羧化壳聚糖止血及其生物安全性评价

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2017.22.020

中国组织工程研究 ›› 2017, Vol. 21 ›› Issue (22): 3561-3566.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.22.020

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羧化壳聚糖止血及其生物安全性评价

刘霞，赵桂芝，王昱霁，蔡婷婷，朱婉萍

浙江省中医药研究院，浙江省杭州市 310007

收稿日期:2018-04-16 出版日期:2017-08-08 发布日期:2017-09-01
通讯作者: 朱婉萍，研究员，浙江省中医药研究院基础实验研究所，浙江省杭州市 310007
作者简介:刘霞，女，1986年生，浙江省临安市人，汉族，2013年温州医科大学毕业，硕士，助理研究员，主要从事药理实验研究。
基金资助:
浙江省科技厅项目(2015F50067)

Hemostatic effect of carboxymethyl chitosan and its biosecurity properties

Liu Xia, Zhao Gui-zhi, Wang Yu-ji, Cai Ting-ting, Zhu Wan-ping

Zhejiang Academy of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou 310007, Zhejiang Province, China

Received:2018-04-16 Online:2017-08-08 Published:2017-09-01
Contact: Zhu Wan-ping, Researcher, Zhejiang Academy of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou 310007, Zhejiang Province, China
About author:Liu Xia, Master, Research assistant, Zhejiang Academy of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou 310007, Zhejiang Province, China
Supported by:
the Project of Zhejiang Provincial Science and Technology Department, No. 2015F50067

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：

壳聚糖：由甲壳素脱乙酰化反应而得，是目前已知的天然多糖中惟一的碱性多糖，它具有良好的生物相容性、生物降解性、无毒及抗菌性等特点，在止血材料中应用广泛，单纯的壳聚糖敷料，如止血绷带，可使大量红细胞快速凝集形成血块，降低失血量；单纯壳聚糖的止血效果与其高度溶胀率、脱乙酰度相关，脱乙酰度40%表现出较好的降解能力，愈合快，无组织粘连，但高频率长期的临床应用中发现，部分患者出现疑似组织粘连。

羧化壳聚糖：是新型的壳聚糖衍生物，除具有壳聚糖的一般性质外，还具有良好的水溶性，在医学上的应用包括：①骨关节炎的治疗：研究发现羧甲基壳聚糖能抑制基质金属蛋白酶1、3 mRNA的表达，降低关节外基质中一氧化氮合酶的量，减少一氧化氮生成，减轻活性氧对细胞呼吸链的破坏，保护线粒体功能，延缓软骨的退行性变；②防止术后组织粘连：体外实验证明，羧甲基壳聚糖能明显缩短组织创面出血时间，具有良好的凝血性；③皮肤创面敷料：能促进皮肤成纤维细胞及表皮角质形成细胞的生长，促进创面愈合；④药物的缓控释载体：目前所使用的药物剂型羧甲基壳聚糖银络合物、羧甲基壳聚糖/环丙沙星植入缓释微球，可有效维持局部药物浓度，减少用药次数及药物不良反应。

背景：羧化壳聚糖是一类具有优良应用性能的壳聚糖衍生物，良好的生物性能使其在止血材料中具有安全有效的优势。

目的：探讨羧化壳聚糖的止血效果及其生物安全性。

方法：①实验组分别在SD大鼠尾静脉出血创面及肝脏出血创面覆盖羧化壳聚糖粉末，记录止血时间，以创面自然止血时间为对照；②实验组分别在ICR小鼠断尾创面、股动脉出血创面及肝脏出血创面覆盖羧化壳聚糖粉末，记录止血时间，以创面自然止血时间为对照；③将羧化壳聚糖糊状物、十二烷基硫酸钠溶液及蒸馏水分别直接敷于白化兔皮肤上，进行皮肤刺激实验；④在豚鼠皮内注射羧化壳聚糖溶液，进行迟发型超敏反应实验；⑤在白化兔皮下分别注射羧化壳聚糖生理盐水溶液、生理盐水，进行皮内刺激实验；在白化兔皮下分别注射羧化壳聚糖浸提于食用橄榄油的上清液及食用橄榄油，进行皮内刺激实验。

