温肾通络止痛方通过外泌体miR-342-3p调控骨髓间充质干细胞骨脂分化平衡

doi:10.12307/2026.672

中国组织工程研究 ›› 2026, Vol. 30 ›› Issue (13): 3258-3269.doi: 10.12307/2026.672

• 骨髓干细胞 bone marrow stem cells • 上一篇下一篇

温肾通络止痛方通过外泌体miR-342-3p调控骨髓间充质干细胞骨脂分化平衡

吾米提·塔西1，王礼宁1，2，3，李沐哲1，孙杰1，陈双柳1，朱弈桦1，周士杰1，马勇1，4，郭杨1

南京中医药大学，1骨伤修复与重建新技术实验室，2中西医结合学院，江苏省南京市 210023；3南京中医药大学附属南京中医院，江苏省南京市 210023；4南京中医药大学附属盐城中医院，盐城市中医院，江苏省盐城市 224000

收稿日期:2025-05-19 修回日期:2025-09-15 接受日期:2025-09-20 出版日期:2026-05-08 发布日期:2025-12-24
通讯作者: 杨，博士，教授，南京中医药大学骨伤修复与重建新技术实验室，江苏省南京市 210023
作者简介:吾米提·塔西，男，1993年生，维吾尔族，南京中医药大学在读博士，主要从事中西医结合防治骨与关节损伤的研究。
基金资助:
国家自然科学基金面上项目(82074458)，项目负责人：郭杨；国家自然科学基金面上项目(82174411)，项目负责人：马勇；江苏省自然科学基金项目(BK20221351)，项目负责人：郭杨；江苏省自然科学基金项目(BK20220470)，项目负责人：王礼宁；国家中医药管理局高水平中医药重点学科建设项目(国中医药人教函[2023]85号)，项目负责人：马勇；盐城市基础研究计划面上项目(YCBK2024087)，项目负责人：马勇

Wenshen Tongluo Zhitong decoction regulates the bone fat differentiation balance of bone marrow mesenchymal stem cells through exosomal miR-342-3p

Wumiti·Taxi1, Wang Lining1, 2, 3, Li Muzhe1, Sun Jie1, Chen Shuangliu1, Zhu Yihua1, Zhou Shijie1, Ma Yong1, 4, Guo Yang1

1Laboratory of New Techniques of Restoration & Reconstruction of Orthopedics and Traumatology, 2School of Integrated Chinese and Western Medicine, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, Jiangsu Province, China; 3Nanjing Hospital of Chinese Medicine Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, Jiangsu Province, China; 4Yancheng Municipal Traditional Chinese Medicine Hospital, Yancheng Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine, Yancheng 224000, Jiangsu Province, China

Received:2025-05-19 Revised:2025-09-15 Accepted:2025-09-20 Online:2026-05-08 Published:2025-12-24
Contact: Guo Yang, PhD, Professor, Laboratory of New Techniques of Restoration & Reconstruction of Orthopedics and Traumatology, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, Jiangsu Province, China
About author:Wumiti·Taxi, Doctoral candidate, Laboratory of New Techniques of Restoration & Reconstruction of Orthopedics and Traumatology, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, Jiangsu Province, China
Supported by:
National Natural Science Foundation of China, No. 82074458 (to GY); National Natural Science Foundation of China, No. 82174411 (to MY); Jiangsu Natural Science Foundation, No. BK20221351 (to GY); Jiangsu Natural Science Foundation, No. BK20220470 (to WLN); National Administration of Traditional Chinese Medicine High-level Key Discipline Construction Project of Traditional Chinese Medicine, No. [2023]85 (to MY); Yancheng Basic Research Plan General Project, No. YCBK2024087 (to MY)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

外泌体：细胞分泌的纳米级双层脂质膜囊泡，内部携带蛋白质、脂质、核酸(如mRNA、miRNA、DNA)及代谢物等生物活性物质。
miRNA：是一类广泛存在于真核生物中的内源性非编码小分子RNA，参与细胞增殖、分化、凋亡等过程，并在神经退行性疾病、癌症等疾病中发挥关键作用。

摘要
背景：中药及其有效成分在调节外泌体miRNA功能方面的潜在作用为骨代谢疾病治疗开辟了新的途径。
目的：探讨温肾通络止痛方通过调控脂肪间充质干细胞来源外泌体miR-342-3p改善骨髓间充质干细胞骨脂分化平衡的作用及机制。
方法：分离培养1周龄SD大鼠脂肪间充质干细胞及骨髓间充质干细胞，温肾通络止痛方含药血清干预脂肪间充质干细胞后超速离心分离外泌体。外泌体与骨髓间充质干细胞共培养48 h后采用碱性磷酸酶染色、茜素红染色和油红O染色评估骨髓间充质干细胞的骨脂分化能力；利用高通量测序筛选差异miRNA，生信分析下游靶基因，用qPCR验证关键miRNA及靶基因表达。采用qPCR评估miR-342-3p及靶基因PDGFRα对骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化基因表达的影响；Western blot法检测miR-342-3p及PDGFRα对下游磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路蛋白表达的影响。
结果与结论：温肾通络止痛方显著促进脂肪间充质干细胞来源外泌体的分泌且更易被骨髓间充质干细胞摄取；测序结果显示温肾通络止痛方干预后的脂肪间充质干细胞来源外泌体中miR-342-3p表达上调最为明显，其通过靶向抑制PDGFRα促进骨髓间充质干细胞成骨分化(Runx2、Osterix mRNA表达上调)并抑制成脂分化(PPARγ、CEBPα mRNA表达下调)；miR-342-3p可促进磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B磷酸化蛋白表达，激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路，调控骨髓间充质干细胞骨脂分化平衡。以上结果表明温肾通络止痛方通过脂肪间充质干细胞外泌体miR-342-3p靶向PDGFRα/磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B轴调控骨髓间充质干细胞的骨脂分化平衡，为中药复方防治骨质疏松提供了分子机制依据。

https://orcid.org/0000-0002-8146-8689(吾米提·塔西)；http://orcid.org/0000-0003-4615-6978(郭杨)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 肾通络止痛方, 骨质疏松症, 骨髓间充质干细胞, 骨脂平衡, 脂肪间充质干细胞, 外泌体, miRNA, 磷脂酰肌醇3激酶, 蛋白激酶B

