2.1   女贞子抗骨质疏松的研究时间图   自1989年DAI等[14]开创性地揭示女贞子具备抗炎功效以来，科学家们对女贞子的研究不断深入，逐步解锁了其丰富的药理价值。在1998年，WILLEMS等[15]从女贞子果实中成功分离出环烯醚萜类化合物，为后续的深入研究奠定了物质基础。进入21世纪，女贞子在防治氧化应激及骨骼健康领域的潜力逐渐显现。在2007年，LIN等[16]的研究首次展示了女贞子对大鼠急性氧化应激模型的显著保护作用，揭示了其在抗氧化领域的潜力。在2008年，ZHANG等[17]的研究则进一步证明了女贞子提取物能直接作用于成骨细胞，通过增强矿化过程来改善老年大鼠的骨骼特性，为骨质疏松症的治疗提供了新的思路。随着研究的深入，女贞子在促进骨骼再生方面的作用也日益受到重视。在2010年，LI等[18]的研究表明，女贞子提取物能显著激活间充质干细胞的碱性磷酸酶活性，加速其成骨分化过程，为骨骼修复和再生提供了有力的支持。而到了2014年，ZHANG等[19]的研究又揭示了女贞子乙醇提取物在糖尿病相关骨骼疾病中的保护作用，通过调控钙转运蛋白和钙敏感受体，有效对抗糖尿病小鼠的高钙尿症和小梁骨退化，进一步拓宽了女贞子在骨骼健康领域的应用范围。直至最近的2023年，LI等[20]的研究更是创新性地提出了女贞子通过Nrf2/血红素加氧酶1(heme oxygenase，HO-1)信号通路抑制卵巢切除诱导的大鼠骨质疏松症中的铁死亡，从而保护成骨能力的新机制，为女贞子在骨质疏松症防治中的应用提供了更为深入的科学依据。研究时间线介绍见图3。




2.2   女贞子活性成分治疗骨质疏松症   根据现代药物学的研究，从女贞子中提取的活性物质主要涵盖了三萜类、环烯醚萜类、苯乙醇苷以及黄酮类这4种主要化合物，见表1。女贞子的治疗主要依赖于这些成分，这些成分具有多种药理效应，包括抗骨质疏松症、抗氧化、抗炎、抗肿瘤以及降低血脂等。此外还含有挥发油、多糖和脂肪酸等多种活性成分，经相关研究报道，这些活性成分在抗骨质疏松症方面也展现出了独特的潜力和广阔的开发前景，但是目前相关研究相对较少，为此在未来的研究当中去挖掘相应的活性成分尤为重要。在临床应用方面，以女贞子为主药组方制成复方制剂或单味中药注射剂已广泛应用于各种疾病的辅助治疗及预防。最近几年的研究揭示，女贞子中含有的一些活性成分具有调控相关信号通路的方式促进相关蛋白的表达，因此已经成为当下防治骨质疏松症药物研究领域中的关注焦点。



2.2.1   三萜类化合物   三萜类化合物属于萜类家族，它们广泛存在于植物、真菌和某些动物当中，存在形式多样，包括游离状态、糖苷形式以及作为植物甾醇和植物激素的成分，在龙胆科等植物中较为常见[21]，萜类化合物一直是天然药物化学成分研究的活跃领域。研究揭示，三萜类化合物在治疗骨质疏松症的过程中，其多种生物活性起到了至关重要的作用。齐墩果酸、熊果酸女贞子提取物，在防治骨质疏松症方面具有良好的天然优势。YU等[22]研究发现，在双侧卵巢切除模型中，齐墩果酸显著增加小鼠骨骼CYP27B1(25-羟基维生素D31-α-羟化酶)表达和循环25-羟基维生素[1，25(OH)2D3]；此外，又上调了人成骨样MG-63细胞中CYP27B1蛋白的表达和活性，以及维生素D应答骨标志物碱性磷酸酶活性和骨桥蛋白的表达，从而发挥治疗骨质疏松症的作用。
另一方面，YANG等[23]在强的松龙诱导的斑马鱼模型中，当齐墩果酸浓度为1 μmol/L时，斑马鱼的矿化面积显著增加，累积光密度显著增加，从而展现出显著的抗骨质疏松作用。与此同时，XU等[24]研究发现，在糖皮质激素诱导的SD雌性成年大鼠模型中，齐墩果酸能显著逆转糖皮质激素引起的骨密度下降，同时齐墩果酸能显著升高血钙，从而增强体内破骨细胞的功能，导致血钙水平升高，减少骨质流失，并抑制破骨细胞的生长。另外，CAO等[25]在卵巢切除后的C57BL/6J小鼠模型中，发现齐墩果酸能显著抑制尿钙排泄，增加骨密度，并且在另一方面增加1，25(OH)2D3的水平。ZHENG等[26]研究表明，在双侧卵巢切除术的雌性大鼠中，证实了熊果酸通过改善骨小梁的微结构恶化，减少椎骨中抗酒石酸酸性磷酸酶阳性破骨细胞的数量以及降低血清中破骨细胞特异性细胞因子的释放，其次在体外实验中发现，熊果酸明显降低了巨噬细胞中破骨特殊标记蛋白(proto-oncogene protein，c-Fos)和NFATc1的表达。并且，CHENG等[27]在维甲酸诱导的SD雌性大鼠模型中发现，熊果酸可防止骨质流失和小梁微结构的恶化，从而维持骨骼的生物力学能力，并且升高碱性磷酸酶和骨钙素的含量。这表明熊果酸能够增加成骨细胞的活性，降低破骨细胞的活性，从而发挥抗骨质疏松症的作用。
