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钟基因在不同胎龄小鼠胚胎和孕鼠的表达规律

闫银弟，罗旭光，杨艳萍，李海荣，崔慧林，曹锡梅

中国组织工程研究 2019, 23 (1): 96-102. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0607

摘要（574）

PDF （987KB）（349）

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文题释义：
生物钟基因(夜蛋白基因)：夜蛋白基因一种参与生物节律规则的基因可能同时也是参与调节新陈代谢的主要控制因素。该基因由美国威斯康星医学院的约瑟夫•彼沙斯(Joseph C. Besharse)和弗吉尼亚大学的卡拉•格林(Carla B.Green)发现。当生物钟基因夜蛋白基因在老鼠体内失活的时候，即使对它们喂以高脂肪的食料，它们也不会胖起来，但是油脂和葡萄糖代谢的很多方面都紊乱了。
胚胎发育：指胚胎从受精卵到胚胎脱离卵膜的这一过程。分为直接发育和间接发育，作为两种模式，虽能够概括所有多细胞动物的胚胎发育，但还不足以表达出无脊椎动物各门类胚胎发育的特点及其相互联系。各门无脊椎动物的后期胚胎发育或变态期的形态发生过程，都各具发展方向，当然难以归纳为少数模式。但如以早期胚胎发育过程为准，则无论在进化水平相近门类之间或不同进化水平门类之间，都存在着一些形态发生上的共性或规律性的内容。

摘要
背景：胚胎发育过程中，周期性节律出现的时间和作用至今尚未完全研究清楚。
目的：观察小鼠胚胎发育过程中钟基因在不同胎龄胚胎、孕鼠肝脏和骨骼肌的时空表达特点。
方法：收集ICR小鼠胎龄10-17 d全胚胎，用抗CLOCK和抗Per1多克隆抗体对胎龄10-17 d小鼠胚胎心脏、肺、肝和体壁骨骼肌进行免疫组织化学染色；胎龄10-17 d小鼠胚胎、孕鼠肝脏和股四头肌的cDNA作模板，定量RT-PCR分析钟基因BMAL1、CLOCK、Per1和肌调节因子myogenin、Tcap、MAZ的表达规律。
结果与结论：①小鼠胚胎发育早期，全胚的钟基因相对表达较低；②免疫组织化学显示胎龄10至11 d，心脏未见CLOCK和Per1阳性细胞，孕鼠子宫蜕膜组织中可见略高于背景的CLOCK弱阳性细胞和Per1强阳性细胞；胎龄13 d，左心房底壁和左右支气管气道平滑肌清晰可见CLOCK阳性细胞；胎龄14 d，体壁骨骼肌出现CLOCK和Per1阳性细胞；胎龄15 d始，全胚的钟基因表达明显升高，但未呈现周期性节律波动，Z线相关蛋白Tcap表达显著增高，提示肌节发育，肺叶内细支气管壁可见CLOCK阳性细胞，右心房出现少量Per1阳性细胞；胎龄16至17 d，肺叶内终末细支气管气道平滑肌呈CLOCK和 Per1阳性，右心房出现Per1强阳性细胞；③胎龄10-17 d肝脏内始终未见CLOCK 和Per1阳性细胞；④胚胎发育过程中MAZ表达水平始终高于myogenin和Tcap，可能参与骨骼肌细胞的分化，钟基因在孕鼠骨骼肌呈稳定周期性节律表达；⑤结果表明，小鼠胚胎发育过程中钟基因的表达和细胞发育成熟相关；心脏、肺和骨骼肌发育可能受钟基因的调节，心房和心室发育不同步，右心室发育晚；小鼠胚胎昼夜节律和功能活动变化可能受孕鼠骨骼肌影响。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
ORCID: 0000-0001-6883-6283(闫银弟)

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体外培养猪骨髓间充质干细胞hHCN2基因的转染及表达

闵锐，李建美，陶四明，张新金，李先花

中国组织工程研究 2012, 16 (41): 7698-7703. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.41.020

