破骨细胞TRPV5通道对体外降解生物珊瑚人工骨的影响

doi:10.12307/2023.413

中国组织工程研究 ›› 2023, Vol. 27 ›› Issue (21): 3337-3342.doi: 10.12307/2023.413

• 组织工程骨材料 tissue-engineered bone • 上一篇下一篇

破骨细胞TRPV5通道对体外降解生物珊瑚人工骨的影响

崔红旺1，王良盛2，温鹏1，孟志斌2

海南医学院第一附属医院，1创伤医学中心，2脊柱外科，海南省海口市 570102

收稿日期:2022-03-14 接受日期:2022-05-21 出版日期:2023-07-28 发布日期:2022-11-23
通讯作者: 孟志斌，硕士，教授，主任医师，硕士生导师，海南医学院第一附属医院脊柱外科，海南省海口市 570102
作者简介:崔红旺，男，1977年生，山西省左权县人，汉族，2016年重庆医科大学毕业，医学博士，副主任医师，主要从事绝经后骨质疏松症的发病机制及修复重建组织工程研究。
基金资助:
海南省重点研发计划项目(ZDYF2021SHFZ084)，项目负责人：崔红旺

Effect of osteoclast TRPV5 channel on in vitro degradation of biological coral artificial bone

Cui Hongwang1, Wang Liangsheng2, Wen Peng1, Meng Zhibin2

1Trauma Medical Center, 2Department of Spine Surgery, The First Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China

Received:2022-03-14 Accepted:2022-05-21 Online:2023-07-28 Published:2022-11-23
Contact: Meng Zhibin, Master, Professor, Chief physician, Master’s supervisor, Department of Spine Surgery, The First Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China
About author:Cui Hongwang, MD, Associate chief physician, Trauma Medical Center, The First Affiliated Hospital of Hainan Medical University, Haikou 570102, Hainan Province, China
Supported by:
the Major Research and Development Project of Hainan Province, No. ZDYF2021SHFZ084 (to CHW)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

TRPV5：是瞬时性受体电位通道超家族中的成员，由4个天冬氨酸残基环组成了选择性过滤序列，此序列构成主细胞外的Ca2+结合袋，参与细胞内外Ca2+的调节。目前研究已证明TRPV5高度表达于人与小鼠破骨细胞刷状边缘上，对骨代谢过程中Ca2+的吸收与骨组织重塑有着重要功能。
生物珊瑚人工骨：是天然珊瑚骨经过“热液置换”后的产物，其分子式为Ca5(PO4)3OH，化学成分99%为碳酸钙，Ca∶P=10∶6；其不仅具有与人类松质骨类似的孔道结构，还具有骨传导性﹑良好的生物相容性，基本满足人工骨的需求，但是由于其植入人体内，在“爬行替代”代谢过程中的降解速率较慢，在临床上的应用受到了一定限制。

背景：生物珊瑚人工骨是一种修复长段骨缺损的良好替代材料，但其在体内的降解吸收速率与新生骨的生长速率不够匹配，因而其在临床上的应用受到限制。
目的：探讨破骨细胞TRPV5通道对生物珊瑚人工骨降解的影响。
方法：取生长状态良好的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7，接种于生物珊瑚人工骨片上，加入破骨细胞诱导分化培养液，观察有破骨细胞出现后，分别加入含0，50，500，5 000 µmol/L钌红(TRPV5通道抑制剂)的破骨细胞诱导分化培养液。培养一定时间后，激光共聚焦显微镜下观察TRPV5通道蛋白表达，扫描电镜下观察生物珊瑚人工骨片上的吸收陷窝，应用Western Blot检测细胞TRPV5通道蛋白表达。
结果与结论：①激光共聚焦显微镜：TRPV5表达于破骨细胞的胞浆和胞膜，随着钌红浓度的增加，破骨细胞上TRPV5表达减少；②扫描电镜：0 nmol/L钌红组骨片上可见大片连续的骨吸收陷窝，其他浓度钌红组骨片上的骨吸收陷窝减少，并散在分布，并且随着钌红浓度的升高，骨陷窝面积逐渐减少；③Western Blot检测：与0 nmol/L钌红组比较，其他浓度钌红组TRPV5通道蛋白表达明显降低(P < 0.05或P < 0.01)；④结果表明：破骨细胞在生物珊瑚人工骨片上生长良好，TRPV5可作为调控生物珊瑚人工骨降解速率的靶点。
https://orcid.org/0000-0002-8293-3378(崔红旺)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