2.2.2   环烯醚萜类化合物   环烯醚萜苷类化合物(iridoid/secoiridoidglycosides)属于女贞子的一种主要活性成分，常见于龙胆科植物当中[28]。研究表明，环烯醚萜苷类化合物在治疗骨质疏松症方面表现出了优越的成效。橄榄苦苷、梓醇及桃叶珊瑚苷是从中药女贞子中分离出得到的，在治疗骨质疏松症及抗氧化等方面展现出了优异的疗效。LAO等[29]研究表明，在高糖诱导的小鼠骨髓间充质干细胞模型中，证明了橄榄苦苷在高糖微环境下可以促进骨髓间充质干细胞增殖和分化。并且在另一方面也证实橄榄苦苷能上调翼状螺旋相关转录因子10b(Wnt10b)以及成骨相关基因中的成骨细胞特异性转录因子2(runt-related transcriptionfactor 2，Runx2)、骨成形特异性转录因子(Osterix)和骨钙素，从而发挥抗骨质疏松症的作用。SANTIAGO- MORA等[30]在以人骨髓间充质干细胞为模型的研究中，证实了橄榄苦苷能够促进成骨细胞分化增加，并且降低脂肪细胞的分化，并且增加了成骨细胞生成标志物Runx2、Osterix、Ⅰ型胶原、骨钙素或碱性磷酸酶的基因表达。CHEN等[31]在双侧卵巢切除建立骨质疏松症大鼠模型中，发现梓醇可以通过激活信号转导与转录激活因子3(signaltransducersandactivatorsoftranscription3，STAT3)从而提高骨髓间充质干细胞的成骨分化，并抑制其向脂肪细胞的分化，并且促进新生血管壁的生成。CHENG等[32]在高糖诱导MC3T3细胞模型中，发现高糖环境会导致MC3T3-E1细胞的增殖和矿化能力下降，同时降低碱性磷酸酶活性；经一定浓度的梓醇处理后，碱性磷酸酶活性得到提高，进一步证实高糖环境诱导下的成骨调节是通过Wnt/β-catenin途径发生的。
2.2.3   苯乙醇苷类化合物   苯乙醇苷类化合物
(phenylethanoid glycosides)主要由β-葡萄糖构成，是一种在双子叶植物中普遍存在的天然糖苷。特别是在女贞子中，已分离出多个此类化合物，以毛蕊花糖苷、红景天苷和松果菊苷等为主。LI等[33]研究表明，在双侧卵巢切除建立的骨质疏松症模型小鼠中，毛蕊花糖苷主要是通过下调RANKL/RANK通路、抑制核转录因子κB从而调节下游蛋白靶点的活性，增加骨小梁的数量。与此同时MARTINAKOVA等[34]发现在双侧切除卵巢建立骨质疏松症小鼠模型中，毛蕊花糖苷具有显著降低肿瘤坏死因子α和白细胞介素6导致的炎症反应的能力，从而影响成骨细胞的生长和分化。CHEN等[35]在双侧卵巢切除小鼠和糖尿病小鼠的模型中，用红景天苷(20 mg/kg)治疗6周后发现，红景天苷增加了骨钙水平，减少尿钙排泄，从而减轻双侧卵巢切除小鼠和糖尿病小鼠骨小梁的恶化，其作用机制是通过调节维生素D代谢和跨细胞钙转运蛋白以及调节肾脏中钙敏感受体(calcium-sensing receptor，CaSR)的表达来改善钙稳态，从而发挥骨保护作用。XIE等[36]在经地塞米松诱导的斑马鱼模型中，发现红景天苷显著缓解了骨形成的抑制作用，促进了斑马鱼颅骨的矿化，其作用机制是通过TGF-β/Smad2/3通路改善经地塞米松诱导的对成骨分化和骨形成的抑制。LI等[37]在去卵巢骨质疏松大鼠模型中，发现了松果菊苷通过促进骨形成和抑制骨吸收而具有保护作用；此外，免疫组化染色证实显著增强了子宫内雌激素受体(estrogen receptor，ER)的表达，对预防雌激素缺乏所致的骨质疏松症具有良好的优势。
2.2.4   黄酮类化合物   黄酮类化合物(Flavonoids)来源于植物中的多酚类物质，具有2-苯基色原酮(C6-C3-C6)的基本结构，并展现出多种生物活性。目前，已从女贞子中分离出多种黄酮类化合物，主要包括芹菜素、槲皮素和木樨草素等，这些化合物表现出促进成骨和抑制破骨等多种药理活性。在对抗骨质疏松症方面发挥着至关重要的作用。ALI等[38]在双侧卵巢切除建立的骨质疏松症小鼠模型中，证实芹菜素能显著抑制双侧卵巢切除小鼠股骨小梁骨丢失，并且在体外实验中发现芹菜素可以抑制多核破骨细胞的形成，从而达到防治骨质流失的作用。CHOI等[39]在成骨细胞MC3T3-E1细胞模型中，用芹菜素(10 μmol/L)处理过后，细胞中碱性磷酸酶活性和胶原含量显著升高，并且在另一方面减少了成骨细胞中肿瘤坏死因子α诱导的白细胞介素6和一氧化氮的产生，从而达到防治骨质疏松的作用。