2.1   实验动物数量分析   共纳入小鼠60只，随机分为6组，均进入结果分析，无脱失。
2.2   动物行为学及病理评分结果   实验期间各组动物均无死亡，蛋氨酸-胆碱充分组小鼠毛发柔顺、有光泽、精神状态良好。蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠随喂养时间增长，表现为体质量明显减轻，毛发紊乱、无光泽，活动减弱，精神萎靡。
   苏木精-伊红染色结果(图1)显示：蛋氨酸-胆碱充分喂养小鼠肝小叶结构均基本正常，肝板走行整齐，肝细胞索排列整齐清晰，围绕中央静脉呈放射状排列，肝细胞形状规则，排列致密、均一，细胞核呈圆形；蛋氨酸-胆碱缺乏喂养4周组小鼠肝细胞肿胀呈圆形，体积较正常明显增加，胞质内可见脂肪空泡，其中汇管区和小叶内可见炎性细胞浸润；蛋氨酸-胆碱缺乏喂养6周组肝细胞呈大泡性脂肪变，小叶内可见灶状肝细胞坏死，伴有淋巴细胞和中性粒细胞浸润，并逐渐出现肝纤维化表现；蛋氨酸-胆碱缺乏喂养8周组肝小叶内脂肪空泡、肝细胞气球样变、炎性细胞灶性浸润并存，肝纤维化表现加重。




油红O染色结果(图2)显示：蛋氨酸-胆碱充分喂养小鼠肝组织可见微小红色脂滴，且随着喂养时间延长脂滴有少量增加；而蛋氨酸-胆碱缺乏喂养4周组小鼠肝组织可见明显红色脂滴，表现为脂滴弥漫浸润入肝细胞中；蛋氨酸-胆碱缺乏喂养6周组小鼠肝小叶内脂滴逐渐融合成片，呈现大颗粒状，且脂滴细胞数所占比例最大；蛋氨酸-胆碱缺乏喂养8周组小鼠肝小叶内脂滴细胞数所占比例较6周组有所减低。



肝组织胶原染色结果(图3)显示：蛋氨酸-胆碱充分喂养小鼠肝组织仅中央静脉和汇管区少量着色；蛋氨酸-胆碱缺乏喂养4 周组小鼠肝细胞肿胀变大，胶原组织增加，局部可见轻度窦周胶原纤维着色；蛋氨酸-胆碱缺乏喂养6周组小鼠肝小叶内有广泛的肝细胞脂肪变性，汇管区和肝窦结构破坏，纤维组织增生，可见短纤维间隔形成，纤维化较4 周加重；蛋氨酸-胆碱缺乏喂养8周组小鼠肝小叶内气球样变较6周减少，但窦周胶原纤维着色增加，纤维化程度进一步增加。



MAFLD组织学病理评分结果显示，模型组小鼠于造模4，6，8 周时NAS评分均>5分，表明MAFLD模型成立，见表1。




2.3   血清谷草转氨酶、谷丙转氨酶及肝组织三酰甘油水平   与蛋氨酸-胆碱充分小鼠相比，蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肝组织三酰甘油水平均显著升高(表2)。



2.4   胆汁酸分析结果比较   采用 UPLC-MS 技术，对饲喂蛋氨酸-胆碱充分和蛋氨酸-胆碱缺乏饲料的小鼠肝脏及血清胆汁酸进行轮廓分析，小鼠血清样本中胆汁酸含量及组成比较如表3及图4所示，肝脏样本中胆汁酸含量及组成比较如表4及图5所示。















