自体来源诱导性多能干细胞移植治疗大鼠急性肺损伤

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1608

摘要/Abstract

摘要：

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文题释义：
急性肺损伤：由各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤，造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致急性低氧性呼吸功能不全，从而引发一系列病理生理改变，包括肺容积减少、肺顺应性降低、血流/通气比例失衡，严重时可出现肺不张，乃至发展成肺纤维化。目前临床上尚无疗效确切的针对性治疗方法。
皮肤来源诱导性多能干细胞：将皮肤成纤维细胞经过基因改造重新编程为诱导性多能干细胞，使其具有与胚胎干细胞类似的多能性，理论上可以分化为任意细胞，避免了移植排斥和伦理学争议等问题。目前的实验研究已经成功将其用于心血管疾病、阿尔茨海默病、肝损伤和肺损伤等疾病的治疗。

摘要
背景：干细胞治疗急性肺损伤的研究主要集中在胚胎干细胞和间充质干细胞，有关自体来源诱导性多能干细胞的研究鲜有报道。
目的：探讨自体皮肤成纤维细胞来源诱导性多能干细胞尾静脉移植治疗大鼠急性肺损伤的可能性。
方法：将24只提取皮肤组织制备诱导性多能干细胞的SD大鼠(北京维通利华实验动物有限公司提供)随机分为3组，对照组腹腔注射生理盐水，模型组和实验组腹腔注射脂多糖制备急性肺损伤模型，造模24 h后，对照组和模型组尾静脉注射PBS，实验组尾静脉注射诱导性多能干细胞悬液。治疗7 d后，观察肺组织形态学、肺组织湿/干质量比、病理损伤程度评分、血清白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平变化。
结果与结论：①治疗7 d后，实验组肺组织损伤明显改善、肺间质水肿减轻、肺泡间隔变薄、毛细血管充血减轻、炎性细胞浸润减少、部分肺泡内的渗出物减少；②治疗7 d后，模型组和实验组肺组织湿/干质量比、病理损伤评分明显高于对照组(P < 0.01)，实验组肺组织湿/干质量比、病理损伤评分明显低于模型组，差异有显著性意义(P < 0.01)；③治疗7 d后，模型组和实验组血清白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平明显高于对照组(P < 0.01)，实验组血清白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平明显低于模型组，差异均有显著性意义(P < 0.01)；④实验结果表明，自体皮肤成纤维细胞来源的诱导性多能干细胞移植可有效减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤，降低血清炎性因子水平。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0001-9375-3615(刘胜岗)

关键词: 急性肺损伤, 脂多糖, 诱导性多能干细胞, 皮肤成纤维细胞, 肺组织, 干细胞移植, 血清炎性因子

Abstract:

BACKGROUND: Embryonic stem cells and mesenchymal stem cells are two main cell sources for stem cell transplantation in the treatment of acute lung injury. There are few reports on the study of autologous induced pluripotent stem cells in the treatment of acute lung injury.
OBJECTIVE: To investigate the possibility of induced pluripotent stem cells derived from autologous dermal fibroblasts injected through the caudal vein in the treatment of acute lung injury in rats.
METHODS: Twenty-four Sprague-Dawley rats (provided by Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.) were randomly divided into three groups. The control group was intraperitoneally injected with normal saline, and the model group and the experimental group were intraperitoneally injected with lipopolysaccharide to make acute lung injury models in rats. At 24 hours after modeling, phosphate buffer solution was injected into the tail vein of the rats in the control and model groups, while the rats in the experimental group were given induced pluripotent stem cell suspension by the tail vein. The changes of lung tissue morphology, lung wet/dry weight ratio, pathological injury score, serum interleukin 1beta, interleukin 6 and tumor necrosis factor alpha levels were observed at 7 days after treatment.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) At 7 days after treatment, pulmonary interstitial edema, alveolar septum thickening, inflammatory cell infiltration, capillary congestion, irregular alveolar morphology, and exudate in the alveolar cavity were significantly improved in the experimental group. (2) At 7 days after treatment, the wet/dry weight ratio of lung tissue in the model and experimental groups was significantly higher than that in the control group, but the wet/dry weight ratio of lung tissue and pathological injury score in the experimental group were significantly lower than those in the model group (P < 0.01).(3) At 7 days after treatment, the levels of serum interleukin 1beta, interleukin 6 and tumor necrosis factor alpha were ranked as follows: model group > experimental group > control group, and there were significant differences between groups (P < 0.01). To conclude, the transplantation of induced pluripotent stem cells derived from autologous dermal fibroblasts can effectively alleviate acute lung injury and reduce serum inflammatory factor levels in rats.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: Acute Lung Injury, Induced Pluripotent Stem Cells, Transplantation, Autologous, Tissue Engineering