此外SUN等[40]研究发现，在睾丸切除术后的C57BL/6小鼠模型中，经槲皮素治疗后胰岛素样生长因子1和高密度脂蛋白水平升高，参与葡萄糖摄取的蛋白质的表达增加，而参与脂质产生的蛋白质的表达降低；此外，GPRC6A和磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK)/AMPK在肝脏和胫骨组织中的表达比值升高。相比之下，槲皮素组的磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)/mTOR比值降低。从而可以说明槲皮素可以减少睾酮缺乏引起的骨质疏松症，其有益作用可能与通过GPCR6A/AMPK/mTOR信号通路调节葡萄糖代谢和抑制脂质代谢有关。ZHENG等[41]在经糖皮质激素诱导SD大鼠颅骨成骨细胞中，发现木犀草素促进成骨细胞增殖、抑制成骨细胞凋亡和后期分化，这种功能可能与上调Sema3A/NRP1/PlexinA1的表达有关。KIM等[42]发现，在双侧卵巢切除构建的骨质疏松症大鼠模型中，口服木犀草素[5，20 mg/(kg·d)]后可显著提高双侧卵巢切除小鼠股骨小梁和皮质骨的骨密度和骨矿物质含量，防止双侧卵巢切除手术引起的骨强度指标下降。血清生化指标分析也显示木犀草素可阻止双侧卵巢切除诱导的骨转换增加。
2.2.5   其他化学成分   目前从女贞子中还分离出了如挥发油、多糖和脂肪酸等多样的化学成分。女贞子的挥发油包括大根香叶烯D、7-杜松醇和石竹烯等成分。YAMAGUCHI等[43]在体外对小鼠骨髓细胞的培养实验中发现，β-石竹烯能够刺激成骨细胞的矿化过程，同时抑制脂肪和破骨细胞的生成，从而有效预防和治疗骨质疏松症的出现。同时，SHAN等[44]在MC3T3-E1成骨细胞模型研究中发现，经过反式石竹烯处理后，胶原蛋白的含量、碱性磷酸酶的活性、骨钙素的生成和矿化都有了显著的提升；此外，在抗霉素A暴露之前使用反式石竹烯进行预处理，可以有效地减少细胞死亡、防止活性氧的释放以及阻止成骨细胞功能的障碍，从而显著降低抗霉素A引发的细胞损害。然而女贞子多糖的成分包括蔗糖、鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和岩藻糖等，而其中的脂肪酸主要是不饱和脂肪酸，如棕榈酸、棕榈油酸和硬脂酸等。目前，关于女贞子中分离的多糖和脂肪酸等化学物质在对抗骨质疏松症方面的研究报道相对有限。为了更深入地了解多糖和脂肪酸在骨质疏松预防和治疗中的分子作用机制，需要进一步研究它们与骨细胞的交互过程以及信号传导路径的调节方式，为后期相应药物的开发提供依据与参考。
2.3   女贞子活性成分治疗骨质疏松症的相关信号通路
2.3.1   Wnt/β-catenin通路   Wnt/β-catenin通路在骨骼分化过程中扮演了关键角色，可以激发一系列与骨骼代谢和成长有关的核心调节因子的产生，Wnt介导的Wnt-β-catenin信号转导是通过与frizzed(Fz)家族和LRP5/6的七通跨膜受体相互作用而激活的。当wnt与Fz受体和LRP5/6的稳定且富含半胱氨酸的部位结合时，无规则蛋白(dishevelled，Dvl)的细胞质蛋白会受到刺激。Dvl具有阻断轴抑制蛋白(axis Inhibitor，Axin)的能力，它可以阻止由大肠腺瘤性息肉病、轴抑制蛋白、糖原合成酶激酶3β和酪蛋白激酶1α构成的破坏性复合物的生成。β-catenin的磷酸化和相应的降解被阻止了，β-catenin是Wnt-β-catenin信号通路中的关键肿瘤细胞增殖调节因子。随后，β连环蛋白稳定易位进入细胞核，并与T细胞因子/淋巴增强子因子(T-cell factor/lymphoid enhancer factor，TCF/LEF)转录复合物结合从而激活下游靶基因的转录，发挥其相应的功能[45-46]。
LIU等[47]在双侧卵巢切除大鼠骨质疏松症模型中，发现梓醇能够抑制骨质疏松症大鼠Dkk1抑制物和骨硬化蛋白(SOST)的表达。并且通过激活TCF/LEF转录因子促进Runx2的活性，从而发挥其成骨作用。此外，ZHU等[48]研究表明，在双侧卵巢切除建立骨质疏松症大鼠模型中，梓醇可促进骨髓间充质干细胞成骨分化并防止骨质流失，经一定浓度的梓醇处理后发现核β-catenin的表达水平显著增强，表明梓醇在促进成骨作用方面与Wnt/β-catenin通路的激活有关。LIU等[49]在双侧卵巢切除大鼠和原代成骨细胞中，发现红景天苷通过抑制SOST和Dkk1的表达来激活Wnt/β-catenin信号通路，从而增加双侧卵巢切除大鼠和原代成骨细胞磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6(phosphorylated low-density lipoprotein receptor-related protein 6，p-LRP6)表达，降低糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3 Beta，GSK3β)表达，增加细胞核β-catenin，Runx2和c-Myc的表达，来促进成骨细胞骨形成。PAN    等[50]在人间充质干细胞模型中，发现芹菜素可增强Wnt信号通路关键转录因子β-catenin及多个下游靶基因的表达，从而激活Wnt/β-catenin信号通路。从而达到防治骨质疏松症的作用，见图4。




