粒细胞刺激因子对白血病细胞趋化因子受体4表达及趋化能力和骨髓微环境的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.0648

中国组织工程研究 ›› 2018, Vol. 22 ›› Issue (33): 5268-5273.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.0648

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粒细胞刺激因子对白血病细胞趋化因子受体4表达及趋化能力和骨髓微环境的影响

王瑾，牛奔，马肖容，张王刚

西安交通大学第二附属医院血液内科，陕西省西安市 710000

修回日期:2018-06-28 出版日期:2018-11-28 发布日期:2018-11-28
通讯作者: 张王刚，教授，博士生导师，西安交通大学第二附属医院血液内科，陕西省西安市 710000
作者简介:王瑾，女，1981年生，陕西省西安市人，汉族，2011年西安交通大学毕业，博士，主治医师，主要从事血液恶性肿瘤的诊治及免疫机制研究。
基金资助:
陕西省自然科学基金项目(2016JQ8032)；西安交通大学第二附属医院人才培养专项基金项目[RC(XM)201307]

Effects of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor on CXC chemokine receptor 4 expression and chemotaxis in bone marrow microenvironment

Wang Jin, Niu Ben, Ma Xiao-rong, Zhang Wang-gang

Department of Hematology, Second Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710000, Shaanxi Province, China

Revised:2018-06-28 Online:2018-11-28 Published:2018-11-28
Contact: Zhang Wang-gang, Professor, Doctoral supervisor, Department of Hematology, Second Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710000, Shaanxi Province, China
About author:Wang Jin, MD, Attending physician, Department of Hematology, Second Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710000, Shaanxi Province, China
Supported by:
the Natural Science Foundation of Shaanxi Province, No. 2016JQ8032; the Special Fund for Talent Training in the Second Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, No. RC(XM)201307

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
骨髓微环境：是指由骨髓中的基质细胞(成纤维细胞、巨噬细胞、脂肪细胞、网状细胞和内皮细胞)、细胞外基质(胶原、蛋白多糖和纤维连接蛋白、层粘连蛋白、血细胞粘结蛋白等糖蛋白)及造血生长因子组成的复杂结构。它是体内容纳干细胞、调控其行为的细胞微环境，也称“龛”或“生态位”。成骨细胞和内皮细胞分别参与构成成骨龛和血管龛。骨髓微环境即是由这两种龛构成的复杂系统，不仅是正常血细胞发育的内环境，也是白血病细胞赖以生存的摇篮。
基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1，SDF-1)/趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4，CXCR4)生物轴：基质细胞衍生因子1是由骨髓基质细胞中网状细胞分泌的趋化因子，与配体趋化因子受体4具有高度亲和力，构成一个耦连分子对，即基质细胞衍生因子1/趋化因子受体4生物轴。它可激活多个信号传导途径，引起靶细胞支架重构，牢固地黏附于内皮细胞并引起定向迁移，调节肿瘤的发生、发展、侵袭、分泌、转移等。基质细胞衍生因子1对表达趋化因子受体4的白血病细胞产生趋化作用，使其向髓内迁移、浸润、黏附、定植，避免被药物杀伤，形成黏附分子介导的耐药。

摘要
背景：骨髓微环境可通过细胞黏附分子介导白血病细胞耐药和免疫逃逸。这些黏附分子可作为新的作用靶点，通过降低其表达水平和功能，有望打破白血病耐药机制。
目的：观察重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony stimulating factor，rhG-CSF)对急性白血病WEHI-3细胞趋化因子受体4表达水平和趋化性的影响，以及在小鼠体内对骨髓基质细胞衍生因子1和外周血Treg细胞的作用。
方法：①将急性白血病细胞株WEHI-3与rhG-CSF共同孵育6，12，18，24 h后，用流式细胞术检测趋化因子受体4表达水平，微孔细胞转移实验检测其迁移能力；②健康Balb/C小鼠给予rhG-CSF皮下注射，ELISA法检测骨髓及外周血中基质细胞衍生因子1水平，流式细胞术检测脾脏及外周血Treg细胞比例。
结果与结论：①rhG-CSF作用后WEHI-3细胞表面趋化因子受体4的表达水平明显下降(P < 0.05)，细胞对基质细胞衍生因子1的趋化性显著降低(P < 0.05)；②健康小鼠应用rhG-CSF处理后，骨髓中基质细胞衍生因子1水平较生理盐水组明显降低(P < 0.05)，外周血及骨髓Treg细胞比例显著升高(P < 0.05)；③结果表明，rhG-CSF可以下调白血病细胞表面趋化因子受体4的表达，降低骨髓中基质细胞衍生因子1水平，并可动员Treg细胞进入外周血，从而打破骨髓微环境介导的免疫逃逸和耐药，改善白血病的免疫治疗效果。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0001-8764-4033(王瑾)