关键词: 生物珊瑚人工骨, 降解, 破骨细胞, TRPV5通道, 骨缺损

Abstract: BACKGROUND: Biological coral artificial bone is a good alternative material for repairing long bone defects. However, the degradation and absorption rate of biological coral artificial bone in the human body does not match the growth rate of new bone, which leads to the limitation of its clinical application.
OBJECTIVE: To explore the effect of osteoclast TRPV5 on the degradation of biological coral artificial bone.
METHODS: Monocyte macrophage strain RAW264.7 from mouse was inoculated on biological coral artificial bone slices, which were co-cultured with osteoclasts. After the appearance of osteoclasts was observed, the osteoclast-induced differentiation medium containing 0, 50, 500, 5 000 µmol/L ruthenium red (TRPV5 channel inhibitor) was added separately. After culturing for a certain period of time, the expression of TRPV5 channel protein was observed under a laser confocal microscope. The absorption lacuna on the biological coral artificial bone slice was observed under a scanning electron microscope. The expression of TRPV5 channel protein in cells was detected by western blot assay.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) Laser scanning confocal microscope: TRPV5 could be expressed on the cytoplasm and membrane of osteoclasts. With the increase of ruthenium red concentration, the expression of TRPV5 on osteoclasts decreased. (2) Scanning electron microscope: Large continuous bone resorption lacuna was seen on the bone slices in the 0 nmol/L ruthenium red group. The bone resorption lacuna on the bone slices in other concentrations of ruthenium red decreased and was scattered, and with the increase of the concentration of ruthenium red, the area of the bone lacuna gradually decreased. (3) Western blot assay: Compared with 0 nmol/L ruthenium red group, the expression of TRPV5 channel protein in other concentrations of ruthenium red groups was significantly decreased (P < 0.05 or P < 0.01). (4) The results confirm that osteoclasts grow well on biological coral artificial bone, and TRPV5 can be used as a target to regulate the degradation rate of biological coral artificial bone.

Key words: biological coral artificial bone, degradation, osteoclast, TRPV5 channel, bone defect

中图分类号:

崔红旺, 王良盛, 温鹏, 孟志斌. 破骨细胞TRPV5通道对体外降解生物珊瑚人工骨的影响[J]. 中国组织工程研究, 2023, 27(21): 3337-3342.

Cui Hongwang, Wang Liangsheng, Wen Peng, Meng Zhibin. Effect of osteoclast TRPV5 channel on in vitro degradation of biological coral artificial bone[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2023, 27(21): 3337-3342.

图/表（结果） 4

2.1 TRAP染色鉴定破骨细胞 RAW264.7细胞为圆形或者类圆形的单核细胞，见图1A；在破骨细胞诱导液连续5 d的作用下，可观察到巨大的多核细胞，胞体较大，胞浆内含空泡，多呈圆形，煎蛋状或不规则状，可见伪足。经抗酒石酸酶特异性染色，可见大量大小不一的多核巨细胞，其包浆内可见红色及粉红色沉淀，即为破骨细胞，见图1B；散落在破骨细胞周围较小的呈圆形的单核细胞为RAW264.7细胞。

2.2 破骨细胞TRPV5通道蛋白表达及F-actin环的检测通过免疫荧光技术对诱导得到破骨细胞的TRPV5蛋白和F-actin环进行了检测，结果见图2A显示，TRPV5表达于破骨细胞的胞浆和胞膜(绿色荧光)，F-actin环在破骨细胞细胞膜呈强表达(红色荧光)；共培养体系中的RAW264.7细胞上，TRPV5通道蛋白及F-actin环均有不同程度的表达。定量分析结果显示，50，500，5 000 μmol/L钌红组破骨细胞的TRPV5通道蛋白表达均低于0 μmol/L钌红组(P < 0.05)，50，500，5 000 μmol/L钌红组破骨细胞的F-actin环面积均低于0 μmol/L钌红组(P < 0.05)，见图2B、C。

