淀粉样蛋白β异常表达对骨代谢的影响

doi:10.12307/2022.613

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (20): 3152-3157.doi: 10.12307/2022.613

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淀粉样蛋白β异常表达对骨代谢的影响

李芳瑜，夏文芳，崔舜

华中科技大学同济医学院附属协和医院，湖北省武汉市 430000

收稿日期:2020-12-24 接受日期:2021-03-03 出版日期:2022-07-18 发布日期:2022-01-18
通讯作者: 崔舜，博士，副教授，华中科技大学同济医学院附属协和医院，湖北省武汉市 430000
作者简介:李芳瑜，女，1995年生，福建省龙海市人，汉族，2019年安徽医科大学毕业，主要从事骨代谢、慢性炎症性疾病、骨关节炎方面的研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81671560)，项目负责人：崔舜

Abnormally expressed beta-amyloid affects bone metabolism

Li Fangyu, Xia Wenfang, Cui Shun

Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430000, Hubei Province, China

Received:2020-12-24 Accepted:2021-03-03 Online:2022-07-18 Published:2022-01-18
Contact: Cui Shun, MD, Associate professor, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430000, Hubei Province, China
About author:Li Fangyu, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430000, Hubei Province, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81671560 (to CS)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
淀粉样蛋白β：是由淀粉样前体蛋白经β-分泌酶和γ-分泌酶的蛋白水解作用而产生的致病性淀粉样蛋白，可存在于不同的组织、器官。淀粉样蛋白在细胞外组织发生聚集沉积从而导致的疾病称为淀粉样变，在组织内聚集可形成淀粉样蛋白斑块。
β-分泌酶1：又称为淀粉蛋白前β-分解酶1，是一种天冬氨酰蛋白酶，是裂解淀粉样前体蛋白产生淀粉样蛋白β的限速酶，抑制β-分泌酶1被认为是潜在治疗阿尔茨海默症最有希望的治疗方法之一。敲除β-分泌酶1基因几乎可完全消除野生型小鼠模型产生的淀粉样蛋白β。

背景：淀粉样蛋白β在人体组织中广泛存在，它的异常表达与阿尔茨海默症、骨质疏松等多种慢性炎症性疾病密切相关。研究表明淀粉样蛋白β在人椎骨和股骨中沉积并引起骨质破坏，但关于淀粉样蛋白β低表达对骨代谢的影响尚不清楚。
目的：探讨淀粉样蛋白过表达及低表达对小鼠骨代谢的影响。
方法：纳入12月龄淀粉样蛋白β过表达的APPswe+/+转基因小鼠(APPswe+/+组)、淀粉样蛋白β低表达的β-分泌酶1基因敲除小鼠(BACE-/-组)和野生型小鼠(野生型组)。刚果红染色观察淀粉样蛋白在骨组织中的沉积；免疫组织化学染色检测淀粉样蛋白前体蛋白在骨组织的分布，Micro-CT研究整体骨结构差异性；碱性磷酸酶染色和抗酒石酸酸性磷酸酶染色，分析骨形成及骨吸收的差异性。
结果与结论：①与野生型组相比，APPswe+/+组小鼠松质骨和致密骨淀粉样蛋白β沉积增多，BACE-/-组小鼠松质骨和致密骨淀粉样蛋白β沉积减少(P < 0.05)；②淀粉样蛋白前体蛋白在APPswe+/+组和BACE-/-组小鼠的松质骨表达增多；③与野生型组相比，APPswe+/+组和BACE-/-组小鼠骨小梁的骨量和骨小梁厚度减少，骨小梁变细、稀疏、排列紊乱或断裂；骨形成异常，破骨细胞活性增强 (P < 0.05)；④淀粉样蛋白β过表达或低表达均可引起骨代谢紊乱，导致骨质流失；β-分泌酶1基因敲除导致淀粉样蛋白β异常低表达，影响淀粉样前体蛋白在骨中的表达，导致骨代谢异常。
缩略语：淀粉样前体蛋白：amyloid precursor protein，APP；β-分泌酶1：beta-secretase cleaving enzyme-1，BACE-1；抗酒石酸酸性磷酸酶：tartrate resistant acid phosphatase，TRAP

https://orcid.org/0000-0003-3274-8366 (李芳瑜)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 淀粉样蛋白β, 骨代谢, β-分泌酶1, 淀粉样前体蛋白, 骨质破坏