关键词: 粒细胞集落刺激因子, 基质细胞衍生因子1, 趋化因子受体4, Treg, 骨髓微环境, 免疫逃逸, 陕西省自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: The bone marrow microenvironment can mediate drug resistance and immune escape of leukemia cells through cell adhesion molecules. These adhesion molecules as new targets can be expected to break the drug resistance mechanism of leukemia cells by reducing their expression levels and functions.
OBJECTIVE: To observe the effects of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (rhG-CSF) on CXC chemokine receptor 4 (CXCR4) expression and chemotaxis in acute leukemia cells, as well as the level of stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) in the bone marrow and peripheral blood CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺ Treg cells.
METHODS: (1) WEHI-3 cells were co-cultured with rhG-CSF for 6, 12, 18 and 24 hours, and the expression of CXCR4 was detected by flow cytometry. The cell migration was checked by Transwell assay. Healthy Balb/C mice were subcutaneously injected with rhG-CSF. The proportion of Treg cells in the peripheral blood and spleen was detected also by flow cytometry. ELISA was used to detect the level of SDF-1 in the bone marrow.
RESULTS AND CONCLUSION: rhG-CSF significantly reduced the CXCR4 expression on the WEHI-3 cell surface, as well as the chemotactic ability of SDF-1 (P < 0.05). The level of SDF-1 in the bone marrow of healthy mice treated with rhG-CSF was significantly lower than that of the control group (P < 0.05), and the proportion of Treg cells in the peripheral blood and spleen was significantly increased (P < 0.05). In conclusion, rhG-CSF can down-regulate CXCR4 expression on the surface of leukemia cells, reduce SDF-1 level in the bone marrow and mobilize the Treg cells into the peripheral blood. These changes might ultimately break the immune escape and drug resistance under the bone marrow microenvironment, thereby improving the effect of immunotherapy against leukemia.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Granulocyte Colony-Stimulating Factor, Chemokine CXCL12, Receptors, Chemokine, T-Lymphocytes, Regulatory, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

王瑾，牛奔，马肖容，张王刚. 粒细胞刺激因子对白血病细胞趋化因子受体4表达及趋化能力和骨髓微环境的影响[J]. 中国组织工程研究, 2018, 22(33): 5268-5273.

Wang Jin, Niu Ben, Ma Xiao-rong, Zhang Wang-gang. Effects of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor on CXC chemokine receptor 4 expression and chemotaxis in bone marrow microenvironment[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2018, 22(33): 5268-5273.

图/表（结果） 1

2.1 rhG-CSF对WEHI-3细胞表面CXCR4表达的影响 二者共同孵育6 h时，实验组WEHI-3细胞CXCR4的表达率为(45.27±3.27)%，对照组为(49.13±3.20)%，差异有显著性意义(P < 0.05)。共同孵育12 h时，实验组WEHI-3细胞CXCR4的表达率为(37.82±4.51)%，对照组为(50.81±2.24)%，差异有显著性意义(P < 0.05)。共同孵育18 h时，实验组WEHI-3细胞的CXCR4表达量为(24.11±2.90)%，而对照组为(48.83±3.85)%，差异有显著性意义(P < 0.05)。共同孵育24 h时，实验组CXCR4的表达率为(23.10± 3.73)%，对照组为(47.04±3.81)%，差异有显著性意义(P < 0.05)。对照组WEHI-3细胞培养前后CXCR4表达无明显变化(P > 0.05)。

