基因病毒载体与动物模型 Viral vectors for gene transfer in animal models 栏目所有文章列表

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    大鼠C-sis基因克隆及其真核表达载体的构建
    孙国芳,丁 浩
    中国组织工程研究    2016, 20 (49): 7418-7424.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.49.018
    摘要283)      PDF (1900KB)(240)   
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    文题释义:
    基因克隆:是20世纪70年代发展起来的一项具有革命性的研究技术,可概括为分、切、连、转、选。“切”是指用序列特异的限制性内切酶切开载体DNA,或者切出目的基因;“连”是指用DNA连接酶将目的DNA同载体DNA连接起来,形成重组的DNA分子;“转”是指通过特殊的方法将重组的DNA分子送入宿主细胞中进行复制和扩增;“选”则是从宿主群体中挑选出携带有重组DNA分子的个体。最终目的在于通过相应技术手段,将目的基因导入宿主细胞,在宿主细胞内目的基因被大量的复制。
    C-sis:是血小板衍生生长因子B链的编码基因。C-sis的基本功能是通过多种机制促使有丝分裂信号向胞内转导并促进细胞增殖。C-sis编码的蛋白血小板衍生生长因子B是一种较强的促有丝分裂源和化学诱导剂,可刺激间胚叶来源细胞的分裂、增殖,对血管的再生及创伤愈合有良好的促进作用。故C-sis具有促进细胞增殖并抑制凋亡,进而促进组织修复的功能。
    摘要
    背景:
    原癌基因C-sis具有促进细胞增殖并抑制凋亡,进而促进组织修复的功能。假设C-sis可能在受损肝组织的修复和暴发性肝衰竭的治疗中发挥积极作用。
    目的:构建pcDNA3.1/C-sis真核表达载体,检测其在大鼠正常肝细胞株BRL细胞和在体大鼠肝脏细胞中的表达。
    方法:通过RT-PCR的方法克隆C-sis基因的选全长编码序列,构建pcDNA3.1/C-sis真核表达载体。鉴定无误后经脂质体介导转染到BRL细胞中,并通过将质粒注入尾静脉后导入大鼠肝脏。最后通过荧光定量PCR和Western Blot鉴定其在BRL细胞和在体大鼠肝脏细胞中的表达。
    结果与结论:①成功克隆了C-sis基因全长编码区;测序证明pcDNA3.1/C-sis重组真核表达载体构建成功;②将其转染至BRL细胞和在体大鼠肝脏,可使C-sis表达升高;③实验结果为后续研究C-sis基因对大鼠暴发性肝衰竭的影响提供了先决条件。

    中国组织工程研究杂志出版内容重点:肾移植肝移植移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植组织工程
    ORCID: 0000-0001-8793-9069(孙国芳)
    人DRD1基因启动子区克隆和双荧光素酶报告基因系统的构建
    王春红,李 哲,王明菡,邓丽丽,王 欢
    中国组织工程研究    2016, 20 (40): 6060-6066.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.40.020
    摘要613)      PDF (927KB)(268)   

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    文题释义:
    多巴胺受体:多巴胺作为一种内源性神经递质,主要通过多巴胺受体调控其功能。多巴胺受体是能与多巴胺特异性结合而发挥其调节效应的蛋白类物质。多巴胺受体为7个跨膜区域组成的G蛋白偶联受体家族,目前已分离出5种类型(DRD1-DRD5)。根据它们的生物化学、药理特性和生理功能的差别,可分为D1类和D2类受体,两类受体的C端含有磷酸化和棕榈酰化位点,涉及激动剂依赖性受体的去敏感化过程和第四胞内环的形成。
    荧光素酶报告基因:是以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化荧光素生成氧化荧光素,在荧光素氧化的过程中,会发出生物荧光。通过荧光测定仪也称化学发光仪测定荧光素氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达,是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种方法。
     
    摘要
    背景:多巴胺受体启动子区多态性位点的改变会影响受体的表达量,进而影响多巴胺能神经递质的作用,导致相关疾病的发生。
    目的:通过克隆人DRD1基因的启动子区,构建含有该基因启动子序列的双荧光素酶报告基因载体并检测其活性,为研究DRD1基因的转录调控提供基础工具。
    方法:以人静脉血基因组DNA为模板,通过PCR扩增DRD1基因启动子序列并克隆至pGM-T载体,测序验证无误后酶切连接至萤火虫荧光素酶报告基因质粒pGL3-Basic,构建含有DRD1基因启动子的荧光素酶报告基因载体,采用阳离子脂质体法与内对照质粒pGL3-TK共转染HEK293细胞同时以不含启动子的pGL3-Basic载体与内对照质粒pGL3-TK共转染作为阴性对照组,化学发光仪检测相对荧光强度。
    结果与结论:①通过酶切和测序验证重组荧光素酶报告基因载体的DRD1基因启动子区序列正确;②与阴性对照组相比,该重组载体转染HEK293细胞后具有转录活性;③成功构建了含有DRD1基因启动子区的荧光素酶报告基因载体,为研究该基因的转录调控提供了基础工具。