Abstract: BACKGROUND: Amyloid β exists widely in human tissues, and its abnormal expression is closely related to various chronic inflammatory diseases such as Alzheimer’s disease and osteoporosis. Studies have shown that amyloid β deposits in human vertebrae and femur and then causes bone destruction. However, the effect of low expression of amyloid β on bone metabolism remains unclear.
OBJECTIVE: To investigate the effect of overexpression and low expression of amyloid β on bone metabolism in mice.
METHODS: There were three groups: an APPswe+/+ group with APPswe+/+ transgenic mice aged 12 months with overexpression of amyloid β, a BACE-/- group with β-secretase cleaving enzyme-1 gene knockout mice with low expression of amyloid β, and a wild type group with wild type mice. Amyloid β deposition in bone tissue was observed by Congo red staining. Immunohistochemical staining was used to detect the distribution of amyloid precursor protein in bone tissue, and micro-computed tomography was used to study the difference of overall bone structure. Alkaline phosphatase staining and tartrate-resistant acid phosphatase staining were used to analyze the differences between bone formation and bone resorption.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the wild type group, amyloid β deposition of cancellous bone and compact bone was increased in the APPswe+/+ group, and decreased in the BACE-/- group (P < 0.05). Compared with the wild type group, the expression of amyloid precursor protein in mouse cancellous bone was increased in the APPswe+/+ and BACE-/- groups. Compared with the wild type group, the bone mass and thickness of trabecular bone were decreased, and trabecular bone became thinner, sparse, disordered or fractured in the APPswe+/+ and BACE-/- groups. There was also abnormal bone formation and enhanced activity of osteoclasts in the APPswe+/+ and BACE-/- groups (P < 0.05). To conclude, overexpression or low expression of amyloid β can cause bone metabolism disorder and lead to bone loss. Abnormal lower expression of amyloid β caused by β-secretase cleaving enzyme-1 gene knockout can affect the expression of amyloid precursor protein in bone, and lead to an abnormal bone metabolism.

Key words: amyloid β, bone metabolism, β-secretase cleaving enzyme-1, amyloid precursor protein, bone destruction

中图分类号:

李芳瑜, 夏文芳, 崔舜. 淀粉样蛋白β异常表达对骨代谢的影响[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(20): 3152-3157.

Li Fangyu, Xia Wenfang, Cui Shun. Abnormally expressed beta-amyloid affects bone metabolism[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(20): 3152-3157.

图/表（结果） 5

2.1 实验动物数量分析选取3个基因型的2月龄小鼠各7只，分为3组，即野生型组、APPswe+/+组和BACE-/-组，自然饲养10个月，从每组中选择状态最佳的5只小鼠进入结果分析。
2.2 刚果红比较3种基因型小鼠股骨中淀粉样蛋白β的表达刚果红染色能将淀粉样物质染成红色。刚果红染色显示，与野生型组相比，APPswe+/+组小鼠松质骨和致密骨淀粉样蛋白β沉积增多，差异有显著性意义(P < 0.05)；BACE-/-组小鼠松质骨淀粉样蛋白β沉积减少，差异有显著性意义(P < 0.05)，见图1。

2.3 免疫组织化学染色比较3种基因型小鼠股骨中APP的表达免疫组化结果显示，淀粉样蛋白前体蛋白在不同基因型鼠的骨组织中均有表达。与野生型组相比，APPswe+/+组和BACE-/-组小鼠松质骨的APP表达增多，差异有显著性意义(P < 0.05)。在BACE-/-组小鼠松质骨中APP沿着生长盘分布，呈块状聚集，见图2。