2.3 扫描电镜观察破骨细胞对生物珊瑚人工骨的降解见图3。

扫描电镜下可见，0 μmol/L钌红组骨片上大片连续的骨吸收陷窝，50，500，5 000 μmol/L钌红组骨片上的骨吸收陷窝逐渐减少，并散在分布。用Image J对骨吸收陷窝面积量化处理后，50，500，5 000 μmol/L钌红组骨吸收陷窝面积明显少于0 μmol/L钌红组(P < 0.01)，说明钌红可有效降低破骨细胞降解生物珊瑚人工骨的能力，且钌红对破骨细胞骨吸收能力的抑制作用随其浓度的升高而增强。
2.4 Western Blot检测破骨细胞TRPV5通道蛋白的表达与对照相比，不同浓度钌红均可降低破骨细胞上TRPV5通道蛋白的表达(P < 0.05，P < 0.01)，见图4。

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引言

肿瘤、先天畸形和意外伤害等因素造成大量骨缺损，美国因此开展的骨移植手术每年约45万台，在世界范围内为每年220万台[1]。虽然，自体骨移植是骨缺损修复的金标准，但由于其供应量有限、会给患者造成二次损伤及加大患者感染风险等因素存在，所以自体骨移植的临床应用受到了限制[2-3]。
生物珊瑚人工骨是天然珊瑚骨经过“热液置换”后的产物，其分子式为Ca5(PO4)3OH，化学成分99%为碳酸钙，Ca∶P=10∶6[4]。生物珊瑚人工骨既保持了天然珊瑚骨与人类松质骨类似的孔道结构，又增加了其机械强度，并兼具骨传导性﹑生物相容性[5]。虽然生物珊瑚人工骨在临床上得到了应用，但是生物珊瑚人工骨在人体内的降解吸收速率与新生骨生长速率不够匹配，因而其临床应用受到了限制[6]。
破骨细胞是移植骨在体内“爬行替代”过程中执行骨吸收作用的功能细胞[7]。GUILLEMIN 等[8]通过组织学观察到珊瑚骨的吸收及成骨过程为：先是血管及肉芽组织长入珊瑚孔道中，破骨细胞迁徙到珊瑚骨表面进行破骨吸收，同时成骨细胞沉积进行骨形成。TRPV5是瞬时性受体电位通道超家族中的成员，表达于破骨细胞刷状边缘膜上[9]，对破骨细胞的分化、迁移、胞内钙离子稳态及骨吸收功能至关重要[10]。研究证实，TRPV5通道被siRNA沉默后，核因子κB受体活化因子配体引起的破骨细胞Ca2+内流被抑制，这提示TRPV5参与了核因子κB受体活化因子配体引起的钙振荡[11]；破骨细胞的褶皱缘是破骨细胞执行骨吸收的功能区，TRPV5表达于破骨细胞骨吸收面微绒毛的褶皱缘上，参与了骨组织新陈代谢的骨吸收过程[12]。然而，TRPV5对破骨细胞降解生物珊瑚人工骨的机制尚不清楚。有研究表明，钌红是瞬时性受体电位通道的抑制剂，可以抑制瞬时性受体电位通道的开放来调节破骨细胞骨吸收功能[13]。此次实验采用不同浓度钌红诱导液共培养RAW264.7细胞和生物珊瑚人工骨，探讨TRPV5是否参与破骨细胞降解生物珊瑚人工骨，以其为进一步优化生物珊瑚人工骨在体内的降解速率提供理论依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

