BMPR2、Nestin和NSE蛋白表达显著下调。此外，联合组对上述因子的诱导效果能被BMP通路抑制剂抵消，见图3。

2.4 免疫荧光检测各组细胞的神经元早期标志物Ⅲβ-tubulin表达 在诱导分化第12天，Ⅲβ-tubulin表达几乎贯穿整个神经元。与阴性对照组相比，miR-20 mimic组Ⅲβ-tubulin表达显著上调，但miR-20 inhibitor组和通路抑制剂组Ⅲβ-tubulin蛋白水平明显下调。联合组骨形态发生蛋白通路抑制剂能中和miR-20对Ⅲβ-tubulin生成的诱导，见图4。

2.5 各组高尔基染色结果 为评定神经元发育及神经传递功能，通过高尔基染色观察各组人乳牙牙髓干细胞诱导的神经元树突棘密度。与阴性对照组相比，miR-20 mimic组单位面积树突棘数目显著增加，但miR-20 inhibitor组和通路抑制剂组树突棘稀疏。联合组骨形态发生蛋白通路抑制剂能中和miR-20对于神经元树突棘的诱导，见图5。

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引言

人乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth，SHED)主要存在于人脱落的乳牙牙髓组织中^[1-2]。Miura等^[3]于2003年首次通过酶消化法在七八岁儿童脱落乳牙的残冠中分离出乳牙牙髓干细胞，然后又通过体内移植的方法证实乳牙牙髓干细胞能够诱导成骨分化、产生牙本质、在小鼠脑中存活并且表达神经元以及胶质细胞的标记物。近年来乳牙牙髓干细胞在神经细胞方向的分化潜能及其在神经保护中的作用越来越受到关注^[4-5]。乳牙牙髓干细胞能够通过分泌生长因子以及细胞因子等发挥抵抗细胞凋亡、激活内源性神经细胞、促进细胞增殖的作用，在神经保护以及神经疾病的治疗中具有重要意义^[6]。经研究证实，骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein，BMPs)信号通路在诱导牙内皮以及间充质相互作用过程中发挥重要作用^[7]。Zhang等^[8]通过研究发现，牙损伤发生后牙基质往往被分解且骨形态发生蛋白释放，这对于细胞成牙本质分化以及牙再生具有重要促进作用。此外，骨形态发生蛋白2被发现在促进中脑多巴胺能神经元分化中具有重要价值^[9]。白广超等^[10]发现骨形态发生蛋白7能够诱导骨髓间充质干细胞向神经元细胞分化。赵红斌等^[11]则证实红景天能够激活骨形态发生蛋白信号通路进而促进骨髓间充质干细胞向神经细胞定向分化。因此，作者进行此项研究关注骨形态发生蛋白通路是否在乳牙牙髓干细胞向神经元细胞分化中发挥作用。miRNA被认为是在真核生物基因表达以及功能调控中发挥重要作用的分子^[12]。有研究证实miR-20能够通过激活骨形态发生蛋白信号通路进而促进人骨髓来源间充质干细胞向成骨细胞分化^[13]。杨倩娟等^[14]也发现miR-20过表达能够促进人炎症牙周膜干细胞的成骨分化。但是关于miR-20与牙髓干细胞及其向神经元样细胞分化之间的关系尚未完全明确。该研究旨在探讨miR-20与乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞分化之间的关联并探讨其可能的作用途径。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 细胞和分子生物学实验。