Abstract: BACKGROUND: The potential role of traditional Chinese medicine and its active ingredients in regulating the function of exosomal miRNA has opened up a new way for the treatment of bone metabolic diseases.
OBJECTIVE: To investigate the effect and mechanism of Wenshen Tongluo Zhitong decoction in improving bone fat differentiation balance in bone marrow mesenchymal stem cells by regulating adipocyte derived exosome miR-342-3p.
METHODS: Adipose mesenchymal stem cells and bone marrow mesenchymal stem cells of 1-week-old SD rats were isolated and cultured. Adipose-derived mesenchymal stem cells were treated with serum containing Wenshen Tongluo Zhitong decoction, and then exosomes were extracted by high-speed centrifugation method. After exosomes were co-cultured with bone marrow mesenchymal stem cells for 48 hours, alkaline phosphatase staining, alizarin red staining, and oil red O staining were used to evaluate the bone-fat differentiation ability of bone marrow mesenchymal stem cells. High-throughput sequencing was used to screen differential miRNAs, and downstream target genes were analyzed by bioinformatics, and the expression of key miRNAs and target genes was verified by qPCR. qPCR was used to evaluate the effects of miR-342-3p and its target gene PDGFRα on the expression of osteogenic and adipogenic differentiation genes of bone marrow mesenchymal stem cells. Western blot assay was used to detect the effects of miR-342-3p and PDGFRα on the expression of downstream phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B pathway proteins.
RESULTS AND CONCLUSION: Wenshen Tongluo Zhitong decoction significantly promoted the secretion of exosomes derived from adipose mesenchymal stem cells and made them more easily taken up by bone marrow mesenchymal stem cells. Sequencing results showed that the expression of miR-342-3p in exosomes derived from adipose mesenchymal stem cells after Wenshen Tongluo Zhitong decoction intervention was the most obvious, which promoted the osteogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells (up-regulated Runx2 and Osterix mRNA expression) and inhibited adipogenic differentiation (down-regulated PPARγ and CEBPα mRNA expression) by targeting and inhibiting PDGFRα. miR-342-3p could promote the phosphorylation expression of phosphoinositide 3-kinase and protein kinase B, activate the phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B signaling pathway, and regulate the balance of bone and fat differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells. The above results indicate that Wenshen Tongluo Zhitong decoction regulates the balance of bone-fat differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells by targeting the PDGFRα/phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B axis through exosome miR-342-3p of adipose mesenchymal stem cells, which can provide a molecular mechanism basis for the prevention and treatment of osteoporosis with traditional Chinese medicine compound.

Key words: ">Wenshen Tongluo Zhitong decoction, osteoporosis, bone marrow mesenchymal stem cells, bone fat balance, adipose mesenchymal stem cell, exosome, miRNA, phosphoinositide 3-kinase, protein kinase B

中图分类号:

吾米提·塔西, 王礼宁, 李沐哲, 孙杰, 陈双柳, 朱弈桦, 周士杰, 马勇, 郭杨. 温肾通络止痛方通过外泌体miR-342-3p调控骨髓间充质干细胞骨脂分化平衡[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(13): 3258-3269.

Wumiti·Taxi, Wang Lining, Li Muzhe, Sun Jie, Chen Shuangliu, Zhu Yihua, Zhou Shijie, Ma Yong, Guo Yang. Wenshen Tongluo Zhitong decoction regulates the bone fat differentiation balance of bone marrow mesenchymal stem cells through exosomal miR-342-3p[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2026, 30(13): 3258-3269.

图/表（结果） 5

2.1 脂肪间充质干细胞来源外泌体的形态学观察及表面蛋白鉴定结果 外泌体可在透射电子显微镜下观察到典型的囊泡，Western blot结果显示外泌体组和温肾通络止痛方干预的外泌体组均有CD9和TSG101蛋白表达，且温肾通络止痛方干预的外泌体组CD9和TSG101蛋白表达量要高于外泌体组；外泌体阴性标志物Calnexin蛋白在脂肪间充质干细胞中表达，而在外泌体组和温肾通络止痛方干预的外泌体组均无表达(图1A-C)。
2.2 骨髓间充质干细胞摄取脂肪间充质干细胞来源外泌体 如图1D所示，绿色荧光为脂肪间充质干细胞来源外泌体(PKH67染色剂)，蓝色荧光为骨髓间充质干细胞的细胞核(DAPI)；将脂肪间充质干细胞来源外泌体加入骨髓间充质干细胞中共培养48 h后，荧光显微镜下可见外泌体被吸附于骨髓间充质干细胞的细胞核周围，说明脂肪间充质干细胞来源外泌体可被骨髓间充质干细胞所摄取。

2.3 温肾通络止痛方干预的脂肪间充质干细胞来源外泌体对骨髓间充质干细胞骨脂分化的影响 骨髓间充质干细胞成骨诱导后碱性磷酸酶染色、茜素红染色结果显示，外泌体组碱性磷酸酶阳性细胞数及茜素红阳性区域显著多于对照组，差异有显著性意义
(P < 0.01)；而温肾通络止痛方干预的外泌体组成骨分化现象得到了进一步提高(P < 0.05)(图2A，B，D)。骨髓间充质干细胞成脂诱导后油红O染色结果显示，外泌体组脂肪细胞数较对照组明显减少，而温肾通络止痛方干预的外泌体组成脂分化抑制现象更显著，差异均有显著性意义(P < 0.05)(图2C，D)。

2.4 温肾通络止痛方对脂肪间充质干细胞来源外泌体miRNA表达的影响 如图3A所示，利用测序技术获得温肾通络止痛方干预的脂肪间充质干细胞来源外泌体中差异miRNA表达谱，筛选出miR-342-3p、miR-451-3p、miR-378a、miR-1964-3p、miR-96-5p等5个差异表达明显的miRNA，利用qPCR验证miR-342-3p差异表达最为明显(图3B)。KEGG分析显示以上差异表达miRNA可能通过PI3K/AKT信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路、转化生长因子β信号通路等发挥作用(图4A)。
2.5 miR-342-3p对骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化及相关mRNA的影响 为研究miR-342-3p对骨髓间充质干细胞成骨和成脂分化的影响，将骨髓间充质干细胞转染NC mimic、miR-342-3p mimic、NC inhibitor、miR-342-3p inhibitor后进行成骨和成脂诱导，发现与NC mimic组比较，miR-342-3p mimic组碱性磷酸酶染色和茜素红染色矿化结节数明显增多，而油红O染色脂滴数量明显减少；与NC inhibitor组比较，miR-342-3p inhibitor组矿化结节数明显减少，脂滴数量明显增多(图3C-E)；同时qPCR检测骨髓间充质干细胞成骨、成脂相关mRNA的表达，发现miR-342-3p mimic可显著促进Runx2、Osterix mRNA表达，抑制CEBPα、PPARγ mRNA表达，而miR-342-3p inhibitor可显著抑制Runx2、Osterix mRNA表达，促进CEBPα、PPARγ mRNA表达，与NC mimic、NC inhibitor组比较均差异有显著性意义(P < 0.01)(图3F)。