材料方法

1.1 设计细胞学体外实验。
1.2 时间及地点实验于2018年9月至2019年10月在海南医学院中心实验室。
1.3 材料生物珊瑚人工骨由海南医学院第一附属医院骨科实验室制备，其制备工艺已于2008年4月获得国家专利证书[专利号：ZL200410044360.8]；RAW264.7细胞株(中科院上海细胞库)；巨噬细胞集落刺激因子(Peprotech公司)；钌红、抗酒石酸酸性磷酸酶(Sigma公司)；核因子κB受体活化因子配体(Peprotech公司)； DMEM/HG培养基、胎牛血清、小牛血清(Gibco公司)；Rabbit Anti-TRPV5 antibody、Alexa Fluor 488-conjugated anti-rabbit IgG(abcam公司)；HRP标记山羊抗兔二抗(Servicebio公司)；鬼笔环肽(赛默飞生命科技有限公司)；倒置相差荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜(Olympus公司)；扫描电镜(JEOL公司)；化学发光仪(CLINX，6300)；灰度分析软件(Alpha Innotech公司)。
1.4 实验方法
1.4.1 细胞培养取RAW264.7细胞，使用含体积分数10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素双抗的高糖型DMEM培养基培养，置于37 ℃、体积分数5%CO2细胞培养箱孵育，每天更换一次培养基。倒置相差显微镜下观察细胞状态和生长情况，当细胞生长密度达到80%-90%时，用含EDTA的胰酶消化传代。
1.4.2 破骨细胞的诱导分化选取生长状态良好的RAW264.7细胞，以2.5×104 /well的密度接种至25T培养瓶内，置于37 ℃体积分数5%CO2细胞培养箱静置1 h，吸弃培养瓶中的培养基，加入破骨细胞诱导液(含50 µg/L 核因子κB受体活化因子配体+30 µg/L巨噬细胞集落刺激因子的高糖型DMEM培养基)，诱导液每天更换一次，共诱导培养5 d。
TRAP染色鉴定破骨细胞：①配置混合液A：取0.5 mL快速石榴石型碱溶液和0.5 mL亚硝酸盐溶液，轻轻混匀20 s，静置3 min备用。②TRAP染液配置：将混合液A 0.1 mL、4.5 mL ddH2O(37 ℃)、0.1 mL酒石酸盐溶液、0.05 mL萘酚AS-BI磷酸溶液、0.2 mL醋酸盐溶液混匀。③把预先诱导的RAW264.7细胞爬片，用PBS清洗2次，Fixation solution室温浸没30 s，37 ℃下PBS洗5次；TRAP染液覆盖爬片，37 ℃避光孵育1 h，倒置显微镜下观察染色结果。
1.4.3 生物珊瑚人工骨片的制备用电动磨钻将生物珊瑚人工骨打磨成10 mm×10 mm×1 mm大小的方片，再在磨刀石上将骨片打磨到500 µm厚度，最后稀盐酸将骨片溶蚀到200 µm(此时可透光)后，蒸馏清洗浸泡过夜，入高压灭菌锅消毒，干燥箱烘干备用。
1.4.4 破骨细胞TRPV5通道蛋白及F-actin环的检测选取生长状态良好的RAW264.7细胞，按2.5×104/well的密度接种到含生物珊瑚人工骨骨片的24孔板内，加入破骨细胞诱导液，培养3 d后，分别加入0，50，500，5 000 µmol/L的钌红，继续培养2 d。2 d后吸弃培养基；PBS摇床洗涤3次，每次5 min，吸弃PBS，加入-20 ℃预冷的固定液(甲醇∶丙酮=1∶1)，置于-20 ℃固定20 min；PBS摇床洗涤3次，每次5 min；加入0.5 mL封闭液，室温封闭60 min；弃封闭液后，加入Rabbit Anti-TRPV5一抗(稀释比例 1∶150)，4 ℃孵育过夜；弃稀释的一抗，PBS摇床洗涤3次，每次5 min；加入HRP标记山羊抗兔二抗(稀释比例 1∶100)，室温避光孵育60 min；弃二抗，PBS洗3次，每次5 min；加入鬼笔环肽染液，室温避光孵育45 min；弃鬼笔环肽染液，PBS洗涤3次，每次5 min；加入含DAPI的抗荧光淬灭剂100 μL，激光共聚焦显微镜下观察结果。每组样本选6个视野计数TRPV5阳性破骨细胞数，按照ROSCHER等[14]的方法，荧光显微镜下观察并测算F-actin环面积。
1.4.5 扫描电镜观察破骨细胞对生物珊瑚人工骨的降解将RAW264.7细胞接种到含生物珊瑚人工骨片的24孔板内，细胞密度为2.5×104/well，使用破骨细胞诱导液培养4 d，观察到有破骨细胞出现时，分别加入0，50，500，5 000 µmol/L的钌红，继续培养3 d。3 d后，以PBS清洗，2.5%戊二醛4 ℃固定2 h，PBS清洗3次，再用体积分数50%，60%，70%，80%，90%，95%，100%乙醇梯度脱水，叔丁醇脱水2次；干燥骨片，予以喷金，扫描电镜下观察骨片降解情况。利用Image J软件测量珊瑚组织工程骨片上的破骨细胞吸收陷窝面积。
1.4.6 Western Blot检测TRPV5通道蛋白的表达取RAW264.7细胞，按照1.4.5分组培养。倒掉各组培养瓶内培养基，用预冷的PBS洗涤2次，去除培养基残液。用刮匙从生物珊瑚人工骨片收集各组处理的细胞，加入蛋白裂解液，提取细胞总蛋白，测定蛋白浓度，配平各组上样量为80 μg；凝胶电泳分离蛋白质，转膜，5%BSA-TBST室温封闭；加Rabbit Anti-TRPV5(1∶1 000)或β-actin(1∶2 000)，4 ℃孵育过夜；加入HRP标记山羊抗兔二(1∶1 000)37 ℃孵育1 h；TBST洗膜，ECL发光显色。以β-actin作为内参，采用Alpha Innotech分析软件进行定量分析。
1.5 主要观察指标破骨细胞TRPV5通道对生物珊瑚人工骨降解的影响。
1.6 统计学分析采用SPSS 21.0统计软件进行统计分析。所有数据以x±s表示，各实验重复3次，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t 检验。P < 0.05为差异有显著性意义。该文统计学方法已经海南医学院生物统计学田冶教授审核。