如图1所示，当WEHI-3细胞与rhG-CSF共同孵育6，12，18，24 h时，与同时间点对照组相比，CXCR4的表达量均明显下降(P < 0.05)。随孵育时间的延长呈下降趋势，但是共同培养18 h与24 h相比二者CXCR4表达量差异无显著性意义(P > 0.05)，CXCR4表达量基本稳定，不再明显下降。

2.2 rhG-CSF对WEHI-3细胞趋化能力的影响 对迁移至下室的WEHI-3细胞行结晶紫染色，如图2A-C所示，对照组未经rhG-CSF处理的WEHI-3细胞可在SDF-1α趋化因子的驱动下正常迁移至下室，空白组细胞在无SDF-1α作用下只有极少量细胞迁移至下室，而实验组经rhG-CSF处理后迁移至下室的WEHI-3细胞较对照组明显减少。

倒置显微镜下细胞计数结果如图2D所示，实验组WEHI-3细胞迁移至下室细胞数显著低于对照组，二者差异有显著性意义(P < 0.05)，提示WEHI-3细胞与rhG-CSF共培养18 h后对SDF-1α趋化迁移能力显著下降(P < 0.05)。

2.3 rhG-CSF对小鼠外周血Treg细胞比例的影响 如图3所示，rhG-CSF组Balb/C小鼠经过rhG-CSF处理后，外周血CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺细胞占CD4⁺细胞比例为(6.64±1.60)%，而生理盐水组小鼠外周血中CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺细胞占CD4⁺细胞比例为(2.96±0.29)%。rhG-CSF组小鼠外周血Treg细胞比例显著高于生理盐水组(P < 0.05)。

rhG-CSF组小鼠经过rhG-CSF处理后，脾脏CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺细胞占CD4⁺细胞比例为(14.21±0.86)%，而生理盐水组小鼠脾脏CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺细胞占CD4⁺细胞比例为(6.28±1.13)%。rhG-CSF组小鼠脾脏Treg细胞比例显著高于生理盐水组(P < 0.05)。

2.4 rhG-CSF对小鼠骨髓SDF-1α水平的影响 如图4所示，rhG-CSF组小鼠骨髓腔冲洗液离心后，上清液中SDF-1α水平为(3.47±1.43) μg/L，而生理盐水组SDF-1α水平为(8.87±0.24) μg/L，两组间差异有显著性意义(P < 0.05)，rhG-CSF组较生理盐水组显著降低。而rhG-CSF组小鼠外周血血清SDF-1α水平与生理盐水组相比，二者间差异无显著性意义[rhG-CSF组(2.60±1.60) μg/L；生理盐水组(2.48±1.01) μg/L，P > 0.05]，提示rhG-CSF处理可导致健康Balb/C小鼠骨髓中SDF-1α水平显著下降，而对外周血SDF-1α水平无明显影响。

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引言

急性白血病是临床上常见的血液系统恶性肿瘤，其预后差、死亡率高，常规化疗的总体疗效有限。免疫治疗理论上有希望彻底清除微小残留病灶、延长缓解期和预防复发，但多种免疫逃逸机制使治疗效果目前尚不尽人意。骨髓微环境中存在多种介导耐药的黏附分子及细胞因子，可与白血病细胞相互作用，逃避化疗药物及免疫细胞杀伤^[1]，其中基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1，SDF-1)/趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4，CXCR4)生物轴以及调节性T细胞(Treg)在这一过程中发挥了重要作用^[2]。表达CXCR4的白血病细胞和Treg细胞在骨髓基质细胞分泌的SDF-1趋化作用下向髓内迁移、浸润、黏附，形成微小残留病灶和免疫抑制微环境，并藏匿于此而抵抗化疗药物及免疫细胞杀伤^[3-5]，形成黏附分子介导的耐药(cell adhension mediated drug-resistance，CAM-DR)。基于此，SDF-1/CXCR4轴可望作为白血病治疗的作用靶点，通过削弱或阻断二者之间的结合作用，使骨髓中的白血病细胞和(或)Treg细胞脱离周围基质细胞的黏附，被动员到外周血中而易与药物或免疫效应细胞接触，从而打破骨髓微环境介导的免疫逃逸和耐药机制^[6-7]，改善免疫治疗的效果。

