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β-catenin基因沉默对肝癌干细胞干性转录因子的影响

孙华, 覃艳春, 荣震, 李祖隆, 蒋锐沅, 钟晓婷

中国组织工程研究 2023, 27 (15): 2297-2303. DOI: 10.12307/2023.364

摘要（445）

PDF （1941KB）（213）

文题释义：
肿瘤干细胞：是具有自我更新能力并能产生异质性肿瘤细胞的细胞亚群，同时具有致瘤性、连续传代能力及多向分化潜能。
RNA干扰：又称转录后基因沉默，是指将特异性同源双链RNA导入细胞内，使目的基因不表达或者表达水平下降。

背景：肝癌干细胞是导致癌细胞形成、更新和增殖的原因，寻找针对肝癌干细胞治疗的关键靶点，并进一步拓展肝癌综合治疗手段是重要研究课题。
目的：观察β-catenin基因沉默后CD133+HepG2细胞干性转录因子变化，探讨β-catenin调控肝癌干细胞干性的作用机制。
方法：采用免疫磁珠筛选CD133+HepG2细胞，然后经干细胞培养基诱导、扩增方案获得CD133+HepG2肝癌干细胞，流式细胞术鉴定CD133+HepG2细胞阳性率，RNA干扰技术构建沉默β-catenin基因表达的 β-catenin-shRNA慢病毒质粒，转染CD133+HepG2肝癌干细胞72 h，荧光标记并评估转染效率。确认β-catenin沉默后，平板克隆形成实验观察CD133+HepG2肝癌干细胞增殖情况，流式细胞术检测CD133+HepG2肝癌干细胞的细胞周期，qRT-PCR和Western blot检测干性转录因子SOX2，NANOG，OCT4的mRNA及蛋白表达水平。
结果与结论：与空白对照组和病毒空载组相比，病毒干扰组的细胞克隆形成能力明显降低，G0/G1期细胞百分比明显增多，S期和G2/M期细胞百分比降低，NANOG、SOX2、OCT4的蛋白和mRNA表达水平明显降低(P < 0.05)，提示下调β-catenin表达可能对抑制肝癌干细胞的干性水平具有潜在作用。
https://orcid.org/0000-0001-6435-1393(孙华)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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枸杞多糖联合奥沙利铂可逆转结肠癌干细胞的耐药

艾芳芳, 肖红燕, 汪芳, 朱永朝, 马丽君

中国组织工程研究 2024, 28 (1): 74-79. DOI: 10.12307/2024.106

摘要（438）

PDF （2209KB）（173）

文题释义：

枸杞多糖：宁夏枸杞是中国药典收载的唯一正品，枸杞具有调节免疫、抗炎、保护细胞、血管、神经以及抗衰老和抗肿瘤等多种药理作用。枸杞多糖是其主要生物活性成分，主要由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、半乳糖醛酸与多种氨基酸或脂质构成的水溶性复合多糖。

结肠癌干细胞：结肠癌组织中表达干细胞标记物的细胞，具有更强的迁移和分化能力，因此在肿瘤的转移和复发过程中起到关键性作用。

背景：结肠癌临床主要采用以氟尿嘧啶、伊立替康及奥沙利铂为基础的治疗方法，研究发现这些药物的转运与ABC转运蛋白G家族成员2(ATP-binding cassette transport protein of G2，ABCG2)等膜转运蛋白相关，然而当患者对这些化疗药物产生耐药后，ABCG2的高表达致使治疗效果明显下降，引起了结肠癌的耐药问题。临床急切需要新的药物及治疗方法来提高疗效，枸杞多糖具有广泛的生物学活性，将多糖作为抗肿瘤药物，可以克服化疗和放疗过程中杀死肿瘤细胞的同时对机体正常细胞的损伤。
目的：通过体外实验探索枸杞多糖联合奥沙利铂对结肠癌干细胞耐药的逆转作用，进而探讨枸杞多糖逆转结肠癌耐药的可能分子机制。
方法：选用结肠癌细胞株HCT116以及奥沙利铂耐药细胞株HCT116-OXR进行体外实验，采用CCK8检测细胞增殖情况确定枸杞多糖和奥沙利铂的最适干预浓度和干预时间，进一步分为HCT116对照组，HCT116-OXR空白处理组，枸杞多糖组(2.5 mg/mL枸杞多糖)，奥沙利铂组
(10 μmol/L奥沙利铂)，枸杞多糖+奥沙利铂组(2.5 mg/mL枸杞多糖+10 μmol/L奥沙利铂)，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，免疫荧光和Western blot检测磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase，PMI)和ABCG2的表达，Western blot检测PI3K，AKT，Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。