讨论

因天然珊瑚具有与人体松质骨类似的三维结构和组织成分，探索珊瑚礁作为骨组织缺损修复替代材料的研究已有40余年历史[15-16]。珊瑚经“热液交换”，使其中的碳酸钙转换成强度更高的珊瑚羟基磷灰石，保留了珊瑚原有的类人体松质骨三维结构[17]。当体内植入珊瑚羟基磷灰石 6周后，珊瑚羟基磷灰石孔隙内有新骨产生，成骨细胞能在多孔状的珊瑚羟基磷灰石上培养成活，这些结果证明珊瑚羟基磷灰石具有良好的成骨潜力[18-19]。理想的组织工程骨材料除了有成骨潜力，其植入体内降解的速率还应与体内新生骨组织的形成相匹配，当新生骨形成时组织工程骨材料逐渐降解，并最终完全被吸收[20-21]。虽然生物珊瑚人工骨已作为组织工程骨材料应用于临床[22]，但珊瑚人工骨在体内的降解吸收较慢[23-24]，因而限制了其临床上的应用。生物珊瑚人工骨在机体内被吸收的主要途径，主要是体液的物理性降解和破骨细胞的骨吸收作用[25-26]。人工骨替代物植入体内后，体液内环境相对稳定，因此通过改善破骨细胞的功能来调节生物珊瑚人工骨在体内的降解速率显得尤为重要。明确破骨细胞在体内降解生物珊瑚人工骨的调节机制，可能优化生物珊瑚人工骨的降解性能，提供其在临床广泛应用的理论依据。
生物珊瑚人工骨植入体内后，其降解过程离不开成骨细胞骨形成和破骨细胞骨吸收的耦合作用，因此，明确破骨细胞对其的降解作用显得尤为重要。由于在体内分离和培养破骨细胞存在相当大的困难，研究学者常用刺激物诱导RAW264细胞生成破骨细胞形成作为破骨细胞来源的替代方案[27-28]。RAW264.7细胞是BALN/c小鼠在感染了Abelson
鼠白血病病毒后，从腹水中收集而来的一种单核巨噬细胞。文献报道，应用50 µg/L核因子κB受体活化因子配体和
30 µg/L巨噬细胞集落刺激因子可成功诱导RAW264.7细胞获得破骨细胞[28]。相关研究表明，W264.7细胞的形态越接近圆形，其诱导效率越高[29]。抗酒石酸酸性磷酸酶是破骨细胞的特异性标志酶，抗酒石酸酸性磷酸酶染色常被用来证明RAW264.7细胞是否被成功诱导为破骨细胞[30]。此次实验含50 µg/L核因子κB受体活化因子配体+30 µg/L巨噬细胞集落刺激因子的培养基连续5 d作用于RAW264.7细胞，抗酒石酸酸性磷酸酶染色后，镜下可见大量大小不一的多核巨细胞，其包浆内可见红色及粉红色沉淀抗酒石酸酸性磷酸酶(+)的破骨细胞，该结果提示核因子κB受体活化因子配体和巨噬细胞集落刺激因子成功将RAW264.7诱导为有活性的破骨细胞，这与文献报道一致[31]。当破骨细胞分化成熟后迁移到骨基质表面，破骨细胞骨架发生重组并产生极化，形成顶膜及基底膜，位于顶膜密封区的微丝让破骨细胞能够锚定在骨表面[32-33]。钙通道作为一种膜蛋白普遍存在于各类细胞上，对破骨细胞的分化﹑骨吸收功能有重要影响，钙离子通道介导胞内钙离子升高可激活多个基因，调控蛋白表达，促进破骨细胞的移行和侵袭[34]。