2.6 靶基因预测及qPCR验证 如图4B所示，通过miRDB、miRWalk和TargetScan 3个在线数据库预测miR-342-3p可能结合的靶基因，取交集后共获得6个靶基因，分别为GXYLT1、VSIG8、PDGFRα、UBN1、AKIRIN1、CHRM3。对以上6个靶基因进行引物设计，通过qPCR检测6个靶基因的表达水平，发现温肾通络止痛方干预的外泌体组PDGFRα表达水平降低，且差异最为显著(P < 0.05)(图4C)。通过TargetScan数据库预测了PDGFRα与miR-342-3p的靶向结合位点(图4D)。
进一步检测了NC mimic、miR-342-3p mimic、miR-342-3p+PDGFRα OE、NC inhibitor、miR-342-3p inhibitor、miR-342-3p inhibitor PDGFRα KD各组成骨和成脂相关指标，如图4E-G所示：共转染miR-342-3p mimic 和PDGFRα过表达质粒时，碱性磷酸酶和茜素红染色矿化结节数较miR-342-3p mimic组减少，而油红O染色的脂滴数量增多；共转染miR-342-3p inhibitor和PDGFRα敲低质粒时，碱性磷酸酶、茜素红染色矿化结节较miR-342-3p inhibitor组明显增多，而油红O染色的脂滴数量降低。以上结果提示miR-342-3p可以通过靶向抑制PDGFRα表达促进骨髓间充质干细胞成骨分化，抑制骨髓间充质干细胞成脂分化。

2.7 Western blot检测PDGFRα及下游PI3K/AKT信号通路蛋白表达 如图5A，B所示，过表达miR-342-3p可抑制PDGFRα蛋白表达，较NC mimic组显著降低(P < 0.01)；共转染miR-342-3p mimic和PDGFRα OE后，PDGFRα蛋白表达升高；miR-342-3p inhibitor组PDGFRα蛋白表达与NC inhibitor组相比显著升高(P < 0.01)；共转染miR-342-3p inhibitor和PDGFRα KD后，PDGFRα蛋白表达降低。
如图5A，C，D所示，miR-342-3p mimic组可显著提高p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT相对蛋白表达水平，与NC mimic组比较差异有显著性意义(P < 0.05)；在miR-342-3p inhibitor组中，p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT相对蛋白表达水平均不同程度降低，与NC inhibitor组比较差异有显著性意义(P < 0.05)；在miR-342-3p mimic+PDGFRα OE组中，p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT相对蛋白表达水平较miR-342-3p mimic组降低，p-PI3K/PI3K差异有显著性意义(P < 0.05)；miR-342-3pinhibitor+PDGFRα KD组p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT相对蛋白表达水平较miR-342-3p inhibitor组升高，p-PI3K/PI3K差异有显著性意义(P < 0.05)。