实验观察了重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony stimulating factor，rhG-CSF)在体外对急性白血病细胞表面CXCR4表达水平及细胞趋化能力的影响，以及在小鼠体内对骨髓SDF-1/CXCR4轴和Treg细胞的作用。通过研究该处理方式对骨髓微环境中黏附分子的作用，探讨其作为白血病治疗靶点的可行性，为进一步实验研究提供数据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 细胞水平体外观察实验及随机对照动物实验。

1.2 时间及地点 实验于2013年6月至2016年1月在西安交通大学医学院中心实验室及动物实验中心完成。

1.3 材料

1.3.1 实验试剂 rhG-CSF(深圳海鹏公司)；CXCR4-PE(ebioscience公司)；CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞检测试剂盒(ebioscience公司)；小鼠SDF-1α/CXCL12 ELISA检测试剂盒(蓝图生物工程有限公司)；人基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)(Peprotech公司)；Transwell小室(5 μm)(Costa公司)；胎牛血清(HYCLON公司)；DMEM培养液(GIBCOBRL公司)。

1.3.2 实验动物及细胞株 WEHI-3细胞为小鼠急性粒单核细胞白血病细胞株，购自美国ATCC，由西安交通大学第二附属医院血液实验室冻存。SPF级Balb/C小鼠，雄性，4-8周龄，购买并饲养于西安交通大学医学院实验动物中心。

1.3.3 实验仪器设备 流式细胞仪(BD公司，美国)；二氧化碳培养箱(SHELD2M2300型，美国)；相差倒置显微镜(Olympus相差显微镜，日本)；超净工作台(SW-CJ-IF型，苏净集团)；台式低温离心机等。

1.4 实验方法

1.4.1 细胞复苏与传代培养 从液氮罐中取出细胞冻存管迅速放入37-40 ℃水浴中反复振荡，复苏细胞，使其内容物在1 min内完全融化；洗涤及适当稀释后接种入培养瓶，置于37 ℃、体积分数为5%CO₂培养箱中培养，每日镜下观察，待细胞长至80%-90%汇合时传代。传代时先弃去旧培养液，在培养瓶中加入0.25%胰蛋白酶2 mL，镜下观察到细胞脱离瓶壁时终止消化，加入培养液吹打成细胞悬液，离心洗涤后等量移入2个或3个新的培养瓶，传代两三次后进行实验。

1.4.2 WEHI-3细胞与rhG-CSF共孵育 取对数生长期WEHI-3细胞按1×10⁹ L^-1细胞浓度接种于6孔板中，实验组加入终质量浓度为100 μg/L的rhG-CSF与WEHI-3细胞共同培养，对照组加入等体积培养液，每组设3个复孔，置于37 ℃，体积分数为5%CO₂培养箱培养，分别于6，12，18，24 h 4个时间点提取细胞进行检测。

1.4.3 流式细胞术检测CXCR4表达 于上述各个目标时间点提取实验组和对照组WEHI-3细胞，离心、洗涤，制备成1×10⁹ L^-1细胞浓度的细胞悬液，各取200 μL，分别加入CXCR4-PE抗体及同型对照抗体各5 μL，4 ℃避光孵育30 min，PBS洗涤细胞3次，用400 μL PBS重悬，流式细胞仪检测。