结果与结论：①HCT116-OXR相较HCT116对枸杞多糖更敏感(P < 0.05)；②与HCT116-OXR空白处理组比较，奥沙利铂联合枸杞多糖促进了HCT116-OXR细胞凋亡(P < 0.05)，Bcl-2蛋白表达明显下调(P < 0.05)，Bax蛋白表达明显上调(P < 0.05)，ABCG2、PMI、PI3K、AKT的蛋白表达明显下调(P < 0.05)；③结果表明枸杞多糖通过抑制PMI/PI3K/AKT通路逆转结肠癌耐药，为研究枸杞多糖增敏化疗作用的分子机制奠定了基础。

https://orcid.org/0000-0001-8716-5251(艾芳芳)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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藤黄酸下调蛋白C受体表达杀伤三阴性乳腺癌干细胞的作用机制

李溯, 王清华, 达梦婷, 杨蕊, 陈道桢

中国组织工程研究 2025, 29 (23): 4888-4898. DOI: 10.12307/2025.089

摘要（115）

PDF （3849KB）（568）

文题释义：

藤黄酸：是从传统中药藤黄中提取的化合物，抗癌作用与一般化疗药不同，对肿瘤细胞的抑制有较高的选择性，能选择性杀伤肿瘤细胞且在有效剂量范围内毒副作用较小，对正常动物造血及免疫系统功能没有影响。
蛋白C受体：是一种内皮Ⅰ型跨膜受体，可增强凝血酶(Ⅱa) -凝血调节蛋白复合物对蛋白C的激活作用。诸多证据表明，蛋白C受体在乳腺干性和人类肿瘤发生中也发挥着作用。最近，蛋白C受体被鉴定为多能性小鼠乳腺干细胞的标记物，同时也被证明在3D培养中对于人乳腺上皮细胞的细胞组织和生长是必需的。

摘要
背景：藤黄酸对乳腺癌具有很强的细胞毒性，可有效杀伤三阴性乳腺癌干细胞，但潜在的机制尚不清楚。
目的：探讨藤黄酸对三阴性乳腺癌干细胞的杀伤作用及可能的机制。
方法：使用PharmMapper数据库预测藤黄酸的靶点蛋白，使用String网站构建各药物靶点蛋白互作网络关系，使用Cytoscape软件构建活性成分-作用靶点网络，通过R语言软件对潜在靶点进行KEGG信号通路富集分析。采用CCK-8法检测不同浓度藤黄酸对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231活力的影响，筛选适宜的作用浓度。采用细胞球培养法富集MDA-MB-231细胞干细胞，经过不同浓度(0，0.5，1.0，2.0 μmol/L)藤黄酸作用24 h，TUNEL荧光染色与流式细胞仪检测干细胞凋亡，qPCR与Western blot检测蛋白C受体表达，Western blot检测p-PI3K、p-AKT、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达；将干细胞分4组培养：空白对照组(干细胞不做任何处理)、siRNA-NC组、siRNA-蛋白C受体组和siRNA-蛋白C受体+PI3K激动剂组，培养36 h后，采用Western blot法检测p-PI3K、p-AKT、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达。

结果与结论：①网络药理学发现，三阴性乳腺癌干细胞标志物蛋白C受体是藤黄酸的作用靶点之一；KEGG富集分析涉及细胞凋亡、上皮生长因子受体、RAS和PI3K-AKT信号通路等；②CCK-8检测结果显示，藤黄酸可抑制MDA-MB-231细胞活力，半数抑制浓度IC50值为(1.18±0.34) μmol/L，因此后续实验选择浓度0.5，1.0，2.0 μmol/L；③TUNEL荧光染色和流式细胞术检测证实，藤黄酸以剂量依赖的方式诱导三阴性乳腺癌干细胞凋亡(P < 0.05)；qPCR和Western blot检测证实，藤黄酸可下调蛋白C受体mRNA和蛋白表达，下调Caspase-3、p-PI3K和p-AKT蛋白表达，上调Cleaved Caspase-3蛋白表达(P < 0.05)；siRNA-蛋白C受体转染实验也进一步证实，敲低三阴性乳腺癌干细胞蛋白C受体表达可提升Cleaved Caspase-3蛋白表达(P < 0.05)、下调PI3K/AKT信号通路磷酸化水平(P < 0.05)，而应用PI3K激动剂740 Y-P能够降低Cleaved Caspase-3蛋白表达(P < 0.05)、提升p-PI3K和p-AKT的磷酸化水平(P < 0.05)，一定程度上改善细胞凋亡情况；④结果表明，藤黄酸可能通过下调蛋白C受体来发挥三阴性乳腺癌及干细胞杀伤及诱导凋亡作用，进一步的分子机制可能和PI3K/AKT信号通路抑制有关。

https://orcid.org/0000-0001-5779-3476 (李溯)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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