中图分类号:

刘胜岗，杨红忠，何白梅. 自体来源诱导性多能干细胞移植治疗大鼠急性肺损伤[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(9): 1403-1409.

Liu Shenggang, Yang Hongzhong, He Baimei. Autologous induced pluripotent stem cell transplantation for acute lung injury in rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(9): 1403-1409.

图/表（结果） 2

2.1 大鼠诱导性多能干细胞的形态学特征 光学显微镜下观察，诱导性多能干细胞呈克隆样生长，细胞排列紧密，形成圆形或卵圆形细胞团，细胞轮廓清晰，折光性强，见图1。

2.2 大鼠诱导性多能干细胞的鉴定结果 实时荧光定量PCR检测诱导性多能干细胞的多能性，结果显示诱导性多能干细胞表达Oct4、Nanog、SSEA-4和Sox2等多能性基因，见图2A。免疫细胞化学检测诱导性多能干细胞中多能性基因的蛋白表达，结果显示诱导性多能干细胞中Oct3/4、Nanog、SSEA-4和Sox2蛋白呈阳性表达，见图2B。

2.3 实验动物数量分析 24只SD大鼠，随机分为对照组、模型组和实验组，每组8只，整个实验过程顺利，未发生大鼠死亡和造模失败，24只大鼠的实验数据全部进入结果分析。为了观察尾静脉注射诱导性多能干细胞是否影响大鼠存活，该研究将实验大鼠存活能力的观察时间延长为6个月，期间24只大鼠摄食等活动正常，无死亡。

2.4 各组大鼠肺组织湿/干质量比 治疗7 d后，模型组和实验组肺组织湿/干质量比明显高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.01)，实验组肺组织湿/干质量比明显低于模型组，差异有显著性意义(P < 0.01)，见图3。

2.5 各组大鼠肺组织形态学变化与病理学评分

2.5.1 各组大鼠肺组织形态学变化 治疗后肺组织大体形态显示，对照组大鼠肺呈粉红色、表面光滑、无出血点和渗出，见图4A；模型组大鼠肺呈红色、表面粗糙、边缘不规则、有出血和渗出，见图4B；实验组大鼠肺颜色变浅、无出血，水肿和渗出较模型组减轻，见图4C。

治疗后肺组织光镜结构显示，对照组大鼠肺组织结构无明显变化，见图4D；模型组大鼠肺组织结构损伤程度加重，肺间质水肿明显，肺泡隔弥漫性增厚，炎细胞和红细胞更多，肺泡形态不规则，大量肺泡消失，肺泡腔内渗出物增多，见图4E；实验组大鼠肺组织损伤较治疗前和模型组有明显改善，肺水肿减轻，浸润的白细胞和红细胞明显减少，部分肺泡隔变薄，肺泡形态仍不规则，肺泡腔内渗出物减少，见图4F。

2.5.2 各组大鼠肺组织病理损伤程度评分 治疗前，模型组和实验组病理损伤评分明显高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.01)，模型组和实验组病理损伤评分比较，差异无显著性意义(P > 0.05)；治疗后，模型组和实验组病理损伤评分明显高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.01)，实验组病理损伤评分明显低于模型组，差异有显著性意义(P < 0.01)；对照组治疗前后病理损伤评分比较，差异无显著性意义(P > 0.05)，模型组治疗后病理损伤评分高于治疗前，差异无显著性意义(P > 0.05)，实验组治疗后病理损伤评分明显低于治疗前，差异有显著性意义(P < 0.01)，见图5。