从小鼠血清胆汁酸检测结果可以看出，与蛋氨酸-胆碱充分组小鼠相比，蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠血清中总游离型和总结合型胆汁酸以及除牛磺脱氧胆酸外的胆汁酸，含量均呈上升趋势，胆酸/鹅去氧胆酸值显著升高；随着饲养时间增长，蛋氨酸-胆碱充分组胆汁酸含量猪去氧胆酸、甘氨胆酸、牛磺猪去氧胆酸含量显著下降；如图4所示，蛋氨酸-胆碱缺乏组与蛋氨酸-胆碱充分组的小鼠血清中胆汁酸的组成发生了较大改变，其中变化幅度较大的胆汁酸为胆酸、牛磺猪去氧胆酸、甘氨胆酸、牛磺熊去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸等。发现造模4，6，8周时，与蛋氨酸-胆碱充分组胆酸占比(9.87%，20.16%，15.02%)相比，在蛋氨酸-胆碱缺乏组的占比(47.49%，56.74%，57.80%)分别增加了4.8，2.8，3.8倍；与蛋氨酸-胆碱充分组牛磺猪去氧胆酸占比(7.12%，4.97%，1.64%)相比，在蛋氨酸-胆碱缺乏组的占比(0.56%，0.42%，0.47%)降低了92%，92%，72%；与蛋氨酸-胆碱充分组甘氨胆酸占比(9.05%，7.18%，8.91%)相比，在蛋氨酸-胆碱缺乏组的占比(0.96%，0.79%，0.97%)降低了90%，89%，89%；与蛋氨酸-胆碱充分组牛磺熊去氧胆酸占比(7.41%，6.49%，6.76%)相比，在蛋氨酸-胆碱缺乏组的占比(2.39%，2.09%，1.37%)降低了68%，68%，80%；与蛋氨酸-胆碱充分组牛磺脱氧胆酸占比(14.73%，13.37%，12.64%)相比，在蛋氨酸-胆碱缺乏组的占比(2.40%，1.80%，1.84%)降低了84%，87%，86%。
从小鼠肝脏胆汁酸检测结果可以看出，与蛋氨酸-胆碱充分组小鼠相比，蛋氨酸-胆碱缺乏组肝脏中总游离型胆汁酸以及胆汁酸胆酸、甘氨胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺胆酸含量呈上升趋势，胆汁酸鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸、牛磺石胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸含量呈下降趋势，胆汁酸甘氨脱氧胆酸含量呈先下降后上升趋势，胆汁酸去氧胆酸、牛磺猪去氧胆酸含量基本不变，胆酸/鹅去氧胆酸值显著升高；随着饲养时间增长，蛋氨酸-胆碱充分组胆汁酸鹅去氧胆酸、熊去氧胆酸、去氧胆酸、猪去氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨脱氧胆酸、牛磺脱氧胆酸含量显著下降；如图5所示，蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠肝脏中胆汁酸的组成发生了较大变化，其中变化显著的为胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、牛磺猪去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸。发现造模4，6，8周时，与蛋氨酸-胆碱充分组胆酸占比(3.12%，3.94%，3.47%)相比，在蛋氨酸-胆碱缺乏组的占比(18.09%，30.83%，28.91%)增加了5.8，7.8，8.3倍；与蛋氨酸-胆碱充分组牛磺鹅去氧胆酸占比(12.47%，13.20%，13.40%)相比，在蛋氨酸-胆碱缺乏组的占比(9.28%，7.82%，5.09%)降低了26%，41%，63%；与蛋氨酸-胆碱充分组牛磺猪去氧胆酸占比(6.57%，8.27%，8.84%)相比，在蛋氨酸-胆碱缺乏组的占比(4.54%，5.49%，4.35%)降低了31%，34%，51%；与蛋氨酸-胆碱充分组牛磺熊去氧胆酸占比(5.10%，5.12%，2.20%)相比，在蛋氨酸-胆碱缺乏组的占比(1.38%，1.02%，1.36%)降低了73%、81%、39%；与蛋氨酸-胆碱充分组牛磺脱氧胆酸占比(11.26%，11.17%，10.06%)相比，在蛋氨酸-胆碱缺乏组的占比(3.50%，2.46%，2.62%)降低了69%，78%，74%。
此外，将血清及肝脏中胆汁酸胆酸/鹅去氧胆酸比值与肝损伤相关的生化指标(血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肝组织三酰甘油)作Pearson相关分析，结果见表5，6。表中相关系数为正值说明呈正相关，表示随着肝损伤的增强胆酸/鹅去氧胆酸比值升高，相关系数的绝对值越大代表相关性越强。可以看出，4，6，8周小鼠血清中胆酸/鹅去氧胆酸比值与血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性呈正相关(P < 0.05)，8周小鼠血清中胆酸/鹅去氧胆酸比值与肝组织三酰甘油含量呈正相关(P < 0.01)，且整个造模过程中的小鼠血清中胆酸/鹅去氧胆酸比值与血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性及肝组织三酰甘油含量呈正相关(P < 0.01)。4，6，8周小鼠肝脏中胆酸/鹅去氧胆酸比值与血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性呈正相关(P < 0.05)，6，8周小鼠肝脏中胆酸/鹅去氧胆酸比值与肝组织三酰甘油含量呈正相关(P < 0.05)，且整个造模过程中的小鼠肝脏中胆酸/鹅去氧胆酸比值与血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性及肝组织三酰甘油含量呈正相关(P < 0.01)。