摘要（219）

PDF （561KB）（383）

背景：通过超极化活化的阳离子电流调制心脏自律性成为该领域研究的焦点。
目的：将起搏基因质粒CMV-hHCN2-3xha-IRES-EGFP转染到猪骨髓间充质干细胞，检测其在骨髓间充质干细胞中核酸和蛋白水平是否表达。
方法：采用单纯直接贴壁法或密度梯度离心结合直接贴壁法分离、纯化、增殖获得骨髓间充质干细胞，脂质体2000转染质粒CMV-hHCN2-3xha-IRES-EGFP至骨髓间充质干细胞。
结果与结论：单纯直接贴壁法收集到的细胞增殖速度慢，而密度梯度离心结合直接贴壁法细胞增殖速度较快，原代细胞培养第3代后转染48 h荧光显微镜下可见骨髓间充质干细胞发出荧光，对照组无荧光。细胞转染率达15%-20%。RT-PCR检测及Western blot 印迹检测证明了hHCN2基因在骨髓间充质干细胞有表达。密度梯度离心结合直接贴壁法较单纯直接贴壁法培养骨髓间充质干细胞的培养效率更高。转染目的基因hHCN2的骨髓间充质干细胞蛋白有表达。

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构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体转染人骨髓基质细胞

陈镇洲

中国组织工程研究 2012, 16 (41): 7704-7708. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.41.021

摘要（351）

PDF （476KB）（497）

背景：骨髓基质细胞不表达端粒酶，因而在体外传代扩增过程中端粒长度逐渐缩短，导致细胞衰老，这是限制其用于细胞治疗应用的一个重要因素。
目的：构建人端粒酶催化亚单位基因慢病毒表达载体，探讨以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞的可行性。
方法：以pReceiver-M02-hTERT质粒为模板PCR扩增获得目的基因。用BP重组系统将目的片段重组到载体pDONR221上。然后使用LR重组系统将目的序列重组到载体pLenti6.3/V5-DEST上。将重组载体与包装质粒充分混合，利用脂质体共转染293FT细胞获得慢病毒颗粒。
结果与结论：成功构建人端粒酶催化亚单位慢病毒表达载体，病毒的平均物理滴度为1.07×10¹²LP/L。以之转染人骨髓基质细胞，目的基因表达水平有显著提升，细胞正确表达人端粒酶反转录酶蛋白。说明以慢病毒介导的人端粒酶催化亚单位基因修饰人骨髓基质细胞能强化细胞表达人端粒酶催化亚单位。

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慢性粒细胞白血病患者骨髓来源Flk1+CD31-CD34-间充质干细胞中 BCR/ABL融合基因的检测

朱希山，张舸，施薇，台卫平

中国组织工程研究 2012, 16 (27): 5006-5010. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.27.013

摘要（243）

PDF （392KB）（426）

背景：免疫表型为Flk1+CD31-CD34-的间充质干细胞体内外实验研究均证实在单细胞水平可以向造血及内皮细胞分化。
目的：观察慢性粒细胞白血病患者骨髓BCR/ABL融合基因的表达情况。
方法：体外培养扩增慢性粒细胞白血病患者骨髓来源原始间充质干细胞，测定其生长曲线，分析其细胞周期及免疫表型，使用RT-PCR和FISH的方法检测其BCR/ABL融合基因的表达情况。
结果与结论：慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的原始间充质干细胞呈成纤维样生长，大部分细胞处于G0/G1期，并且高表达Flk1，CD13，CD29，CD44，用RT-PCR和FISH的方法能够检测出BCR/ABL融合基因的表达。提出慢性粒细胞白血病的白血病基因转化可能发生在比造血干细胞更高的血液血管干细胞水平上。

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血管内皮生长因子基因修饰骨髓间充质干细胞移植心肌梗死大鼠：高压氧干预促进治疗性血管生成

高峰，张近宝，周凯，欧阳辉，唐柯，邬晓臣，何春阳，刘维永

中国组织工程研究 2012, 16 (27): 5011-5016. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.27.014

