大豆异黄酮酊干预Ⅱ度烫伤模型小鼠创面的愈合

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.02.014

中国组织工程研究 ›› 2013, Vol. 17 ›› Issue (2): 264-269.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.02.014

• 皮肤粘膜组织构建 skin and mucosal tissue construction • 上一篇下一篇

大豆异黄酮酊干预Ⅱ度烫伤模型小鼠创面的愈合

张丽¹，陈娟²，苏卫升²，黄家君¹

1.重庆医科大学，药学院药理学教研室，重庆市生物化学与分子药理学重点实验室，重庆市 400016
2.重庆医科大学，生物医学工程学院，重庆市 400016

收稿日期:2012-05-19 修回日期:2012-06-20 出版日期:2013-01-08 发布日期:2013-01-08
通讯作者: 黄家君，男，副教授，重庆医科大学，药学院药理学教研室，重庆市生物化学与分子药理学重点实验室，重庆市 400016 Frank.huang1964@gmail.com
作者简介:张丽★，女，1985年生，山西省襄垣县人，汉族，2012年重庆医科大学毕业，硕士，主要从事肿瘤药理学等研究。 zhangshijli@163.com

Influence of soy isoflavone tincture on wound healing of deep partial-thickness scald in mice

Zhang Li¹, Chen Juan², Su Wei-sheng², Huang Jia-jun¹

1 Department of Pharmacology, School of Pharmaceutical Sciences, Chongqing Key Laboratory of Biochemistry and Molecular Pharmacology, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China
2 Department of Biomedical Engineering, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China

Received:2012-05-19 Revised:2012-06-20 Online:2013-01-08 Published:2013-01-08
Contact: Huang Jia-jun, Associate professor, Department of Pharmacology, School of Pharmaceutical Sciences, Chongqing Key Laboratory of Biochemistry and Molecular Pharmacology, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China Frank.huang1964@gmail.com
About author:Zhang Li★, Master, Department of Pharmacology, School of Pharmaceutical Sciences, Chongqing Key Laboratory of Biochemistry and Molecular Pharmacology, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China zhangshijli@163.com
Supported by:
Supported by: the Natural Science Foundation of Chongqing Science and Technology Committee, No. 2010BB5111

摘要/Abstract

摘要：

背景：雌激素具有促进创面愈合的作用，大豆异黄酮能与雌激素受体结合，具有明显的雌激素样效应。
目的：探索大豆异黄酮酊的制备、观察其对小鼠烫伤创面愈合的影响。
方法：用冷浸渍法制备大豆异黄酮酊，筛选最佳有效浓度。用昆明小鼠造Ⅱ度烫伤模型，随机分为6组。药物组分别应用0.100，0.361，1.000，3.610 g/L的大豆异黄酮酊局部涂抹；溶剂对照组应用体积分数75%乙醇局部涂抹；空白对照组不作任何处理。从第 3 天起，隔天记录创面面积、计算未愈合创面占原始创面的百分比，于造模后第 3，9，14 天取创面组织做病理切片，观察形态学改变和创面愈合情况。
结果与结论：大豆异黄酮酊的最佳效应浓度是3.61 g/mL。在创伤后第 5，7，9，11，13 天，大豆异黄酮酊组的未愈合创面占原始创面的百分比明显小于溶剂对照组和空白组(P < 0.05)。病理组织切片显示，第 9 天，大豆异黄酮酊组的成纤维细胞明显多于溶剂对照组和空白组，第 14 天，大豆异黄酮酊组的表皮生长情况比溶剂对照组和空白组好。表明以75%乙醇为溶剂制备大豆异黄酮酊是可行的； 3.61 g/L的大豆异黄酮酊对小鼠创面的愈合具有明显的促进用。

关键词: 组织构建, 皮肤组织构建, 大豆异黄酮酊, 创伤愈合, 烫伤模型, 小鼠, 省级基金, 组织构建图片文章

Abstract:

BACKGROUND: Estrogen has a role to promote wound healing, and combination of soy isoflavones and estrogen receptor presents an obvious estrogen-like effect.
OBJECTIVE: To explore the preparation of soy isoflavone tincture and to study its influence on wound healing in scalded mice.
METHODS : Soy isoflavone tincture was prepared by cold dipping and the most effective concentration was
screened. At the beginning of the experiment, all of the mice were used to prepare deep partial-thickness scald models and then randomly divided into soy isoflavone tincture (0.100, 0.361, 1.000, 3.610 g/L), solvent control (75% ethanol) and blank (without treatment) groups. From the 3rd day on, nonhealing rates of wound were assessed every other day. Simultaneously, the histological and morphological changes were observed and analyzed at days 3, 9, 14 after modeling.
RESULTS AND CONCLUSION: The most effective concentration of soybean isoflavone tincture was 3.61 g/L. On days 5, 7, 9, 11, 13 after injury, the nonhealing rate of wound in the soybean isoflavone tincture group was significantly less than that of the blank group (P < 0.05), as well as that of the solvent control group (P < 0.05). On day 9 post scalded, the histomorphology displayed that there were many more fibroblasts in the granulation tissue in the soy isoflavone tincture group than those of the blank group, also than those of the solvent control group. On day 14 post scalded, the histomorphology showed that the epithelial layer in the soy isoflavone tincture group was thicker than that of the other two groups. It is a viable method that soy isoflavone tincture is prepared in 75% ethanol solution, and its concentration of 3.61 g/L can significantly accelerate the wound healing in scalded mice by local application.

Key words: tissue construction, skin tissue construction, soy isoflavone tincture, wound healing, scald models, mice, provincial grants-supported paper, tissue construction photographs-containing paper

中图分类号:

R318

张丽，陈娟，苏卫升，黄家君. 大豆异黄酮酊干预Ⅱ度烫伤模型小鼠创面的愈合[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(2): 264-269.

Zhang Li, Chen Juan, Su Wei-sheng, Huang Jia-jun. Influence of soy isoflavone tincture on wound healing of deep partial-thickness scald in mice[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(2): 264-269.

图/表（结果） 6

2.1 实验动物数量分析实验选用昆明小鼠99只，分为2个实验，实验过程无脱失，全部进入结果分析。
2.2 最佳药物浓度筛选见表1。溶解于体积分数75%乙醇中、浓度为3.610 g/mL的大豆异黄酮酊组，与其他各组比较，未愈合创面占原始创面的百分比均差异有显著性意义(P < 0.05)。

2.3 药理作用研究
2.3.1 未愈合创面占原始创面的百分比通过对创面形成后第5，7，9，11，13天未愈合的创面所占原始面积的百分比进行统计分析，其结果见表2，药物组与溶剂对照组、空白组比较，未愈合创面占原始创面的百分比差异均有显著性意义(P < 0.05)。

2.3.2 组织病理学观察及创面愈合时间病理切片，用药后第9天，药物组的肉芽组织生长情况明显优于空白组，成纤维细胞明显多于空白组，见图2，3。

图2 用药组第9天肉芽组织生长情况(箭头指肉芽组织，苏木精-伊红染色，×100)
Figure 2 The growth condition of granulation tissue in the therapy group at 9 d (Hematoxylin-eosin staining, ×100)

图3 空白组第9天肉芽组织生长情况(箭头指肉芽组织，苏木精-伊红染色，×100)
Figure 3 The growth condition of granulation tissue in the blank group at 9 d (Hematoxylin-eosin staining, ×100)

用药后14 d，药物组表皮层生长较好，与空白组比较，表皮层较厚，已形成表皮钉脚，而空白组表皮正在生长，表皮层较薄，钉脚正在生长，见图4，5。

图4 用药组第13天肉芽组织生长情况(箭头指表皮生长因子，苏木精-伊红染色，×100)
Figure 4 The growth condition of granulation tissue in the therapy group at 13 d (Hematoxylin-eosin staining, ×100)

