淫羊藿苷含药血清对脂多糖诱导人软骨细胞炎症损伤的影响

doi:10.12307/2026.556

中国组织工程研究 ›› 2026, Vol. 30 ›› Issue (6): 1368-1374.doi: 10.12307/2026.556

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淫羊藿苷含药血清对脂多糖诱导人软骨细胞炎症损伤的影响

李林臻, 焦泓焯, 陈伟南, 张铭哲, 王建龙, 张君涛

天津中医药大学第一附属医院，国家中医针灸临床医学研究中心，天津市 300381

收稿日期:2024-11-23 接受日期:2025-01-23 出版日期:2026-02-28 发布日期:2025-07-14
通讯作者: 张君涛，博士，主任医师，天津中医药大学第一附属医院，国家中医针灸临床医学研究中心，天津市 300381
作者简介:李林臻，女，1999年生，云南省曲靖市人，汉族，天津中医药大学在读硕士，主要从事中医药治疗骨关节炎及软骨修复再生相关基础研究。
基金资助:
国家自然科学基金面上项目(82074470)，项目负责人：张君涛

Effect of icariin-containing serum on lipopolysaccharide-induced inflammatory damage in human chondrocytes

Li Linzhen, Jiao Hongzhuo, Chen Weinan, Zhang Mingzhe, Wang Jianlong, Zhang Juntao

First Teaching Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, National Clinical Research Center for Traditional Chinese Medicine and Acupuncture, Tianjin 300381, China

Received:2024-11-23 Accepted:2025-01-23 Online:2026-02-28 Published:2025-07-14
Contact: Zhang Juntao, MD, Chief physician, First Teaching Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, National Clinical Research Center for Traditional Chinese Medicine and Acupuncture, Tianjin 300381, China
About author:Li Linzhen, Master candidate, First Teaching Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, National Clinical Research Center for Traditional Chinese Medicine and Acupuncture, Tianjin 300381, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China (General Program), No. 82074470 (to ZJT)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
人来源软骨细胞：从人体软骨中获得的细胞，呈圆形或多角形，与人体软骨组织有着相同的生理功能，体外培养的人软骨细胞是用于膝骨关节炎软骨修复研究的关键细胞。
淫羊藿苷含药血清：淫羊藿是补肾壮阳之要药，淫羊藿苷是淫羊藿的主要有效活性单体，动物连续灌胃淫羊藿苷溶液后，采集血液并分离得到血清，即为淫羊藿苷含药血清。

背景：课题组前期研究发现，淫羊藿苷含药血清能够延缓大鼠膝骨关节炎进展，促进软骨细胞增殖与干细胞成软骨分化，但是否能应用于临床尚缺乏充分依据。
目的：探讨淫羊藿苷含药血清对脂多糖诱导的人软骨细胞炎症损伤的修复效应。
方法：CCK-8法检测淫羊藿苷含药血清对人软骨细胞活力的影响并筛选出最佳的淫羊藿苷含药血清体积分数及干预时间；然后将人软骨细胞分为空白对照组、脂多糖组、淫羊藿苷含药血清组及脂多糖+淫羊藿苷含药血清组，按上述分组予以处理后，免疫荧光法检测各组软骨细胞Ⅱ型胶原分泌情况；实时荧光定量PCR法检测相关基因表达。
结果与结论：①淫羊藿苷含药血清对人软骨细胞呈现出良好的生物安全性，当淫羊藿苷含药血清体积分数为15%、干预48 h时细胞活力达最高水平，以此条件为标准进行后续实验；②与空白对照组相比，脂多糖显著抑制软骨细胞分泌Ⅱ型胶原，而淫羊藿苷含药血清能有效促进正常和炎症状态下软骨细胞分泌Ⅱ型胶原；③在脂多糖刺激下，软骨细胞的Ⅱ型胶原和聚蛋白聚糖mRNA表达显著降低，基质金属蛋白酶13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5 mRNA表达显著升高；淫羊藿苷含药血清能促进炎症状态下软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达，抑制基质金属蛋白酶13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5 mRNA表达。结果表明，淫羊藿苷含药血清对人软骨细胞具有良好的安全性，在维持软骨细胞正常生理功能、促进细胞外基质合成和抑制炎症因子分泌方面发挥重要作用。
https://orcid.org/0009-0008-3203-9686(李林臻)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 软骨损伤, 软骨修复, 膝骨关节炎, 淫羊藿苷, 淫羊藿苷含药血清, 工程化组织构建