摘要（246）

PDF （592KB）（407）

背景：骨髓间充质干细胞移植入缺血心肌后梗死区周边心肌的缺血、缺氧、炎性反应、细胞凋亡等病理变化严重影响到移植骨髓间充质干细胞的存活，而高压氧能显著改善其缺氧状态。
目的：对心肌梗死模型大鼠缺血心肌局部移植血管内皮生长因子修饰的骨髓间充质干细胞，在移植后对大鼠进行高压氧干预，探讨其对骨髓间充质干细胞移植后所获得的治疗性血管生成效应的影响。
方法：将真核表达载体pcDNA3.1(-)/人血管内皮生长因子165转染大鼠骨髓间充质干细胞，再移植至心肌梗死模型大鼠的缺血区组织，移植前细胞行CM-DiI标记。移植后2周每日对大鼠行高压氧治疗干预。移植1个月后行心脏B超测量其左室射血分数，组织化学苏木精-伊红染色和Ⅷ因子染色并评价新生血管密度。
结果与结论：CM-DiI能有效标记骨髓间充质干细胞，标记率近100%。细胞移植1个月后高压氧干预的大鼠射血分数、再生血管密度较均明显增高(P < 0.05)。证实，高压氧干预能显著促进移植血管内皮生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞的心肌梗死大鼠所获得的治疗性血管生成作用，对心脏功能有明显改善作用。

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pIRES-骨形态发生蛋白2质粒转染大鼠骨髓间充质干细胞后的持续表达

孙立，田晓滨，胡如印，王远政，田家亮，韩伟，李波，袁军，聂瑛洁

中国组织工程研究 2012, 16 (27): 5017-5021. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2012.27.015

摘要（180）

PDF （424KB）（397）

背景：重组人骨形态发生蛋白2已被广泛应用于骨组织工程治疗骨缺损或骨不连，但是直接应用外源性骨形态发生蛋白2修复骨缺损效果不理想。
目的：观察转染pIRES-骨形态发生蛋白2的大鼠骨髓间充质干细胞持续合成并分泌骨形态发生蛋白2的情况。
方法：全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，脂质体介导下将真核表达质粒pIRES-骨形态发生蛋白2导入大鼠骨髓间充质干细胞。
结果与结论：ELISA结果显示，随着pIRES-骨形态发生蛋白2转染时间的延长，大鼠骨髓间充质干细胞分泌的骨形态发生蛋白2逐渐增多，至转染后10~12 d达高峰，转染后15 d，仍可见较多骨形态发生蛋白2的表达。说明转染pIRES-骨形态发生蛋白2的大鼠骨髓间充质干细胞可持续稳定分泌骨形态发生蛋白2。

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人骨形态发生蛋白2基因修饰自体骨髓间充质干细胞移植促进兔下颌骨牵张成骨实验的组织形态学观察

黄旋平，周诺，江献芳，宋继传，李华，谢庆条

中国组织工程研究 2012, 16 (23): 4242-4246. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.23.013

摘要（225）

PDF （535KB）（452）

背景：如何提高牵张成骨过程中新骨形成的速度和质量，缩短牵张成骨治疗时间，减少并发症的发生是目前该领域的研究热点。
目的：观察人骨形态发生蛋白2基因修饰自体骨髓间充质干细胞移植对兔下颌骨牵张成骨新骨形成的促进作用。
方法：36只新西兰白兔随机摸球法分为3组。建立牵张成骨动物模型，在固定期第2天，实验组于牵张间隙注射人骨形态发生蛋白2基因修饰的自体骨髓间充质干细胞；对照组注射等量自体骨髓间充质干细胞；空白组注射等量生理盐水。
结果与结论：在固定期2周及6周实验组牵张区骨小梁形成质量明显好于对照组和空白组。证实骨形态发生蛋白2基因修饰的自体骨髓间充质干细胞移植能有效促进兔下颌骨牵张成骨新骨形成。

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核受体相关因子1基因转染骨髓源性神经干细胞体外诱导向多巴胺能神经元的分化

梁维，许志恩，柯俊龙，陈静娟，李华

中国组织工程研究 2012, 16 (23): 4247-4252. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.23.014

摘要（271）

PDF （505KB）（347）

背景：核受体相关因子1基因修饰是否促进骨髓源性神经干细胞向多巴胺能神经元分化少见报道。
目的：观察核受体相关因子1基因修饰骨髓源性神经干细胞在体外诱导分化为多巴胺能神经元的作用。
方法：体外培养和纯化大鼠骨髓源性神经干细胞，将骨髓源性神经干细胞分为4组，将未转染的骨髓源性神经干细胞随机分为对照组，脑源性神经营养因子组；将筛选出的重组质粒转染阳性的神经干细胞分为核受体相关因子1组和核受体相关因子1+脑源性神经营养因子组。
结果与结论：RT-PCR显示转染的骨髓源性神经干细胞4 d后核受体相关因子1高表达，分化结果显示：核受体相关因子1+脑源性神经营养因子组细胞内酪氨酸羟化酶在mRNA水平上的表达量最高，神经干细胞贴壁分化后各组酪氨酸羟化酶阳性细胞比例均明显高于对照组，其中以核受体相关因子1+脑源性神经营养因子组分化比例最高，为(52.44±15.9)%。提示核受体相关因子1基因修饰可促进骨髓源性神经干细胞向多巴胺能神经元分化，并通过脑源性神经营养因子的诱导作用，在体外可获得大量的多巴胺能神经元。