1.2 时间及地点 实验于2017年2月至2018年7月在南华大学附属第二医院实验室完成。

1.3 材料 胶原酶、中性蛋白酶和Trypsin-EDTA(上海源叶生物有限公司)；RIPA裂解液、BCA试剂盒(碧云天生物有限公司)；DAPI核染液、抗荧光淬灭剂、ECL反应液、DMEM、Opti-MEM、无血清神经诱导培养基、Trizol试剂盒、反转录试剂盒、miScript SYBR Green PCR Kit (Thermo Fisher)；高尔基快速染色试剂盒(FD NeuroTechnologies公司)；一抗GAPDH、BMP2、BMPR2、Nestin、NSE和β-Ⅲtubulin及辣根过氧化物酶和荧光标记的二抗IgG(Abcam公司)；miR-20 mimic、miR-20 inhibitor和阴性对照序列(由华大基因合成)；选择性骨形态发生蛋白通路抑制剂Noggin(美国MedChemExpress公司)；倒置显微镜、荧光显微镜(德国徕卡)；Nanodrop紫外/可见光分光光度计、7300定量PCR仪和化学发光仪(美国Applied Biosystem公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 人乳牙牙髓干细胞分离及培养 收集3名5-10岁无牙科疾病及全身性疾病健康儿童的掉落乳牙共4颗，体积分数为75%乙醇合并紫外光消毒后，PBS多次清洗，轻轻剥取牙髓组织，PBS清洗并剪碎；将牙髓组织置于EP管中并按1∶1比例加入3 g/LⅠ型胶原酶和4 g/L中性蛋白酶37 ℃消化1 h；使用70 μm细胞筛收集细胞，1 000 r/min离心10 min，弃上清；重悬后将细胞接种于含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基中进行常规培养及传代，培养条件为37 ℃，体积分数为5%CO₂培养箱。倒置显微镜观察细胞形态并结合流式细胞术鉴定其表面分子Vimentin、CD29、CD44的表达。该研究经所有患儿和监护人知情同意，且经南华大学附属第二医院伦理委员会审批。

1.4.2 细胞分组和处理 将人乳牙牙髓干细胞分为5组：阴性对照组(转染阴性对照序列)、miR-20 mimic组(转染miR-20模拟物)、miR-20 inhibitor组(转染miR-20抑制物)、通路抑制剂组(骨形态发生蛋白通路抑制剂处理细胞)、联合组(细胞转染miR-20模拟物24 h后在培养基中添加通路抑制剂)。

转染方式：将传至第3代的人乳牙牙髓干细胞按3×10⁴/孔密度接种于含DMEM高糖培养基(不含双抗)的24孔板中，待细胞汇合度达30%-50%，每孔添加下述混合溶液。A液：将30 pmol的miR-20 mimic，miR-20 inhibitor和阴性对照序列冻干粉用RNase-free水溶解；B液：用250 µL不含血清Opti-MEM培养基稀释5 µL lipofectamin 2000，轻轻混匀并室温孵育5 min；混匀A液和B液室温孵育20 min，加入至细胞培养孔并于37 ℃，体积分数为5%CO₂培养箱培养48 h。

骨形态发生蛋白通路特异性抑制剂处理：将传至第3代的人乳牙牙髓干细胞按3×10⁴/孔密度接种于含DMEM高糖培养基(不含双抗)的24孔板中，待细胞汇合度在20%左右，每孔添加200 μg/L Noggin蛋白，在37 ℃，体积分数为5%CO₂培养箱培养10 d，每3 d换液1次。

1.4.3 神经元分化诱导 用0.25% Trypsin-EDTA消化各组人乳牙牙髓干细胞大约1 min，PBS洗涤3次，每次5 min，1 200 r/min离心10 min，弃上清，收集沉淀，用无血清神经诱导培养基(Neurobasal A培养基，含B27添加剂、20 µg/L碱性成纤维细胞生长因子、20 µg/L表皮细胞生长因子、10 µg/L胶质细胞源性神经营养因子、10 µg/L脑源性神经营养因子、1%链霉素和1%青霉素)重悬细胞并接种于12孔板中，于37 ℃，体积分数为5%CO₂培养箱培养，倒置显微镜观察细胞形态改变。

