2.1   飞龙掌血的活性成分与靶点蛋白   通过文献回顾，鉴定出飞龙掌血的92种化学成分，其中87种符合筛选标准。排除无靶点的化合物后，最终预测飞龙掌血含54种有效活性成分，对应694个靶点蛋白。使用Cytoscape(v.3.8.0)可视化分析(图2)，其中22种成分具有高度值，表明它们是飞龙掌血的主要活性成分。
2.2   类风湿性关节炎数据集的差异分析结果   将获取的类风湿性关节炎相关基因数据集中GSE77298、GSE55235和GSE55457作为训练集，GSE1919作为外部验证集，对训练集的基因数据进行批次校正处理(图3A，B)。根据筛选标准，共识别1 437个差异表达基因，包括563个下调基因和874个上调基因(图3C)。图3D展示了前50个最显著上调和下调的基因。
2.3   飞龙掌血作用于类风湿性关节炎的靶点   通过飞龙掌血活性成分靶点与类风湿性关节炎差异表达基因取交集，获得140个交集靶点，这些靶点在类风湿性关节炎发病过程中呈现显著差异表达，并与飞龙掌血活性成分存在潜在相互作用；进一步分析发现，其中包含86个靶点上调、54个靶点下调(图4)。
2.4   飞龙掌血抗类风湿性关节炎交集靶点的富集分析结果   对86个上调靶点的GO分析显示，它们参与976种生物学机制，主要通过860个生物过程，如炎症反应调控、免疫反应激活信号通路和免疫反应调节信号通路；定位于44个细胞组分，包括质膜胞质侧、膜外成分和膜胞质侧；涉及72个分子功能，如蛋白酪氨酸激酶活性、蛋白丝氨酸激酶活性和蛋白苏氨酸激酶活性(图5A)。对54个下调靶点的GO分析表明，它们涵盖539种生物学机制，主要通过471个生物过程，如激素代谢过程、伯醇代谢过程和视黄醇代谢过程；主要定位于10个细胞组分，如基底外侧质膜和RNA聚合酶Ⅱ转录调控复合物；涉及67个分子功能，包括激素结合、核受体活性和配体激活转录因子活性(图5B)。











KEGG分析指出，86个上调靶点主要富集于53条信号通路，如趋化因子信号通路、核因子κB信号通路和细胞凋亡(图5C)；54个下调靶点则富集于102条通路，包括酪氨酸代谢、AMP依赖的蛋白激酶信号通路和胰岛素信号通路(图5D)。基于KEGG通路二级分类图(图5E，F)，推测飞龙掌血可能通过影响免疫、疾病、遗传和环境信息等多方面发挥抗类风湿性关节炎作用。
2.5   飞龙掌血抗类风湿性关节炎的特征基因   采用最小绝对收缩选择算子回归对飞龙掌血抗类风湿性关节炎相关的86个上调靶点和54个下调靶点深入分析，分别筛选出17个(图6A)和16个(图7A)误差最小的特征基因，其对模型贡献最大。同时运用支持向量机递归特征消除方法进一步验证筛选：对上调和下调靶点分别分析后，最终得到16个(图6B)和5个(图7B)误差最小的特征基因。
为更精准确定飞龙掌血抗类风湿性关节炎的特征基因，取最小绝对收缩选择算子回归和支持向量机递归特征消除2种方法的交集，最终筛选出10个上调特征基因(图6C)：MMP13(基质金属蛋白酶13)、PIM2(Pim-2原癌基因)、QPCT(谷氨酰肽环转移酶)、SRD5A1(类固醇5α-还原酶1)、NUDT1(核苷二磷酸连接模块含有1)、NR1H3(核受体亚家族1H组成员3)、TLR8(Toll样受体8)、BIRC3(baculoviral IAP重复含有3)、PLCG2(磷脂酶Cγ2)和PTPN7(蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型7)；5个下调特征基因(图7C)：MAPK8(丝裂原活化蛋白激酶8)、CA5A(碳酸酐酶5A)、ERBB4(erb-b2受体酪氨酸激酶4)、AKR1B10(醛糖还原酶相关蛋白1B10)和AVPR1A(精氨酸加压素受体1A)。
2.6   飞龙掌血抗类风湿性关节炎特征基因的KEGG富集结果   对飞龙掌血抗类风湿性关节炎的15个特征基因进行KEGG富集分析(图8A，B)显示，其主要通过ErbB信号通路、钙信号通路、