参考文献

[1] FENG S, FENG Z, WEI Y, et al. EEF1B2 regulates bone marrow-derived mesenchymal stem cells bone-fat balance via Wnt/β-catenin signaling. Cell Mol Life Sci. 2024;81(1):260.
[2] 王礼宁,朱弈桦,马勇,等.骨质疏松视野下骨脂代谢相关调控网络的研究[J].中国骨质疏松杂志,2023,29(3):437-443.
[3] PAPADOPOULOS KS, PIPERI C, KORKOLOPOULOU P. Clinical Applications of Adipose-Derived Stem Cell (ADSC) Exosomes in Tissue Regeneration. Int J Mol Sci. 2024;25(11):5916.
[4] KANANIVAND M, NOURI F, YOUSEFI MH, et al. Mesenchymal stem cells and their exosomes: a novel approach to skin regeneration via signaling pathways activation. J Mol Histol. 2025;56(2):132.
[5] LI R, LI D, WANG H, et al. Exosomes from adipose-derived stem cells regulate M1/M2 macrophage phenotypic polarization to promote bone healing via miR-451a/MIF. Stem Cell Res Ther. 2022;13(1):149.
[6] WANG T, GUO S, ZHANG Y. Effect of nHA/CS/PLGA delivering adipose stem cell-derived exosomes and bone marrow stem cells on bone healing-in vitro and in vivo studies. Sci Rep. 2024;14(1):27502.
[7] TAN X, XIAO H, YAN A, et al. Effect of Exosomes From Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stromal Cells and Adipose-Derived Stromal Cells on Bone-Tendon Healing in a Murine Rotator Cuff Injury Model. Orthop J Sports Med. 2024;12(1):23259671231210304.
[8] 郑苏阳,马勇,郭杨,等.“温肾通络止痛方”治疗原发性骨质疏松症的疗效观察及处方优化[J].辽宁中医杂志,2016,43(10):2098-2100.
[9] WANG L, PAN Y, LIU M, et al. Wen-Shen-Tong-Luo-Zhi-Tong Decoction regulates bone-fat balance in osteoporosis by adipocyte-derived exosomes. Pharm Biol. 2023;61(1):568-580.
[10] 牛园园,张天驰,李沐哲,等.温肾通络止痛方通过AMPK/mTOR信号通路调控自噬对老年性骨质疏松模型小鼠的干预作用[J].中国中西医结合杂志,2024,44(1):84-90.
[11] 曹晨曦,吴天唯,廖鑫,等.基于亲母细胞“印迹模板”外泌体载体水通道的经络运行物质基础探讨[J].中华中医药杂志,2023,38(3): 1045-1049.
[12] 唐幸林子,王志宇,王胜奇,等.基于表观遗传定义的肿瘤外泌体及其中医证本质[J].中华中医药杂志,2023,38(8):3609-3614.
[13] 薛枫,邹吉宇,庞立健,等.“气络失和”病机观与“外泌体分泌异常”在特发性肺纤维化中的相关性探讨[J].实用中医内科杂志,2024,38(6):107-110.
[14] WU P, JIAO F, HUANG H, et al. Morinda officinalis polysaccharide enable suppression of osteoclastic differentiation by exosomes derived from rat mesenchymal stem cells. Pharm Biol. 2022;60(1):1303-1316.
[15] 朱俊清,徐洋,华新振,等.中医药调节外泌体干预疾病的研究进展[J].中草药,2024,55(21):7519-7529.
[16] LI M, NIU Y, ZHANG T, et al. Wen-Shen-Tong-Luo-Zhi-Tong-Decoction inhibits bone loss in senile osteoporosis model mice by promoting testosterone production. J Ethnopharmacol. 2025;338(Pt 2):119033.
[17] LI Y, WANG G, WANG Q, et al. Exosomes Secreted from Adipose-Derived Stem Cells Are a Potential Treatment Agent for Immune-Mediated Alopecia. J Immunol Res. 2022;2022:7471246.
[18] WANG D, LIU Y, DIAO S, et al. Long Non-Coding RNAs Within Macrophage-Derived Exosomes Promote BMSC Osteogenesis in a Bone Fracture Rat Model. Int J Nanomedicine. 2023;18:1063-1083.
[19] 谷成旭,张乃丽,孟永春,等.脂肪间充质干细胞外泌体可减轻过氧化氢诱导PC12细胞的凋亡[J].中国组织工程研究,2024,28(19): 2988-2995.
[20] 刘宇,龚森怡,杨丽华,等.间充质干细胞来源外泌体分离、鉴定技术及应用[J].中国组织工程研究,2026,30(1):194-203.
[21] PERTEA M, PERTEA GM, ANTONESCU CM, et al. StringTie enables improved reconstruction of a transcriptome from RNA-seq reads. Nat Biotechnol. 2015;33(3):290-295.
[22] SUN L, LUO H, BU D, et al. Utilizing sequence intrinsic composition to classify protein-coding and long non-coding transcripts. Nucleic Acids Res. 2013;41(17):e166.
[23] BURR DB. Fifty years of bisphosphonates: What are their mechanical effects on bone? Bone. 2020;138:115518.
[24] ADAMI G, SAAG KG. Expert Perspective: How, When, and Why to Potentially Stop Antiresorptive Drugs in Osteoporosis. Arthritis Rheumatol. 2025. doi: 10.1002/art.43179.
[25] ZHANG W, HUANG P, LIN J, et al. The Role of Extracellular Vesicles in Osteoporosis: A Scoping Review. Membranes (Basel). 2022;12(3):324.
[26] 吕茹月,顾路路,刘茜,等.外泌体分泌调控机制及在生物医学中的应用前景[J].中国组织工程研究,2026,30(1):184-193.
[27] 张昊,余翔,任辉,等.左归丸调控miR34a对BMSCs成骨分化能力的影响[J].辽宁中医杂志,2018,45(6):1300-1304+1341.
[28] 安宏强.miRNA-19a-5p调控IL-17A在绝经后骨质疏松症中的作用与中药干预机制研究[D].济南:山东中医药大学,2021.
[29] QING Y, HUANG M, CAO Y, et al. Effects of miRNA-342-3p in modulating Hedgehog signaling pathway of human umbilical cord mesenchymal stem cells by down-regulating Sufu. Oral Dis. 2019;25(4):1147-1157.
[30] HUANG M, QING Y, SHI Q, et al. miR-342-3p elevates osteogenic differentiation of umbilical cord mesenchymal stem cells via inhibiting Sufu in vitro. Biochem Biophys Res Commun. 2017;491(3):571-577.
[31] BÖHM AM, DIRCKX N, TOWER RJ, et al. Activation of Skeletal Stem and Progenitor Cells for Bone Regeneration Is Driven by PDGFRβ Signaling. Dev Cell. 2019;51(2):236-254.e12.
[32] PHAM T, NAJY AJ, KIM HC. E3 ligase HUWE1 promotes PDGF D-mediated osteoblastic differentiation of mesenchymal stem cells by effecting polyubiquitination of β-PDGFR. J Biol Chem. 2022;298(6):101981.
[33] TREMPUS CS, PAPAS BN, SIFRE MI, et al. Functional Pdgfra fibroblast heterogeneity in normal and fibrotic mouse lung. JCI Insight. 2023; 8(22):e164380.
[34] YAN Y, YUAN J, LUO X, et al. microRNA-140 Regulates PDGFRα and Is Involved in Adipocyte Differentiation. Front Mol Biosci. 2022;9:907148.
[35] XU S, LIU Y, ZHANG D, et al. PDGF-AA promotes gap junction intercellular communication in chondrocytes via the PI3K/Akt pathway. Connect Tissue Res. 2022;63(5):544-558.
[36] DOHERTY L, YU J, WANG X, et al. A PDGFRβ-PI3K signaling axis mediates periosteal cell activation during fracture healing. PLoS One. 2019;14(10):e0223846.
[37] SUN Z, CAI Y, CHEN Y, et al. Ultrasound-targeted microbubble destruction promotes PDGF-primed bone mesenchymal stem cell transplantation for myocardial protection in acute Myocardial Infarction in rats. J Nanobiotechnology. 2023;21(1):481.
[38] XIANG S, LUO Y, LIU W, et al. Calycosin alleviates ovariectomy-induced osteoporosis by promoting BMSCs autophagy via the PI3K/Akt/mTOR pathway. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 2025. doi: 10.1007/s00210-025-04009-x.
[39] CASE N, THOMAS J, SEN B, et al. Mechanical regulation of glycogen synthase kinase 3β (GSK3β) in mesenchymal stem cells is dependent on Akt protein serine 473 phosphorylation via mTORC2 protein. J Biol Chem. 2011;286(45):39450-39456.