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肝脏能够调节全身脂质，维持脂质稳态，当肝脏中脂质稳态机制被破坏时，过量的脂质累积，从而导致全身代谢功能障碍并引发代谢相关脂肪性肝病(metabolic associated fatty liver disease，MAFLD)[1-3]，原名非酒精性脂肪性肝病。MAFLD已经成为世界上最常见的慢性肝病之一，而胆汁酸被认为是维持脂质稳态所必需的物质[4]。胆汁酸的合成在胆固醇分解代谢中起着关键作用，胆汁酸不仅作用于脂肪、类固醇和脂溶性维生素的吸收，还能够通过激活核受体和膜胆汁酸受体来调节肝脏脂质、葡萄糖和能量代谢相关的信号分子[5-7]。胆汁酸稳态的改变能够影响肝脏代谢稳态，引起炎症，并参与MAFLD、糖尿病、肥胖和炎症性肠病等代谢性疾病的发生[5]。近年来国内外大量研究报道了胆汁酸对肠道细菌和肠屏障功能的影响，目前胆汁酸的调节成为有效干预肝脏脂质稳态的研究热点之一[8]。
蛋氨酸-胆碱缺乏饲料中通常具有高蔗糖含量(约40%)和中等脂肪含量(约10%)，并且缺乏胆碱和蛋氨酸，长期蛋氨酸-胆碱缺乏饲料可导致极低密度脂蛋白颗粒的产生受损与β-氧化损伤[9]。该模型是国际上被广泛使用的诱发MAFLD的动物模型，由于该造模方法操作简便、成模率高，成为研究MAFLD发病机制及防治药物的主要动物模型。但已有的蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导MAFLD动物模型的研究缺少对整个造模过程小鼠胆汁酸谱的动态观察数据，此次研究通过动态取材，监测了蛋氨酸-胆碱缺乏饮食饲养4，6，8周的MAFLD小鼠生化指标、肝组织病理变化情况及血清和肝组织中胆汁酸含量变化，对MAFLD发生、发展及胆汁酸轮廓做了较系统的分析。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