结果与结论：①与对照组比较，实验组SD大鼠尾静脉、肝脏出血创面止血时间明显缩短(P < 0.01)；②与对照组比较，实验组ICR小鼠断尾创面、股动脉出血创面及肝脏出血创面止血时间明显缩短(P < 0.05或P < 0.01)；③羧化壳聚糖对白化兔皮肤无刺激性，具有极轻微的白化兔皮内刺激反应；羧化壳聚糖对豚鼠皮肤无致敏反应；④结果表明，羧化壳聚糖对SD大鼠、ICR小鼠创面具有较好的止血作用，对白化兔及豚鼠无明显皮肤刺激、致敏反应及皮内刺激反应，是一种较安全的止血材料。

ORCID: 0000-0003-0946-8171(朱婉萍)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

关键词: 生物材料, 材料相容性, 羧化壳聚糖, 止血, 皮肤刺激, 皮肤过敏, 皮内刺激, 安全性评价

Abstract:

BACKGROUND: Carboxymethyl chitosan (CMCS), a chitin derivative, has a good application performance that makes it become a safe and effective hemostatic material.

OBJECTIVE: To determine the hemostatic effect of CMCS and its biosecurity properties.

METHODS: (1) CMCS powder was scattered on the caudal vein and liver wounds of Sprague-Dawley rats, and the hemostatic time was recorded as experimental group, while the time for natural haemostasis of the wound was recorded as control group. (2) CMCS powder was scattered on the tail, femoral artery and liver wounds of ICR mice, and the hemostatic time was recorded as experimental group, while the time for natural haemostasis of the wound was recorded as control group. (3) CMCS, Sodium dodecyl sulfate solution and distilled water were respectively applied on the skin of albino rabbits in a skin irritation test. (4) A delayed-type hypersensitivity test of CMCS was carried out by intradermal injection of CMCS in guinea pigs. (5) An intradermal irritation test was carried out by subcutaneous injection of normal saline containing CMCS and normal saline, respectively. Another intradermal irritation test was carried out by subcutaneous injection of the supernatant of CMCS olive oil extract and olive oil, respectively.

RESULTS AND CONCLUSION: (1) Compared with the control group, the hemostatic time for caudal vein and liver wounds were significantly shortened in the Sprague-Dawley rats in the experimental group (P < 0.01). (2) Compared with the control group, the time of hemostasis on the tail, femoral artery and liver wounds was significantly shortened in the ICR mice in the experimental group (P < 0.05 or P < 0.01). (3) The CMCS had no irritation to the skin of albino rabbits and no allergic reaction to the skin of guinea pigs. To conclude, the CMCS has good hemostatic effect on the wound in Sprague-Dawley rats and ICR mice, and has no skin irritation, allergic reactions and intradermal irritation reactions in albino rabbits and guinea pigs, which is a relatively safe hemostatic material.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

Key words: Chitosan, Hemostasis, Tissue Engineering

中图分类号:

R318

刘霞，赵桂芝，王昱霁，蔡婷婷，朱婉萍. 羧化壳聚糖止血及其生物安全性评价[J]. 中国组织工程研究, 2017, 21(22): 3561-3566.

Liu Xia, Zhao Gui-zhi, Wang Yu-ji, Cai Ting-ting, Zhu Wan-ping.

Hemostatic effect of carboxymethyl chitosan and its biosecurity properties

[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2017, 21(22): 3561-3566.

图/表（结果） 3

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引言

国内外常用的可吸收止血材料有纤维蛋白、胶原、氧化再生纤维素、氰基丙烯酸酯组织胶、壳聚糖、沸石等^[1]。各止血材料都具有较好的止血功能，但同时也存在一定的安全风险，如，主动止血材料包括纯化浓缩的纤维蛋白原及凝血酶，可致血栓形成及诱发过敏反应^[2]；又如被动止血材料类，胶原类止血材料可增加伤口感染和异物肉芽的形成，易导致血液系统栓塞及神经占位性或粘连性损伤，而且其不良的黏附性可能会影响其止血功效，而纤维素可致组织pH降低，引发神经组织炎症及神经损伤变性^[3-6]。有学者将止血纤维腹腔注射于大鼠体内13周，可见肝脏及脾脏毒性，提示止血纤维可能降解不完全而蓄积在体内导致其亚慢性毒性^[7]。

