舒芬太尼对神经干细胞移植治疗脊髓损伤的影响

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.25.019

摘要/Abstract

摘要：

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文题释义：
脊髓损伤：是指由于外界直接或间接因素导致脊髓损伤，在损害的相应节段出现各种运动、感觉和括约肌功能障碍，肌张力异常及病理反射等相应改变。脊髓损伤的程度和临床表现取决于原发性损伤的部位和性质。脊髓损伤是脊柱损伤最严重的并发症，往往导致损伤节段以下肢体严重的功能障碍。
舒芬太尼：是一种强效的阿片类镇痛药，同时也是一种特异性μ-阿片受体激动剂, 对μ-受体的亲合力比芬太尼强7-10倍。舒芬太尼的镇痛效果比芬太尼强好几倍，而且有良好的血液动力学稳定性，可同时保证足够的心肌氧供应，对中枢神经系统亦有保护作用。

摘要
背景：有研究显示舒芬太尼联合神经干细胞移植联合治疗可以提高新生的神经纤维数量。
目的：观察舒芬太尼干预对神经干细胞移植治疗脊髓损伤大鼠后肢功能恢复的影响。
方法：①将100只成年雌性SD大鼠随机分为5组：正常对照组、模型组、舒芬太尼组、神经干细胞移植组和舒芬太尼+神经干细胞移植联合治疗组，每组20只。正常对照组大鼠不实施任何干预，其他4组参照改良的Allen’s重物打击法建立大鼠脊髓损伤模型；②造模6 h后，联合治疗组大鼠蛛网膜下腔注射10 μL细胞浓度为1×10¹⁰ L^-¹的神经干细胞悬液，腹腔注射100 μL舒芬太尼(150 μg/kg)；神经干细胞移植组大鼠蛛网膜下腔注射10 μL细胞浓度为1×10¹⁰ L^-¹的神经干细胞悬液，腹腔注射100 μL生理盐水；舒芬太尼组蛛网膜下腔注射10 μL的神经干细胞培养液，腹腔注射100 μL舒芬太尼(150 μg/kg)；模型组大鼠蛛网膜下腔和腹腔各注射10 μL神经干细胞培养液和100 μL生理盐水；③造模后72 h，RT-PCR检测脊髓损伤区周围AQP4、MMP9 mRNA的表达，TUNEL法检测细胞凋亡情况；④造模后第1，3天和第1，2，3，4 周通过BBB评分、斜板实验进行运动功能评定；⑤造模后4周取材行苏木精-伊红染色，荧光显微镜观测CM-Dil标记的神经干细胞存活情况，荧光金逆行追踪观察脊髓神经纤维的再生与分布情况。
结果与结论：①造模后72 h，与模型组、舒芬太尼组、神经干细胞移植组比较，联合治疗组脊髓损伤区AQP4、MMP9 mRNA表达和细胞凋亡率显著降低(P < 0.05)；②造模2周后，联合治疗组运动功能评分优于舒芬太尼组和神经干细胞移植组(P < 0.05)，舒芬太尼组和神经干细胞移植组优于模型组(P < 0.05)；③造模后4周，模型组可见脊髓空洞形成，舒芬太尼组和神经干细胞移植组损伤区脊髓空洞较小，联合治疗组脊髓空洞几乎消失；④联合治疗组CM-Dil 阳性细胞最多，神经干细胞移植组较多，舒芬太尼组和模型组未见阳性细胞；⑤联合治疗组荧光金阳性神经纤维数最多，舒芬太尼组和神经干细胞移植组次之，模型组最少；⑥结果表明，舒芬太尼通过促进移植神经干细胞的增殖，减少大鼠脊髓损伤区AQP4、MMP9表达和局部神经细胞凋亡，进而改善后肢运动功能。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0001-7229-144X(燕厚永)

关键词: 干细胞, 移植, 脊髓损伤, 神经干细胞, 舒芬太尼, 运动功能, 大鼠

Abstract:

BACKGROUND: Studies have shown that the combined use of sufentanil and neural stem cell (NSC) transplantation can increase the number of newborn nerve fibers.
OBJECTIVE: To investigate the effect of sufentanil on the hind limb function of rats with spinal cord injury after neural stem cell transplantation.
METHODS: (1) Eighty adult female Sprague-Dawley rats were used to build spine cord injury model according to the modified Allen’s method and divided into model group, sufentanil group, NSCs transplantation group and sufentanil combined with NSCs transplantation group (combined group). Extra 20 adult female Sprague-Dawley rats were not conducted any treatment as normal control group. (2) After 6 days of modeling, the model rats were subjected to subarachnoid injection of 10 μL of NSC culture medium and intraperitoneal injection of 100 μL of saline in the model group; subarachnoid injection of 10 μL of NSC culture medium and intraperitoneal injection of 100 μL of sufentanil(150 μg/kg) in the sufentanil group; subarachnoid injection of 10 μL of 1×10¹⁰/L NSCs suspension and intraperitoneal injection of 100 μL of saline in the NSCs transplantation group; and subarachnoid injection of 10 μL of 1×10¹⁰/L NSCs suspension and intraperitoneal injection of 100 μL of sufentanil (150 μg/kg) in the combined group. (3) After 72 hours of modeling, the AQP4 and MMP9 gene expression levels were detected by RT-PCR, and the cell apoptosis changes around the spine cord injury area were determined with TUNEL staining method. (4) The motor functions of rats were tested by Basso, Beattie and Bresnahan score and inclined plane test after 1, 3 days and 1, 2, 3 and 4 weeks of modeling. (5) After 4 weeks of modeling, the histopatholgical changes in the area of spine cord injury were observed by hematoxylin-eosin staining method. The survival changes of NSCs labeled by CM-Dil were determined by fluorescence microscope. The regenerations and distributions of spinal nerve fibers were observed by fluorescein gold retrograde tagging.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) After 72 hours of modeling, the AQP4 and MMP9 gene expression levels as well as the cell apoptotic rate in the combined group were significantly lower than those in the model, sufentanil and NSCs transplantation groups (P < 0.05). (2) After 2 weeks of modeling, the combined treatment significantly improved the hind limb motor functions of rats compared with the sufentanil and NSCs transplantation groups (P < 0.05), and the recovery of motor function was better in the sufentanil and NSCs transplantation groups than in the model group (P < 0.05). (3) After 4 weeks of modeling, the results of hematoxylin-eosin staining manifested that the spinal cord tissues lost and the magnified syringomyelias occurred in the model group. The syringomyelias in the sufentanil and NSCs transplantation groups were significantly smaller than that in the model group, and the syringomyelias almost disappeared in the combined group. (4) The number of positive cells was the most in the combined group, more in the NSCs transplantation group, but there were no positive cells labeled by CM-Dil in the sufentanil and negative control groups. (5) The number of positive neural fibers in the combined group was the highest followed by the sufentanil and NSCs transplantation groups, and the number of positive neural fibers in negative control group was the lowest. To conclude, sufentanil can improve the recovery of hind limb motor function by reducing the AQP4 and MMP9 expression levels in the injury area, promoting the survival of transplanted NSCs, and decreasing the local NSCs apoptosis after spinal cord injury.

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Key words: Spinal Cord Injuries, Neural Stem Cells, Stem Cell Transplantation, Sufentanil, Tissue Engineering

中图分类号:

R394.2

燕厚永，宋冷梅，刘越，姚光，张如意. 舒芬太尼对神经干细胞移植治疗脊髓损伤的影响[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(25): 4050-4056.

Yan Hou-yong, Song Leng-mei, Liu Yue, Yao Guang, Zhang Ru-yi. Role of sufentanil in neural stem cells transplantation for spinal cord injury[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(25): 4050-4056.

图/表（结果） 5

2.1 神经干细胞形态 在细胞培养初期神经干细胞呈分散状态分布，六七天后在培养液中可见神经干细胞球体，细胞代谢非常旺盛。培养9-12 d后，神经干细胞呈神经球状，大小不均一，球体周边细胞清楚可辨，球体中间细胞密集，细胞界限不清，见图1。

2.2 AQP4、MMP9基因的表达 造模72 h后，正常对照组AQP4、MMP9的mRNA相对表达水平显著低于其他各个实验组；与模型组相比，舒芬太尼组和神经干细胞移植组AQP4、MMP9的mRNA相对表达水平显著降低；舒芬太尼+神经干细胞移植联合治疗组AQP4、MMP9的mRNA相对表达水平显著低于舒芬太尼组和神经干细胞移植组，见表1。