1.1   设计   随机对照造模动物实验。
1.2   时间及地点   于2019年3至9月在上海中医药大学附属曙光医院肝病研究所完成。
1.3   材料
1.3.1   实验动物   SPF级C57BL/6J雄性小鼠60只，6-8周龄，20-25 g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK(沪)2017-0005。饲养于上海中医药大学实验动物中心，室温(22±1) ℃，相对湿度30%-60%，12 h光照/12 h黑暗，自由进食和饮水。相关动物实验通过上海中医药大学实验动物伦理委员会审查(伦理编号：PZSHUTCM190315006)。
1.3.2  主要试剂   蛋氨酸-胆碱缺乏饲料(Research Diets，A02082002BR)、蛋氨酸-胆碱充分饲料(Research Diets，A02082003BR)均为美国Research Diets，Inc. 产品；谷丙转氨酶(C009-2-1)、谷草转氨酶(C010-2-1)、三酰甘油(F001-1)检测试剂盒、油红O染液(D027-1)、苏木精-伊红染液(D006-1)购自南京建成生物科技有限公司；胆酸(M0214AS)、鹅去氧胆酸(A0221AS)、脱氧胆酸(J0602AS)、熊去氧胆酸(00424AS)、猪去氧胆酸(D1017AS)、石胆酸(A0809AS)、甘氨胆酸(J0115AS)、甘氨鹅去氧胆酸(J0312A)、甘氨脱氧胆酸(O1009A)、甘氨熊脱氧胆酸(B03D9K76539)、牛磺胆酸(B0516AS)、牛磺鹅去氧胆酸(S0312AS)、牛磺石胆酸(J0115A)、牛磺脱氧胆酸(M1202A)、牛磺熊去氧胆酸(A0311A)、牛磺猪去氧胆酸(A0409A)、甘氨石胆酸(MY02YE08MY13)、甘氨猪去氧胆酸(MY02YE08MY17)均购于大连美仑生物技术有限公司。
1.4   方法
1.4.1   动物分组与处理    60只雄性C57/BL6J小鼠给予普通饲料适应性饲喂1 周后按随机数字表法分成2组，每组30只，其中一组为对照组给予蛋氨酸-胆碱充分饲料，另一组为模型组给予蛋氨酸-胆碱缺乏饲料喂养，自由摄食、饮水。每2 d记录动物体质量，并观察动物进食、饮水、行为、活动、精神状态、毛发及尿便等情况，于造模第4，6，8 周分别在两组中随机抽取10只小鼠，禁食不禁水12 h后，小鼠摘眼球采血，5 000×g离心15 min获得血清，解剖取肝脏组织，切取部分进行OCT冰冻包埋，部分用体积分数4%中性甲醛固定后用于组织学观察，其余液氮处理后-80 ℃保存。
1.4.2   血清学及肝组织指标检测   采用南京建成生物公司相关试剂盒检测各组小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肝组织三酰甘油水平。
1.4.3    肝组织病理学观察   选取肝右侧最厚一叶，切取0.5 cm×0.4 cm×0.3 cm肝组织1块，体积分数4%中性甲醛固定，自动脱水机逐级乙醇脱水，二甲苯透明，包埋，4 μm切片，观察肝组织的病理变化。采用苏木精-伊红染色观察肝组织学损伤；天狼猩红染色：将石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水洗3次，每次5 min，滴加天狼猩红染色液，30 ℃孵育30 min，无水乙醇冲洗，晾干后封固；油红O染色：冰冻切片复温后，油红稀释液染色10-15 min，蒸馏水洗2.0-3.0 min，试剂二复染液3-5 min，蒸馏水清洗1 min，封固。采用Image-pro plus 6.0软件分析病理图片的阳性染色区域。
1.4.4   胆汁酸定量分析的超高效液相串联质谱法(Ultra 
performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS)    胆汁酸测定方法参考文献报道[10]，使用 Dionex Ultimate 3000高压液相系统分离，色谱柱Acquity UPLC® BEH C18色谱柱(100 mm ×2.1 mm，1.7 µm)；流动相为5 mmol/L

醋酸铵含0.1%甲酸(A)-甲醇(B)；梯度洗脱程序：0-1 min (55% B)，1-2.6 min (55%-62% B)，2.6-11.4 min (62%-80% B)；流速0.30 mL/min，进样量为5 μL，柱温45 ℃。