壳聚糖由甲壳素脱乙酰化反应而得，是目前已知的天然多糖中惟一的碱性多糖，它具有良好的生物相容性、生物降解性、无毒及抗菌性等特点，在止血材料中应用广泛。单纯的壳聚糖敷料，如止血绷带，可使大量红细胞快速凝集形成血块，降低失血量^[8]。单纯壳聚糖的止血效果与其高度溶胀率、脱乙酰度相关，脱乙酰度40%表现出较好的降解能力，愈合快，无组织粘连^[9]，但高频率长期的临床应用中发现，部分患者出现疑似组织粘连。Yeo等研究发现，未经修饰的壳聚糖依然有许多模型动物出现肉芽肿反应等粘连情况。改性的壳聚糖敷料(壳聚糖衍生物)，如温敏性壳聚糖膜止血效果较单纯壳聚糖快速、优良^[10-11]。还比如纳米化的壳聚糖纳米纤维垫，其凝血效果被提高了数倍，明显优于单纯壳聚糖及氧化纤维^[12]。又如异丁基壳聚糖多功能敷料，无刺激、无致敏及明显急性毒性反应，是一种良好的敷料^[13]。羧化壳聚糖是新型的壳聚糖衍生物，除具有壳聚糖的一般性质外，还具有良好的水溶性，显著拓展了其应用领域。羧化壳聚糖在医学上的应用包括骨关节炎的治疗，研究发现羧甲基壳聚糖能抑制基质金属蛋白酶1、3 mRNA的表达，降低关节外基质中一氧化氮合酶的量，减少一氧化氮生成，减轻活性氧对细胞呼吸链的破坏，保护线粒体功能，延缓软骨的退行性变。羧化壳聚糖还应用于防术后组织粘连，潘仕荣等^[14]通过体外实验证明，羧甲基壳聚糖能明显缩短组织创面出血时间，具有良好的凝血性，分析原因为羧化壳聚糖是一种两性聚电解质，在溶液中，氨基能质子化生成阳离子，羧基能电离生成阴离子，两种离子共同作用加速凝血过程缩短了凝血时间。羧化壳聚糖还可用于皮肤创面敷料，Abbah等^[15]用浇铸方法将壳聚糖、聚乙烯醇、羧甲基壳聚糖制成C-P-C复合不对称膜，最上层为壳聚糖，中间层聚乙烯醇，最下层为羧甲基壳聚糖。羧甲基壳聚糖能促进皮肤成纤维细胞及表皮角质形成细胞的生长，促进创面愈合^[16]。此外，羧甲基壳聚糖还可用于药物的缓控释载体，目前所使用的药物剂型羧甲基壳聚糖银络合物、羧甲基壳聚糖/环丙沙星植入缓释微球，可有效维持局部药物浓度，减少用药次数及药物不良反应^[17-19]。羧化壳聚糖的应用多作为药物载体进行复合产品的开发，单独使用羧化壳聚糖在动物止血及其皮肤刺激、过敏反应方面鲜有报道。在产品开发中发现，羧化壳聚糖溶液的止血效果不及粉末，其粉末对动物创口具有较好的黏附性及包裹性，从而对创口具有较好的止血作用，后期观察出血创口愈合良好且无感染症状。为进一步探讨羧化壳聚糖止血性能的可开发性，实验对羧化壳聚糖粉末进行多类型动物出血模型的止血实验及生物完全性评价，以期为羧化壳聚糖后期产品开发提供实验依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计观察性实验。

1.2 时间及地点实验于2014年9月至2016年12月在浙江省中医药研究院基础实验研究所进行。

1.3 材料羧化壳聚糖，批号 SK-1407061，由浙江金壳药业有限公司提供；乌来糖(氨基甲酸乙酯)，批号 30191228，购自国药集团化学试剂有限公司；水合氯醛，批号200407，购自上海化学试剂采购供应五联化工厂；十二烷基硫酸钠，批号20080219，购自天津市博迪化工有限公司；弗氏完全佐剂，LOT. BK1731V，Sigma-Alorich；氯化钠注射液，批号C1508131，购自杭州民申药业有限公司；氯化钠注射液，批号C1508131，购自杭州民生药业有限公司；CELOX^TM haemostatic agent，Medtrade Products Ltd (Lot.132832 )；云南白药，批号 091105，购自云南白药有限公司。

实验动物：①清洁雄性级SD大鼠，体质量(200±20) g，动物合格证号0017775，由浙江省中医药研究院动物中心提供，许可证号：SCXK(浙)2014-0001；②ICR小鼠，体质量(20±2) g，雌雄各半，动物合格证号0017775，由浙江省中医药研究院动物中心提供，许可证号：SCXK(浙)2014- 0001；③同一品系健康初成年白化兔，雌雄不拘，体质量2 kg，由浙江省中医药研究院动物中心提供，许可证号：SCXK(浙)2014-0001；④雄性豚鼠，体质量约280 g，动物合格证号0019546，由余姚市泗门镇建飞实验兔养殖场提供，许可证号：SCXK(浙)2012-0050。