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干细胞调控因子神经系统多梳蛋白1的全基因组范围结合靶点分析

李辉，刘媛，龚燕华

中国组织工程研究 2012, 16 (23): 4259-4262. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.23.016

摘要（329）

PDF （346KB）（352）

背景：在胚胎发育早期神经系统高表达的多梳蛋白家族成员神经系统多梳蛋白1具有明确转录抑制作用。最近研究表明，神经系统多梳蛋白1可能是一个有别于同源基因Bmi1的新的神经干细胞调控因子。
目的：检测体外神经细胞分化模型小鼠畸胎瘤P19细胞中神经发育相关表观遗传调控因子神经系统多梳蛋白1在基因组上的结合靶点。
方法：扩增未分化状态的小鼠畸胎瘤P19细胞系(内源性高表达神经系统多梳蛋白1基因)，使用兔源抗神经系统多梳蛋白1多克隆抗体进行P19细胞的染色质免疫沉淀实验，并结合采用高通量芯片检测技术(ChIP-on-chip)检测捕获靶基因序列，最后利用生物信息学在线软件分析神经系统多梳蛋白1结合靶点临近基因功能的分类特点。
结果与结论：筛选出约1 280个神经系统多梳蛋白1结合靶点，靶点临近或所在基因的功能主要与分化、发育、转录及其调节、神经发生等密切相关。提示全基因组结合靶点分析可有效揭示神经系统多梳蛋白1基因在体外神经干细胞分化模型P19细胞中结合并可能参与调控的靶基因谱的分布特点，有利于下一步深入开展干细胞调控相关因子神经系统多梳蛋白1的下游信号通路研究。

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人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体转染人骨髓基质干细胞后的细胞增殖

郭伟韬，王辉，刘思景，曾荣，肖启贤，陈子秋，黄云，王斌，胡资兵

中国组织工程研究 2012, 16 (23): 4273-4278. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.23.019

摘要（198）

PDF （605KB）（316）

背景：利用重组腺病毒载体转染外源性基因到组织工程骨的种子细胞是骨缺损基因治疗研究的热点。
目的：用人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2双基因共表达腺病毒载体转染人骨髓基质干细胞，以探讨基因转染对人骨髓基质干细胞增殖的影响。
方法：将Ad-hBMP2-IRES-hFGF2转染至人骨髓基质干细胞中，荧光显微镜观察转染效果，RT-PCR方法观察人骨形态发生蛋白2 cNDA和人成纤维细胞生长因子2 cNDA在人骨髓基质干细胞中的转录情况，Wester blot 方法检测人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2蛋白表达情况，锥虫蓝测定细胞活力，流式细胞仪分析其对细胞增殖的影响。
结果与结论：转染后人骨形态发生蛋白2和人成纤维细胞生长因子2基因在mRNA水平和蛋白水平均有表达，细胞活力无明显变化，流式细胞仪分析细胞周期中增殖细胞比例明显增加。说明该双基因可高效转染人骨髓基质干细胞，且促进细胞增殖。

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RNA干扰抑制骨髓间充质干细胞中caspase-3基因的表达**★

刘立宝1，华平1，杨淞然2，刘家良1，江慧琦1，王萌1，曾宽1，敖翔1，杨艳旗1

中国组织工程研究 2012, 16 (19): 3551-3555. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.19.027