Abstract: BACKGROUND: Previous studies of the research group have found that icariin-containing serum can delay the progression of knee osteoarthritis, promote chondrocyte proliferation and stem cell cartilage differentiation in rats, but there is still a lack of sufficient basis for clinical application.
OBJECTIVE: To investigate the repair effect of icariin-containing serum on lipopolysaccharide-induced inflammatory damage of human chondrocytes.
METHODS: The effect of icariin-containing serum on chondrocyte viability was detected by cell counting kit-8 method, and the optimal volume fraction and time of icariin-containing serum were screened. The cells were then divided into blank group, lipopolysaccharide group, icariin-containing serum group and lipopolysaccharide+icariin-containing serum group. After grouping, immunofluorescence was used to detect the secretion of type II collagen in chondrocytes in each group. Real-time PCR was used to detect the expression of related genes.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Icariin-containing serum showed good biosafety characteristics for human chondrocytes, and the cell viability reached the highest level after 48 hours of intervention when the icariin-containing serum volume fraction was 15%, and the follow-up experiments were carried out according to the conditions. (2) Compared with the blank group, lipopolysaccharide significantly inhibited the expression of type II collagen in chondrocytes, while icariin-containing serum showed a positive mobilization effect, which could effectively promote the secretion of type II collagen in chondrocytes under normal and inflammatory conditions. (3) The mRNA expression of type II collagen and Aggrecan in chondrocytes decreased significantly under lipopolysaccharide stimulation, and the mRNA expression levels of matrix metalloproteinase 13 and a disintegrin-like and metalloproteinase with thrombospondin motifs-5 increased significantly. Icariin-containing serum promoted the mRNA expression of type II collagen in human chondrocytes under inflammatory conditions and reduced the mRNA expression of matrix metalloproteinase 13 and a disintegrin-like and metalloproteinase with thrombospondin motifs-5 in chondrocytes after lipopolysaccharide intervention. Therefore, these findings indicate that the icariin-containing serum has good safety for human chondrocytes and plays an important role in maintaining the normal physiological functions of chondrocytes, promoting the synthesis of extracellular matrix, and inhibiting the secretion of inflammatory factors.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Key words: cartilage injury, cartilage repair, knee osteoarthritis, icariin, icariin-containing serum, engineered tissue construction

中图分类号:

李林臻, 焦泓焯, 陈伟南, 张铭哲, 王建龙, 张君涛. 淫羊藿苷含药血清对脂多糖诱导人软骨细胞炎症损伤的影响[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(6): 1368-1374.

Li Linzhen, Jiao Hongzhuo, Chen Weinan, Zhang Mingzhe, Wang Jianlong, Zhang Juntao. Effect of icariin-containing serum on lipopolysaccharide-induced inflammatory damage in human chondrocytes[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2026, 30(6): 1368-1374.