主要仪器：Sartorius pH计(Professional Meter PP-25)；电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 羧化壳聚糖止血实验

SD大鼠尾静脉止血：将20只SD大鼠随机分成实验组及对照组，每组10只。用体积分数75%乙醇棉球不断刷洗20只大鼠尾巴，直到清楚的看见静脉为止，用刀片在尾静脉处划一深约1 mm的伤痕，自由出血5 s后，实验组用羧化壳聚糖粉末覆盖在受伤处，观察用药后尾静脉止血时间；对照组不用药，使大鼠尾静脉自然止血^[20-22]。

SD大鼠肝脏止血：将18只SD大鼠随机分成2组。将所有大鼠用10%乌拉坦(1 300 mg/kg)行腹腔注射麻醉，麻醉后大鼠仰卧固定，逐层打开腹腔，暴露出肝脏，实验组(n=13)用手术刀在肝左叶往上1.5 cm处划一深约1 mm的刀痕，待自由出血5 s后，羧化壳聚糖粉末给药并计时；对照组(n=5)在肝右叶往上1.5 cm处切同样大小及深度的刀痕，不用药，使肝脏创面自然止血^[23-24]。

ICR小鼠断尾止血：将25只ICR小鼠随机分成对照组(n=9)、实验组(n=9)、云南白药组(n=7)。距所有小鼠尾尖2 mm处断尾，当第1滴血液流出后，实验组将小鼠尾巴放入适量羧化壳聚糖止血粉末中，使羧化壳聚糖粉末与小鼠尾尖充分接触，开始计时，取出尾巴观察出血情况，以血液不再溢出为血止，并记录小鼠止血时间；对照组小鼠断尾出血后任其自由出血至止血为止；云南白药组使用云南白药喷雾剂，记录止血时间^[25-26]。

ICR小鼠股动脉止血：将14只ICR小鼠随机分成对照组(n=5)及实验组(n=9)，10%乌拉坦(1 300 mg/kg)麻醉小鼠，麻醉后在小鼠下肢内侧剪开皮肤，轻轻钝性分离组织，暴露股动脉，将股动脉剪断，实验组迅速将适量羧化壳聚糖止血粉末敷于动脉上进行止血，敷药后开始计时，观察 3 min内药物止血效果，止血时间超过3 min的记为3 min；对照组小鼠出血后不加羧化壳聚糖，任其自然出血，超过 3 min未止住记为3 min，用药进行止血^[27-28]。

ICR小鼠肝脏止血：将19只ICR小鼠，随机分成对照组(n=9)及实验组(n=10)，10%乌拉坦(1 300 mg/kg)麻醉小鼠，麻醉后将小鼠腹部剖开，充分暴露小鼠肝脏，将纱布垫于肝脏下，轻轻牵出小鼠肝脏大叶及小叶，并将其平铺于纱布上，用手术刀在小鼠肝脏右大叶上划开0.8 mm左右伤口，待出血10 s后，实验组将适量羧化壳聚糖粉末撒于伤口上，开始计时，观察出血情况，待粉末不再被血液浸润，粉末表面形成结痂状时，判定为血液已被止住，并记录止血时间；对照组小鼠肝脏大叶上划开伤口后，不做任何处理，止血时间超过3 min的记为3 min^[29-30]。

1.4.2 羧化壳聚糖皮肤刺激反应按国家标准GB/T 16886.10-2005/ISO 10993-10：2002进行。剪除３只白化兔背毛，除毛部位划分成4个实验部位，以脊柱为界线，左右各2个实验区域，从上往下从左到右依次为：实验部位、阴性对照部位、阳性对照部位、实验部位。故3只家兔的实验部位6个，阴性对照部位3个，阳性对照部位3个。将0.5 g羧化壳聚糖用1 mL蒸馏水调成糊状物。按皮肤应用部位将羧化壳聚糖(实验部位)、0.5 mL 20%十二烷基硫酸钠(阳性对照部位)、0.5 mL蒸馏水(阴性对照部位)直接敷于家兔除毛部位，用纱布封闭性固定敷贴片6 h，接触期结束后取下敷贴片，用清水稍作擦拭，用持久性墨水对接触部位进行标记。记录除去敷贴后1，24，48，72 h各接触部位情况，按表1给出的记分系统确定原发性刺激指数(PⅡ)，描述每一接触部位在每一规定时间内的皮肤红斑和水肿反应情况并评分。