2.6 各组大鼠治疗前后血清白细胞介素6、白细胞介素1β 和肿瘤坏死因子α水平比较 治疗前，模型组和实验组血清3种炎症因子水平明显高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.01)，模型组和实验组血清3种炎症因子水平比较，差异无显著性意义(P > 0.05)；治疗后，模型组和实验组血清3种炎症因子水平明显高于对照组，差异有显著性意义(P < 0.01)，实验组血清3种炎症因子水平明显低于模型组，差异有显著性意义(P < 0.01)；对照组治疗前后血清3种炎症因子水平比较，差异无显著性意义(P > 0.05)，模型组治疗后血清3种炎症因子水平高于治疗前，但差异无显著性意义(P > 0.05)，实验组治疗后血清3种炎症因子水平明显低于治疗前，差异有显著性意义(P < 0.01)，见图6。

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引言

急性肺损伤是一种急性、进行性、弥漫性的肺组织与功能损伤，由各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤，造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致急性低氧性呼吸功能不全，从而引发一系列病理生理改变，包括肺容积减少、肺顺应性降低、血流/通气比例失衡，严重时可出现肺不张，乃至发展成肺纤维化^[1-4]。目前，由于临床上尚无针对性治疗急性肺损伤和逆转肺纤维化的有效方法，急性肺损伤继发肺纤维化患者的死亡率仍在40%以上，即使早期应用保护性肺通气治疗急性肺损伤，病死率仍一直居高不下^[5]。

以往动物实验研究表明，将干细胞移植入肺内补充损伤的细胞，有利于急性肺损伤的修复^[6]。Soh等^[7]从人类胚胎干细胞和多能干细胞中分化出修复小鼠急性肺损伤的细胞亚群。Zhang等^[8]和Zhu等^[9]将人脐带间充质干细胞移植治疗脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤，可以明显减轻小鼠的肺损伤程度。Taki等^[10]发现胎儿来源骨髓间充质干细胞对体外循环导致的大鼠急性肺损伤具有改善作用。Xiang等^[11]将经血来源的间充质干细胞移植治疗脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤，也可以明显减轻小鼠的肺损伤程度。Su等^[12]和Yang等^[13]将诱导多能干细胞经静脉途径治疗内毒素诱导的小鼠急性肺损伤模型，其肺损伤症状明显减轻。至今，干细胞治疗急性肺损伤动物模型的研究主要集中在胚胎干细胞和间充质干细胞，有关诱导性多能干细胞的研究较少。

诱导性多能干细胞是将成熟体细胞重新编程为多能干细胞，具有与胚胎干细胞相似的多能性，具有自主增殖、自我更新与分化能力，可以诱导分化为多种体细胞，且避免了移植排斥和伦理学争议等问题。目前的实验研究已经成功将其用于心血管疾病、阿尔茨海默病、肝损伤和肺损伤等疾病的细胞替代治疗^[14-17]。诱导性多能干细胞在疾病动物模型、药物筛选、细胞替代治疗等方面的飞速发展与广泛应用，为其进一步参与肺损伤的转化医学应用提供技术支持^[18-19]。因此，该研究采用腹腔注射脂多糖方法诱导大鼠急性肺损伤，观察大鼠自体皮肤成纤维细胞来源诱导性多能干细胞对肺损伤的治疗作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 随机对照动物模型实验。

1.2 时间及地点 于2017年1月至2018年1月在长沙市中心医院完成。

1.3 材料

1.3.1 实验动物 8周龄雄性SD大鼠24只，SPF级，体质量190-210 g；SD孕鼠2只，SPF级，体质量240-280 g，均由北京维通利华实验动物有限公司提供，动物许可证号：SCXK(京)2014-0001。

