整块石蜡包埋处理颈动脉粥样硬化斑块的方法

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.1334

中国组织工程研究 ›› 2019, Vol. 23 ›› Issue (31): 5041-5045.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.1334

• 组织构建基础实验 basic experiments in tissue construction • 上一篇下一篇

整块石蜡包埋处理颈动脉粥样硬化斑块的方法

曹敬丽1，2，Marina S. Ferguson3，孙杰3，张东1，刘丽1，李子瑞1，王雅杰1，隋滨滨1，沈宓1，高培毅1，4，Thomas S. Hatsukami3，赵锡海5，苑纯1，3，5

(1首都医科大学附属北京天坛医院，国家神经系统疾病临床医学研究中心，北京市 100070；2脑血管病转化医学北京市重点实验室，北京市 100070；3美国华盛顿大学，血管成像实验室，美国，华盛顿-西雅图，98195；4北京市神经外科研究所，北京市 100070；5清华大学医学院，生物医学影像研究中心，北京市 100084)

收稿日期:2019-05-09 出版日期:2019-11-08 发布日期:2019-11-08
通讯作者: 苑纯，教授，博士生导师，首都医科大学附属北京天坛医院，国家神经系统疾病临床医学研究中心，北京市100070；美国华盛顿大学，血管成像实验室，美国，华盛顿-西雅图，98195；清华大学医学院，生物医学影像研究中心，北京市100084
作者简介:曹敬丽，女，1979年生，山东省曲阜市人，汉族， 2014年毕业于北京协和医学院，博士，助理研究员，主要从事颈动脉粥样硬化组织学研究。
基金资助:
国家自然科学基金国际(地区)合作与交流项目(81361120402)，项目负责人：高培毅

An en bloc paraffin embedding method for serial sectioning of carotid atherosclerotic plaque

Cao Jingli1, 2, Marina S. Ferguson3, Sun Jie3, Zhang Dong1, Liu Li1, Li Zirui1, Wang Yajie1, Sui Binbin1, Shen Mi1, Gao Peiyi1, 4, Thomas S. Hatsukami3, Zhao Xihai5, Yuan Chun1, 3, 5

Received:2019-05-09 Online:2019-11-08 Published:2019-11-08
Contact: Yuan Chun, Professor, Doctoral supervisor, China National Clinical Research Center for Neurological Diseases, Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University, Beijing 100070, China; Vascular Imaging Laboratory, Department of Radiology, University of Washington, Seattle 98195, WA, USA; Center for Biomedical Imaging Research, Department of Biomedical Engineering, School of Medicine, Tsinghua University, Beijing 100084, China
About author:Cao Jingli, MD, Research assistant, China National Clinical Research Center for Neurological Diseases, Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University, Beijing 100070, China; Beijing Key Laboratory of Translational Medicine for Cerebrovascular Disease, Beijing 100070, China
Supported by:
Funding: the National Natural Science Foundation International (Regional) Cooperation and Exchange Project, No. 81361120402 (to GPY)

摘要/Abstract

摘要：

文章快速阅读：

文题释义：
CEA斑块：是指经颈动脉内膜剥脱术取下的颈动脉粥样硬化斑块。
动脉粥样硬化的主要病理特征：为动脉某些部位的内膜下脂质沉积，并伴有平滑肌细胞和纤维基质成分的增殖，逐步发展形成动脉粥样硬化性斑块。

摘要
背景：在颈动脉粥样硬化斑块的石蜡包埋工作中，将平均长度约3 cm的颈动脉粥样硬化斑块组织完整地包埋入蜡块中是上述科研工作必须步骤。
目的：阐述一种颈动脉粥样硬化斑块整块石蜡包埋处理方法。
方法：颈动脉粥样硬化斑块组织取自首都医科大学附属北京天坛医院经颈动脉内膜剥脱术手术取材样本。为了便于连续切片后的组织学层面能够与磁共振成像的信息作精准同层比对，实验在组织石蜡包埋时将颈动脉粥样硬化斑块组织作为一个整体完整地包埋入蜡块中。
结果与结论：在实际工作中，借鉴合作方美国华盛顿大学血管成像实验室在斑块处理方面的实践经验，结合实验室的实际情况，通过一种简易包埋方法进行颈动脉粥样硬化斑块的整块石蜡包埋，克服了颈动脉粥样硬化斑块组织整块包埋中的技术难点，为有类似工作需求的同行提供参考和引用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程
ORCID: 0000-0001-9819-3514(曹敬丽)；0000-0002-6154-5106(苑纯)