图/表（结果） 4

2.1 人软骨细胞形态复苏后的软骨细胞贴壁后，倒置相差显微镜观察可见细胞成簇状生长，为梭形或多角形，细胞两端伸出伪足，似成纤维细胞样，见图1。
2.2 人软骨细胞鉴定结果甲苯胺蓝染色可见软骨细胞呈紫蓝色，细胞基质呈蓝色，见图2。
2.3 最佳ICS干预体积分数及时间通过CCK-8检测不同ICS体积分数及不同时间点的软骨细胞活性，并计算细胞活率，结果显示，当培养基中ICS体积分数达到15%时，软骨细胞活性呈现出最为理想的状态，表明体积分数15%的ICS能够对软骨细胞活性产生更为积极的影响；而在时间维度上，与24 h和72 h相比，干预48 h的细胞活率更好，基于此， ICS干预软骨细胞的最佳体积分数为15%，最佳干预时间为 48 h，后续实验以此条件为标准进行，见图3。
2.4 ICS对脂多糖干预的软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响免疫荧光染色检测Ⅱ型胶原表达，结果显示，脂多糖显著抑制了软骨细胞Ⅱ型胶原的表达，这与膝骨关节炎状态下软骨细胞的病理变化相吻合。相较于空白对照组生理状态下的软骨细胞，ICS干预的软骨细胞能分泌更多的Ⅱ型胶原，进一步观察发现ICS不仅能够拮抗脂多糖对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的抑制作用，还可以进一步促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原，见图4。
2.5 ICS对脂多糖干预的软骨细胞中Ⅱ型胶原等mRNA表达的影响 qPCR检测结果显示，在脂多糖的刺激下，软骨细胞中Ⅱ型胶原、聚蛋白聚糖mRNA表达量降低，而MMP13、Adamts5 mRNA表

达量升高，与空白对照组相比差异有显著性意义，MMP13和Adamts5不仅是炎症相关因子，还是与软骨损伤修复直接关联的靶点，在软骨细胞外基质的降解过程中发挥着关键作用[25-26]。MMP13主要降解Ⅱ型胶原，Ⅱ型胶原是关节软骨细胞外基质的重要成分[27]；Adamts5则对聚集蛋白聚糖具有高度的酶解活性，而聚集蛋白聚糖是维持软骨弹性和抗压能力的关键分子[28]，由此可见，脂多糖干预软骨细胞能够较好地模拟膝骨关节炎状态下的软骨损伤状态。在正常生理状态下，ICS对软骨细胞的Ⅱ型胶原与聚蛋白聚糖分泌功能无明显促进作用，但当软骨细胞受到脂多糖刺激而处于炎症状态时，ICS能显著增强Ⅱ型胶原的表达，与免疫荧光结果相吻合，进一步

证明了ICS对于炎症状态下的软骨细胞有修复作用。同时，ICS能够大幅度降低脂多糖刺激后的软骨细胞MMP13、Adamts5表达量。这些数据表明，ICS不仅能够促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原、聚蛋白聚糖等软骨细胞外基质重要成分，发挥对软骨细胞的保护作用，还能够抑制软骨细胞MMP13、Adamts5等炎症因子的表达，有效改善炎症状态下软骨细胞微环境，促进软骨修复，见图5。