2.3 各组细胞凋亡情况 模型组中可见大量的凋亡细胞，细胞凋亡率为(39.56±5.06)%，舒芬太尼组和神经干细胞移植组细胞凋亡率为(23.59±3.26)%，(22.97±3.05)%，联合治疗组细胞凋亡率最少，为(10.13±2.41)%。联合治疗组大鼠脊髓损伤部位细胞凋亡率显著低于舒芬太尼组和神经干细胞移植组，见图2。

2.4 各组运动功能评定结果 由表2可见，造模后前2周，BBB评分和斜板实验评分在各个实验组间差异无显著性意义。但是在造模2周之后观察到各组之间差异逐渐增大。联合治疗组BBB评分和斜板实验评分均显著高于模型组、舒芬太尼组和神经干细胞移植组(P < 0.05)，而舒芬太尼组和神经干细胞移植组则显著高于模型组(P < 0.05)。

2.5 苏木精-伊红染色结果 在造模4周后，模型组脊髓损伤部位组织结构紊乱，组织发生明显的断裂并形成脊髓空洞。舒芬太尼组和神经干细胞移植组中可见较为典型的神经细胞样形态改变，脊髓空洞明显小于模型组。联合治疗组可见非常典型的神经细胞样形态出现，且并未观察到脊髓空洞，见图3。

2.6 脊髓损伤部位CM-Dil阳性细胞的存活和分布 模型组和舒芬太尼组并未观察到CM-Dil阳性细胞存在；神经干细胞移植组和联合治疗组有较多的CM-Dil阳性细胞，见图4。

2.7 脊髓损伤区域内荧光金阳性神经纤维数 模型组损伤区域荧光金阳性神经纤维数最少，与模型组相比，舒芬太尼组和神经干细胞移植组荧光金阳性神经纤维数显著增多，联合治疗组的荧光金阳性神经纤维数最多，见图5。

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引言

脊髓损伤是导致患者残疾的重要病因之一，脊髓损伤会带来一系列的生理病理性变化，如神经细胞坏死凋亡、炎症反应等等^[1-2]。神经干细胞具有高度增殖和自我更新能力，且有迁移功能以及与正常脑组织良好融合的特性，已被广泛应用于帕金森、亨廷顿、缺血性脑卒中、阿尔茨海默病等神经系统疾病的治疗中，并取得了一定程度的进展^[3-15]。大量实验数据显示神经干细胞有很好的可塑性，并且体外扩增能力较强^[9-11]。同时研究发现，在脊髓损伤区植入的神经干细胞能够诱导损伤区的微血管再生，释放生长因子，使细胞定向分化为神经样细胞，促进轴突的再形成，使神经损伤得到再生及重建^[12-15]。神经干细胞治疗神经系统疾病的主要作用机制是神经干细胞可分化为神经元细胞以及分泌神经营养因子等，尽管如此神经干细胞移植治疗效果仍非常有限。由于受损伤部位微环境的影响，神经干细胞在脊髓损伤部位存活和分化受到了严重的挑战^[15]。

舒芬太尼是临床上常用的镇静镇痛类药物，已经被广泛应用于脊柱损伤手术麻醉和康复治疗^[16-17]。此外研究显示舒芬太尼可以抑制心肌细胞、肝脏细胞等组织器官细胞的凋亡^[18-19]，其对神经细胞凋亡的抑制作用尤为突出^[20]。故推测舒芬太尼可能会抑制脊髓损伤的神经元凋亡，但其是否对神经干细胞移植效果有所助益尚无相关研究。实验旨在探讨舒芬太尼对神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的影响，以期为神经干细胞移植治疗脊髓损伤提供支持和借鉴。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 随机对照动物实验。

1.2 时间及地点 实验于2014年3月至2016年1月在山东医科大学实验动物中心完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 健康成年雌性大鼠100只，体质量250-300 g，由山东医科大学实验动物中心提供，室温25 ℃，湿度50%-80%，SPF环境下自由饮水和采食。