2.3.2   骨保护素/RANKL/RANK通路   骨保护素/RANKL/RANK通路在骨骼重建和破骨细胞分化的过程中，扮演着关键的信号传递角色[51]。RANKL与RANK结合形成复合物会激活下游信号通路，从而激活破骨细胞相关基因的表达[52]。骨保护素是由成骨细胞产生的，作为RANKL的诱饵受体，它是破骨细胞的唯一负向调节因子，能够阻止破骨细胞与RANKL的结合，中断信号的传递，进而避免骨的吸收。白细胞介素1是一种炎性细胞因子，能通过激活白细胞介素6提高RANKL的表达。当转录因子κB受体与RANKL结合时，它会促进破骨细胞的生长。此外，RANKL和扮演着促进c-Fos与NFATc1的结合的角色，促使破骨细胞中的抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate-Resistant Acid Phosphatase，TRACP)和组织蛋白酶K(Cathepsin K，CtsK)等基因活性在NFATc1的作用下迅速被激活，从而发挥其功能。此外，CtsK还具备分解Ⅰ型胶原的特性，这进一步影响了骨骼的代谢过程，并加速了骨骼的流失[53-54]。
ZHENG等[55]研究发现，在去卵巢切除合并糖尿病的SD大鼠模型中，当红景天苷的浓度为20 mg/kg灌胃处理后，实验结果表明红景天苷能抑制骨转换增加，抑制骨髓脂肪生成，并且上调去卵巢切除糖尿病大鼠骨保护素/RANKL的蛋白和mRNA比值，从而能有效改善糖尿病大鼠骨质量。此外，LI等[56]研究表明，在小鼠颅骨分离MC3T3-E1细胞模型中，松果菊苷在促进成骨细胞分化和矿化方面起到了积极作用，这涉及到Ⅰ型胶原的释放和骨保护素的形成。并且能降低RANKL蛋白的表达，从而促进成骨细胞的增殖与分化并且减少破骨细胞的产生。LIU等[57]在双侧卵巢切除的雌性大鼠中发现，橄榄苦苷能显著提高SD大鼠的骨密度；同时，它能降低终末白细胞介素6、碱性磷酸酶浓度，对Ca2+浓度无影响；并且在体外实验中，橄榄苦苷能促进成骨细胞的增殖，此外，还能促进骨保护素蛋白和mRNA的表达；相反，它抑制RANKL蛋白和mRNA的表达，其作用机制与调节骨保护素/RANKL的表达有关。ZHANG等[58]发现，在注射地塞米松诱导的骨质疏松症小鼠模型中，桃叶珊瑚苷能有效地减少小鼠血清中白细胞介素1的浓度，并进一步降低RANKL细胞中NFATc1和CtsK的表达水平，进而达到减少骨质流失的作用，见图5。




2.3.3   Keap1/Nrf2通路   氧化应激的发生是由于氧化与抗氧化间的平衡遭到破坏，这种不平衡促使破骨细胞分化，进而触发骨质疏松症。细胞氧化还原平衡的关键是对Nrf2的调控[59]。正常生理环境下，在缺少keap1与Neh2结构域的前提下，Nrf2表现为一种不稳定的蛋白质。然而，在稳定的环境中，Keap1是E3泛素连接酶的组成部分，该系统利用特定的转录因子Nrf2来达到泛素化和依赖于蛋白酶体的分解，进而精确地调节Nrf2的功能表现。在应激反应中，Keap1里的传感器半胱氨酸所驱动的复杂分子结构确保了Nrf2可以规避泛素化的风险，在细胞内累积，并被转运到细胞核[60]。当细胞受到大量活性氧刺激后，叉头转录因子O亚型(forkheadbox O，FoxO)会被激活。但是，当Nrf2经过磷酸化作用后，它会与Keap1分离并转移到细胞核中，与并与靶基因启动子内抗氧化反应元件(antioxidantresponse elementt，ARE)发生结合，这种结合导致了抗氧化酶的生成，包括血红素氧合酶(heme oxygenase-1，HO-1)、醌氧化还原酶1(NADH-oxidoreductase-1，NQO1)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GPx)以及超氧化物歧化酶，从而抑制了氧化应激的发生[61]。多项研究证实，Nrf2在抗氧化和抗炎作用中，HO-1起到了关键作用[62]。这些内源性的保护性物质由酶降解后的产物构成，具有抗炎和抗氧化的特性[63-64]。这有助于抑制活性氧对细胞的刺激作用，从而进一步减少活性氧对骨细胞生成的抑制作用。