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引言

膝骨关节炎是一种常见的关节退行性疾病，临床表现为疼痛、肿胀、活动受限，晚期甚至会出现关节畸形，严重影响患者的生活质量[1-2]。软骨损伤是膝骨关节炎的典型病理特征[3]。关节软骨是一种光滑且富有弹性的结缔组织，在膝关节腔内发挥着润滑关节、缓冲压力、维持关节活动灵活性以及延长关节寿命等重要作用[4]。软骨损伤修复是膝骨关节炎治疗的关键所在[5]。当前，临床修复膝骨关节炎软骨损伤的方法以关节腔内注射透明质酸、皮质类固醇、软骨素、葡萄糖胺等为主[6-7]，这些疗法虽能在一定程度上缓解疼痛、改善关节腔内微环境，但存在药物在关节内停留时间短、药物释放效应不可控等弊端，影响了长期临床疗效，难以实现令人满意的软骨修复效果[8-9]。近年来，随着组织工程的持续研究以及中医药事业的进一步发展，越来越多的研究者将中医药联合组织工程技术修复软骨损伤纳入研究范畴[10]。
中医认为 “肝主筋，肾主骨”，肝肾亏虚、筋骨失养是膝骨关节炎发生的重要原因[11]。补肾类中药在临床治疗膝骨关节炎中颇为常用，其中以具有补肾壮阳功效的淫羊藿应用最为广泛[12]。淫羊藿是补肾壮阳之要药，味辛、甘，性温，归肝、肾经，具有补肾壮阳、祛风除湿的功效[13]。淫羊藿苷是淫羊藿的主要有效活性单体。现代药物研究表明，淫羊藿苷具有促进软骨细胞增殖、抑制炎性因子表达、抑制细胞外基质降解并减少软骨细胞凋亡等作用，有助于维持软骨结构与功能的完整性[14-15]。课题组前期研究发现，淫羊藿苷含药血清(icariin-containing serum，ICS)比淫羊藿苷原液更能促进软骨细胞增殖，且其药效与浓度并非呈正比关系，2倍等效体表面积灌胃所得的ICS在软骨细胞增殖与表型维持方面作用最强[16-17]。ICS不仅能够有效抑制大鼠膝骨关节炎软骨细胞的炎症反应和凋亡过程，还能抑制脂多糖诱导的大鼠膝骨关节炎软骨细胞线粒体膜电位去极化、抑制乳酸生成、稳定线粒体能量表型[18-19]，而且通过动物实验进一步验证了ICS对膝骨关节炎软骨损伤的修复作用[20]。
尽管课题组前期通过动物与细胞实验验证了ICS对炎症条件下软骨的修复效应，但就其真正进入临床并应用于患者而言，当下仍缺乏充分的证据支持。有研究探索了体外培养的人来源软骨细胞与人体内软骨细胞的区别，发现体外培养的人来源软骨细胞与人体软骨细胞形态相似，合成细胞外基质的能力也与体内软骨细胞一致，故可用人来源软骨细胞作为研究对象以观察药物的临床可行性[21]。为能更加科学地推进ICS的临床应用，该实验在课题组前期研究的基础上，以人来源软骨细胞为研究对象，探讨ICS对脂多糖诱导的人来源软骨细胞炎症损伤的修复效应，为ICS的临床应用奠定更为坚实可靠的科学基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计观察性体外细胞学实验，对所得数据进行正态性分析和方差齐性检验，符合正态分布且方差齐性数据多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验，两组间方差不齐者用Dunnet T3检验。
1.2 时间及地点实验于2023年12月至2024年7月在天津中医药大学第一附属医院实验中心完成。
1.3 材料
1.3.1 实验细胞永生化人原代软骨细胞(上海安为生物科技有限公司，编号：AW-CELLS-Y0041)。
1.3.2 实验试剂软骨细胞专用基础培养基(上海安为，批号：PriMed-iCell-020)；特级胎牛血清(广东赛业，批号：FBSAD-01011-500)；胰酶(Gibco，批号：6124102)；PBS(赛维尔)；无血清细胞冻存液(白鲨生物，批号：BL203A)；ICS(课题组前期研究制备)；脂多糖(北京索莱宝)；CCK-8检测试剂盒(北京中生奥邦，批号：03.S17002DA)；甲苯胺蓝染色液(北京索莱宝，批号：G2543)；兔抗Ⅱ型胶原多克隆抗体(正能生物，批号：222189)；山羊抗兔IgG抗体(正能生物，批号：550036)；DAPI染料(美国APEXBIO公司，批号：C3362)；Evo M-MLV反转录预混型试剂盒(艾科瑞生物，批号：AG11728)。
1.3.3 实验仪器移液枪(德国Eppendorf公司)；CO2细胞培养箱(美国Themo公司)；Vaioskan Flash多功能酶标仪(美国Themo公司)；CKX41倒置光学显微镜(日本Olympus公司)；倒置荧光显微镜(日本Olympus公司)；梯度PCR仪(美国Roche公司)；实时荧光PCR仪(美国Roche公司)。
1.4 实验方法
1.4.1 软骨细胞复苏、培养、传代与冻存将冻存状态的人原代软骨细胞置于提前预热好的37 ℃水浴锅中快速解冻，解冻后迅速转移至超净台中，将细胞重悬于含体积分数10%胎牛血清的软骨细胞专用培养基中，1 200 r/min离心5 min，弃上清，用含体积分数10%胎牛血清的软骨细胞专用培养基重悬细胞沉淀，将细胞接种于T25瓶中，放入37 ℃、体积分数5% CO2细胞培养箱中进行培养，24 h后能观察到大部分细胞贴壁生长，每3 d换液1次，待细胞融合生长至90%时，根据实验安排及进度对细胞进行传代与冻存，以便后续实验使用。
1.4.2 软骨细胞鉴定将第3代软骨细胞以1.0×105/孔密度接种于放有玻片的6孔板中，待细胞在玻片上的融合率达85%-90%时，取出玻片，PBS轻柔冲洗3遍，多聚甲醛固定1 h，冲洗后置于染色架，滴加甲苯胺蓝染色液，室温染色30 min，PBS冲洗干净，晾干后树脂封固，明场下观察并拍照记录。
1.4.3 CCK-8法检测软骨细胞增殖活性第3代软骨细胞融合度达到90%时，用0.25% EDTA胰酶消化细胞，收集细胞悬液于15 mL离心管中，1 400 r/min离心5 min后，弃去上清液，用含体积分数10%胎牛血清的软骨细胞专用培养基重悬细胞，以5×103/孔密度接种于96孔板中，24 h后取出孔板，设置5个ICS梯度：体积分数为0%，5%，10%，15%，20%，每组3个复孔，共接种3个96孔板，ICS干预时间分别为24，48，72 h。在相应检测时间，将原有的培养基吸除干净，每孔加入含10 µL CCK-8试剂的无血清软骨细胞专用培养基，设置3个空白孔，在37 ℃下避光孵育2 h后测定450 nm波长处的吸光度值。细胞存活率=(ICS干预组吸光度值-空白孔吸光度值)/(对照组吸光度值-空白孔吸光度值)，通过比较，得到ICS干预软骨细胞的最佳体积分数和最佳时间。