1.3.2 主要细胞、试剂和仪器 冻存原代神经干细胞(中国医学科学院)。BCA蛋白浓度测试试剂盒(增强型)、5×SDS蛋白上样缓冲液、20×TBS缓冲液(南京建成生物有限公司)；胎牛血清和PBS(Hyclone公司)；Trizol试剂盒(Invitrogen公司)；Real-time PCR仪(Bio-Rad公司)；聚合酶链式反应的引物采用Primer 5.0软件设计，由克劳宁(北京)生物科技有限公司合成；超净工作台(艺斯高上海贸易有限公司)；台式离心机(德国SIGMA有限公司)；ht2型Biocell酶标仪(郑州博赛生物公司)；-70 ℃冰箱(日本SANYO公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 建立脊髓损伤大鼠模型及实验分组干预 将100只成年雌性SD大鼠随机分为5组：正常对照组、模型组、舒芬太尼组、神经干细胞移植组和舒芬太尼+神经干细胞移植联合组，每组20只。正常对照组大鼠不实施任何干预，其他4组参照改良的Allen’s重物打击法建立大鼠脊髓损伤模型。大鼠麻醉成功后，小心切除T₉_-₁₁棘突和椎板，并以T₁₀脊髓段为中心显露出半径约2 mm的圆形区域。将长方体塑料垫片(3 mm×2 mm×1 mm)按大鼠脊髓背侧生理曲度屈曲预弯后，小心放置于T₁₀处脊髓硬脊膜外，将特制的套筒嘴垂直轻放于塑料垫片正中心上，用自制的改良Allen氏打击装置，以脊髓后正中血管为中心，使5 g打击棒经套筒自5 cm高度自由落体下落撞击塑料垫片，观察到鼠尾痉挛性摆动，双下肢及躯体回缩扑动，表示建模成功。逐层关闭切口，敷料覆盖伤口并固定。

将冻存的原代神经干细胞置于60 ℃恒温水浴箱，30 s内进行快速复苏。细胞融化后迅速转入EP管并加入DMEM培养基，小心重复吹打细胞使其均匀分布，随后离心弃上清液，用DMEM完全培养基调整细胞浓度为1×10⁹ L^-¹，放入细胞培养箱进行培养，待细胞汇合度达80%以上时，胰蛋白酶消化两三分钟后终止消化，离心弃上清，重悬细胞，调整细胞浓度为2×10¹⁰ L^-¹，再次低速离心使神经干细胞形成较为松散的团状，弃去上清液后加入1 mL细胞悬液，小心吹打使细胞均匀分布，将细胞浓度调整为8×10⁸ L^-¹，然后向细胞悬液中加入5 μL CM-DiL进行标记，置于培养箱中孵育25-30 min，离心弃上清，PBS重悬，重复标记2次，显微镜下观察可见标记的神经干细胞显现出鲜艳的橘红色，且颜色均匀，备用。

造模6 h后，联合组大鼠蛛网膜下腔注射10 μL细胞浓度为1×10¹⁰ L^-¹的神经干细胞悬液，腹腔注射100 μL舒芬太尼(150 μg/kg)；神经干细胞移植组大鼠蛛网膜下腔注射10 μL 细胞浓度为1×10¹⁰ L^-¹的神经干细胞悬液，腹腔注射100 μL生理盐水；舒芬太尼组蛛网膜下腔注射10 μL的神经干细胞培养液，腹腔注射100 μL舒芬太尼(150 μg/kg)；模型组大鼠蛛网膜下腔和腹腔各注射10 μL神经干细胞培养液和100 μL生理盐水。

1.4.2 RT-PCR检测脊髓损伤区周围AQP4、MMP9基因的表达 每组取3只大鼠。造模72 h后，麻醉后处死大鼠，小心剥离大鼠脊髓损伤区域周围组织采用RT-PCR测定AQP4和MMP9的mRNA表达水平。通过Primer Primer 5.0软件设计引物，AQP4上游引物：5’-CCA GCT GTG ATT CCA AAA CGG AC-3’，下游引物：5’-TCT AGT CAT ACT GAA GAC AAT ACC TC-3’，扩增片段长度为305 bp；MMP9上游引物：5’-GGT TTC TGT CCA GAC CAA GG-3’，下游引物：5’-TGC AAA GGA TTG TCA TCT GGA-3’，扩增片段长度为379 bp；内参照GAPDH上游引物：5’-GAG GAC CAG GTT GTC TCC TG-3’，下游引物：5’-GGA TGG AAT TGT GAG GGA GA-3’，扩增片段长度为300 bp。提取各组大鼠脊髓损伤区域周围组织的总RNA，运用实时聚合酶链式反应测定基因相对表达水平。采用2^-^??Ct分析法表示AQP4和MMP9基因相对表达水平。