冠状病毒病-COVID-19及丝裂原活化蛋白激酶信号通路发挥作用。其中MAPK8和PLCG2两个基因在多个信号通路中富集，因此研究选择这2个基因进行深入分析。在疾病背景下，PLCG2被鉴定为上调基因，MAPK8为下调基因(图8C)。
2.7   飞龙掌血抗类风湿性关节炎核心特征基因表达及单基因基因组富集分析   在训练集中，类风湿性关节炎组MAPK8表达低于正常组(P < 0.001)，PLCG2表达高于正常组(P < 0.001)，见图9A。在外部验证集GSE1919中，类风湿性关节炎组PLCG2表达高于正常组(P < 0.01)，并且表达趋势与训练集一致，两组间MAPK8无明显差异，见图9B。
通过单基因基因组富集分析进一步探索核心特征基因区分正常与疾病样本的潜在功能。PLCG2在类风湿性关节炎中表达升高，显著富集于免疫相关通路，包括细胞因子-细胞因子受体相互作用、趋化因子信号通路、造血细胞谱系、IgA生成肠道免疫网络、自然杀伤细胞介导的细胞毒性及原发性免疫缺陷(图9C)。
MAPK8与B细胞受体信号通路、造血细胞谱系、IgA生成肠道免疫网络、利什曼原虫感染、原发性免疫缺陷及T细胞受体信号通路相关(图9D)。表明PLCG2和MAPK8可能通过调控免疫炎症反应在类风湿性关节炎发病中起关键作用。
2.8   分子对接结果   飞龙掌血核心成分与类风湿性关节炎核心特征基因的分子对接能范围为-42.68 kJ/mol至-26.78 kJ/mol(表2)。配体与核心基因结合力强，主要依赖氢键、疏水作用及范德华力，表明天然条件下飞龙掌血核心成分可有效结合类风湿性关节炎核心特征基因PLCG2与MAPK8。图10详细展示药物成分与PLCG2/MAPK8的最佳受体结合模式，8-Methoxychelerythrine与MAPK8蛋白MET-111氨基酸残基形成1个氢键(绿色虚线)，并与ILE-32、VAL-40等形成5个疏水作用(黄色虚线)；Dihydrochelerythrine与PLCG2蛋白MET-14、ASP-16等形成7个疏水作用。
2.9   分子动力学模拟结果   为验证化合物与蛋白的结合亲和力及稳定性，对8-Methoxychelerythrine-MAPK8、Dihydrochelerythrine-PLCG2复合物进行100 ns 分子动力学模拟。从图11A可以看出，两复合物的均方根偏差曲线全程维持在1 nm内且无显著波动，表明结构高度稳定；图11B中，残基均方根涨落均≤1 nm，说明小分子对MAPK8/PLCG2氨基酸残基稳定性的影响极小；图11C中，回转半径曲线分别波动于2.2 nm和1.4 nm附近。MAPK8复合物轨迹平滑，提示结构紧密稳定；PLCG2复合物存在轻微波动，表明结合稳定性略弱；图11D中，8-Methoxychelerythrine-MAPK8间氢键数稳定在1–2个(波动平缓)，凸显强氢键作用与高稳定性。Dihydrochelerythrine-PLCG2复合物几乎无氢键，但图10B的分子对接结果显示Dihydrochelerythrine通过与活性口袋内疏水残基形成范德华力。由于疏水作用的构象适应性较强，可减少因单点突变导致的结合口袋结构改变，并且分子对接结果提示复合物结合自由能绝对值较高，因此依旧维持良好稳定性。图11E中，MAPK8与PLCG2的广义玻恩表面积曲线分别稳定波动于180 nm2和70 nm2内，证实蛋白本征稳定性。