2.4 各种基因型小鼠骨微结构的变化 Micro-CT扫描及骨三维结构重构结果显示，与野生型组相比，APPswe+/+组和BACE-/-组小鼠均呈现骨小梁体积分数、骨小梁厚度明显减少；骨小梁分离度、结构模式指数明显增加，皮质骨面积/周长明显减少，差异有显著性意义(P < 0.05)。结果提示老龄APPswe+/+组和BACE-/-组小鼠相较于野生型组呈现骨质疏松状态，骨小梁偏向杆状结构，皮质骨厚度变薄，见图3。

2.5 生物化学染色
2.5.1 碱性磷酸酶染色比较3种基因型小鼠骨形成的差异碱性磷酸酶代表非胶原骨基质成分，是成骨细胞的骨形成指标。碱性磷酸酶染色结果显示，与野生型组相比，APPswe+/+组和BACE-/-组小鼠松质骨的染色阳性减少，差异有显著性意义(P < 0.05)，提示淀粉样蛋白β异常的小鼠骨形成异常。此外在BACE-/-组，可见致密骨存在点状分布的碱性磷酸酶染色阳性，见图4。

2.5.2 TRAP染色比较3种基因型小鼠骨吸收的差异 TRAP是破骨细胞活性和骨吸收的指标。TRAP染色结果显示，与野生型组相比，APPswe+/+组松质骨TRAP染色阳性减少，BACE-/-组小鼠松质骨和致密骨的染色阳性增加，差异有显著性意义(P < 0.05)，提示淀粉样蛋白β高表达导致老龄鼠破骨细胞活性减弱，淀粉样蛋白β低表达导致老龄鼠破骨细胞活性增强，见图5。