1.4.3 TUNEL法检测细胞凋亡情况 每组取3只大鼠。造模72 h后，麻醉后处死大鼠，取其脊髓损伤区域组织，每只大鼠制备5张切片，石蜡切片常规脱蜡至水，滴加1滴复合消化液(蛋白酶K与胃蛋白酶)，25 ℃孵化20 min，洗涤后滴加TUNEL标记反应混合液50 μL，在湿盒中37 ℃孵育1 h，滴加POD2转化液50 μL，湿盒37 ℃孵育30 min，PBS冲洗3次，DAB显色，苏木精-伊红复染，显微镜下可见棕黄色细胞核的细胞为凋亡细胞，计算细胞凋亡率。

1.4.4 运动功能评定 每组取3只大鼠。造模后第1，3天和第1，2，3，4周通过BBB评分、斜板实验评定大鼠后肢运动功能。①BBB评分：将大鼠后肢运动功能分为22个等级，全瘫为0分，完全正常为21分，评分采用双盲法，均于晚上9点进行，每只大鼠测3次，取其平均值；②斜板实验：把大鼠放置在测试面带有浅沟槽的胶皮特制的斜板上，测量大鼠维持姿势的能力、抓握能力和在斜板上至少停留5 s的最大角度。每只大鼠测量3次，记录最高分数。正常大鼠在斜板上停留的最大角度为80°。采取双盲法进行相关评分。

1.4.5 苏木精-伊红染色观察病理变化 每组取3只大鼠。造模4周后，麻醉处死大鼠并取出脊髓损伤区域组织，用体积分数为10%的甲醛溶液固定，使用梯度乙醇作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水分，再将组织块置于二甲苯中透明，随后进行浸蜡包埋。将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成5-8 μm厚薄片。将薄片烫平，贴到载玻片上，45 ℃恒温烘干。脱蜡后，进行苏木精-伊红染色。染色后的切片经纯乙醇脱水，再经二甲苯使切片透明。将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。待树胶干燥后，荧光显微镜下观察各组大鼠脊髓损伤组织病理变化。

1.4.6 荧光显微镜观测CM-Dil标记的神经干细胞存活及分布 每组取3只大鼠。造模4周后，采集大鼠脊髓损伤区域组织，制作冰冻切片并进行4’，6-二脒基-2苯基吲哚染色，每张冷冻切片随机选取5个视野进行拍照记录。假设每张照片的总亮度为1，每张照片选取一个光亮度点，利用ACDsee5.0软件确定其坐标值。随机选取5个视野，计数CM-Dil阳性细胞数及细胞总数，计算标记率。

1.4.7 荧光金逆行追踪观察脊髓神经纤维的再生与分布情况 每组取3只大鼠。各组动物于造模4周后进行荧光金逆行示踪标记，以评价舒芬太尼联合神经干细胞移植对脊髓损伤神经再生的影响。麻醉大鼠之后，在脊髓远端距损伤区3 mm处注射5%荧光金水溶液0.5 μL进行逆行标记，关闭伤口，标记后大鼠再饲养7 d，经左心室先后灌注血管冲洗液和固定液，取大鼠T₇_-₁₁段脊髓，固定液固定，30%蔗糖浸泡至下沉，冷冻包埋组织，制备30 μm的横切面切片以及20 μm纵切面切片，PBS漂洗后甘油封固，荧光显微镜观察荧光金在脊髓神经轴突中的走向，计数荧光金阳性标记的神经纤维数目。

1.5 主要观察指标 ①RT-PCR检测脊髓损伤区周围AQP4、MMP9基因的表达；②TUNEL法检测细胞凋亡情况；③运动功能；④苏木精-伊红染色观察病理变化；⑤荧光显微镜观测CM-Dil标记的神经干细胞存活及分布；⑥荧光金逆行追踪观察脊髓神经纤维的再生与分布情况。

1.6 统计学分析 采用SPSS 11.0软件包，所有数据的组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