1.4.4 体外微孔细胞迁移实验 实验分为3组：空白组、实验组及对照组。取对数生长期WEHI-3细胞，在含终质量浓度为100 μg/L rhG-CSF的培养液中培养18 h，收获细胞后离心、洗涤，调整为细胞浓度5×10⁹ L^-1的细胞悬液，接种于Transwell小室上室，下室加入含SDF-1α的DMEM培养液600 μL，记为实验组。对照组上室加入等量未用rhG-CSF处理的WEHI-3细胞悬液，下室加入含SDF-1α的DMEM培养液600 μL。空白组上室加入等量未经处理的WEHI-3细胞悬液，下室加入无血清DMEM培养液600 μL。每组设3个复孔。SDF-1α终质量浓度均为100 μg/L，趋化时间设定为4 h。在37 ℃、体积分数为5%CO₂、饱和湿度的条件下培养4 h后取出小室，用棉签轻轻擦去上室内的细胞，4%戊二醛固定5 min；加入0.1%结晶紫染色，室温30 min，PBS洗2遍，显微镜下观察拍照，每个小室随机选择5个10倍视野，取其平均值，作为每个小室迁移至下室的细胞个数，实验重复3次。

1.4.5 小鼠分组及rhG-CSF处理 Balb/C小鼠随机分为2组：rhG-CSF组和生理盐水组，每组10只。rhG-CSF组给予皮下注射rhG-CSF(100 μg/kg)，体积为100 μL，生理盐水组皮下注射生理盐水100 μL，均为1次/d，连续注射5 d。第6天眼球取血后断颈法处死，取外周血、脾脏及股骨、胫骨待测。

1.4.6 流式细胞术检测脾脏及外周血Treg细胞 常规制备小鼠脾细胞悬液，调整细胞浓度为1×10⁹ L^-1待用。小鼠眶后取外周血0.5 mL，肝素钠抗凝。脾细胞悬液及抗凝血均设检测管及同型对照管，分别加入CD4-APC、CD25-FITC(各2 μL/100 μL细胞悬液或抗凝血)，4 ℃避光孵育30 min，Flow cytometry Staining buffer洗涤，加入破膜剂1 mL，4 ℃孵育过夜，然后rhG-CSF组加入Foxp3-PE各2 μL，生理盐水组加入IgG2a-PE，4 ℃孵育30 min，PBS洗涤细胞2次，加入400 μL 10 g/L多聚甲醛固定，24 h内上机检测CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞在CD4⁺细胞中的比例。

1.4.7 骨髓SDF-1质量浓度检测 取小鼠股骨及胫骨，分别剪断两端，用1 mL PBS溶液反复冲洗骨髓腔，每个骨段固定冲洗3次，收集冲洗液，2 000 r/ min室温离心5 min，取上清。按照小鼠SDF-1α酶联免疫吸附实验检测试剂盒说明书操作。

1.5 主要观察指标 ①WEHI-3细胞在rhG-CSF作用前及作用6，12，18，24 h后CXCR4的表达水平；②rhG-CSF作用后WEHI-3细胞趋化能力的改变；③rhG-CSF作用后小鼠外周血Treg细胞比例的变化；④rhG-CSF作用后小鼠骨髓SDF-1α水平。

1.6 统计学分析 计量资料以x(_)±s表示。采用SPSS 19.0软件进行统计学分析，不同组间以非配对t 检验进行比较，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

骨髓微环境是体内容纳干细胞、调控造血的细胞微环境，其成分主要有基质细胞、细胞外基质及造血生长因子^[8]。SDF-1(亦称为CXCL12)是由骨髓基质细胞中的网状细胞分泌的趋化因子，属于CXC家族成员^[9]，有SDF-1α和SDF-1β两种形式，配体均为趋化因子受体CXCR4，主要表达于造血干/祖细胞，两者结合主要介导免疫、炎症反应和干/祖细胞的增殖、分化、迁移及归巢等作用^[10-12]。CXCR4在正常组织中表达量很低，但在多种实体瘤和血液肿瘤中高表达，包括食管癌^[13]、胃癌^[14]、结肠癌^[15]。在急性白血病尤其是急性淋巴细胞白血病以及急性髓系白血病FAB型中的M4、M5型白血病细胞表面，CXCR4有较高表达，是急性髓系白血病预后的重要指标^[16]。白血病患者体内显著升高的SDF-1/CXCR4轴表达水平可介导白血病细胞存活和增殖，影响白血病的发生发展^[17-20]。SDF-1还对表达CXCR4的免疫效应T细胞的迁移有浓度相关的双向作用。在适宜浓度下对T细胞产生吸引作用，而在较高浓度下对T细胞产生击退效应^[21]。故骨髓、胸腺这类存在高浓度SDF-1的器官内缺乏成熟T细胞广泛浸润，免疫治疗产生的效应CTL细胞难以接近并杀灭残存的白血病细胞，成为白血病耐药复发的根源。