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引言

阿尔茨海默病是一种常见的中枢神经系统退行性疾病，其临床症状主要是认知和记忆功能障碍，病理特征为淀粉样蛋白β沉积于脑皮质和脑血管，神经纤维缠结形成，导致慢性炎症和神经元丧失[1-2]。骨质疏松是阿尔茨海默病患者另一个进行性骨退行性病变，流行病学研究显示阿尔茨海默病患者存在骨代谢紊乱，如骨质疏松、骨折的发生率增加及骨密度降低[3]。除了与增龄因素相关外，利用阿尔茨海默病转基因鼠模型研究显示高表达淀粉样蛋白β的转基因鼠Tg2576存在骨代谢异常，以年龄依赖性的方式调节破骨细胞活性，骨吸收增加，抑制成骨细胞分化，骨形成减少，导致骨质疏松及骨再建能力下降[4-5]。此外，人骨质疏松性椎骨小梁骨和股骨颈标本中的淀粉样蛋白β和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein，APP)水平升高，且淀粉样蛋白β在骨骼中的异常沉积揭示了淀粉样蛋白β与人类骨质疏松症之间的密切关系[6-7]。
APP有两种切割途径[8]：一种为非淀粉样生成途径，由α-分泌酶在淀粉样蛋白β域的16-17位残基处切割APP，并产生可溶性和非致病性前体，其产物APPsα蛋白对神经有保护作用；另一种为淀粉样生成途径，通过β-分泌酶1(beta-secretase cleaving enzyme-1，BACE-1)和γ-分泌酶顺序切割APP释放淀粉样蛋白β[9]。BACE-1是一种天冬氨酰蛋白酶，是裂解APP产生淀粉样蛋白β的限速酶，BACE基因敲除鼠中的裂解APP产生淀粉样蛋白β的水平降低[10]。
为了进一步了解淀粉样蛋白β对骨的影响，作者采用淀粉样蛋白β高表达的APPswe+/+转基因小鼠和淀粉样蛋白β低表达的BACE-1敲除小鼠进行体内比较研究，通过对比骨微结构和代谢状态，探讨淀粉样蛋白β异常表达对骨发育和骨代谢的影响及在骨形成和骨吸收中的作用，为治疗阿尔茨海默病合并骨质疏松开发新药提供实验依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计分组对比动物实验，3组间比较采用方差齐性检验。
1.2 时间及地点实验于2019-2020年在华中科技大学同济医学院完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物选择2月龄SPF级APP/PS1+/+转基因小鼠(购自南京大学动物模式研究所)、BACE-/-敲基因小鼠(购自美国Jackson Lab)、C57BL/6小鼠(购自南京大学动物模式研究所)各5只，体质量27-32 g，雄性，分别作为APPswe+/+组、BACE-/-组及野生型组，在华中科技大学同济医学院动物房IVC饲养，医学实验动物环境设施为SPF 级，动物喂养10个月。
1.3.2 实验试剂和仪器 Skyscan-1176高分辨率活体Micro-CT(购于德国Bruker公司)，淀粉样物质染色试剂盒(货号：G1534，购于Solarbio公司)，APP抗体(货号：A8717，购于Sigma公司)，碱性磷酸酶染色试剂盒(购于武汉百奥斯)，抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase，TRAP)染色试剂盒(购于日本Wako公司)。
1.4 实验方法