1.3.2 实验试剂与仪器 Ⅳ型胶原蛋白酶、胰蛋白酶、尼克酰胺、明胶水合氯醛、脂多糖(Sigma公司)；CytoTune^®-iPS仙台病毒重编程试剂盒、TrypLE^TMExpress Enzyme、Knockout^TMDMEM培养基和Trizol(Thermo Fisher公司)；StemFlex^TM Medium、胎牛血清和DMEM培养基(Gibco公司)；兔抗鼠Oct4单克隆抗体、兔抗鼠Nanog多克隆抗体、鼠抗鼠SSEA-4多克隆抗体、兔抗鼠Sox2单克隆抗体、鼠抗鼠β-actin单克隆抗体、荧光标记的山羊抗鼠IgG(Santa Cruz公司)；SYBR^® Premix DimerEraser^®试剂盒与PrimeScript^® Ⅱ High Fidelity RT-PCR Kit(宝生物公司)；白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α酶联免疫分析试剂盒(卡迈特生物科技有限公司)；CO₂培养箱(Esco公司)；超净工作台(Thermo公司)；梯度基因扩增仪(Biometra公司)；实时荧光定量PCR仪(ABI公司)；流式细胞仪(Beckman Coulter公司)；光学显微镜、体视解剖显微镜、倒置相差显微镜和荧光显微镜(Olympus公司)。

1.4 实验方法

1.4.1 大鼠胚胎成纤维细胞饲养层的制备 参照文献[20]方法，将孕13.5 d的SD大鼠处死，无菌条件下取出胚胎，PBS洗3遍，去除鼠胚头、尾、四肢和内脏，保留分布于躯干部位的皮肤，用眼科剪剪碎，应用梯度消化法，将事先配制好的4种浓度的胰蛋白酶-乙二胺四乙酸溶液，自低浓度至高浓度分别消化组织碎块各5 min，1 500 r/min离心 3 min，小心弃去上清液，收集获得的细胞沉淀物，用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞，将细胞悬液接种于培养皿中，常规培养24 h，用丝裂霉素C处理后将细胞接种于底部涂好明胶的培养皿内，制成大鼠胚胎成纤维细胞饲养层，备用。

1.4.2 诱导性多能干细胞的制备 取24只SD大鼠，分别采集皮肤标本1 cm²，加入0.25%胰酶消化3次，每次10 min，1 000 r/min离心5 min，差速贴壁获得成纤维细胞；严格按照CytoTune^®-iPS仙台病毒重编程试剂盒说明书操作步骤进行转染，用浓缩的病毒液培养成纤维细胞24 h，换液后继续培养48 h，将细胞接种于预先在底部铺满大鼠胚胎成纤维细胞饲养层的培养皿内，观察诱导性多能干细胞克隆的形成，培养7 d后挑取形成的克隆进行传代，每7 d传代1次，取第3代细胞进行鉴定。

1.4.3 诱导性多能干细胞的鉴定 ①荧光实时定量PCR检测Oct4、Nanog、SSEA-4和Sox2基因的表达：参照文献[21]方法，收集生长良好的第3代诱导性多能干细胞克隆，Trizol法冰上裂解细胞提取总RNA，凝胶电泳法检测提取的RNA质量，选取抽提质量好的总RNA，随机引物反转录获得cDNA，应用试剂盒进行扩增反应；反应条件：95 ℃预变性30 s，94 ℃变性10 s，55 ℃退火15 s，72 ℃延伸15 s，共45个循环，以β-actin为对照，引物序列见表1；②免疫细胞化学荧光染色检测Oct4、Nanog、SSEA-4和Sox2蛋白的表达：参照文献[22]方法，将诱导性多能干细胞用预冷的丙酮固定5 min，PBS洗涤3次，每次5 min，用0.1%Triton X-100室温孵育3 min给细胞膜打孔，用体积分数为10%山羊血清室温避光封闭10 min，随后加入兔抗鼠Oct4(1∶50)、Nanog(1∶200)、SSEA-4(1∶100)、Sox2 (1∶50)和β-actin(1∶500)抗体，4 ℃避光孵育过夜，次日PBS漂洗3次，每次5 min，加入荧光标记的二抗(1∶2 000)，荧光显微镜下观察、摄片。