原发性刺激指数计算方式：将每只动物在每一规定时间药物引起的红斑与水肿的原发性刺激记分相加后减去对照原发性刺激记分再除以观察总数之和(每一实验部位的1个观察数据包括红斑和水肿2个记分)。

1.4.3 羧化壳聚糖豚鼠迟发型超敏反应最大剂量实验按国家标准GB/T 16886.10-2005/ISO 10993-10：2002进行。将20只豚鼠随机分成对照组和实验组，每组10只。豚鼠致敏反应实验流程图，见图1。

皮内诱导阶段：按图2所示，在每只动物去毛的肩胛骨内侧部位成对皮内注射0.1 mL。实验组：①部位A：注射弗氏完全佐剂与生理盐水以50 : 50(体积比)比例混合的稳定性乳化剂；②部位B：注射3%羧化壳聚糖溶液(对照组动物仅注射生理盐水)；③部位C：3%羧化壳聚糖溶液与50%弗氏完全佐剂溶液以体积比50 : 50配制成的稳定性乳化剂进行皮内注射(对照组注射生理盐水与佐剂配制成的乳化剂)。

局部诱发阶段：皮内诱导阶段后7 d，实验前1 d，用10%十二烷基硫酸钠溶液对局部皮肤进行预处理。抽取3%羧化壳聚糖溶液0.5 mL，直接涂布于诱导注射点部位，将纱布块封闭式包裹好豚鼠实验部位并覆盖诱导注射点，并于(48±2 ) h后除去包扎带和敷贴片。

激发阶段：局部诱导阶段后14 d，用羧化壳聚糖激发全部实验动物和对照动物。将1.5%羧化壳聚糖溶液0.5 mL或生理盐水局部涂抹于诱导阶段未实验部位(上腹部)，用封闭式包扎带固定，并于(24±2) h后除去包扎带。

动物观察：除去包扎纱布后24，48 h，观察两组豚鼠激发部位皮肤情况。按照Magnusson和 Kligman分级标准对每一激发部位和每一观察时间皮肤红斑和水肿反应进行描述并分级：无明显改变，为0级；极轻微红斑散发性或斑点状红斑，为1级；中度融合性红斑，为2级；重度红斑和水肿，为3级。

结果评价：按Magnusson和Kligman分级标准，对照组动物等级<1，而实验组中等级≥1时一般提示致敏。如对照组动物等级≥1时，实验组动物反应超过对照组中最严重的反应则认为致敏。如为疑似反应，推荐进行再激发以确认首次激发结果。实验结果显示为实验组和对照组动物中的阳性激发结果发生率。

1.4.4 羧化壳聚糖兔皮内刺激实验^[31] 按国家标准GB/T 16886.10-2005/ISO 10993-10：2002进行。精密称取羧化壳聚糖1.000 0 g，加生理盐水10 mL，搅拌均匀，室温静置过夜；精密称取羧化壳聚糖0.200 0 g，加食用橄榄油 2 mL，室温下浸提过夜。

实验使用2只白化兔，实验前24 h背部除毛，以脊柱为界线分成左右2个实验区域，左侧上部区域皮内注射由生理盐水浸提的羧化壳聚糖0.2 mL/点，平行注射4个点；右侧上部区域皮内区域注射由食用橄榄油浸提的羧化壳聚糖0.2 mL/点，平行注射4个点；左侧下部区域皮内注射生理盐水0.2 mL/点，平行注射4个点；右侧下部区域皮内注射食用橄榄油0.2 mL/点，平行注射4个点。注射24，48， 72 h按照皮内反应记分系统分别记录兔子皮肤红斑及水肿状况，在72 h评分后，分别将每一实验样品和溶剂对照的全部红斑与水肿记分相加，再除以12[2(动物数)×3(观察期)×2(记分类型)]计算出每一实验样品和每一对应溶剂对照的综合平均记分，如实验样品和溶剂对照平均记分之差≤1.0，则符合实验要求。

1.5 主要观察指标羧化壳聚糖的止血效果及生物安全性。

1.6 统计学分析计量资料数据以x(_)±s表示，组间比较采用SPSS 19.0 数据分析软件进行t-test检验。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料; 口腔生物材料; 纳米材料; 缓释材料; 材料相容性；组织工程