1.4.1 取材及样品制备用1%戊巴比妥钠(4 mL/kg) 腹腔麻醉处死小鼠，分离两侧股骨，剔除肌肉组织，其中一侧股骨置于40 g/L多聚甲醛，固定24 h，随后进行Micro-CT扫描；另一侧股骨置于40 g/L多聚甲醛，固定过夜，14%EDTA脱钙处理21 d，直至针刺无阻力(即脱钙完成)。股骨组织脱钙后，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，采用Leica 切片机进行组织切片，厚度为10 μm，40 ℃温水展片，60 ℃烘干，4 ℃保存待用。
1.4.2 Micro-CT扫描及分析将小鼠股骨样本用胶带固定后放入SkyScan 1176扫描机器内，设置扫描参数，滤片为Al 1 mm；扫描厚度为9 μm，进行样本扫描。使用CTAn软件和Nrecon软件对数据进行三维重建和分析。骨小梁区域选择为，从生长板水平开始选取100个图像切片的位置作为起始端，并从该位置开始延伸400个图像切片，作为骨小梁分析的目标区域，在相同方法下对数据进行观察和分析。统计骨小梁体积分数、骨小梁厚度、骨小梁分离度和结构模式指数，分析以上骨结构参数并绘图。
骨小梁体积分数指骨小梁体积与样本体积的比值，能反映骨小梁的骨量；骨小梁厚度指骨小梁的平均厚度；骨小梁分离度代表骨小梁之间髓腔平均宽度；结构模式指数代表小梁结构组成结构中板层结构和杆状结构比例的参数，结构模式指数值越小，骨小梁更偏向板状结构；结构模式指数值越大，骨小梁更偏向杆状结构；皮质骨面积/周长是指皮质骨面积与周长的比值，能反映皮质骨的厚度。
1.4.3 组织切片分析
(1)刚果红染色：切片脱蜡，梯度乙醇脱水，将刚果红染液滴加到切片上，湿盒避光孵育10 min。苏木精染核5 s，立即用双蒸水冲洗，37 ℃烤箱烘干，透明封固。扫描后放大观察，进行图像拍摄采集，利用Image J将采集的图像进行定量分析，红色沉淀为淀粉样物质。
(2)组织化学染色：切片脱蜡水合后置于沸腾的抗原修复液中，再放入高压灭菌锅中，115 ℃ 3 min，自然冷却至室温。切片滴加体积分数3%的过氧化氢溶液，室温下孵育20 min。含体积分数10%山羊血清的封闭液室温封闭30 min，一抗4 ℃冰箱孵育过夜(一抗稀释浓度1∶100，APP抗体(货号：A8717，Sigma公司)，二抗室温孵育30 min，滴加新鲜的DAB工作液，染色1 min，苏木精复染、自来水反蓝，脱水、透明、中性树胶封固。扫描后放大观察，进行图像拍摄采集，利用Image J将采集的图像进行定量分析，淡黄色至棕褐色为阳性标志。
(3)碱性磷酸酶染色：切片脱蜡，梯度乙醇脱水，根据试剂盒说明按照比例配制染液，将染液滴加到切片上，湿盒避光孵育30 min。苏木精染核5 s，立即用双蒸水冲洗，37 ℃烤箱烘干，透明封固。扫描后放大观察，进行图像拍摄采集，利用Image J将采集的图像进行定量分析，灰黑色颗粒或灰黑色块状或条状沉淀为碱性磷酸酶染色阳性。
(4)TRAP染色：切片脱蜡，梯度乙醇脱水，根据试剂盒说明按照比例配制染液，将切片浸入显色液中，37 ℃恒温箱中避光反应60 min。双蒸水冲洗30 s，滴加核染色试剂，反应1 min。水洗干燥后，二甲苯透明，中性树胶封固。扫描后放大观察，进行图像拍摄采集，利用Image J将采集的图像进行定量分析，鲜红色或深红色颗粒为TRAP染色阳性。
1.5 主要观察指标选取12月龄不同基因型小鼠，通过刚果红染色及免疫组织化学染色检测淀粉样蛋白β及其前体蛋白APP在骨组织中的沉积及表达；生物化学染色检测碱性磷酸酶及TRAP的表达。
1.6 统计学分析采用SPSS 26.0 统计软件进行数据分析，数据以x±s表示，3组间比较采用方差齐性检验，P < 0.05为差异有显著性意义。采用GraphPad Prism 8.0统计分析软件进行图像绘制。