从图12A，B中可以看出，在0/25/50/75/100 ns五个时间点，8-Methoxychelerythrine和Dihydrochelerythrine始终结合于MAPK8、PLCG2的相同位点(小分子构象以红/绿/蓝/黄/橙色标示)，进一步验证复合物的稳定性。根据图12C，MAPK8复合物的自由能景观形成单一主导能量簇，提示超强稳定性；PLCG2复合物存在多能量簇，但构象分析(图12D)证实小分子未解离，能量波动源于PLCG2右侧结构域的局部运动，不影响结合稳定性。根据图12E，F，MAPK8与PLCG2复合物的平均结合自由能分别为-143.05 kJ/mol和-75.19 kJ/mol，前者呈强结合亲和力，后者为中等亲和力。关键残基能量贡献分析显示(图12G，H)，MAPK8的VAL-40(-10.29 kJ/mol)与LEU-168(-10.00 kJ/mol)、PLCG2的MET-14(-9.92 kJ/mol)与VAL-91(-7.53 kJ/mol)是主导结合的关键位点，这些残基与分子对接结果(图10)高度一致，证实模拟全程结合模式稳定。

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类风湿性关节炎是一种病因未明的复杂自身免疫性疾病，典型表现为滑膜增厚、脓肿形成以及软骨和骨组织损伤。类风湿性关节炎的致残率和死亡率较高，给社会及患者个体带来沉重负担[1]。随着人口老龄化、预期寿命延长及全球环境的恶化，类风湿性关节炎的年发病率持续上升，数据显示全球约1%的人口受类风湿性关节炎影响，女性发病率是男性的三四倍[2-3]。当前类风湿性关节炎的治疗策略主要聚焦于调节免疫炎症反应以缓解关节炎症状[4]，但药物不良反应、个性化治疗方案有限、疗效波动性及耐药性等问题仍是重要挑战，亟需探索兼具疗效与安全性的新型治疗药物。
天然植物因天然来源、疗效确切和安全性高而备受关注。飞龙掌血(Toddalia asiatica (L.) Lam.)作为传统抗炎植物，在《中华本草 苗药卷》中明确记载其具有“祛风除湿、消肿解毒、散瘀止痛”功效，与类风湿性关节炎“湿浊瘀阻，经络不通”的中医病机高度契合，为它抗类风湿性关节炎潜力提供了传统医学依据。现代药理研究进一步证实，飞龙掌血提取物可通过多种途径发挥抗炎作用：飞龙掌血提取物可抑制RAW 264.7巨噬细胞中炎症因子的表达，降低胶原诱导关节炎小鼠血清炎症因子水平，并提升白细胞介素10表达，从而发挥抗炎治疗作用；飞龙掌血提取物联合miR-483可促进骨关节炎软骨细胞的增殖，抑制凋亡相关蛋白P21、caspase-3及炎症因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6的表达[5]。近期研究发现，飞龙掌血乙醇提取物可调节佐剂诱导关节炎大鼠模型中肠道免疫辅助性T细胞17/调节性T细胞相关蛋白与mRNA平衡，增加有益肠道菌群、减少有害菌群，逆转微生物失调[6-7]。
上述研究提示，飞龙掌血可能通过调控免疫炎症、细胞凋亡及肠道微生态等通路干预关节炎症，但它抗类风湿性关节炎的机制尚未明确。此外，中药的多成分、多靶点特性也为其机制研究带来挑战。而计算生物学方法，如网络药理学、分子对接等恰能弥补这一局限。网络药理学通过说明药物、靶点和疾病之间的联系，强调整体性，全面揭示药物的作用机制，与中医的系统性、辨证性和多成分调控的特点相吻合。网络药理学为中药成分的研究提供了一种独特的方法，被广泛用于预测中药的潜在有效成分和靶点，以及深入研究药物的作用机制。基于此，此次研究结合生物信息学与分子动力学模拟技术系统探索飞龙掌血活性成分抗类风湿性关节炎的潜在作用机制，为它的临床应用提供科学依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

1   资料和方法   Data and methods
1.1   设计   利用文献及数据库检索飞龙掌血抗类风湿性关节炎的成分和靶点，通过基因本体论(gene ontology，GO)与京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)富集分析靶点功能和信号通路；采用最小绝对收缩选择算子回归和支持向量机递归特征消除两种方法取交集，筛选药物抗类风湿性关节炎的特征基因，分析特征基因KEGG和单基因基因组富集分析，并进一步分析核心特征基因表达；最后，通过分子对接技术与分子动力学模拟研究活性成分与潜在靶点的结合。研究方案设计见图1。