WANG等[65]在叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的大鼠成骨细胞中，发现红景天苷降低了活性氧和脂质过氧化水平，提高了谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶等抗氧化酶的活性，促进了成骨分化；相关机制研究表明，红景天苷是通过上调Nrf2表达并促进其核易位，阻止了骨质疏松症发展，减少了氧化损伤。此外WANG等[66]发现，在人骨髓间充质干细胞细胞模型中，桃叶珊瑚苷具备促进Nrf2从细胞质向细胞核转位的能力，并在体外条件下显著上调了HO-1与NQO1蛋白表达水平，从而减轻氧化压力导致的成骨抑制。这意味着桃叶珊瑚苷对抗氧化压力的能力是通过Nrf2所介导的信号途径来达成的。 SUH等[67]研究表明，在经甲基乙二醛诱导的MC3T3-E1成骨细胞模型中，木樨草素显著抑制甲基乙二醛诱导MC3T3-E1细胞活性氧生成和肿瘤坏死因子α水平升高以及线粒体超氧化物和心磷脂过氧化的产生，此外，木犀草素增加了谷胱甘肽和Nrf2水平，并降低了甲基乙二醛对HO-1活性的抑制，其作用机制是通过Nrf2/HO-1激活达到细胞保护的作用，见图6。
2.3.4   PI3K/Akt信号通路   PI3K/Akt信号通路被认为是RANKL触发的破骨细胞生成的关键[68]。RANKL/RANK的复合物触发了破骨细胞PI3K的激活和Akt的磷酸化过程，这进一步促进了与破骨细胞相关的关键转录因子原癌基因c-Fos的活性，从而介导破骨细胞的分化和成熟[69]。NFATc1是一种具有特异性的转录因子，能够调控破骨细胞特异性基因(Acp5及CtsK等)以及RANKL/RANK复合物介导的破骨细胞的分化和功能激活。Akt在经过磷酸化大量积累后迅速提高c-Fos的活化，从而导致抗酒石酸酸性磷酸酶5(Tartrate-Resistant Acid Phosphatase 5，TRACP5)




和CtsK的表达水平上升[70]。胰岛素生长因子1在成骨细胞的合成和代谢过程中起到了关键的调节作用[71]。成骨细胞分化中的PI3K/Akt/mTOR信号通路和Runx2相互作用密切。Runx2有助于提高PI3K亚基和Akt的蛋白质表达，影响PI3K/Akt/mTOR通路推动了成骨细胞的增长。
JIANG等[72]在假体周围关节感染大鼠模型中，发现松果菊苷能够通过降低PI3K的表达、减少Akt的磷酸化程度和减少c-Fos的表达，进而有效地抑制破骨细胞中PI3K/Akt/c-Fos的通路，从而实现降低破骨细胞的增殖和成熟能力。LI等[73]研究表明，在注射地塞米松诱导的骨质疏松症小鼠模型中，发现地塞米松能够抑制PI3K/Akt/mTOR通路中的关键蛋白水平，而毛蕊花糖苷则能够减轻这种抑制效果，同时还能提高成骨细胞的活性，从而表明了PI3K/Akt途径中相应的靶点可以被毛蕊花糖苷所识别。GONG等[74]在糖尿病骨质疏松症大鼠模型中，梓醇通过活化PI3K/Akt/mTOR通路促进了胰岛素生长因子1的分泌，并在成骨细胞MC3T3-E1中上调了p-mTOR，p-IGF-1R及p-PI3K的蛋白表达水平。此过程进而激活了对Runx2的调控，强化了成骨细胞的活性，并有效减缓了骨质疏松症的发展进程。LIANG等[75]发现，在双侧卵巢切除构建的骨质疏松症大鼠模型中，木犀草素可减轻双侧卵巢切除大鼠骨质流失，上调骨髓间充质干细胞中Ⅰ型胶原、骨桥蛋白和Runx2蛋白的表达，促进成骨分化。与此同时，体外细胞研究表明，木犀草素通过增加p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt的表达比例，增强了PI3K/Akt信号通路的活性，从而促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。见图7。
2.3.5   骨形态发生蛋白/Smads通路   骨形态发生蛋白也被称为骨形成蛋白，它是转化生长因子(transforming growth factor-β，TGF-β)超家族中的一个成员，并在骨基质中有着广泛的分布[76]。骨形态发生蛋白2作为骨形态发生蛋