引言

骨质疏松症是以骨密度降低、骨微结构破坏为特征的慢性骨病，其病理核心在于骨吸收与骨形成的动态平衡失调，导致骨骼脆性增加和骨折风险显著升高。近年研究发现，骨髓间充质干细胞的成骨能力退化且伴随着成脂能力的持续增强，这种成骨-成脂分化失衡(骨脂失衡)导致骨髓微环境内骨量减少是加剧骨质疏松的驱动因素[1-2]。
外泌体作为细胞间通讯的关键载体，因其高生物相容性、低免疫原性及靶向递送能力，成为骨再生医学的研究热点。脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells，ADSCs)通过旁分泌外泌体将miRNA、非编码RNA等效应分子作用于靶细胞，可直接或间接影响骨髓间充质干细胞分化的方向，进一步影响骨重塑过程[3-4]。LI等[5]研究表明脂肪间充质干细胞来源外泌体可通过递送miR-451a有效调节骨免疫代谢，进而促进骨愈合；WANG等[6]也证明负载脂肪间充质干细胞来源外泌体的纳米羟基磷灰石/壳聚糖/聚乳酸-羟基乙酸共聚物支架联合骨髓间充质干细胞可促进骨缺损修复。另有研究发现局部注射脂肪间充质干细胞来源外泌体可以募集骨髓间充质干细胞并促进成骨、软骨生成和腱骨愈合[7]。以上研究提示外泌体携带的效应分子可能是脂肪间充质干细胞在生理和病理条件下与受损器官交流并调节全身代谢的关键物质。
中医药在骨质疏松症防治中展现出独特的理论优势与实践价值。马勇教授强调骨质疏松症的治疗应注重脾肾互资，肝肾同源，扶阳、健脾合用，基于“补肾、健脾、疏肝”的治则构建了温肾通络止痛方。前期临床研究证实温肾通络止痛方能有效改善骨质疏松症患者周身酸楚、肌肉痿软无力、步履艰难等伴随症状，提高骨密度[8]；基础研究也证实此方可改善骨质疏松模型小鼠骨微结构、力学性能，降低衰老相关蛋白表达，促进骨形成，从而调节骨稳态[9-10]。大量研究者认为外泌体的功能与中医“气络”概念相呼应，即在微观层面上“气络”被认为有助于气血津液输注及调节体内阴阳平衡[11-13]。因此，外泌体被视为中医经络相关疾病微观生物学基础，中医药调节外泌体防治疾病可进一步阐释中医药发挥作用的微观疗效机制[14-15]。基于此，该研究旨在探究温肾通络止痛方对脂肪间充质干细胞来源外泌体分泌的作用，聚焦于“细胞间对话”的机制解析其携带的功能性miRNA在骨微环境中调控骨脂平衡的关键靶点。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 体外细胞学实验。
1.2 时间及地点 实验于2023年12月至2024年12月在南京中医药大学骨伤研究所(骨伤修复与重建新技术实验室)完成。
1.3 材料
1.3.1 实验药物 温肾通络止痛方由山炙黄芪15 g、淫羊藿10 g、骨碎补30 g、蛇床子6 g、狗脊10 g、薏苡仁15 g、茱萸10 g、附子8 g、炒白术10 g、天麻6 g、羌活10 g、白芍15 g、独活10 g、细辛3 g、炙甘草6 g组成。实验用中药材由江苏省中医院中药房提供。按配伍比例称取处方饮片，加入10倍的水煎煮1 h。煎煮的药渣再次煎煮1 h[16]。以上水煎液合并后过滤，通过旋蒸仪浓缩至1.5 g/mL。
1.3.2 实验动物 SPF级雌性SD大鼠20只，8周龄，体质量(200±20) g，用于含药血清制备；SPF级雄性SD大鼠8只，1周龄，体质量(15±3) g，用于分离脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞，以上实验动物均由江苏青龙山生物科技有限公司提供，动物生产合格证号：SCXK(苏)2024-0023。动物实验获得南京中医药大学动物伦理委员会的批准(批准号：202312A044)，并遵循《实验动物护理指南》。动物饲养条件：室温20-26 ℃，湿度40%-70%，12 h光照/12 h黑暗周期，并保持良好的通风。
1.3.3 实验试剂 无菌磷酸盐缓冲液(G4202，Servicebio)；胎牛血清(SVV30208.01，Cytiva)；去外泌体胎牛血清(FBSKM0508，Ozfan)；青霉素-链霉素(C100C5，新赛美)；胰蛋白酶消化液(C100C10，新赛美)；CD9抗体(CY5337，abways)；TSG101抗体(CY5985，abways)；Calnexin抗体(CY5839，abways)；磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3 kinase，PI3K)(60225-1-Ig，Proteintech)；磷酸化PI3K (Abways，CY6427)；蛋白激酶B(protein kinase B，AKT)(10176-2-AP，Proteintech)；磷酸化AKT (66444-1-Ig，Proteintech)；PDGFRα(CY6714，Abways)；HRP偶联羊抗兔二抗(Proteintech，SA0001-2)；外泌体miRNA提取试剂盒(RC201，诺唯赞)；茜素红染色液(G1450，索莱宝)；碱性磷酸酶染色试剂盒(G1480，索莱宝)；油红O染色试剂盒(G1262，索莱宝)；PKH67细胞染色剂(D0031，索莱宝)；多聚甲醛(P1112，索莱宝)；转染试剂(AD600500，Zeta Life)；引物合成(上海生工)；NC mimic、miR-342-3p mimic、NC inhibitor、miR-342-3p inhibitor、PDGFRα敲低、过表达质粒合成(南京亿施特生物公司)。
1.3.4 实验仪器 超速离心机(Sorvall WX 90+，ThermoFisher)；荧光定量PCR仪(QuanStudio 3，美国ABI)；微量分光光度计(杭州奥盛，NANO-300)；电转印槽系列(Mini Trans-Blot Cell，美国Bio-Rad)；高通量测序仪(Cbot，美国Illumina公司)；全自动化学发光图像仪器(Tanon5200CE，中国天能公司)；流式细胞仪(Gallios，美国Beckman Coulter公司)。
1.4 实验方法
1.4.1 含药血清制备 根据前期研究方法制备含药血清[16]，即实验大鼠随机分为空白组、温肾通络止痛方组，每组10只。按10 mL/kg给予空白组大鼠0.9%氯化钠溶液，含药血清组大鼠给予温肾通络止痛方药液(7.32 g/kg)灌胃，连续7 d，末次灌胃2 h后腹主动脉取血，血清静置2 h后离心制备含药血清，过滤，-80 ℃保存备用。
1.4.2 细胞分离及培养
脂肪间充质干细胞分离培养：依据前期文献报道方法进行脂肪间充质干细胞分离及培养[17]。即选取1周龄SPF级SD大鼠，麻醉后颈椎脱臼处死，置于体积分数75%乙醇中浸泡15 min后于无菌环境下取大鼠双侧腹股沟脂肪，置于无菌培养皿中，用PBS冲洗数次；修剪残余纤维结缔组织及血管，转移至新的6 cm培养皿，将脂肪组织剪碎至乳糜状，置于含有0.2%Ⅰ型胶原酶的离心管中，37 ℃恒温摇床振荡消化30 min，待消化均匀后，