1.2   时间及地点   实验于2025年1-4月在云南省中医医院/云南中医药大学第一附属医院中心实验室完成。
1.3   资料   ①数据获取与检索：GEO数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)、PubChem数据库(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)、RCSB PDB数据库(https://www.rcsb.org/)；②靶点预测与化合物分析：Swiss Target Prediction(http://www.swisstargetprediction.ch/)、SwissADME(http://www.swissadme.ch/)；③网络与可视化工具：Cytoscape 3.8.0、PyMOL 2.6.0；④分子对接与模拟：CB-DOCK2 (https://cadd.labshare.cn/cb-dock2/php/index.php)、GROMACS 2020.6、gmx_mmpbsa在线工具(https://github.com/Jerkwin/gmxtool/tree/master/gmx_mmpbsa)；数据分析与统计：R语言(v.4.3.0)。
1.4   方法   

1.4.1   药物活性成分及靶点筛选   首先通过文献检索飞龙掌血的化学成分，从PubChem数据库获取这些化合物的规范SMILES，随后将SMILES导入SwissADME平台分析它们的生物活性和生物利用度。药物活性成分的筛选基于2个主要标准：①选择胃肠道吸收标记为“high”的成分，以确保口服后具有良好的生物利用度和吸收性；②选择在5项评价标准(Lipinski、Ghose、Veber、Egan、Muegge)中至少2项获得“YES”标记的化合物，表明它具备理想的类药特性[8]。筛选完成后，将合格活性成分的规范SMILES输入SwissTarget Prediction数据库(概率值> 0)获取对应靶点信息，最后使用Cytoscape(v.3.8.0)构建药物-成分-

靶点网络图，通过拓扑网络分析中的度值识别主要活性成分——这些成分与其他节点连接更多，在网络药理作用机制中可能起关键作用，进一步确保筛选结果的可靠性。

1.4.2   疾病数据集获取   GEO数据库由美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information，NCBI)于2000年创建并维护，收录了世界各国研究机构提交的高通量基因表达数据，包括基于单通道和双通道微阵列的实验数据以及非阵列技术如基因表达系列分析、质谱蛋白质组学数据和高通量测序数据。此次研究以“rheumatoid arthritis”为关键词从GEO数据库获取类风湿性关节炎相关基因表达综合数据集，详细信息见表1。利用芯片平台注释文件对原始数据探针进行匹配，排除未注释探针后，以均值合并同一基因的多探针表达值。为消除不同数据集间的技术变异，采用R语言(v.4.3.0)“sva包”ComBat算法对训练集数据进行批次效应校正，随后对校正后的基因表达数据进行标准化处理，通过设定绝对log2倍数变化> 0.585且校正P(adj. P) < 0.05的标准，筛选类风湿性关节炎相关差异表达基因。

1.4.3   飞龙掌血作用于类风湿性关节炎的靶点筛选   将飞龙掌血主要活性成分对应的靶点映射到类风湿性关节炎差异表达基因上，识别两者间的重叠基因，这些重叠基因被视为飞龙掌血通过其活性成分作用于类风湿性关节炎的关键靶点。