创面愈合天数，药物组为(16.36±0.82) d，溶剂对照组为(19.71±1.17) d，空白组为(22.88±1.69) d；药物组创面愈合时间明显较溶剂对照组及空白组提前(P < 0.05)。

图5 空白组第13天肉芽组织生长情况(箭头指表皮生长因子，苏木精-伊红染色，×100)
Figure 5 The growth condition of granulation tissue in the blank group at 13 d (Hematoxylin-eosin staining, ×100)

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引言

材料方法

设计：随机对照动物实验。

时间及地点：实验于2011年3月至2012年1月在重庆市生物化学与分子药理学重点实验室(生物安全的防护水平时是BSL-2；重庆市教委2000年批准的重庆市重点实验室)完成。

材料：

实验动物：4-6周龄清洁级雄性昆明种小鼠99只，体质量(20±2) g，重庆医科大学实验动物中心提供(许可证号：SCXK(渝)2007-0001)。

实验方法：

大豆异黄酮酊的制备：参照曹红等^[18]的实验方法，略加改进。以体积分数10%，20%，40%，60%，75%的乙醇及无水乙醇为溶剂，分别加入适量的大豆异黄酮，震动、搅拌30 min，静置24 h，倾出上清液，过滤即得大豆异黄酮酊；置4 ℃冰箱保存，备用。所得酊剂浓度值(g/L)等于(加入药物总量－未溶药物量－滤纸上残留药物量)+乙醇溶液体积。

创伤模型的建立：实验前24 h，用100 g/L硫化钠溶液将小鼠背部近尾侧脱毛。次日，小鼠腹腔注射5 g/L戊巴比妥钠溶液0.25 mL，待小鼠进入麻醉状态后，取出置于沸水中盛满水的小瓶(瓶底直径1.5 cm，面积约7 cm²)，擦干水分，用适当外力将瓶底挤压在小鼠背部近尾侧脱毛处约10 s，造成Ⅱ度烫伤模型^[19]，见图1。

最佳药物浓度筛选：取36只昆明小鼠随机分为6组，即药物Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、溶剂对照组及空白对照组，每组6只；药物组分别应用0.100，0.361，1.000，3.610 g/L的大豆异黄酮酊创面涂抹，1次/d，连续7 d；溶剂对照组应用体积分数75%乙醇创面涂抹，1次/d，连续7 d；空白对照组不作任何处理。实验期间，所有小鼠均正常进食，自然饮水。

药理作用研究：取63只昆明小鼠随机分为3组，即药物组、溶剂对照组及空白对照组，每组21只；药物组给予3.610 g/L的大豆异黄酮酊局部涂抹、溶剂对照组给予体积分数75%乙醇局部涂抹、空白对照组不作任何处理。实验期间，所有小鼠均正常进食，自然饮水。

观察方法：记录创面面积及计算未愈合的创面占原始创面面积的百分比^[20]。于烫伤后3，5，7，9，11，13 d观察创面，用带格子的透明胶片记录创面面积；以第3天记录的面积为原始创面面积(烫伤3 d之内有水泡出现，影响面积测定；3 d后水泡消退)，计算未愈合的创面占原始创面的百分比。并于造模后的第3，9，14天各组随机处死3只小鼠，取创面组织，固定于40 g/L多聚甲醛中，常规石蜡包埋，纵行切片，片厚5 μm ，行常规苏木精-伊红染色^[21]，对创面组织进行形态学观察^[22]。

主要观察指标：创面愈合率、创面愈合时间、组织病理学分析、细胞增殖情况。

统计学分析：计量资料数据以x(_)±s表示，用SPSS 17.0统计软件进行t 检验，以P < 0.05为差异有显著性意义。

大豆异黄酮酊干预Ⅱ度烫伤模型小鼠创面的愈合

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