讨论

临床理想的止血应用材料应具备止血迅速、无毒性、无抗原性、不增加感染概率、不影响组织愈合、价格经济等特点^[32]。壳聚糖相较于其他可吸收止血材料具有较好的生物相容性^[33]，而通过对羧化壳聚糖羧化度的控制，可生产出与医学性能相匹配的生物相容性产品^[34]。

前期实验中同时使用羧化壳聚糖溶液和粉末进行大鼠及小鼠的止血效果观察，发现相比于羧化壳聚糖溶液，羧化壳聚糖粉末对于出血伤口具有更好的黏附性，可牢固附着在创面上，而且粉末越细黏附性能越好，更有利于止血。有关壳聚糖止血实验的文献很多，有壳聚糖止血敷料、壳聚糖止血膜、壳聚糖止血复合膜等，但大部分的止血性能研究以单种动物的一种或者几种出血模型为主，且壳聚糖相关止血实验中同时对止血材料进行生物安全性能评价的报道鲜少。此次实验使用单一成分的羧化壳聚糖粉末对多种动物出血模型进行了止血作用研究，多模拟外伤所致的出血模型，探讨羧化壳聚糖对外伤导致出血现象的止血与促愈合作用。通过各止血模型的止血效果可看出，羧化壳聚糖可较好地止住外伤致出血现象，从小鼠股动脉止血伤口愈合情况来看，羧化壳聚糖止血后小鼠伤口恢复较好，无伤口感染及小鼠死亡。结合止血实验期间的愈创表现可看出，羧化壳聚糖在皮肤创面具有一定的保护作用。此外，此次实验采用了家兔皮肤刺激、豚鼠迟发型致敏反应大剂量实验及家兔皮内刺激实验，对羧化壳聚糖皮肤刺激、皮肤致敏及皮内刺激的生物安全性进行评价。实验结果显示羧化壳聚糖在实验条件下对家兔皮肤无刺激，对豚鼠皮肤无致敏现象，具有可接受范围内极轻微的家兔皮内刺激反应。

综上所述，羧化壳聚糖对大鼠、小鼠出血模型具有较好的止血作用，同时可促进伤口愈合，对家兔及豚鼠无皮肤刺激、过敏反应及皮内刺激反应，可能是一种较安全的止血材料。

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延伸阅读

羧化壳聚糖是新型的壳聚糖衍生物，除具有壳聚糖的一般性质外，还具有良好的水溶性，显著拓展了其应用领域。羧化壳聚糖在医学上的应用包括骨关节炎的治疗，研究发现羧甲基壳聚糖能抑制基质金属蛋白酶1、3 mRNA的表达，降低关节外基质中一氧化氮合酶的量，减少一氧化氮生成，减轻活性氧对细胞呼吸链的破坏，保护线粒体功能，延缓软骨的退行性变。羧化壳聚糖还应用于防术后组织粘连，潘仕荣等通过体外实验证明，羧甲基壳聚糖能明显缩短组织创面出血时间，具有良好的凝血性，分析原因为羧化壳聚糖是一种两性聚电解质，在溶液中，氨基能质子化生成阳离子，羧基能电离生成阴离子，两种离子共同作用加速凝血过程缩短了凝血时间。羧化壳聚糖还可用于皮肤创面敷料，Pang等用浇铸方法将壳聚糖、聚乙烯醇、羧甲基壳聚糖制成C-P-C复合不对称膜，最上层为壳聚糖，中间层聚乙烯醇，最下层为羧甲基壳聚糖。羧甲基壳聚糖能促进皮肤成纤维细胞及表皮角质形成细胞的生长，促进创面愈合。此外，羧甲基壳聚糖还可用于药物的缓控释载体，目前所使用的药物剂型羧甲基壳聚糖银络合物、羧甲基壳聚糖／环丙沙星植入缓释微球，可有效维持局部药物浓度，减少用药次数及药物不良反应。羧化壳聚糖的应用多作为药物载体进行复合产品的开发，单独使用羧化壳聚糖在动物止血及其皮肤刺激、过敏反应方面鲜有报道。在产品开发中发现，羧化壳聚糖溶液的止血效果不及粉末，其粉末对动物创口具有较好的黏附性及包裹性，从而对创口具有较好的止血作用，后期观察出血创口愈合良好且无感染症状。为进一步探讨羧化壳聚糖止血性能的可开发性，实验对羧化壳聚糖粉末进行多类型动物出血模型的止血实验及生物完全性评价，以期为羧化壳聚糖后期产品开发提供实验依据。

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羧化壳聚糖止血及其生物安全性评价

Hemostatic effect of carboxymethyl chitosan and its biosecurity properties

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