4 ℃、1 000×g离心10 min，弃掉上层的脂肪及消化液，加入含体积分数10%胎牛血清的L-DMEM培养液，轻轻吹打混匀管底沉淀物后进行过滤。将滤液收集至15 mL离心管，4 ℃、250×g离心10 min，弃上清后重悬沉淀，接种至培养瓶，置于CO2恒温培养箱中，待细胞生长至85%-95%融合时，按照1∶3传代，第3代细胞用于后续实验。
骨髓间充质干细胞分离培养：根据前期文献方案培养大鼠骨髓间充质干细胞[18]。即选取1周龄SPF级SD大鼠，麻醉后颈椎脱臼处死，置于体积分数75%乙醇中浸泡15 min后于无菌环境下分离股骨、胫骨置于培养皿中，用PBS冲洗骨组织，剪去两侧骨端后用DMEM培养基冲洗骨髓腔，将骨髓冲洗液转移至15 mL离心管，4 ℃、250×g离心5 min，用含体积分数10%胎牛血清的L-DMEM完全培养基重悬后，于CO2恒温细胞培养箱中培养，细胞生长融合至85%-95%时，按照1∶3传代，第3代细胞用于后续实验。
1.4.3 外泌体分离 将原代脂肪间充质干细胞重悬并接种于含有体积分数10%无外泌体血清、1%双抗、89% L-DMEM的10 cm培养皿中，置于37 ℃、体积分数5% CO2培养箱中培养。待细胞生长至60%时，更换为含体积分数10%空白血清、1%双抗、89% L-DMEM培养基或体积分数10%温肾通络止痛方含药血清、1%双抗、89% L-DMEM培养基，干预48 h后通过超速离心法分离外泌体[19-20]，用PBS重悬末次离心后收集的外泌体进行后续实验。
1.4.4 外泌体差异miRNA筛选及靶基因预测 根据外泌体miRNA提取试剂盒方案分离外泌体miRNA。用微量分光光度计对miRNA进行质控，miRNA反转录合成cDNA后与RNase H进行二链合成，转化成DNA双链，同时在二链中掺入dUTP Solution，将双链DNA的末端补齐为平末端。利用磁珠进行筛选，再通过PCR形成(300±50) bp的文库。最后，使用illumina Novaseq™ 6000进行测序。使用fastp (https://github.com/OpenGene/fastp)软件对原始数据进行质控。使用StringTie软件对基因或转录本进行组装、注释及过滤，使用R包edgeR对样本之间的差异基因进行分析，差异倍数> 2倍或< 0.5倍且P < 0.05定义为有差异的miRNA[21-22]。使用DAVID软件(https:// david.ncifcrf.gov/)进行GO和KEGG富集分析。利用miRDB、TargetScan和miRWalk 3个在线数据库分别预测miR-342-3p可能结合的靶基因，取交集后获得的靶基因进行qPCR验证，通过NCBI搜索并预测靶基因与miR-342-3p的靶向结合位点。
1.4.5 骨髓间充质干细胞成骨、成脂诱导分化
成骨诱导方案：将生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞使用完全培养基(1%双抗+体积分数10%胎牛血清+L-DMEM)接种于12孔板中，将培养液更换为成骨诱导液(添加50 pg/mL维生素C+5 mmol/L β-甘油磷酸钠+0.1 μmol/L地塞米松)，隔天半量换液，镜下观察细胞形态并进行碱性磷酸酶及茜素红染色。
成脂诱导方案：将生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞使用完全培养基调整密度至2×105/孔，接种于12孔板中，将培养液更换为成脂诱导分化液Ⅰ(添加0.5 mmol/L IBMX、1 μmol/L地塞米松、10 μg/mL胰岛素)，记为诱导第0天，诱导分化第3天后，更换成脂诱导分化液Ⅱ(添加10 μg/mL胰岛素)诱导1 d，以此方法循环三四次，镜下观察细胞形态并进行油红O染色。
1.4.6 分组及干预 第3代骨髓间充质干细胞按照随机数字法分为空白组、外泌体组(EXO)、温肾通络止痛方干预的外泌体组(WSTLZTF+EXO)，接种骨髓间充质干细胞于12孔板中，细胞密度为2×105/孔，用含体积分数10%胎牛血清的L-DMEM培养，细胞汇合至60%时空白组予以PBS干预；外泌体组予以1 mg/mL脂肪间充质干细胞来源外泌体干预，温肾通络止痛方干预的外泌体组予以1 mg/mL温肾通络止痛方含药血清干预的脂肪间充质干细胞来源外泌体干预，48 h后对骨髓间充质干细胞进行成骨、成脂诱导及碱性磷酸酶染色、茜素红染色、油红O染色。
第3代骨髓间充质干细胞按照随机数字法分为NC mimic组、miR-342-3p mimic组、miR-342-3p mimic+PDGFRα OE组、NC inhibitor组、miR-342-3p inhibitor组、miR-342-3p inhibitor+PDGFRα KD 组，接种骨髓间充质干细胞于12孔板中，细胞密度为2× 105/孔，用含体积分数10%胎牛血清的L-DMEM培养细胞，细胞汇合至60%时，将miRNA与转染试剂按照1∶1直接混合，用移液器吹吸10-15次混匀，室温静止15 min。转染复合物加入到12孔板中混匀(500 µL/孔)，于CO2恒温培养箱中培养6 h后，分别在miR-342-3p mimic+PDGFRα OE、miR-342-3p inhibitor+PDGFRα KD两组加入PDGFRα过表达和敲低质粒，摇匀后继续置于CO2恒温培养箱中，每组3个复孔，干预48 h后进行骨髓间充质干细胞成骨、成脂诱导，qPCR检测成骨、成脂相关mRNA表达以及Western blot检测下游PI3K/AKT通路相关蛋白表达。
1.5 主要观察指标
1.5.1 外泌体鉴定 ①透射电镜观察外泌体形态：将30 μL外泌体悬液置于铜网静置5 min，用滤纸从侧面吸干液体后滴加10 μL 4%磷钨酸溶液(pH=7)，负染5 min，吸干负染液并用白炽灯烤干15 min后观察外泌体形态；②Western blot检测外泌体标志物CD9 (1∶2 000)、TSG101(1∶2 000)、Calnexin(1∶2 000)蛋白表达。
1.5.2 外泌体PKH67染色 用“Diluent C”稀释“PKH67 linker储存液，配制100 μmol/L工作液；在1 mg/mL外泌体溶液中加入50 μL工作液后混匀，静置10 min加入10 mL PBS混匀，再次通过超速离心法分离外泌体[19-20]，200 μL 1×PBS重悬外泌体沉淀，用于观察骨髓间充质干细胞对外泌体的摄取情况。
1.5.3 碱性磷酸酶染色 按照成骨诱导方案对各组骨髓间充质干细胞进行10-14 d的成骨诱导，弃液润洗3次，加入40 g/L多聚甲醛溶液固定约15 min，加入BCIP/NBT碱性磷酸酶染色液避光孵育20 min，蒸馏水润洗3次，显微镜观察。
1.5.4 茜素红染色 按照成骨诱导方案对各组骨髓间充质干细胞进行21-27 d的成骨诱导，待出现大量不透光结节时，终止培养，弃液润洗2次，40 g/L多聚甲醛固定15 min，蒸馏水润洗3次，加入0.1%茜素红染液，37 ℃避光孵育30 min，蒸馏水润洗3次，显微镜观察。
1.5.5 油红O染色 按照成脂诱导方案对各组骨髓间充质干细胞进行12-16 d的成脂诱导，待出现较多呈亮黄色脂滴时，终止培养，弃液后40 g/L多聚甲醛固定30 min，蒸馏水润洗3次，加入油红O染液染色20 min，蒸馏水洗涤3次，显微镜观察。