白配体家族的一员，其具有较强的促进骨形成的活性，它能有效地增强骨钙素的活性，从而有助于骨骼和软骨的形成。骨形态发生蛋白与Ⅰ型和Ⅱ型跨膜Ser/Thr激酶受体结合，激活Smad及非Smad信号通路[77]。Smad蛋白作为信号传递者，将骨形态发生蛋白信号由受体转至靶基因，通过磷酸化Smad1，5，8等转导因子并引导其入核，启动Runx2的转录，进而增强早期成骨mRNA的合成[78]，此过程调控了骨桥蛋白、碱性磷酸酶及骨钙素等成骨分化标志物的表达，最终促进骨形成。
LI等[79]研究发现，在人成骨样细胞MG63细胞模型中，桃叶珊瑚苷显著提高了Smad1/5/8的表达水平，并增强了碱性磷酸酶和骨钙素的活性，从而进一步加速了骨骼的形成，这也充分证实了骨形态发生蛋白2介导的Smads信号传导在促进骨细胞分化中的关键作用。LI等[80]在注射地塞米松诱导的骨质疏松症小鼠模型中，发现桃叶珊瑚苷通过增加MG63的细胞数量，并在骨质疏松症小鼠模型中通过激活骨形态发生蛋白/Smads信号通路，增强骨形态发生蛋白2和p-Smads的表达，从而促进细胞增殖分化，并展现出对抗骨质疏松症的效果。郑红等[81]研究发现，在双侧卵巢切除建立的骨质疏松症大鼠模型中，经检测发现血液中环磷酰胺、骨形成标志物(PINP)和骨碱性磷酸酶的含量显著上升，而Ca、P和骨密度显著下降。经过槲皮素灌胃处理后，这些现象都有所改善，并且表现出剂量依赖性；此外，骨形态发生蛋白2和Smad4的基因和蛋白表达水平在槲皮素治疗后也呈现上升趋势。这表明槲皮素能够有效促进成骨分化，并通过上调骨形态发生蛋白2和Smad4的表达来改善骨质疏松症，见图8。

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骨质疏松症主要表现为骨密度下降和骨组织微观结构损伤，其特征是骨量在全身范围内的损失以及骨微观结构的显著变化[1]。骨质疏松症不仅严重降低了患者的生活质量，还因为高致残和致死风险为患者和整个社会带来了沉重的经济压力[2-3]。因此在中国人口老龄化日益严重的今天，探索并开发针对骨质疏松症的有效预防与治疗药物，并深入解析其作用机制，是缓解骨质疏松症治疗压力、优化医疗资源配置的关键任务。当前治疗骨质疏松症的药物选择中，双膦酸盐、核转录因子κB配体受体激活剂抑制剂(地诺单抗)、降钙素、甲状旁腺激素治疗和选择性雌激素受体调节剂等是主要的选择。但是，双膦酸盐可能导致的颌骨坏死和其他可能的非骨骼效应，如低钙血症和肾功能恶化，可能会对临床治疗选择产生影响[4]。鉴于骨质疏松症治疗的需求，研发一种高效、不良反应少且安全性卓越的药物显得尤为迫切。中医药领域因其独特的骨保护作用、经济成本效益以及相对较少的不良反应，在治疗骨质疏松症方面获得了广泛的认可与青睐。中药女贞子为中国传统中药，最早被记录在《神农本草经典》中，并被标记为没有明显毒性的草药，具有扶正固本、补肝益肾及明目乌发的功效，是木犀科女贞属植物女贞的干燥果实，是治疗骨质减少及骨折的经典草药之一[5]。研究表明，从女贞子中分离鉴定出的主要化合物包括三萜类、环烯醚萜类、苯乙醇苷类、黄酮类化合物和挥发油、多糖和脂肪酸类化合物等[6]。近期的现代药理研究表明女贞子具有抗肿瘤[7]、抗氧化[8]、抗炎[9]、抗骨质疏松症[10]、免疫调节[11]、降血糖及降血脂等多种药理活性[12-13]，这些多效作用赋予了女贞子潜在的临床应用和新药开发价值。
随着骨组织工程技术的发展，中药及其活性成分与骨组织工程相结合方式已经成为当下研究的热点，并展现了优良的应用潜力。因此，随着女贞子活性成分的挖掘使得对骨质疏松症的治疗具有多方面的优势，可以通过与骨组织工程技术的结合改善骨组织的微观结构和力学性能，使再生的骨组织更加坚固耐用；并且可以通过促进血管生成相关因子的表达，加速支架的血管化进程。此前已有针对中药及其活性成分治疗骨质疏松症的相关机制研究的综述，但其研究范围较为广泛，女贞子活性成分对预防骨质疏松症的具体机制论述深度不足。
随着女贞子及其活性成分在骨质疏松症信号通路调控领域的实验研究的日益丰富，针对其干预机制的综述性文献却相对局限。文章旨在填补这一空白，系统性地归纳与总结女贞子活性成分如何调节与骨质疏松症密切相关的信号通路，深化对该领域已有研究的理解。进一步地，文章将探讨女贞子活性成分与多种信号通路在骨质疏松症防治中的具体作用机制，并结合骨组织工程的视角，展望女贞子活性成分在治疗骨质疏松症中的潜在应用前景，为后期更好地发现一些潜在活性成分发挥抗骨质疏松症的作用以及为新的作用靶点提供参考依据。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

1   资料和方法   Data and methods
1.1   资料来源   