使用Q Exactive四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪作为分析检测的仪器。离子源：电喷雾离子源(H-ESI)，采用负离子模式全扫描-单离子监控(Full scan-SIM)模式用于采集数据质谱参数：扫描范围(100-1 500 m/z)；分辨率70 000；喷雾电压2.8 kV；毛细管温度320 ℃；辅助加热器温度300 ℃；鞘气(N2)流量35 arb；辅助气(N2)流量13 arb；自动增益控制106；s-lens 射频水平50。
1.4.5   肝脏及血清胆汁酸分析   称取50 mg肝脏组织，加入甲醇1 mL匀浆，于 4 ℃，10 000 ×g 离心 10 min，取上清800 μL 氮吹仪吹干，用80 μL 体积分数70%甲醇复溶残渣，待充分溶解后相同参数再次离心，取上清进行LC-MS分析。取50 μL血清，加入甲醇150 μL混匀，于 4 ℃，10 000 ×g 离心10 min，取上清140 μL氮吹仪吹干，再用70 μL体积分数70%甲醇复溶，取上清进样UPLC-MS。
1.5   主要观察指标  检测各组小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及肝组织三酰甘油水平；采用UPLC-MS法分析肝脏及血清胆汁酸含量；应用苏木精-伊红染色、天狼猩红染色、油红O染色观察肝脏组织病理变化。
1.6   统计学分析   应用SPSS 19.0和GraphPad Prism 7.0软件进行统计学分析及作图，实验数据以x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，用Student’s t检验进行两样本间比较，以P < 0.05为差异有显著性意义。另外，将血清及肝脏中胆汁酸胆酸/鹅去氧胆酸比值与肝损伤相关的生化指标(血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶，肝组织三酰甘油)作Pearson相关分析。