1.5.6 qPCR检测成骨、成脂相关mRNA表达 按照提取试剂盒方案提取各组骨髓间充质干细胞总RNA并测定RNA浓度，反转录后进行两步法扩增。采用2-ΔΔCt法计算Runx2、Osterix、CEBPα、PPARγ mRNA相对表达水平，以GAPDH(mRNA)和U6(miRNA)为内参进行归一化，研究使用的基因相关检测引物由上海生工生物工程技术有限公司(中国)配制，引物序列如表1所示。

1.5.7 Western blot检测PDGFRα及下游PI3K/AKT通路相关蛋白表达 收集各组骨髓间充质干细胞，加入RIPA裂解液，冰上裂解，离心提取蛋白并进行定量；加入Loading Buffer高温变性10 min后进行电泳、转膜；5%脱脂奶粉室温封闭4 h后TBST洗涤条带4次，每次5 min，然后分别加入稀释好的GAPDH (1∶20 000)、PI3K(1∶1 500)、p-PI3K(1∶2 000)、AKT (1∶1 500)、p-AKT(1∶2 000)、PDGFR(1∶2 000)一抗；4 ℃摇床孵育过夜，TBST洗涤4次，每次5 min；HRP偶联羊抗兔二抗(1∶5 000)孵育2 h，TBST洗涤条带4次，每次5 min，进行ECL显影，采用Image J软件进行蛋白定量分析。
1.6 统计学分析 使用SPSS 25.0对数据进行分析，计量资料以x±s表示，数据服从正态性和方差齐性，组间比较采用单因素方差分析，若数据方差不齐，则采用非参数检验，P < 0.05为差异有显著性意义。文章统计学方法已经通过南京中医药大学生物统计学专家审核。