1.4.4 细胞分组与给药根据文献[22-24]的软骨细胞炎症造模浓度及实验探索出来的最佳ICS给药体积分数与时间，将细胞分为4组：空白对照组、脂多糖组、ICS组、脂多糖+ICS组。待细胞生长至融合度60%-80%时对细胞进行干预，细胞分组及对应干预方式见表1。

1.4.5 Ⅱ型胶原免疫荧光染色将软骨细胞按1×105/孔密度接种于12孔板中，按分组对细胞进行给药干预，每组3个复孔。干预结束后，取出孔板，吸出培养基，用PBS轻柔清洗3次，每次5 min，每孔加入40 g/L多聚甲醛200 µL室温固定15 min，弃去多聚甲醛，用PBS轻柔清洗3次，每次5 min，每孔加入200 µL 0.5%Triton X-100通透液室温通透10 min，弃去通透液，用PBS轻柔清洗3次，每次5 min，每孔加入200 µL体积分数5%山羊血清室温封闭30 min，封闭结束后去除山羊血清，每孔加入500 µL稀释好的Ⅱ型胶原一抗(1∶100) 4 ℃孵育过夜，第2天取出孔板，回收一抗，用TBST浸洗细胞3次，每次5 min，最后一次浸洗结束后吸干残留的TBST，在避光条件下每孔加入500 µL稀释好的荧光二抗(1∶1 000)室温避光孵育1 h，弃去二抗，TBST浸洗细胞3次，每次5 min，吸净TBST后每孔加入500 µL DAPI溶液室温避光孵育5 min进行细胞核复染，复染结束后弃去DAPI溶液，用TBST洗4次，每次5 min，洗去多余的DAPI染液，小心取出孔板中的爬片，用吸水纸吸净液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封固，在正置荧光显微镜下观察并拍照记录，采用Image J定量分析荧光强度。