目前认为蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导MAFLD的原理是通过饲喂缺乏蛋氨酸、胆碱的饮食，造成小鼠极低密度脂蛋白合成、分泌减少及线粒体β-氧化功能损伤，从而使三酰甘油在肝细胞内迅速大量堆积，导致肝细胞脂肪变性，构成了“第一次打击”，使得肝脏对其他损伤的敏感性增加[11]；肝细胞脂肪变导致线粒体对游离脂肪酸的摄入减少，促使游离脂肪酸β-氧化增加，导致氧化应激和脂质过氧化，形成对肝脏的“第二次打击”[12]，进而形成MAFLD。与其他饮食动物模型相比，蛋氨酸-胆碱缺乏饮食可以在较短的时间内(2-4周)诱导肝脏炎症、脂肪变性和纤维化，能够模拟MAFLD病理特征[13]。饲养2周时便出现弥漫性脂肪变性以及小叶内炎症浸润，并随着饲养时间的延长而进展；部分小鼠在饲养4周内出现轻微的肝窦和细胞周围纤维化；在饲养6周后均出现了显著的纤维化[14]。此次研究结果显示，蛋氨酸-胆碱缺乏饮食喂养的小鼠4 周时肝细胞内即可见明显的脂肪沉积及炎症细胞浸润，NAS评分达到5分以上，同时血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平升高，肝内三酰甘油含量升高，且随着造模时间的延长，模型组小鼠体质量较空白组明显下降，符合蛋氨酸-胆碱缺乏饲料饲喂动物模型的特点，表明此次研究MAFLD模型成立。造模6周的蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠与4周相比，在脂肪变性、炎性浸润及纤维化等方面均出现一定程度的进展。但通过病理染色发现，造模8周的蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠的纤维化程度与6周相比明显加重，而脂肪变性情况有所减轻。课题组长期临床实践中，观察到MAFLD患者在纤维化程度加重时，常伴随脂肪变性适当减轻的现象。范建高等[15]在脂肪肝与肝纤维化文章中报道，在脂肪肝合并肝纤维化时，随着肝纤维化的形成及肝内胶原量的增多，肝内脂肪蓄积可逐渐减轻甚至消失。但当前研究相关报道较少，相关机制也尚不明确，该现象也值得进一步关注加以探索。
胆汁酸在体内的调控主要经肝脏和肠道得以实现，其合成主要有2条途径，即经典通路和替代通路(图6)，代谢成为不同类型的初级胆汁酸[6，16]。经典途径是胆汁酸合成的主要途径由胆固醇-7α-羟化酶(Cyp7α1)限速酶和胆固醇-8β-羟化酶(Cyp8β1)催化，生成胆酸和鹅去氧胆酸；替代途径由胆固醇-27α-羟化酶(Cyp27α1)和胆固醇-7α-羟化酶(Cyp7β1)催化，最终只产生鹅去氧胆酸一种初级胆汁酸[17]。初级胆汁酸胆酸和鹅去氧胆酸可通过胆汁酸CoA合成酶和胆汁酸CoA氨基酸N-酰基转移酶与牛磺酸和甘氨酸结合，形成结合型胆汁酸，如甘氨胆酸、甘氨鹅去氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺鹅去氧胆酸；这些胆汁酸主要通过胆盐输出泵及多药耐药相关蛋白2向胆小管转运到胆囊，并分泌到十二指肠，在肠道中受细菌作用分解成次级胆汁酸，如胆酸和鹅去氧胆酸分别被转化为去氧胆酸、石胆酸和少量熊去氧胆酸，次级胆汁酸的代谢产物通过肝肠循环重吸收后回到肝脏，形成三级胆汁酸[18-19]。 机体内胆汁酸的种类较多，不同类型的胆汁酸具有不同的亲水性和毒性，对脂质吸收、代谢和排泄的影响也不相同[20]。结合型胆汁酸极性较大，在体内结构较稳定，在盐或酸环境中不易沉淀[21-22]。而游离性胆汁酸在胆汁代谢异常时容易积聚，且实验证明胆汁酸的毒性与其亲疏水性有关，疏水性胆汁酸有一定的细胞毒作用，其机制可能与胆汁酸的去污作用、细胞能量代谢和氧自由基作用有关[23-24]。一般来说，胆汁酸的疏水性越大，其本身的毒性越强。在肝细胞中，胆汁酸的积累导致线粒体损伤，最终导致细胞凋亡或坏死，同时也导致氧化应激[25]。胆固醇除了代谢成胆汁酸以外，还有另一条重要的排泄途径，即随着胆汁一起从胆囊进入肠道，然后排出体外，组成胆汁的胆汁酸的亲水性越大，越有利于胆固醇在胆汁中的溶解和排泄[26]。此次研究结果显示，与蛋氨酸-胆碱充分组相比，4，6，8 周的蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠血清中总游离型和总结合型胆汁酸含量均呈上升趋势，且随着造模时间延长总游离型胆汁酸含量增长更为显著；肝脏中总游离型胆汁酸含量呈上升趋势，总结合型胆汁酸含量虽呈先上升后下降趋势，但整体含量变化不大。除此之外，作者对小鼠胆汁酸的组成进行分析发现，与蛋氨酸-胆碱充分组相比，4，6，8 周的蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠血清和肝脏中疏水性游离型胆汁酸的总占比增大，亲水性结合型胆汁酸的总占比减小，其中小鼠血清中游离型胆汁酸的总占比大于结合型胆汁酸。可能导致胆汁酸毒性增强，进而引起肝细胞损伤，并且胆固醇在胆汁中的溶解和排泄受到抑制，基于此，作者推测该模型可能存在一条通过影响胆汁酸代谢进而引起MAFLD的致病途径。
蛋氨酸-胆碱缺乏模型中血清和肝脏中各胆汁酸含量及占比存在较大差异，血清胆汁酸的变化不能反映肝脏胆汁酸的变化，但与蛋氨酸-胆碱充分组相比，血清和肝脏中胆汁酸组成变化贡献最大的均为胆汁酸胆酸，胆酸可能是蛋氨酸-胆碱缺乏模型小鼠改变胆汁酸轮廓的主要成分。此外，作者对初级胆汁酸之间的比例也做了比较分析，文献报道表明胆酸/鹅去氧胆酸比值是影响脂质吸收的关键因素，当胆酸/鹅去氧胆酸比值较高时，脂肪和胆固醇的吸收提高；比值较低时，脂肪和胆固醇的吸收会受到影响[27]。此文的研究结果显示，与蛋氨酸-胆碱充分组小鼠相比，蛋氨酸-胆碱缺乏组小鼠血清和肝脏中胆酸/鹅去氧胆酸比值在4，6，8周均显著增高，且在整个造模过程中，小鼠血清及肝脏中胆汁酸胆酸/鹅去氧胆酸比值与肝组织三酰甘油含量呈正相关(表3-6)，提示蛋氨酸-胆碱缺乏饮食能够促进小鼠脂肪和胆固醇的吸收，进而诱发MAFLD。此外，4，6，8周小鼠血清及肝脏中胆酸/鹅去氧胆酸比值与血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性呈正相关，表明胆酸/鹅去氧胆酸比值越高，血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性就越高，肝毒性就越大，进一步说明胆酸/鹅去氧胆酸比值为可能的生物标记物来反映肝脏毒性。
此文通过对小鼠血清和肝脏胆汁酸含量检测发现，随着饲养时间延长，蛋氨酸-胆碱充分组一些胆汁酸含量出现显著改变，造成这一改变的原因可能与小鼠日龄增长其体内胆汁酸存在生理性改变有关。此外，油红O染色结果显示蛋氨酸-胆碱充分喂养小鼠肝组织可见微小红色脂滴，且随着喂养时间延长脂滴有少量增加，是由于蛋氨酸-胆碱充分饲料是在蛋氨酸-胆碱缺乏饲料基础上补充胆碱和蛋氨酸，其他成分不变，其中仍含有高蔗糖(约40%)和中等脂肪(约10%)，因此随着饲养时间延长蛋氨酸-胆碱充分组会有少量脂滴出现。
此次研究动态观察了蛋氨酸-胆碱充分及蛋氨酸-胆碱缺乏喂养4，6，8 周小鼠的病理、血清学改变，以及血清、肝脏中胆汁酸轮廓的变化，发现蛋氨酸-胆碱缺乏饮食可显著影响小鼠胆汁酸代谢，而这些胆汁酸轮廓的改变可能是该模型诱导小鼠MAFLD的重要原因之一，其中胆酸/鹅去氧胆酸比值增高可能起到关键作用，值得进一步关注，后续也有必要对胆汁酸相关代谢酶、转运体及受体等开展深入研究加以证实。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