TRPV5是一种Ca2+高敏感性蛋白通道，高度表达于人与小鼠破骨细胞上[35]。TRPV5定位于破骨细胞刷状边缘上，TRPV5在破骨细胞骨吸收活动中可能有着重要功能；TRPV5被作为可能是调节破骨细胞、成骨细胞生物学功能的新兴靶点。研究发现，缺失 TRPV5蛋白小鼠外周血的单核细胞中能分离诱导出较多骨吸收能力受损的破骨细胞，Ca2+蛋白通道TRPV5参与了破骨细胞的骨吸收过程[36]。文献报道，F-actin环被作为破骨细胞进行骨吸收作用的结构基础，其面积大小被作为评估破骨细胞骨吸收能力的量化指标[37]。此次实验在能稳定获取破骨细胞后，建立了生物珊瑚人工骨与破骨细胞共培养体系，诱导5 d后通过激光共聚焦技术观察到：F-actin环与破骨细胞刷状边缘相邻，在体外培养下其形状大致为破骨细胞轮廓，而TRPV5又定位在破骨细胞刷状边缘上，结果证实RAW264.7细胞分化为有活性的破骨细胞，执行骨吸收功能。
钌红是一种电镜组织学多聚阳离子着色剂，可与卵磷脂结合，常被用于电镜观察细胞及组织着色。有研究表明，一定浓度的钌红可对TRPV5通道产生显著阻滞效果[38]。为评估TRPV5钙离子通道对破骨细胞降解生物珊瑚人工骨的影响，采用含不同浓度钌红(0，50，500，5 000 µmol/L)的诱导液继续处理生物珊瑚人工骨与破骨细胞共培养体系，通过扫描电镜观察破骨细胞对生物珊瑚人工骨的降解情况，结果显示，破骨细胞对生物珊瑚人工骨的降解能力随钌红浓度的升高而降低；应用Western blot定量检测TRPV5蛋白的表达，结果提示钌红可降低TRPV5蛋白的表达。TRPV5与破骨细胞的分化与骨吸收过程息息相关[39]。研究证实，TRPV5基因敲除小鼠的骨吸收功能受损[40]，与野生型比其皮质骨的厚度及骨小梁增加，并患有骨硬化症，可见，TRPV5钙离子通道对破骨细胞的分化及功能有重要调节作用。此次实验应用TRPV5抑制剂钌红阻滞其功能，发现生物珊瑚人工骨上的破骨细胞 TRPV5蛋白表达减少，这提示TRPV5参与了破骨细胞降解生物珊瑚人工骨的过程，TRPV5的功能抑制是生物珊瑚人工骨降解缓慢的重要原因。通过调节TRPV5钙离子通道的状态进而改变破骨细胞对机体骨代谢状况，可能有望成为调节降解生物珊瑚人工骨速率的新靶点。
研究的创新与不足：实验建立生物珊瑚人工骨和破骨细胞共培养体系，应用钌红抑制钙离子通道，从分子水平证实了破骨细胞TRPV5对生物珊瑚人工骨降解的影响，为制备适合人体骨组织代谢需要的生物珊瑚人工骨提供了理论依据，具有一定创新性。但是由于破骨细胞获取较为困难、生物珊瑚人工骨片透光度相对较差等客观因素限制，未对钌红干预破骨细胞后进行破骨细胞形态学及相关特异性功能蛋白方面的研究；另外，该研究仅仅是体外实验的初步探索，有待于在动物体内进一步证实，对于破骨细胞TRPV5对生物珊瑚人工骨降解的确切机制尚不能完全明确。希望后期能通过体内实验，采用多靶点干预，应用Western blot、免疫荧光、扫描电镜等技术进一步研究，明确破骨细胞TRPV5对生物珊瑚人工骨降解的作用机制，为生物珊瑚人工骨的临床使用提供证据。中国组织工程研究杂志出版内容重点：生物材料；骨生物材料；口腔生物材料；纳米材料；缓释材料；材料相容性；组织工程

破骨细胞TRPV5通道对体外降解生物珊瑚人工骨的影响

Effect of osteoclast TRPV5 channel on in vitro degradation of biological coral artificial bone

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