既往研究结果显示，rhG-CSF能够下调正常骨髓内髓系细胞表面CXCR4表达水平^[22]，从而促进骨髓中造血干细胞迁移至外周血，用于造血干细胞移植。该研究中在6，12，18，24 h各个时间上检测的WEHI-3细胞表面CXCR4表达水平均明显降低，与以上结果一致。因此，尝试联合应用rhG-CSF或其他药物降低SDF-1/CXCR4轴的作用，可作为逆转白血病耐药的新思路。在临床工作中，预激方案化疗时应用rhG-CSF动员白血病细胞进入外周血中，被小剂量长疗程的化疗药物杀伤，在治疗复发/耐药白血病中取得较高缓解率^[23-24]。该研究中rhG-CSF与WEHI-3细胞作用不同时间段的设置，有利于后续肿瘤模型动物联合治疗时rhG-CSF最佳应用时机的选择。

CXCR4与SDF-1相互作用可促使细胞沿SDF-1浓度梯度做定向迁移，介导淋巴细胞归巢及肿瘤浸润转移等^[25]，而低表达CXCR4的CD34⁺细胞迁移能力降低^[26]。该研究中体外细胞迁移实验结果证实rhG-CSF可显著降低WEHI-3细胞的迁移能力，这至少部分与rhG-CSF下调WEHI-3细胞CXCR4的表达有关。至于rhG-CSF如何降低细胞表面CXCR4的表达，有研究结果显示，rhG-CSF与其特异性的rhG-CSF受体结合后促进转录抑制生长因子1(GIF-1)表达升高。CXCR4上游的基因序列可结合高表达的GIF-1而被抑制了转录，导致CXCR4 mRNA表达下调，胞内及胞外CXCR4蛋白水平明显减少^[27]。

现已证实CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg可通过产生白细胞介素10和转化生长因子β等抑制肿瘤患者的免疫效应T细胞^[28]，具有显著的免疫抑制效应，可能是阻碍免疫治疗的主要障碍^[29]。Zou等^[30]研究证实，骨髓是人体Treg细胞最重要的储备池。Treg细胞表面表达CXCR4，通过SDF-1/CXCR4信号介导而黏附、定植在骨髓内，导致骨髓中免疫抑制微环境形成。而rhG-CSF可动员骨髓中的Treg进入外周血^[31]，被化疗药物或抗CD25单抗杀伤^[32]。该研究中，经rhG-CSF处理的小鼠外周血及脾脏Treg细胞占CD4⁺细胞比例均显著升高，而其骨髓中SDF-1α水平显著降低。Treg细胞并不表达rhG-CSF受体，基于前述原理^[27]，理论上rhG-CSF不会下调Treg细胞上CXCR4表达水平。因此，rhG-CSF可能是通过降低骨髓SDF-1水平来削弱表达CXCR4的Treg细胞向骨髓迁移及黏附，从而使Treg细胞被动员进入外周血，更易于被清除，这可改善血液肿瘤患者骨髓免疫抑制状态，提高免疫治疗效果。

综上，研究证实rhG-CSF可以降低白血病细胞表面介导耐药机制的黏附分子CXCR4的表达，降低骨髓SDF-1水平，下调SDF-1/CXCR4生物轴的功能，促使骨髓中的Treg细胞进入外周血。这一措施理论上可打破免疫逃逸，促使白血病细胞进入外周血，有望改变骨髓的免疫抑制微环境，从而改善白血病免疫治疗的效果。因此，SDF-1/CXCR4生物轴是白血病治疗中潜在的新靶标。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

粒细胞刺激因子对白血病细胞趋化因子受体4表达及趋化能力和骨髓微环境的影响

Effects of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor on CXC chemokine receptor 4 expression and chemotaxis in bone marrow microenvironment

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