近年来，神经干细胞移植治疗脊髓损伤的研究日渐增多。Fujimeto等^[21]研究发现将神经干细胞移植入脊髓损伤模型大鼠后，神经干细胞可以分化为神经元细胞并显著改善大鼠的后肢运动能力。Lundberg等^[22]通过移植神经干细胞也得到了较好的脊髓损伤恢复治疗效果。然而，单纯神经干细胞移植的治疗效果并不令人十分满意。因此，近年来利用生物制剂、支架结构、基因转染、细胞共培养等生物学技术联合神经干细胞移植提高疗效的研究较多^[23-25]。

舒芬太尼是临床上常用的镇静镇痛药物，研究显示舒芬太尼具有较好的神经细胞保护作用，其可抑制局灶性脑缺血再灌注引起的神经细胞凋亡^[26]。实验通过舒芬太尼联合神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤，结果显示联合治疗干预可以显著提高脊髓损伤大鼠的后肢运动功能，改善脊髓损伤区域的组织结构，该作用显著高于单纯舒芬太尼治疗和神经干细胞移植治疗。此外实验结果表明，舒芬太尼联合神经干细胞移植治疗可以明显提高损伤区域内的神经干细胞数量。这表明舒芬太尼可以通过改善神经干细胞的存活和分布，以提高神经干细胞移植的疗效。已有多篇报道神经干细胞联合药物治疗能够有效提高大鼠脊髓损伤的治疗效果^[27-29]。

神经干细胞移植可以显著治疗脊髓损伤，其可分化为神经细胞，弥补脊髓损伤引起的神经元凋亡和缺失，形成神经突触并实现神经回路的重构；神经干细胞可以分化成为少突胶质细胞，促进神经纤维新生，恢复神经纤维的完整性；除此之外，神经干细胞在迁移至脊髓损伤部位之后，可以分泌多种神经营养因子，改善因损伤引起的微环境障碍，并可以分泌细胞外基质，填充因损伤带来的空洞，为神经元的再生提供支持^[30-33]。实验结果显示，舒芬太尼与神经干细胞移植明显降低了神经细胞凋亡，减少了脊髓损伤空洞，增加了损伤区域内的神经纤维数目。

脊髓损伤往往会引起血管源性水肿，后者会加剧神经细胞因缺血、缺氧造成的细胞凋亡，故缓解脊髓水肿不容忽视。AQP4对水分子有高度的通透性，该分子广泛存在于中枢神经系统中，介导水分子在细胞和基质之间的转运，从而为损伤区域内的细胞正常代谢提供一个稳定的内环境，因此AQP4也是组织水肿的标志分子。MMP9可能会影响血管再生和炎症反应，破坏血脑屏障。研究显示抑制MMP9的高表达可缓解中枢神经系统水肿^[34-35]。董宝铁等^[36]研究发现大鼠脊髓损伤区域MMP9基因表达水平显著升高。实验结果显示，联合治疗组大鼠脊髓损伤周围组织中AQP4和MMP9 mRNA表达水平降低，提示舒芬太尼联合神经干细胞移植可以缓解组织水肿，保障细胞的正常代谢，实验结果显示造模后72 h，与模型组、舒芬太尼组、神经干细胞移植组比较，联合治疗组脊髓损伤区AQP4、MMP9 mRNA表达和细胞凋亡率显著降低，联合治疗组运动功能评分优于舒芬太尼组和神经干细胞移植组；造模后4周，模型组可见脊髓空洞形成，舒芬太尼组和神经干细胞移植组损伤区脊髓空洞较小，联合治疗组脊髓空洞几乎消失；联合治疗组CM-Dil阳性细胞最多，神经干细胞移植组较多，舒芬太尼组和模型组未见阳性细胞；联合治疗组荧光金阳性神经纤维数最多，舒芬太尼组和神经干细胞移植组次之，模型组最少；舒芬太尼通过促进移植神经干细胞的增殖，减少大鼠脊髓损伤区AQP4、MMP9表达和局部神经细胞凋亡，进而改善后肢运动功能。

综上所述，舒芬太尼联合神经干细胞移植联合治疗可以提高新生的神经纤维数量，降低神经元凋亡，改善下肢运动功能和脊髓部位的组织结构，并可以通过降低AQP4和MMP9的表达水平缓解组织水肿。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程