1.4.4   GO与KEGG富集分析   为阐明重叠基因的功能及潜在生物学过程，使用R语言(v.4.3.0)“Bioconductor”包进行GO和KEGG富集分析。GO富集分析涵盖3个领域：生物过程、细胞组分和分子功能，揭示这些基因在细胞中的功能角色；KEGG富集分析识别基因参与的关键通路及相互作用，深化对其生物学意义的理解。分析设定校正P(adj. P) < 0.05以确保结果显著性。
1.4.5   特征基因筛选   为识别飞龙掌血抗类风湿性关节炎作用的特征基因，此次研究联合两种互补算法进行特征筛选并取交集，以平衡高维数据降维的准确性与稳定性。最小绝对收缩选择算子回归通过R语言(v.4.3.0)“glmnet”包实现，它的核心优势在于利用L1正则化将次要特征系数压缩至零，能有效剔除冗余变量并降低过拟合风险。经10折交叉验证确定最小化预测误差的最优收缩水平(λ值)，保留λ值下非零系数的基因。支持向量机递归特征消除通过R语言(v.4.3.0)“e1071”包实现，通过递归评估特征对分类模型的贡献度并消除低权重变量，擅长处理非线性关系数据且泛化能力强。采用10折交叉验证确保鲁棒性，当特征数超50时逐半削减，按重要性排序保留顶层基因。最终取2种方法筛选结果的交集以整合相互之间的优势，确定确定飞龙掌血抗类风湿性关节炎相关的上、下调特征基因。
1.4.6   特征基因的KEGG富集分析   使用R语言“Bioconductor”包对特征基因进行KEGG通路富集分析(P < 0.05)，探究它们在信号通路中的功能及作用机制。
1.4.7   核心特征基因表达与单基因基因组富集分析   利用训练集和外部验证集数据，通过R语言“ggpubr”包绘制核心特征基因表达小提琴图，直观展示样本间表达差异。同时计算目标基因与训练集表达数据的相关性，按核心特征基因高、低表达组间log2倍数变化排序基因，剔除对照样本及低表达基因，以‘c2.cp.kegg.symbols.gmt’为参考基因集，通过R语言“clusterProfiler”包进行单基因基因组富集分析(P valueCutoff=1)，筛选显著通路(P < 0.05)，使用‘gseaplot2’可视化富集结果前6的通路。
1.4.8   分子对接   为探究飞龙掌血核心成分与类风湿性关节炎核心特征基因的相互作用，从PubChem数据库下载飞龙掌血核心成分的SDF 2D结构文件，从RCSB PDB数据库获取类风湿性关节炎核心特征基因的PDB格式受体结构。用PyMOL(v.2.6.0)移除受体共结晶配体和水分子，再通过CB-DOCK2在线服务器执行盲对接，包含结合位点探测与盲对接两阶段。用PyMOL分析结合构象、空间相互作用及结合亲和力(≤0 kJ/mol表示自发结合，负值越低结合越强)。
1.4.9   分子动力学模拟   基于对接结果，验证飞龙掌血核心化合物与靶蛋白复合物的稳定性。蛋白质采用Amber14SB力场，配体采用GAFF2力场。TIP4P水模型构建1.2 nm立方周期水盒，PME方法计算长程静电，蒙特卡洛法添加Na⁺/Cl⁻维持电荷中性。平衡步骤：①能量最小化：50 000步最速下降法[终止标准：最大力< 1 000 kJ/(mol·nm)]；②NVT平衡：50 000步(2 fs步长)，310 K恒温；③NPT平衡：50 000步(2 fs步长)，310 K恒温、101.325 kPa恒压；④生产模拟：100 ns非约束分子动力学模拟(2 fs步长)，每10 ps保存轨迹；⑤轨迹分析：评估蛋白骨架均方根偏差、残基均方根涨落、回转半径、蛋白-配体氢键数、相对自由能分布及0/25/50/75/100 ns结构对比；⑥结合自由能：采用分子力学/广义玻恩表面积方法计算平均结合自由能。
1.5   主要观察指标   ①药物活性成分及预测靶点结果；②类风湿性关节炎上调、下调的差异表达基因；③疾病相关靶点与药物-疾病交集靶点；④潜在靶点及核心靶点的富集分析及表达情况；⑤分子对接结果；⑥分子动力学模拟结果。