讨论

骨代谢异常是动物依龄性改变的疾患之一，在老年具有显著性表现。骨质疏松症是最常见的慢性代谢性骨病，其特征是骨量低和骨脆性增加[11]，如今有超过2亿人患有骨质疏松症，而且由于人口老龄化和寿命延长，受影响的人数仍在急剧增加，这是一个重大的公共卫生问题[12]。先前的流行病学显示，阿尔茨海默病与骨质疏松密切相关，在患有阿尔茨海默病的患者中并发骨质疏松的风险高于非阿尔茨海默病患者[13-14]。另有研究表明，在股骨颈骨折患者中，成人骨组织中神经系统相关基因APP、淀粉样蛋白β前体样蛋白2和BACE-1强协调表达，这些基因的表达与已知的骨转换标志物核因子κB受体活化因子配体、TRAP以及成骨细胞活性标志物骨保护素和重组人牙本质基质蛋白1密切相关。在APP、淀粉样蛋白Β前体样蛋白2、BACE-1、核因子κB受体活化因子配体和TRAP之间观察到，最强的相关性不仅存在于阿尔茨海默病患者中，而且在非阿尔茨海默病组中也是如此，这些强关联表明参与神经系统稳态和骨重塑病理的基因之间存在关联功能[15]。
淀粉样蛋白β是淀粉样前体蛋白经蛋白酶裂解后产生的致病性淀粉样蛋白，可存在于不同的组织、器官，淀粉样蛋白在细胞外组织发生聚集沉积从而导致的疾病称为淀粉样变[16]。淀粉样蛋白β在脑组织中的沉积是导致阿尔茨海默病的病理基础，除脑组织外，淀粉样蛋白β可沉积于骨组织，并导致局部炎症[17-18]。与非痴呆症患者相比，阿尔茨海默病患者骨骼肌和颞肌的淀粉样蛋白β表达水平升高[18]。MCLEOD等[6-7]还观察到小鼠骨质疏松性骨样品的骨陷窝都存在淀粉样蛋白β 42和APP。近来的研究发现，淀粉样蛋白β对破骨细胞分化和活性的刺激作用是一种剂量依赖关系[6]。也有研究显示，淀粉样蛋白β对成骨细胞的促进作用呈依赖关系[19]。由此可见，淀粉样蛋白β参与了骨代谢过程。
为了深入研究淀粉样蛋白β对骨代谢的影响作用，此次研究利用BACE-/-鼠模型以及APPswe+/+鼠模型进行了体内对比研究，以了解淀粉样蛋白β异常表达对骨代谢的影响。由于骨代谢异常是动物依龄性疾患，在老年具有显著性表现，此次研究选取了老龄小鼠股骨进行了体内研究。淀粉样蛋白在组织中的沉积是组织损伤的病理基础，由此，作者首先通过刚果红染色观察淀粉样蛋白在骨组织中的沉积。APPswe+/+小鼠股骨的松质骨和致密骨都可见明显的淀粉样蛋白β沉积，而BACE-/-小鼠几乎没有淀粉样蛋白β沉积。作者进一步研究了APP蛋白在骨组织中的表达，结果显示淀粉样蛋白β的异常表达可能导致其前体蛋白APP的表达增多。与刚果红染色淀粉样蛋白β的沉积相比，APP在松质骨及致密骨都有表达，且BACE-/-鼠的APP表达增强，在生长盘呈块状聚集，该异常表达与堆积可能导致骨代谢异常。
骨重塑是维持骨代谢平衡的一个重要过程，也是成年人体内主要的代谢过程，以保持骨骼发育完成后的骨量及骨骼形状[20]。骨重塑是一个高度协调的过程，涉及破骨细胞、成骨细胞和骨细胞所介导的骨吸收和骨形成。这3种细胞构成骨重塑的基本多细胞单元，在基本多细胞单元内骨重塑的活动包括3个连续的阶段：首先，造血前体细胞的激活促进破骨细胞的形成和骨吸收；其次，间充质干细胞募集成骨谱系细胞，成骨谱系细胞与破骨细胞之间相互作用，以完成分解代谢到合成代谢的逆转；最终，成骨细胞介导骨形成直到被吸收的骨骼完全被新骨取代而终止[21]。基于Micro-CT对不同基因型鼠模型骨微结构研究和小鼠长骨结构的组织学分析，淀粉样蛋白β对骨稳态的调节是明显的，淀粉样蛋白β过表达和低表达均可导致骨代谢异常。APPswe+/+和 BACE-/-小鼠之间的骨缺损具有显著的相似性，两者都呈现骨质疏松状态，骨小梁体积分数和骨小梁厚度减少，结构模式指数增加，骨小梁偏向杆状结构。通过碱性磷酸酶染色观察到与野生型组相比，APPswe+/+组和BACE-/-组小鼠松质骨的碱性磷酸酶染色阳性减少，提示淀粉样蛋白β异常的小鼠骨形成异常。通过TRAP染色观察到与野生型组相比，APPswe+/+组松质骨TRAP染色阳性减少，BACE-/-组小鼠松质骨和致密骨的染色阳性面积增加，差异有显著性意义(P < 0.05)，提示淀粉样蛋白β高表达导致老龄鼠破骨细胞活性减弱，淀粉样蛋白β低表达导致老龄鼠破骨细胞活性增强。
然而，淀粉样蛋白β是如何调节骨代谢、进而导致骨质疏松的潜在机制仍不清楚[22-32]。CUI等[4]的研究表明淀粉样蛋白β通过晚期糖基化终产物受体调节破骨细胞的分化和功能，在幼年鼠中增加了骨基质中细胞因子的释放而促进破骨细胞形成，而随着年龄增加，体内可溶性糖基化终产物受体分泌增多，抑制淀粉样蛋白β与晚期糖基化终产物受体结合，降低对破骨细胞的分化作用。同时该研究诱导BACE-/-鼠骨髓间充质干细胞分化为破骨细胞，在分化早期，TRAP阳性细胞减少，而到了分化晚期TRAP阳性细胞增多。这些结果表明 BACE是增强破骨形成的初始阶段所必需的，且BACE-/-鼠显示出破骨细胞延迟分化的特点。APPswe+/+组骨质疏松可能是由于早期破骨细胞活性增强造成骨代谢紊乱，以及成骨细胞活性下降所致。BACE-/-组出现骨质疏松这一缺陷可能是由于BACE-1酶缺陷导致的破骨细胞延迟分化，该异常分化导致老龄鼠破骨细胞活性增强，骨形成减少。
综上所述，淀粉样蛋白β参与骨代谢过程，淀粉样蛋白β过表达或低表达都会导致骨代谢失衡，由此推测淀粉样蛋白β是骨代谢调节因子之一，其机制有待进一步研究。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

淀粉样蛋白β异常表达对骨代谢的影响

Abnormally expressed beta-amyloid affects bone metabolism

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