摘要（244）

PDF （426KB）（376）

背景：研究发现，骨髓间充质干细胞移植入心肌梗死区域后易发生凋亡导致移植细胞存活率较低。
目的：构建caspase-3基因的小分子干扰RNA片段(small interfering RNAs，siRNAs)表达质粒，探讨其在体外对骨髓间充质干细胞中caspase-3基因表达的抑制作用。
方法：根据siRNA设计原则，针对caspase-3基因设计并合成siRNAs，构建caspase-3siRNA表达载体并利用脂质体介导方法瞬时转染骨髓间充质干细胞。实验分为正常对照组，阴性序列对照组(si-ncg)和3个干扰组(si-caspase-3-1、si-caspase-3-2和si-caspase-3-3)。
结果与结论：成功构建了caspase-3siRNA表达载体并转染骨髓间充质干细胞。Western blot和RT-PCR检测转染后的骨髓间充质干细胞中caspase-3蛋白和mRNA的表达下降，以转染si-caspase-3-3的骨髓间充质干细胞下降最明显。结果提示构建的caspase-3siRNA表达质粒在体外能抑制骨髓间充质干细胞中caspase-3基因的表达。

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Dlx2基因过表达与前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化过程中的细胞凋亡和周期调控*****★◆

孙昊，王旭东，代杰文，卢境婷，沈国芳

中国组织工程研究 2012, 16 (10): 1808-1812. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.022

摘要（257）

PDF （1157KB）（772）

背景：Dlx2基因在颅神经嵴细胞迁徙进入第一鳃弓过程和颅颌面骨骼发育中起重要作用，但Dlx2基因对成骨细胞分化过程中细胞凋亡和细胞周期调控的影响尚未见报道。
目的：观察Dlx2基因过表达对前成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化过程中细胞凋亡和细胞周期调控的影响。
方法：构建反转录病毒pMSCV-puro-Dlx2并转染矿化诱导液培养下的MC3T3-E1细胞，构建稳定过表达Dlx2基因的细胞系MC3T3-E1-Dlx2。RT-PCR和Western blot验证Dlx2基因过表达细胞系的建立。Annexin V/PI双染色后流式细胞分选检测细胞凋亡，PI/RNase双染色后流式细胞分选检测细胞周期变化。
结果与结论：实验成功构建稳定过表达Dlx2基因的细胞系MC3T3-E1-Dlx2。发现Dlx2基因过表达促进细胞凋亡(P < 0.05)，同时阻滞细胞周期于G1/G0期(P < 0.05)，减低细胞增殖性，促进细胞分化行使功能。
关键词：成骨细胞分化；Dlx2基因；稳定过表达；细胞凋亡；细胞周期
doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.022

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人骨形态发生蛋白2基因重组腺病毒表达载体转染兔骨髓间充质干细胞*^★

何春耒，姬广林，刘午阳，吴东宝，何澄，王茂源，叶勇军，莫建文，高辉

中国组织工程研究 2012, 16 (10): 1817-1821. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.024

摘要（259）

PDF （510KB）（279）

背景：采用GatewayTM技术构建腺病毒载体，显著弥补了外源性细胞因子局部应用的缺陷。
目的：观察人骨形态发生蛋白2重组腺病毒表达载体(Ad-BMP-2/GFP)转染兔骨髓间充质干细胞后骨形态发生蛋白2的表达情况。
方法：密度梯度离心联合贴壁培养法，分离、培养、纯化兔骨髓间充质干细胞；GatewayTM技术构建的Ad-BMP-2/GFP腺病毒载体转染兔骨髓间充质干细胞。
结果与结论：RT-PCR检测转染诱导后的细胞表达成骨细胞特异性产物骨钙素；转染后兔骨髓间充质干细胞在mRNA水平和蛋白水平均有人骨形态发生蛋白2的表达。结果表明构建的Ad-BMP-2/GFP可高效转染兔骨髓间充质干细胞，骨形态发生蛋白2在细胞中能高效表达。

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5-氟尿嘧啶对乳腺癌MCF7细胞中干细胞相关基因Oct4、Bmi-1表达的影响*★

燕丽1，史立纲1，徐正顺1，李惠翔2

中国组织工程研究 2012, 16 (10): 1822-1826. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.025

摘要（333）

PDF （454KB）（338）

背景：国内外研究证明乳腺癌干细胞可能是起始乳腺癌生长及辅助治疗后复发和远处转移的根源。
目的：观察5-氟尿嘧啶对人乳腺癌MCF7细胞Oct4、Bmi-1表达的影响。
方法：应用0.1 mg/L 5-氟尿嘧啶处理MCF7，RT-PCR检测处理前G0及处理后6代细胞G1~G6中Oct4、Bmi-1 mRNA的表达，免疫细胞化学检测处理前G0、G1~G5中Oct4的表达。
结果与结论：5-氟尿嘧啶处理后，Oct4、Bmi-1 mRNA表达水平在G3和G5均较处理前明显增高，OCT4蛋白表达呈现出降低-升高-更高-降低-升高的趋势。提示MCF7中可能存在肿瘤干细胞样细胞；5-氟尿嘧啶可能诱导MCF7中肿瘤干细胞样细胞的数量或比例增加。
关键词：乳腺癌；5-氟尿嘧啶；MCF7细胞；Oct4；反转录酶-聚合酶链反应；免疫细胞化学
doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.025