1.4.4 大鼠急性肺损伤模型建立与分组 将上述提取皮肤用于制备诱导性多能干细胞的24只SD大鼠，随机分为对照组、模型组和实验组，每组8只。在提取皮肤28 d后，参照文献[23]报道的方法建立大鼠急性肺损伤模型。模型组与实验组大鼠腹腔注射脂多糖(5 mg/kg)，将5 mg脂多糖溶于5 mL PBS中；对照组大鼠腹腔注射同体积生理盐水。造模后，大鼠肺组织结构紊乱，肺间质水肿，肺泡隔明显增厚，内有大量炎性细胞浸润和漏出的红细胞，肺泡形态不规则，腔内可见渗出的液体，说明造模成功。

1.4.5 诱导性多能干细胞移植治疗急性肺损伤 参考文献[24]报道的方法，造模24 h后，实验组大鼠尾静脉注射200 µL诱导性多能干细胞悬液(细胞浓度为3×10¹⁰ L^-1)；对照组与模型组大鼠经尾静脉注射等体积PBS。尾静脉注射治疗7 d后进行相关指标检测。

1.5 主要观察指标 治疗前后每组各取4只大鼠进行下列指标的观察。

1.5.1 肺组织湿/干质量比 参照文献[25]报道，开胸切取大鼠右肺，称取质量即为湿质量；随后将肺组织放入干燥箱65 ℃烘烤48 h至恒质量，称取质量即为干质量；按公式：肺湿/干质量比=肺湿质量/肺干质量，评价肺水肿的程度。

1.5.2 肺组织病理形态学变化 参照文献[25]报道，开胸切取大鼠左肺，PBS冲洗后放入40 g/L多聚甲醛中固定，24 h后梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，制成4 µm切片，常规苏木精-伊红染色，观察肺组织损伤程度与修复情况，并根据文献[28-29]报道的方法，主要从肺组织形态结构、炎性细胞浸润、水肿程度和出血等4个方面对肺病理损伤程度进行评分，每一个项目参照的评分标准为：最轻微损害计0分，轻微损害计1分，中度损害计2分，重度损害计3分，最严重损害计4分，分值在0-16之间，分值越高说明损伤越严重。

1.5.3 血清炎症因子白细胞介素6、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平 于造模前与治疗7 d后剪鼠尾取血1 mL，4 ℃、3 500 r/min离心15 min，小心吸收取上层血清，严格按照酶联免疫分析试剂盒说明书进行操作，检测白细胞介素6、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平变化。

1.6 统计学分析 所有数据用x(_)±s表示，录入SPSS 21.0软件进行统计学分析，组间比较应用单因素方差分析，组间两两比较用S-N-K检验，组内治疗前后比较用t 检验， P < 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

讨论

急性肺损伤发病的可能机制包括炎症反应、细胞凋亡、炎性因子分泌、凝血与纤溶失衡、氧化应激、肺泡腔分泌物清除异常等，其中炎症导致肺组织损伤是主要机制^[26-27]。治疗原发病、机械通气、血液净化等方法虽然在一定程度上可减轻肺组织损伤，但疗效存在争议^[28]。探讨针对急性肺损伤病因的新治疗方法是呼吸医学的主要研究方向之一。在导致肺组织急性弥漫性损伤的众多因素中最常见的原因是革兰阴性细菌引起的脓毒血症，而革兰阴性细菌外膜中的脂多糖是引起炎症的主要物质，能促进炎性因子的分泌^[29]。王婷等^[30]通过比较3种建立大鼠急性肺损伤模型的方法，发现腹腔注射脂多糖的造模方法优于气管内滴注脂多糖和盲肠结扎穿刺，更适用于后续治疗的实验研究。温保强等^[31]对脂多糖诱导的鼠急性肺损伤模型进行分析评价，结果显示虽然大鼠对脂多糖的敏感性低于小鼠，但SD大鼠对脂多糖的敏感性在大鼠中最高，且实验可操作性优于小鼠。因此，该实验应用脂多糖腹腔注射建立大鼠急性肺损伤模型，成本低且可操作性强，具有较好的临床意义。实验从大体形态到微细结构入手，初步观察移植诱导性多能干细胞对肺损伤的形态学影响，肺脏大体结构显示，模型组治疗前较对照组有明显的水肿、出血和渗出，注射PBS后没有改善肺损伤，而实验组在移植诱导性多能干细胞后肺脏出血和渗出较模型组有明显减轻。肺组织苏木精-伊红染色光镜观察结果显示，治疗前，模型组和实验组大鼠的肺组织结构出现病理性改变，肺间质水肿、毛细血管充血、炎性细胞浸润、肺泡腔内可见液体渗出、肺泡数量减少且形态异常，提示肺组织炎症反应明显；治疗后，与模型组比较，实验组大鼠肺组织间质水肿和充血程度明显减轻，浸润的炎性细胞数量减少，肺泡腔内无渗出液体，说明诱导性多能干细胞移植确实减轻了肺损伤程度。此外，肺组织湿/干质量比结果显示，治疗前，模型组和实验组肺组织湿/干质量比明显高于对照组，提示肺组织中水分含量增多，与形态学结果显示的肺水肿一致；治疗后，实验组肺组织的湿/干质量比低于模型组，说明诱导性多能干细胞移植后肺组织水肿程度减轻。以上结果不仅表明腹腔注射脂多糖成功建立了急性肺损伤模型，也提示诱导性多能干细胞尾静脉注射能减轻肺损伤程度。