1.4.6 qPCR检测相关mRNA表达将软骨细胞按2×106/皿密度接种于4个10 cm培养皿中，待细胞融合率达80%时，按分组对细胞进行给药干预，待干预结束，取出培养皿，使用SteadyPure快速RNA提取试剂盒对细胞进行RNA提取，检测RNA浓度及A260/A230、A260/A280值，根据RNA浓度进行反转录及qPCR。采用Evo M-MLV反转录预混型试剂盒提取各组细胞的cDNA，按照SYBR® Green Pro Taq HS预混型qPCR试剂盒配置20 µL反应体系，包括2×SYBR® Green Pro Taq HS Premix(ROS plus)10 µL，10 µmol/L前后引物各2 µL，DNA模板小于100 ng，ddH2O补足体积至20 µL。以β-actin为内参进行PCR扩增，反应条件为95 ℃ 15 s；60 ℃ 60 s；95 ℃ 15 s，共40个循环，以2-ΔΔCt法表示各目的基因的相对表达量。各基因的引物序列见表2。

1.5 主要观察指标 ①软骨细胞的形态、生长情况；②软骨细胞甲苯胺蓝染色鉴定；③各组软骨细胞Ⅱ型胶原的表达；④各组软骨细胞Ⅱ型胶原、聚蛋白聚糖、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinases 13，MMP13)、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(a disintegrin-like and metalloproteinase with thrombospondin motifs-5，Adamts5)mRNA表达。
1.6 统计学分析数据采用GraphPad Prism 9进行分析。每组处理平行重复3次，对各组数据进行方差齐性检验，多组间比较采用单因素方差分析。P < 0.05为差异有显著性意义。统计学方法已经天津中医药大学第一附属医院张君涛主任审核。