类风湿性关节炎是一种慢性系统性自身免疫性疾病，发病率呈上升趋势。过去几十年间，类风湿性关节炎的治疗主要聚焦于抗炎疗法或免疫抑制剂的使用，已有多种药物用于缓解相应症状，然而，单靶点治疗策略及严重不良反应仍是患者启动和坚持治疗的主要障碍。传统中药凭借整体调节与协同作用的特点，在类风湿性关节炎治疗中展现出独特的药理学特性。研究表明，飞龙掌血能快速有效改善类风湿性关节炎模型大鼠关节症状，并在治疗过程中增加肠道有益菌、减少有害菌[6-7]。此次研究通过网络药理学进一步探索飞龙掌血治疗类风湿性关节炎的分子机制。
3.1   飞龙掌血核心活性成分的药理特性   此次研究在飞龙掌血中鉴定的22种核心成分主要属于香豆素或生物碱类，这与当前飞龙掌血成分研究一致[9-10]。作为芸香科植物成员，多项研究证实芸香科植物提取物具有抗炎[11]、抗增殖[12]、抗菌抗病毒及促伤口愈合的潜力[13-14]。既往研究表明，飞龙掌血根皮提取的总生物碱具有显著抗炎特性：可明显抑制二甲苯诱导的小鼠耳肿胀和琼脂诱导的爪肿胀；同时抑制羧甲基纤维素钠诱导的血细胞迁移及醋酸诱导的小鼠扭体反应，且长期给药无肝损伤[15]。此外，飞龙掌血乙醇提取物中的生物碱对细菌和真菌生长均具抑制作用，凸显它作为广谱抗菌剂的潜力；其叶片乙酸乙酯提取物所含香豆素化合物能抑制表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌的生长；其香豆素成分还对神经元细胞损伤具有显著保护作用[16]。针对飞龙掌血特异性活性成分的研究表明，其托达烯酮侧链中的α，β-不饱和羰基基团比萘基表现出更优的一氧化氮抑制活性，抗菌效果与阳性对照药物吲哚美辛相当。Luvangetin具有抗癌特性[17]，而Braylin对前列腺素E4和寄生虫感染均显示抑制作用[18-19]。
3.2   飞龙掌血抗类风湿性关节炎作用机制探讨   结果显示，飞龙掌血抗类风湿性关节炎治疗中的上调靶点主要在胞质、膜侧等位置发挥作用，通过刺激蛋白激酶活性、调节炎症反应及激活免疫反应参与疾病病理过程。在类风湿性关节炎中，炎症反应是核心环节，其中核因子κB信号通路是关键枢纽。趋化因子可引导免疫细胞迁移至炎症区域[20]，而凋亡通路异常可能触发炎症级联反应并加剧炎症程度[21]。Fcγ受体虽参与巨噬细胞吞噬调控以清除病原体、维持免疫稳态，但其激活亦可促进炎症因子释放并增强免疫应答[22]。
在上调核心靶点中，MMP13与类风湿性关节炎的破坏性病程相关[23]，TLR8和QPCT可能通过多通路调控炎症反应影响疾病进展[24-26]。SRD5A1的活性亦与类风湿性关节炎疾病系统性指标(如血沉、DAS28 ESR)及患者疼痛程度相关[27]。
对下调靶点的分析显示，飞龙掌血主要干预代谢过程。酪氨酸激酶在细胞分化、代谢、增殖、迁移及凋亡中起关键作
用[28-29]，并且多种酪氨酸激酶参与类风湿性关节炎发病。免疫、炎症与代谢的相互作用已被报道[30-31]，胰岛素抵抗与类风湿性关节炎的潜在关联亦被证实[32-33]。核心下调基因可能通过多种生物效应参与炎症调控[34-35]。
KEGG二级分类图进一步表明，多种疾病与类风湿性关节炎密切相关。研究证实，炎症介导的内皮功能障碍是类风湿性关节炎患者心血管风险(如加速性动脉粥样硬化、心衰、心包炎)的驱动因素[36]。队列研究显示，类风湿性关节炎患者癌症[37-38]、感染及精神障碍风险增加[39-40]。综上所述，飞龙掌血可能通过代谢、免疫等多通路抑制炎症反应发挥抗类风湿性关节炎作用。
基于上、下调核心靶点的KEGG富集分析，PLCG2与MAPK8参与的通路数量最多。训练集中PLCG2与MAPK8在正常组与类风湿性关节炎组表达差异显著，提示该基因与类风湿性关节炎病理相关。但验证集中MAPK8未显示显著差异，可能与验证集样本量较训练集减少导致统计效力不足，或者患者之间的个体异质，如病程阶段、合并症等差异以及疾病状态本身的复杂性等相关。