1.1.1   检索人及检索时间   第一作者在2024年4月进行检索。
1.1.2   检索文献时限   各数据库建库至2024年4月。 
1.1.3   检索数据库   中国知网和PubMed数据库。
1.1.4   检索词   中文检索词为：“骨质疏松症，骨髓间充质干细胞，成骨细胞，破骨细胞，女贞子，信号通路”，英文检索词为：“Osteoporosis，Bone marrow mesenchymal stem cells，Osteoblast，Osteoclast，Ligustri Lucidi Fructus，Signal path”。
1.1.5   检索文献类型   研究性论文、著作、综述和基础实验文章。
1.1.6   手工检索情况   无。
1.1.7   检索策略   中英文数据库检索策略，见图1。



1.1.8   检索文献量   初步检索到中英文文献3 066篇，其中英文文献2 362篇，中文文献704篇。
1.2   入组标准
1.2.1   纳入标准   ①实验方法和数据可靠，结果及结论与女贞子活性成分防治骨质疏松症的新方向相关。②涉及女贞子活性成分与Wnt/β-catenin、核转录因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand，RANKL)/ 核转录因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor-κB，RANK)、Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1)/核转录因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein Kinase B，Akt)、骨形态发生蛋白/Smad等相关信号通路的机制研究；③涉及含女贞子活性成分防治骨质疏松症的相关性研究。
1.2.2   排除标准   ①排除了质量欠佳、证据等级偏低的危险文章；②剔除了重复出现的文献；③并剔除了与研究核心主题无直接关联的内容。
1.3   数据的提取及文献质量评估   经计算机最终评估导入EndNote剔除重复后得到英文文献762篇、中文文献370篇文献，排除与研究目的相关性差及陈旧、文献质量不高及重复文献后，最终得到82篇(PubMed数据库72篇，中国知网10篇)文章，见图2。

3   总结与展望   Summary and prospects
3.1   既往他人在该领域的贡献和存在的问题   骨质疏松症是一种骨密度下降和骨组织微观结构损伤的骨病，其特点是骨量和骨密度减少，骨微结构恶化导致骨骼脆性增强，从而增加骨折的风险。骨代谢是一个终生的过程，包括骨形成和骨吸收，此问题已经对中老年人群的生活质量产生了严重的负面影响，并已经演变为一个全球范围内的社会健康问题。随着对女贞子活性成分的研究和认识不断深入发现，女贞子对成骨细胞的作用核心在于其调控Wnt/β-catenin、骨形态发生蛋白/Smads及PI3K/Akt/mTOR等多条信号通路的能力，进而促进Runx2等关键靶点的表达发挥抗骨质疏松症的作用。与此同时，女贞子影响破骨细胞的作用则主要是通过调控骨保护素/RANKL/RANK和PI3K/Akt/c-Fos通路，延缓骨质的吸收。此外，女贞子还可通过影响Keap1/Nrf2通路途径发挥抗氧化作用，消除活性氧，进而减弱氧化应激对成骨细胞的作用，从而达到保持骨内平衡。目前，女贞子的研究主要聚焦于其作为成骨或破骨细胞的标记物的功能，并且多数研究都是从单一的信号途径或特定的蛋白质表达角度来探索其作用机制。但是，研究者们需要深入研究多个信号路径之间，以及氧化应激与炎症反应之间的错综复杂的互动关系，在现有研究中尚显不足。
   文章对三萜类化合物参与抗骨质疏松症的相关作用机制进行了汇总，见表2。



文章汇总了环烯醚萜苷类化合物在抗骨质疏松症方面的相关作用机制的研究，见表3。



文章对苯乙醇苷类化合物参与抗骨质疏松症的机制研究实验进行了汇总，见表4。文章对黄酮类化合物在防治骨质疏松症方面进行了归纳总结，见表5。
3.2   综述区别于他人他篇的特点   近年来，关于女贞子对骨质疏松症的研究性综述而言，主要集中于骨质疏松症指标的变化，对于深入的机制解析较为稀缺。文章汇总了女贞子的生物学特征，并对其在调节成骨细胞、破骨细胞、骨髓间充质干细胞以及相关信号通路的机制进行了全面的分析。研究表明，三萜类、环烯醚萜类及苯乙醇苷类和黄酮类等化合物是女贞子所提取的主要活性物质，相关研究已证实这些化合物对防治骨质疏松症具有显著效果。此外研究表明，女贞子在抗骨质疏松方面的功效主要源自于对多个信号通路的调节，包括Wnt/β-catenin、骨保护素/RANKL/RANK、Keap1/Nrf2、PI3K/Akt及骨形态