讨论

膝骨关节炎是世界上第二大致残性疾病，严重影响患者的生活质量且发病率较高，是当前临床领域亟待深入探究并有效解决的关键问题之一[29]。软骨在维持关节结构完整性与功能稳定性方面发挥不可替代的关键作用[30-31]。软骨细胞和软骨细胞外基质是组成膝关节软骨组织的主要成分，大量研究表明软骨损伤与炎症因子释放、细胞外基质降解相关[32-33]。
因此，在膝骨关节炎治疗研究中，探索既能减轻炎症、逆转软骨损伤，又能阻止病程进展且安全的治疗方法至关重要。
膝骨关节炎病位在筋骨，其发病根本在于肾[34]。肾为先天之本，主骨生髓，肾气充盛，则精髓充足，骨与关节能够正常发育且强健有力[35]。在膝骨关节炎治疗领域中，中医药彰显出独特优势，淫羊藿作为一味传统中药，具有益精气、坚筋骨、补腰膝等功效，是补肾强骨的要药，在关节软骨损伤修复方面展现出良好的应用前景[36]。淫羊藿苷是淫羊藿的主要成分，具有抗氧化、抗炎等多种生物活性，能够调节细胞内的信号通路、抑制软骨细胞外基质降解、促进软骨细胞增殖和降低关节炎症反应[37-39]。课题组前期研究表明，经生物转化后的ICS能够促进软骨细胞增殖和糖胺聚糖分泌，并探索出2倍等效体表面积灌胃所得ICS在软骨细胞增殖与表型维持方面作用最强[16]，在此基础上课题组通过动物与细胞实验验证了ICS修复膝骨关节炎软骨损伤的有效性，并能够促进“软骨细胞-骨髓间充质干细胞-滑膜间充质干细胞非接触共培养体系”中软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原表达，促进共培养体系中间充质干细胞的成软骨分化[40]。基于课题组前期研究成果，作者推测ICS能够成为临床修复膝骨关节炎软骨损伤的潜在有效物质。该研究使用课题组前期研究中制备得到的ICS，观察ICS对人来源软骨细胞是否具有细胞毒性，探索ICS干预人来源软骨细胞的有效浓度及时间，通过脂多糖干预人来源软骨细胞以构建炎症模型，验证ICS对脂多糖诱导的人软骨细胞炎症模型的修复效应，为推动ICS应用于临床奠定基础。
该研究通过CCK-8法筛选出适合软骨细胞增殖的ICS体积分数及干预时间，得出培养基中体积分数15% ICS干预48 h效果最佳。在此基础上，采用脂多糖对软骨细胞进行炎症造模，能够稳定模拟膝骨关节炎状态下软骨细胞环境。实验结果显示，脂多糖明显抑制了软骨细胞Ⅱ型胶原的表达，这与膝骨关节炎状态下软骨细胞的病理变化相吻合。与空白对照组生理状态下的软骨细胞相比，经ICS干预的软骨细胞可分泌更多Ⅱ型胶原，而且ICS不但能够拮抗脂多糖对软骨细胞Ⅱ型胶原表达的抑制作用，还可进一步促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原，这一系列结果提示ICS在调控软骨细胞Ⅱ型胶原表达方面具有重要作用，对维护软骨细胞生理功能、延缓膝骨关节炎病理进程有积极意义。qPCR结果显示，对于脂多糖刺激后处于炎症状态的软骨细胞，ICS能够明显促进Ⅱ型胶原的表达，与免疫荧光所得结果相吻合，进一步证明了ICS对于炎症状态下的软骨细胞有修复作用。同时，ICS能够降低脂多糖刺激的软骨细胞中MMP13、Adamts5的表达量，其中对MMP13的抑制能力更为显著。ICS具有多方面重要功能，不仅能够有效促进软骨细胞分泌Ⅱ型胶原、聚蛋白聚糖等软骨细胞外基质重要成分，发挥对软骨细胞的保护作用，还能显著抑制软骨细胞中MMP13、Adamts5等炎症因子的表达，减轻炎症反应程度，有效改善炎症状态下软骨细胞微环境，为软骨细胞的正常功能维持与损伤修复创造有利条件。与课题组前期所研究的淫羊藿苷减轻小鼠软骨细胞炎症相比[20]，ICS促进人软骨细胞Ⅱ型胶原的分泌优于小鼠软骨细胞，在等量脂多糖干预下，脂多糖+ICS组人软骨细胞Ⅱ型胶原表达量高于空白对照组，而小鼠来源软骨细胞Ⅱ型胶原表达量虽较脂多糖组有提升，但没有超过空白对照组。因此，该研究认为ICS不仅能够抑制膝骨关节炎状态下软骨细胞炎症效应、修复炎症状态下损伤的软骨细胞，且相较于动物体内及细胞实验，ICS对人软骨细胞的安全性及炎症修复效应更好，ICS适用于临床膝骨关节炎患者的治疗得到进一步验证。
综上所述，ICS对于人来源软骨细胞有良好的安全性，在细胞层面未呈现出明显的毒副作用或不良影响，在维持软骨细胞正常生理功能方面表现出积极效应，不仅能够促进细胞外基质的分泌，而且可有效抑制炎症因子的分泌，为软骨组织的稳态维持和功能正常发挥提供了有力保障，为ICS应用于膝骨关节炎的临床应用提供了重要的细胞安全性依据。该研究完成了ICS对人来源软骨细胞的生物安全性及炎症修复效应的验证，未来课题组将在此研究的基础上进一步探索ICS修复人类膝骨关节炎软骨损伤的确切机制，并将开展临床试验以进一步推进ICS的临床应用，为临床膝骨关节炎的治疗提供新方法和保障。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

淫羊藿苷含药血清对脂多糖诱导人软骨细胞炎症损伤的影响

Effect of icariin-containing serum on lipopolysaccharide-induced inflammatory damage in human chondrocytes

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