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间充质干细胞靶向转运胸苷激酶基因联合更昔洛韦杀伤鼻咽癌细胞*★

钟品能，文忠，申聪香，王海丽，王军旗

中国组织工程研究 2012, 16 (10): 1827-1832. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.026

摘要（379）

PDF （655KB）（312）

背景：研究证实，间充质干细胞能通过基因修饰成为肿瘤治疗的靶向载体。
目的：观察转染胸苷激酶基因的胸苷激酶-间充质干细胞联合更昔洛韦对鼻咽癌细胞的靶向杀伤作用。
方法：应用LipofectamineTM 2000将表达胸苷激酶基因的重组质粒pGL3-EGFP-胸苷激酶转染至SD大鼠间充质干细胞，观察其增殖能力。应用Transwell小室观察胸苷激酶-间充质干细胞的归巢特性；将胸苷激酶-间充质干细胞植入裸鼠，观察其致瘤性；用胸苷激酶-间充质干细胞/更昔洛韦干预人鼻咽癌细胞5-8F，观察其对细胞的杀伤作用及旁观者效应。
结果与结论：荧光显微镜观察及RT-PCR检测结果提示实验成功将胸苷激酶基因转染至间充质干细胞，CCK-8检测结果显示胸苷激酶-间充质干细胞与间充质干细胞增殖能力差异无显著性意义(P > 0.05)。Transwell小室迁移实验显示胸苷激酶-间充质干细胞具有归巢特性，裸鼠移植瘤实验显示胸苷激酶-间充质干细胞无致瘤性。CCK-8检测检测发现胸苷激酶-间充质干细胞/更昔洛韦具有旁观者效应，可明显降低5-8F的生存率(P < 0.01)。提示胸苷激酶-间充质干细胞/更昔洛韦对鼻咽癌细胞具有靶向迁移及杀伤作用，间充质干细胞可作为治疗鼻咽癌的理想靶向转运载体。
关键词：鼻咽肿瘤；间充质干细胞；基因治疗；归巢；旁观者效应
doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.026

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氯化锂诱导毛囊干细胞定向分化中Wnt信号通路介导基因的调控

杨斌，向萌娟

中国组织工程研究 2011, 15 (49): 9202-9206. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.49.019

摘要（312）

PDF （2023KB）（405）

背景：研究发现氯化锂有促进毛囊干细胞向毛囊上皮定向分化的作用，但其分子调节机制仍不清楚。
目的：通过外源性因子氯化锂干预人毛囊干细胞，观察Wnt信号通路中主要下游分子及目的基因的改变，探讨氯化锂对毛囊干细胞定向分化的诱导作用。
方法：取正常成人除皱术后的头皮，采用两步酶消化法结合手术显微镜分选毛囊干细胞，采用角蛋白10抗体-异硫氰酸荧光素鉴定毛囊干细胞。以外源性因子氯化锂干预人毛囊干细胞。
结果与结论：氯化锂干预5 d后可发现毛囊干细胞体积变大，核浆比减小，Wnt信号通路中β-catenin、cyclinD1表达增强，GSK3β、Tcf3表达减弱，c-myc在氯化锂浓度低时增强浓度高时减弱。提示氯化锂可影响毛囊干细胞中Wnt信号通路β-catenin、GSK3β、Tcf3、c-myc和cyclinD1的表达水平，可能对毛囊干细胞的分化起到重要作用。

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人胚胎干细胞Pten基因表达及PI3K/Akt/mTOR信号通路下游蛋白的磷酸化

周睿卿，龚玉萍，邢宏运，杨曦

中国组织工程研究 DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.49.020

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重组反转录病毒碱性成纤维细胞生长因子基因转染对人骨髓基质细胞成骨的影响

周荣兴，陈华，郭军，吕慧成，杨铁翼

中国组织工程研究 2011, 15 (49): 9211-9214. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.49.021