1.4.4 Real-time PCR检测人乳牙牙髓干细胞miR-20以及BMP2、Nestin和NSE的mRNA表达 未经处理的第3代人乳牙牙髓干细胞向神经元细胞诱导分化0，3，6，9，12 d以及上述5组第3代人乳牙牙髓干细胞向神经元细胞诱导分化第12天，根据Trizol试剂盒说明书提取总RNA，利用ND-1000紫外/可见光分光光度计检测RNA的A_260/280值，用不含RNA酶的ddH₂O调整RNA浓度用于后续实验。采用反转录试剂盒提取样本cDNA，反应条件：70 ℃ 10 min，冰浴2 min，42 ℃ 60 min，70 ℃ 10 min，反转录所得cDNA置于-80 ℃冰箱保存。以cDNA为模版，采用miScript SYBR Green PCR Kit进行实时荧光定量PCR，PCR引物见表1。按照反应体系配置说明书配置总反应液25 μL：2×Quantiect SYBR Green PCR 12.5 μL；10×miscript Primer Assay 140/27a/U6 2.5 μL；RNase-free water 5 μL；Template cDNA 2.5 μL，每个样本设3个复孔，反应条件：95 ℃预变性15 min；94 ℃变性15 s；55 ℃退火30 s，70 ℃延伸30 s，40个循环，在7300定量PCR仪上进行检测，miR-20以U6为内参，其他目的基因以GAPDH为内参，采用熔解曲线评价PCR结果的可靠性，反应结束后，通过产物的熔解曲线判定引物的特异性。利用2^-^??Ct法检测人乳牙牙髓干细胞中相关基因mRNA表达水平。

1.4.5 Western blot检测各组人乳牙牙髓干细胞BMP2、BMPR2、Nestin和NSE蛋白表达 未经处理的第3代人乳牙牙髓干细胞向神经元细胞诱导分化0，3，6，9，12 d以及上述5组第3代人乳牙牙髓干细胞向神经元细胞诱导分化第12天，用含蛋白酶抑制剂的RIPA于4 ℃裂解细胞30 min，每隔10 min摇晃1次，然后在4 ℃下按12 000 r/min离心20 min，取上清并使用BCA试剂盒测定蛋白浓度；用去离子水调整每个蛋白泳道上样量为30 μg，进行SDS-PAGE电泳后按90 mA转膜2 h，5%脱脂奶粉封闭2 h，PBST洗膜3次，每次5 min；加入一抗BMP2、BMPR2、Nestin、NSE 4 ℃孵育过夜，GAPDH作为内参，PBST洗膜3次，每次5 min；加入HRP标记的IgG二抗于室温震荡孵育2 h，PBST洗膜3次，每次5 min。将膜浸入ECL反应液中室温反应1 min，化学发光仪进行曝光。Image J计算蛋白条带灰度值。

1.4.6 免疫荧光检测各组细胞中神经元早期标志物Ⅲβ-tubulin的表达 在诱导分化第12天，制备各组细胞爬片，PBS洗涤3次，每次2 min，40 g/L多聚甲醛固定15 min，PBS洗涤3次，每次2 min；0.1%Triton X-100通透15 min，PBS洗涤3次，每次3 min；3%BSA于室温下封闭30 min，加入一抗Ⅲβ-tubulin于湿盒4 ℃孵育过夜，PBS漂洗3次，每次10 min；加入Alexa Fluor^®790标记二抗IgG室温孵育1 h，PBS漂洗3次，每次5 min；DAPI核染两三分钟，PBS漂洗3次，每次5 min；抗荧光淬灭剂加入封固液进行封固。荧光显微镜下观察并检测荧光强度。

1.4.7 高尔基染色检测各组细胞树突棘数目 在诱导分化第12天，制备各组细胞爬片，按照高尔基快速染色试剂盒进行如下操作：在棕色瓶中加入显色液A和显色液B各5 mL，加入10 mL去离子水，即为显色液。在避光条件下，细胞爬片滴加500 μL显色液于室温孵育30 min，去离子水洗涤1 min，显色液再次孵育10-30 min，显微镜下观察细胞出现黑色，立即终止；然后去离子水洗1 min，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固并于显微镜下观察，Image-pro plus 7.0计数单位长度树突棘数目。

1.5 主要观察指标 ①人乳牙牙髓干细胞向神经元诱导分化的形态变化及标志物表达；②人乳牙牙髓干细胞中miR-20和BMP2的表达水平；③各组人乳牙牙髓干细胞诱导分化第12天miR-20、BMP2、BMPR2、Nestin和NSE蛋白表达；④各组人乳牙牙髓干细胞在诱导分化第12天Ⅲβ-tubulin蛋白荧光定量；⑤各组人乳牙牙髓干细胞诱导分化第12天神经元树突棘密度。