干细胞根据来源和特性分为胚胎干细胞、成体干细胞和诱导多能干细胞，目前用于治疗急性肺损伤模型动物的干细胞研究主要集中在成体干细胞和异体来源的诱导性多能干细胞^[32]。Pedrazza等^[33]研究发现间充质干细胞通过抑制中性粒细胞胞外杀菌网络的形成来改善脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的存活率；Li等^[34]研究发现骨髓间充质干细胞通过抑制炎症反应来减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤；Hao等^[35]发现骨髓间充质干细胞和胚胎干细胞均可通过免疫调节治疗大肠杆菌内毒素导致的小鼠急性肺损伤；Zhang等^[36]研究发现脂肪基质干细胞通过降低白细胞介素6减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤；Li等^[37]和Xu等^[38]研究发现骨髓间充质干细胞通过减少炎症递质与白细胞浸润和旁分泌细胞因子来减少肺组织损伤和肺衰竭的发生；Martínez-González等^[39]发现人骨髓间充质干细胞通过过表达白细胞介素33拮抗白细胞介素1的作用来减轻内毒素诱导的急性肺损伤。以上研究均表明干细胞的抗炎作用是减轻急性肺损伤的主要机制。该研究形态学结果显示，诱导性多能干细胞静脉注射后实验组大鼠肺组织炎症反应明显减轻，炎性细胞浸润减少、肺泡腔内渗出减少，提示移植诱导性多能干细胞也能通过降低炎症反应发挥减轻急性损伤的作用。血清学检测结果显示，实验组治疗后血清白细胞介素6、白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α水平明显低于治疗前，治疗后实验组血清白细胞介素6、白细胞介素1β 和肿瘤坏死因子α水平明显低于模型组，但仍明显高于对照组，说明炎症因子确实发生变化。以上结果一致表明诱导性多能干细胞可能通过抑制炎症反应减轻肺组织损伤。Li等^[40]研究发现间充质干细胞通过旁分泌角质细胞生长因子促进肺泡腔内液体的清除，发挥对脂多糖诱导的急性肺损伤的治疗作用。该研究形态学结果显示，治疗后实验组肺泡腔内的渗出物明显少于模型组，提示诱导性多能干细胞可能通过旁分泌细胞因子发挥促进肺组织修复作用。

综上所述，移植诱导性多能干细胞不仅减轻脂多糖诱导的急性肺损伤，还促进了肺组织的修复，可能机制是减轻炎症反应、提高肺泡腔内渗出物的清除率。该研究只选取了治疗后7 d为研究时间点，未进行更长时间的观察，使研究具有一定局限性，今后将进一步深入研究中长期治疗效果和可能机制。同时，该研究未对移植的诱导干细胞进行标记与示踪，故未获得诱导性多能干细胞肺部归巢的直接依据，后续将利用体内成像技术直接观察诱导性多能干细胞的体内定植情况。

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