文题释义：

蛋氨酸-胆碱缺乏饮食：是指蛋氨酸-胆碱缺乏饲料中通常具有高蔗糖含量(约40%)和中等脂肪含量(约10%)，并且缺乏胆碱和蛋氨酸，长期喂养蛋氨酸-胆碱缺乏饲料可导致极低密度脂蛋白颗粒的产生受损与β-氧化损伤，继而导致代谢相关脂肪性肝病的发生。

代谢相关脂肪性肝病：曾用名非酒精性脂肪性肝病，全球患病率高达25%，至今在美国和欧盟尚无药物获批用于治疗该病。

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蛋氨酸-胆碱缺乏饲料中通常具有高蔗糖含量（约40%）和中等脂肪含量（约10%），并且缺乏胆碱和蛋氨酸，长期蛋氨酸-胆碱缺乏饲料可导致极低密度脂蛋白颗粒的产生受损与β-氧化损伤。该模型是国际上被广泛使用的诱发代谢相关脂肪性肝病的动物模型，由于该造模方法操作简便、成模率高，成为研究代谢相关脂肪性肝病发病机制及防治药物的主要动物模型。但已有的蛋氨酸-胆碱缺乏饮食诱导代谢相关脂肪性肝病动物模型的研究缺少对整个造模过程小鼠胆汁酸谱的动态观察数据。

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