发生蛋白/Smads等，这些通路协同作用，影响骨细胞系的增殖、分化和死亡过程。特别是Wnt/β-catenin和骨保护素/RANKL/RANK通路与其他信号通路相互作用中调控成骨和破骨活动中起到了关键作用。因此，女贞子抗骨质疏松症的作用可能涉及多个信号通路之间的集成调控。此外，总结过往文献时发现淫羊藿和女贞子联合使用可以直接或间接促进成骨细胞的形成，抑制破骨细胞的形成。实验表明淫羊藿和女贞子联合使用可调节成骨细胞-破骨细胞细胞因子表达，影响成骨细胞-破骨细胞之间的通讯，从而表现出促进成骨细胞形成和抑制破骨细胞形成的作用[82]。从而得出，除了女贞子外，还有众多中药单体及其有效成分有潜力通过相同的机制来治疗骨质疏松症。此外通过相关实验发现，Dkk1作为一种具备多重功能效应的分子，在多种细胞类型的表达中展现出关键作用，普遍被视为一种关键的负向调控因子，可以通过影响Wnt/β-catenin通路促进Runx2的活性，从而发挥其成骨作用。进一步研究这些中药单体和有效成分如何通过影响成骨细胞-破骨细胞之间的联系来治疗骨质疏松症以及一些尚未挖掘的潜在抑制剂与激动剂，将有助于发现新的治疗目标，提供治疗骨质疏松症的新策略，并可能发掘更多有效成分，为骨质疏松症的预防和治疗增添更多选项。
3.3   综述的局限性   关于女贞子的药理研究主要停留在三萜类、环烯醚萜类、苯乙醇苷类及黄酮类等四类化合物中。然而，现有的研究多集中在某种成分上，对其作用机制的研究仍然不足，这也阻碍了对女贞子更好的开发与利用。因此，跨学科的研究方法显得尤为的关键，在现有的研究基础之上探索分子水平方面女贞子活性成分抗骨质疏松症的相关机制，寻找相关的目标激动剂或抑制剂，这有助于在不同的层面发现中医药防治骨质疏松症的潜在靶点。既往研究已经证实，在抗氧化应激方面女贞子活性成分表现出了独特的优势，并在体内和体外实验中展示了显著的治疗成效。鉴于上述问题及其潜在机制的复杂性，后续研究仍需深化实验验证与临床应用的探索，旨在为女贞子在骨质疏松症治疗中的应用奠定更加坚实的研究基础。
3.4   综述的重要意义   综上所述，文章汇总了关于女贞子及其活性在相关信号通路中发挥抗骨质疏松症的研究进展。骨质疏松症发病机制繁复，涉及多种相关信号通路的作用，包括当单一信号通路作用的影响或者多信号通路之间的相互作用。因此深入研究多条信号通路之间的相互作用，寻找更多能够通过影响相关信号通路的抑制剂与激动剂，有助于阐明女贞子及其活性成分抗骨质疏松症的分子机制，揭示其在骨质疏松症发病中的角色，为防治骨质疏松症寻找新的靶点和理论基础。同时探索相关抑制剂与激动剂以及调节成骨细胞-破骨细胞的细胞因子表达在对各类细胞增殖分化、细胞凋亡中存在关联，探讨与骨质疏松症有关的细胞互相之间不同作用模式的联合串扰调控机制，有利于开发基于相关抑制剂与激动剂治疗骨质疏松症的调控药物，对于改善骨质疏松症起到更好的作用疗效。
3.5   课题专家组建议   文章综述了女贞子活性成分在预防和治疗骨质疏松症方面的分子机制的最新研究进展，并从生物信号分析的角度深入探讨了该药物的工作原理。文章不仅为后续的科研探索与临床实践奠定了坚实的理论基础，还启发了中医药领域在骨质疏松症治疗策略上的新视角与思路。未来研究的焦点可以集中在通过动物实验和细胞实验来探究其作用机制，同时也有潜力进一步研究女贞子与其他中药成分或复合制剂的联合使用以及挖掘更多活性成分通过作用于影响相关信号通路的激动剂与抑制剂，以识别其与骨组织工程相结合在预防和治疗骨质疏松症方面的有效途径。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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近年研究表明，女贞子活性成分抗骨质疏松的研究大多停留在体内外实验当中，了解相关信号通路的作用机制以及与抗骨质疏松症有关的抑制剂及激动剂的作用条件的发生是深入了解女贞子活性成分发挥抗骨质疏松症的重要途径。 目前，中医药已被证实在抗骨质疏松方面具有显著作用，女贞子活性成分其抗骨质疏松的有效性及作用机制逐渐得到学者们认可，其临床与基础研究逐渐被大家重视。#br# #br# 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程#br#

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