    中国组织工程研究杂志出版内容重点:肾移植肝移植移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植组织工程

    ORCID:
    0000-0002-5083-3962(王春红)
    体积分数95%乙醇建立薄型子宫模型大鼠子宫内膜中波蛋白和血管内皮生长因子的变化
    许艳萍,赵桂峰,苗佳宁,谭季春
    中国组织工程研究    2016, 20 (5): 718-722.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.05.019
    摘要455)      PDF (624KB)(774)   

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    文题释义:

    薄型子宫:是指子宫内膜厚度低于能够获得妊娠的阈厚度,即小于7 mm,可严重影响子宫的容受性。
    子宫内膜:是指构成哺乳类子宫内壁的一层,分为致密层、海绵层和基底层3层。内膜表面2/3为致密层和海绵层统称功能层,受卵巢性激素影响发生周期变化而脱落。基底层为靠近子宫肌层的1/3内膜,不受卵巢性激素影响,不发生周期性的变化。子宫内膜对动情素和孕激素都起反应,因此可随着性周期(发情周期、月经周期)发生显著的变化。动情素可引起子宫肥大,孕激素可促使子宫内膜发生特殊的妊娠初期变化,或改变子宫内膜的性质,使之具有产生蜕膜的能力。子宫内膜覆盖着黏膜,由黏膜上皮与其下方的固有层所组成。黏膜上皮为柱状上皮、立方上皮或复层柱状上皮,动情素分泌时,各上皮细胞将长大、分裂使数目增多。固有层中黏膜上皮下方的部分称为机能层,上皮细胞进入其中形成子宫腺,并对动情素起反应。机能层的下层称为基底层,富有血管。

     

    背景:乙醇化学损伤法能够有效对大鼠子宫进行薄型子宫内膜建模,薄型子宫内膜增殖相关蛋白表达减少,有助于研究薄型子宫内膜相关发生机制,为临床治疗提供指导。
    目的:探索高浓度乙醇致薄型子宫后子宫内膜中波蛋白和血管内皮生长因子的表达变化。
    方法:SD雌鼠右侧子宫缓慢注入0.3 mL体积分数95%乙醇建立薄型子宫模型,左侧子宫注入等量生理盐水作为对照侧。

    结果与结论:与对照侧相比,大鼠损伤侧子宫内膜明显变薄,腺体数量减少,结构紊乱,波蛋白和血管内皮生长因子表达明显降低。说明体积分数95%乙醇损伤可有效建立大鼠薄型子宫内膜动物模型,且与增殖相关的蛋白在薄型子宫内膜中表达出现变化。 

    ORCID: 0000-0003-3055-519X(许艳萍)

    被引次数: Baidu(6)
    构建糖尿病大鼠模型:Klotho基因导入对冠状动脉的保护作用
    舒礼良,陈茂林,苏 刚,徐 敬
    中国组织工程研究    2015, 19 (49): 7958-7963.   DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.49.015
    摘要305)      PDF (585KB)(254)   

    背景:Klotho基因是一种与机体衰老、代谢以及疾病有重要关联的基因,并已在小鼠动物实验中证实可减缓和抑制动脉粥样硬化,其机制与参与脂类代谢有关。
    目的:构建糖尿病大鼠模型,观察Klotho基因导入是否对糖尿病大鼠冠状动脉具有保护作用。
    方法:由正常SD大鼠肾组织提取Klotho基因,对目的基因进行PCR扩增,以腺病毒作为载体。随机将SD大鼠分为模型组、对照组和治疗组,进行糖尿病造模;将Klotho基因导入治疗组,对照组导入普通腺病毒,模型组不作任何处理。造模成功后12周时处死模型动物,检测血清低密度脂蛋白、高密度脂蛋白浓度及冠状动脉内膜、中膜厚度比。
    结果与结论:高密度脂蛋白浓度,治疗组高于模型组及对照组,治疗组与模型组、治疗组与对照组差异均有显著性意义(P < 0.05),模型组与对照组间差异无显著性意义(P > 0.05)。低密度脂蛋白浓度,各模型组均有明显升高,但差异无显著性意义(P > 0.05)。计算各组内膜厚度,治疗组显著小于模型组及对照组,差异均有显著性意义(P < 0.01),而模型组与对照组差异无显著性意义(P > 0.05)。各组间中膜厚度差异无显著性意义  (P > 0.05)。内膜、中膜厚度比,治疗组分别与模型组及对照组相比,差异均有显著性意义(P < 0.01);治疗组与正常组差异无显著性意义(P > 0.05),表明KL基因导入后内膜、中膜厚度比基本接近于正常水平,低于模型组及对照组,内膜增厚程度减小。提示Klotho基因导入糖尿病大鼠后对冠状动脉具有保护作用。