摘要（267）

PDF （1175KB）（264）

背景：国内外有关成纤维细胞生长因子基因转染促血管和促肌肉生长的研究较多，而成纤维细胞生长因子基因促成骨的研究未见报道。
目的：观察重组反转录病毒retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子基因转染对人骨髓基质细胞成骨能力的影响。
方法：从健康志愿者全骨髓中分离培养人骨髓基质细胞，体外扩增纯化后分为4组：①retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组：培养液中加入碱性成纤维细胞生长因子基因重组反转录病毒。②retrovirus pLXSN组：培养液中加入反转录病毒空载体。③阳性对照组：培养液中添加地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠。④空白对照组：不给予特殊处理。
结果与结论：经多次换液传代，人骨髓基质细胞呈均一梭形形态。处理后retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组与阳性对照组细胞形态逐渐趋于扁平，突起减少。免疫组织化学染色见retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子组碱性成纤维细胞生长因子表达明显强于其他3组。retrovirus pLXSN/碱性成纤维细胞生长因子和阳性对照组可引起细胞碱性磷酸酶活性增高和矿化结节及骨胶原形成。提示基因重组反转录病毒成纤维细胞生长因子转染对人骨髓基质细胞成骨能力具有促进作用。

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骨髓间充质干细胞中突变型人低氧诱导因子1α真核表达载体的表达

张男，李谌，郭韬，刘丹平

中国组织工程研究 2011, 15 (45): 8495-8498. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.45.030

摘要（329）

PDF （1419KB）（254）

背景：转基因小鼠体内实验证实，重组的低氧诱导因子1α可以促进皮肤形态功能正常的血管新生。
目的：构建能够在常氧条件下同时表达突变型低氧诱导因子1α目的蛋白和绿色荧光蛋白报告分子的新型腺病毒真核表达载体，并转染SD大鼠骨髓间充质干细胞，检测该基因在细胞中的表达情况。
方法：利用Lipofectamine 2000介导将构建成功的重组腺病毒真核表达载体pAd-HIF1αmu- IRES-hrGFP-1转染HEK293A细胞，包装病毒，以最佳感染指数=50将重组腺病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞，并设3个对照组，即阳性对照组：转染Ad-CMV-HIF1α-IRES-hrGFP-1；阴性对照组：转染Ad-CMV-IRES-hrGFP-1组；空白组：未转染病毒。
结果与结论：①腺病毒载体成功转染HEK293A细胞，包装成功，细胞内有大量绿色荧光表达。②转染突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体的细胞在常氧条件下蛋白表达量明显高于转其他3组，3个对照组间差异无显著性意义(P > 0.05)。提示突变型腺病毒真核表达载体Ad-HIF1α-IRES-hrGFP-1在HEK293A内成功包装；突变后低氧诱导因子1α基因能够在常氧条件下大量且高效表达。

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异基因间充质干细胞在体内免疫调节作用的时间及剂量依赖性

朱希山，施薇，台卫平，张舸，安广宇

中国组织工程研究 2011, 15 (45): 8499-8502. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2011.45.031

摘要（284）

PDF （1603KB）（280）

背景：异基因间充质干细胞移植时，发挥作用需要的剂量、持续的时间及是否具有不良反应是目前研究的热点。
目的：观察异基因的骨髓间充质干细胞在体内免疫调节作用的时间、剂量依赖性。
方法：免疫系统正常的BALB/c小鼠模型，制备骨髓来源间充质干细胞，24只BALB/c小鼠随机分为4组，实验组每只小鼠分别通过尾静脉注射0.3 mL细胞悬液，分别含5×10⁵，5×10⁴，5×10³骨髓间充质干细胞，对照组小鼠仅注射0.3 mL生理盐水。进行淋巴细胞增殖检测、混合淋巴细胞反应、间充质干细胞移植对异基因小鼠免疫系统的影响等实验。
结果与结论：不同剂量的C57BL/6骨髓来源间充质干细胞经尾静脉注射给BALB/c受体小鼠后，骨髓间充质干细胞体内对免疫系统的调节呈剂量依赖性。间充质干细胞促进异基因移植物的植入，同时这种免疫下调作用在2周时最强，1个月逐渐减弱，2个月基本消失，提示间充质干细胞的免疫调节作用具有剂量依赖性，并且只能维持一段时间。

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