讨论

骨质疏松症作为慢性骨病，其治疗一直是医学领域的重点与难点。传统的治疗手段涵盖物理治疗与药物治疗，旨在通过多种途径改善患者的骨密度、骨质量，降低骨折风险。药物治疗是骨质疏松症治疗的关键环节，主要为抑制骨吸收和促进骨形成两大类。然而传统药物如雌激素、降钙素及双膦酸盐等存在一些局限性。例如双膦酸盐虽然是最常用的骨特异性抗吸收剂，但长期使用可能导致骨组织变脆，增加骨折风险[23-24]。外泌体是一类直径介于30-150 nm的纳米级囊泡，作为细胞间通讯的关键递质，不仅能够在复杂的生物环境中稳定存在，还可有效保护内部携带的蛋白质、脂质、miRNA等生物活性分子，提高药物在骨组织中的靶向性和生物利用度，重塑骨稳态的平衡[25-26]。
近年来，越来越多的研究探索中药及其有效成分在调节外泌体miRNA功能方面的潜在作用，为骨代谢疾病的治疗开辟了新的途径。中药及其有效成分可通过多组分、多靶点协同作用，影响外泌体关键蛋白及分子表达、促进骨髓间充质干细胞成骨分化、改善骨髓微环境炎症状态等，发挥抗骨质疏松效应。例如左归丸可通过调控miR-34a促进成骨蛋白Runx2表达，从而调节骨髓间充质干细胞成骨分化[27]；而金丝桃苷靶向miR-19a-5p/白细胞介素17轴，缓解骨质疏松症炎症状态，发挥抗骨质疏松作用[28]。该研究聚焦于骨髓间充质干细胞骨脂代谢失衡的病理状态，将脂肪间充质干细胞培养上清中提取的外泌体与骨髓间充质干细胞共培养，验证了骨髓间充质干细胞可成功摄取外泌体，而含药血清干预后分离的外泌体更容易被骨髓间充质干细胞摄取；经过成骨、成脂诱导培养后，外泌体可促进骨髓间充质干细胞成骨分化，抑制成脂分化，调节骨脂分化平衡，而温肾通络止痛方含药血清干预后的外泌体通过进一步强化以上效应发挥作用。
为探究外泌体促进骨髓间充质干细胞骨脂平衡的具体分子机制，利用高通量测序技术获取了温肾通络止痛方干预脂肪间充质干细胞来源外泌体中的差异miRNA表达谱，并利用qPCR技术筛选出差异miR-342-3p为最为明显的miRNA。已有研究报道miR-342-3p参与细胞分化过程，可通过Sufu/Gli调控Hedgehog信号通路，促进间充质干细胞成骨相关基因表达以维持骨稳态[29-30]。生物信息学预测结果显示PDGFRα与miR-342-3p存在靶向结合的位点，PDGFR是一种受体酪氨酸激酶(RTKs)，已被证明在体外和体内都能影响间充质细胞的增殖和扩增[31-32]。
另外PDGFR在脂肪生成和能量代谢中具有重要的调节作用，尤其是在脂肪前体细胞的分化和成熟过程中[33]。YAN等[34]也进一步证实miR-140可促进PDGFRα表达，进一步加速脂质生成和脂肪间充质干细胞分化，而抑制miR-140-5p则会减弱这些过程。PDGF/PDGFR 信号通过激活 PI3K/Akt 通路介导细胞反应，其诱导的 Akt 底物磷酸化水平与 Akt 特异性激活剂 SC79 的处理效果相当[35-37]。前期研究证明PI3K/Akt信号通路亦在骨髓间充质干细胞骨脂代谢中扮演着关键角色，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白作为PI3K/Akt通路的重要下游效应分子，黄芪素通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白的激活促进骨髓间充质干细胞的自噬，减轻卵巢切除引起的骨质疏松[38]；另有研究指出mTORC2蛋白介导Akt蛋白磷酸化，进而促进GSK3β的激活，影响骨髓间充质干细胞增殖并促进其成骨分化[39]。因此，以上研究结果提示温肾通络止痛方可能通过上调脂肪间充质干细胞外泌体miR-342-3p，抑制PDGFRα介导的脂肪生成，激活PI3K/Akt信号通路，从而逆转骨髓间充质干细胞病理状态下的骨脂代谢失衡。然而以上研究存在部分局限，仅在细胞生物学方面进行验证，后期将在体内实验中进一步验证脂肪间充质干细胞外泌体miR-342-3p对骨质疏松大鼠骨脂代谢平衡的作用机制；另外，该研究虽然通过Western blot、qPCR等实验技术证实miR-342-3p与PDGFRα靶向关系，但缺少荧光素酶报告可能会使实验结论缺乏说服力。
总体而言，该研究从外泌体miRNA角度揭示了温肾通络止痛方“补肾健脾，疏肝通络”的物质基础。一方面，外泌体miR-342-3p直接作用于PI3K/AKT通路，模拟了“补肾填精”促进骨形成的效应；另一方面，促进PDGFRα表达可能通过减少脂肪沉积实现“通络”以改善骨髓微环境。这种“成分-外泌体-通路-表型”的多层次调控网络，为骨质疏松症的代谢微环境研究及中药复方干预策略提供了新视角。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

温肾通络止痛方通过外泌体miR-342-3p调控骨髓间充质干细胞骨脂分化平衡

Wenshen Tongluo Zhitong decoction regulates the bone fat differentiation balance of bone marrow mesenchymal stem cells through exosomal miR-342-3p

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 5

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	刘文龙, 董磊, 肖争争, 聂宇. 骨质疏松患者行固定平台单髁置换后胫骨假体松动的有限元分析[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(9): 2191-2198.
[2]	吴妍廷, 李宇, 廖金凤. 氧化镁纳米粒调控成骨与血管生成相关基因表达促进骨缺损愈合[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(8): 1885-1895.
[3]	蒋星海, 宋玉林, 李德津, 邵建敏, 徐军志, 刘华凯, 吴应国, 沈岳辉, 冯思诚. 血管内皮生长因子165基因转染骨髓间充质干细胞构建血管化两亲性肽凝胶模块[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(8): 1903-1911.
[4]	胡雄科, 刘少华, 谭谦, 刘昆, 朱光辉. 紫草素干预骨髓间充质干细胞改善老年小鼠股骨的微结构[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1609-1615.
[5]	宋浦蓁, 马贺宾, 陈宏广, 章亚东. 骨髓间充质干细胞外泌体联合转化生长因子β1对巨噬细胞的作用[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1616-1623.
[6]	袁小霜, 杨姁, 杨波, 陈晓旭, 田婷, 王飞清, 李艳菊, 刘洋, 杨文秀. 弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞条件培养液对人骨髓间充质干细胞增殖、凋亡的影响[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1632-1640.
[7]	李镇宇, 张思明, 柏家祥, 朱晨. 蛇床子素改善高糖环境下骨髓间充质干细胞的成骨分化功能[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1641-1648.
[8]	韩念荣, 黄异飞, 艾克热木·吾斯曼, 刘岩路, 胡炜. 高糖微环境中程序性细胞死亡受体1抑制大鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1649-1657.
[9]	金东升, 赵张红, 朱子银, 张森, 孙祖延, 邓江. 淫羊藿苷缓释微球三维支架对兔骨髓间充质干细胞成骨分化的影响[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1658-1668.
[10]	邹玉莲, 陈朝沛, 黄海霞, 兰玉燕, 刘敏, 黄婷. 白藜芦醇在炎症微环境下促进骨髓间充质干细胞的成骨分化[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1669-1678.
[11]	王秋花, 杜孜玮, 王文双, 赵冬梅, 张晓晴. 雌雄大鼠脂肪间充质干细胞代谢、增殖、分化及向血管平滑肌细胞分化的差异性[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1687-1698.
[12]	何家乐, 黄茜, 董鸿斐, 陈朗, 钟方宇, 李先慧. 脱细胞真皮基质联合脂肪干细胞外泌体促进烧伤创面愈合[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1699-1710.
[13]	夏林枫, 王露, 龙乾发, 唐荣武, 罗浩东, 汤轶, 钟俊, 刘阳. 人脐带间充质干细胞来源外泌体减轻脓毒症脑病小鼠血脑屏障损伤[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1711-1719.
[14]	陈钰璘, 何莹莹, 胡凯, 陈枝凡, 聂莎, 蒙衍慧, 李闰珍, 张小朵, 李宇稀, 唐耀平. 瓜蒌类外泌体囊泡防治动脉粥样硬化的作用及机制[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1768-1781.
[15]	韩腾, 马洪, 杨若仪, 罗祎, 李超. 口腔鳞状细胞癌细胞来源外泌体递送血管生成素2参与肿瘤血管生成[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(7): 1755-1767.