MAPK/ERK通路在细胞凋亡与分化中起关键作用[41]。MAPK8可与c-Jun结合并增强其转录活性，响应辐射、环境应激及生长因子等刺激[42]。在类风湿性关节炎中，MAPK异常激活促进滑膜血管翳形成[43]。MAPK8还参与铁死亡调控，例如，CAO等[44]发现MAPK8过表达抑制T4O对胶质瘤细胞增殖及铁死亡的影响；LUO等[45]证实MAPK8可逆转LINC01564缺失对细胞凋亡与铁死亡的作用，表明它在细胞死亡调控中具有重要价值。
PLCG2是一种钙离子依赖的跨膜信号酶，可催化磷脂酰肌醇4，5-二磷酸水解为第二信使肌醇1，4，5-三磷酸和二酰甘油，进而激活NLRP3炎症小体。研究发现，PLCG2的高活性突变可通过增强细胞内Ca²⁺释放激活NLRP3炎症小体，进而促进白细胞介素1β分泌[46]，这一过程已在自身炎症性疾病患者的免疫细胞中得到验证。虽与类风湿性关节炎直接关联的研究较少，但近期发现PLCG2的rs60427389单核苷酸多态性与甲氨蝶呤治疗类风湿性关节炎患者的药物性肝损伤相关[47]，提示它或为类风湿性关节炎炎症控制的潜在靶点。
分子对接显示飞龙掌血22种核心成分与PLCG2、MAPK8结合良好。分子动力学模拟进一步证实Dihydrochelerythrine与8-Methoxychelerythrine可分别稳定结合PLCG2与MAPK8，这些核心成分通过与靶点氨基酸残基形成氢键、疏水作用及范德华力实现稳定结合，进而改变靶点生物学功能发挥治疗作用。
值得注意的是，临床应用还需关注飞龙掌血潜在的毒性风险。研究表明，飞龙掌血含有毒性活性成分或成分群，主要表现为中枢神经系统毒性、肝毒性及体质量减轻，但其毒性具有可逆性，并且根的毒性大于茎[48]。毒性成分的蓄积可能与多次给药相关，而炮制方法可影响药物毒性，因此，在关注飞龙掌血治疗作用的同时还需进一步探索其毒性成分群及减毒机制。
3.3   结论   此次研究通过生物信息学与分子动力学模拟技术，深入探索了飞龙掌血抗类风湿性关节炎的潜在机制。通过文献检索筛选获得飞龙掌血的22种核心活性成分及其抗类风湿性关节炎治疗的关键靶点。对于疾病靶点筛选基于类风湿性关节炎患者临床样本数据，通过整合GEO数据库中3个独立训练集的基因表达数据，共纳入超过50例类风湿性关节炎患者的滑膜组织样本，根据筛选标准进行差异分析。飞龙掌血抗类风湿性关节炎的交集基因富集分析表明，飞龙掌血可能通过调控疾病相关信号通路(包括癌症、感染性疾病、代谢性疾病和心血管疾病相关通路)以及与代谢、免疫和炎症相关的生物学通路，介导治疗作用。同时，飞龙掌血的主要成分Dihydrochelerythrine和8-Methoxychelerythrine可能作为PLCG2和MAPK8的潜在配体，为“多通路协同”提供了初步线索。但需明确的是，当前结论主要依赖生物信息学富集分析及分子互作模拟，缺乏体内外实验验证关键通路节点的调控效应。此外，目前关于PLCG2作为类风湿性关节炎靶点的作用机制研究有限，值得进一步深入探索。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

此次研究创新性地整合生物信息学与分子动力学模拟技术，系统探索飞龙掌血抗类风湿性关节炎的分子机制。通过严格筛选获得飞龙掌血的22种核心活性成分，构建“药物-成分-靶点”网络，结合类风湿性关节炎差异表达基因分析，识别140个交集靶点，揭示其通过免疫调节、炎症反应及代谢通路协同发挥作用的多靶点特征。研究发现飞龙掌血的核心成分Dihydrochelerythrine和8-Methoxychelerythrine可分别特异性靶向PLCG2与MAPK8蛋白，分子动力学模拟证实两者结合稳定，为类风湿性关节炎治疗提供了潜在候选化合物及精准作用靶点。研究为中药多成分、多通路的科学阐释提供了范例，也为类风湿性关节炎的机制研究和药物开发奠定了理论基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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