1.6 统计学分析 所有数据均采用SPSS 21.0统计学软件进行处理，计量资料以x(_)±s的形式表示，两组间比较采用t 检验，多组间的比较采用单因素方差分析，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

牙髓作为人体内疏松的结缔组织，主要由牙本质细胞、淋巴细胞、成纤维细胞以及未分化的间充质细胞构成^[15]。未分化的间充质细胞实际上就是牙髓干细胞，相对于牙髓干细胞，乳牙牙髓干细胞具有更高的分化潜能，可以分化为脂肪、牙本质以及神经细胞等多种细胞^[16]。Bagher等^[17]发现牙源性间充质干细胞具有分化为神经元细胞的功能。Song等^[18]也证实乳牙牙髓干细胞能够抑制神经损伤过程中星形胶质细胞的凋亡，在促进神经功能恢复中具有重要意义。该研究通过乳牙牙髓干细胞进行神经元诱导分化并且探讨其分子调控机制，发现miR-20能够激活骨形态发生蛋白信号通路进而促进乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞的分化。

首先对诱导分化前后的乳牙牙髓干细胞形态进行观察，原代细胞在神经分化诱导培养基作用下其胞体逐渐收缩呈神经球样，再培养一段时间后细胞突起呈网状连接，证实神经元样细胞诱导分化完成。张凤兰等^[19]借助人参皂苷Rg3加速小鼠神经干细胞向神经元细胞分化，Nestin表达显著提高。康湘萍等^[20]也发现骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化过程中Nestin以及NSE的表达逐渐增高。该研究结果发现诱导分化后Nestin的表达先增高后降低，NSE表达则随着诱导时间的增多不断增加。miRNA作为内源性小分子RNA，在干细胞的分化和更新中具有显著调控作用^[21]。研究表明，miR-20在人脂肪源干细胞的成骨诱导过程中表达显著增强^[22]。miR-20在炎症牙周膜干细胞中的表达显著低于健康牙周膜干细胞^[14]。Chen等^[23]也证实miR-20能够参与到胚胎成纤维细胞的成骨分化过程中。以上研究均证实了miR-20在诱导不同来源干细胞分化中的重要价值。Kunimatsu等^[24]研究证实人乳牙牙髓干细胞中骨形态发生蛋白2表达显著增强。Jovanovic等^[25]发现骨形态发生蛋白信号通路在促进神经元细胞生成中发挥重要作用。该实验发现，随着诱导时间的增加，miR-20表达以及BMP2 mRNA和蛋白表达均显著增加，表明miR-20促进乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞分化可能与骨形态发生蛋白通路有关。

为进一步探究miR-20介导骨形态发生蛋白通路对乳牙牙髓干细胞向神经元细胞分化中的作用，该研究通过Western blot方法检测结果发现，过表达miR-20能够促进Nestin和NSE以及骨形态发生蛋白通路相关蛋白的表达，抑制骨形态发生蛋白信号通路后，以上因子上调则消失。Ⅲβ-tubulin是神经元的早期标志物^[26-27]。通过免疫荧光检测发现，过表达miR-20后Ⅲβ-tubulin表达显著增强，抑制骨形态发生蛋白信号通路则导致Ⅲβ-tubulin表达降低。通过高尔基染色对各组神经元发育情况进行观察，过表达miR-20能够促进神经元树突棘密度的增加，抑制骨形态发生蛋白信号通路则得到相反结果。以上研究共同证实了miR-20促进乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞分化主要是通过激活骨形态发生蛋白信号通路实现的。

综上所述，miR-20能够通过激活骨形态发生蛋白信号通路从而诱导乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞的定向分化，miR-20有望成为加速乳牙牙髓干细胞向神经元细胞分化中的关键因子，但是miR-20对骨形态发生蛋白信号通路进行调控进而影响神经元分化是否通过下游靶基因或者其他作用途径仍然需要通过更多的实验进行研究。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程