关键词: 颈动脉粥样硬化斑块, 磁共振成像, 石蜡包埋, 包埋底模, 连续切片, 动脉粥样硬化, 责任斑块, 脑梗死, 稳定斑块, 不稳定斑块

Abstract:

BACKGROUND: Carotid atherosclerotic plaque with the length of about 3 cm completely embedding into paraffin block is a key step.
OBJECTIVE: To clarify a method to embed carotid atherosclerotic plaque en bloc in paraffin.
METHODS: Carotid atherosclerotic plaque was removed from the carotid endanerectomy at Beijing Tiantan Hospital, Capital Medical University. In order to facilitate the comparison between histological slices from serial sectioning and MRI, we need to embed carotid atherosclerotic plaque en bloc in paraffin.
RESULTS AND CONCLUSION: With the guidance of the University of Washington Vascular Imaging Lab, we had established a simple embedding method according to the practice in our lab. With the method, we successfully overcame the technical difficulties in the en bloc embedding of carotid atherosclerotic plaque, which provides a reference for researchers with similar work needs.

Key words: carotid atherosclerotic plaque, magnetic resonance imaging, paraffin embedding, embedding molds, serial section, atherosclerosis, culprit plaque, stroke, stable plaque, unstable plaque

中图分类号:

曹敬丽, Marina S. Ferguson, 孙杰, 张东, 刘丽, 李子瑞, 王雅杰, 隋滨滨, 沈宓, 高培毅, Thomas S. Hatsukami, 赵锡海, 苑纯. 整块石蜡包埋处理颈动脉粥样硬化斑块的方法[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(31): 5041-5045.

Cao Jingli, , Marina S. Ferguson, Sun Jie, Zhang Dong, Liu Li, Li Zirui, Wang Yajie, Sui Binbin, Shen Mi, Gao Peiyi, , Thomas S. Hatsukami, Zhao Xihai, Yuan Chun, , . An en bloc paraffin embedding method for serial sectioning of carotid atherosclerotic plaque[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2019, 23(31): 5041-5045.

图/表（结果） 1

参考文献

[1]Sadeghipour ABabaheidarian P. Making formalin-fixed, paraffin embedded blocks. Methods Mol Biol. 2019;1897:253-268.

[2]Sorrelle N, Ganguly D, Dominguez ATA, et al. Improved multiplex immunohistochemistry for immune microenvironment evaluation of mouse formalin-fixed, paraffin-embedded tissues. J Immunol. 2019;202(1):292-299.

[3]Silakhori M, Naghavi MS, Metselaar HSC, et al. Accelerated thermal cycling test of microencapsulated paraffin wax/polyaniline made by simple preparation method for solar thermal energy storage. Materials (Basel). 2013;6(5):1608-1620.

[4]Alcock HE, Stephenson TJ, Royds JA, et al. A simple method for PCR based analyses of immunohistochemically stained, microdissected, formalin fixed, paraffin wax embedded material. Mol Pathol. 1999;52(3):160-163.

[5]Hatsukami TS, Ross R, Polissar NL, et al. Visualization of fibrous cap thickness and rupture in human atherosclerotic carotid plaque in vivo with high-resolution magnetic resonance imaging. Circulation. 2000;102(9):959-964.

[6]Li F, Yarnykh VL, Hatsukami TS, et al. Scan-rescan reproducibility of carotid atherosclerotic plaque morphology and tissue composition measurements using multicontrast MRI at 3T. J Magn Reson Imaging. 2010;31(1):168-176.

[7]Saam T, Ferguson MS, Yarnykh V, et al. Quantitative evaluation of carotid plaque composition by in vivo MRI. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2005;25(1):234-239.

[8]Yuan C, Kerwin WS, Yarnykh VL, et al. MRI of atherosclerosis in clinical trials. NMR Biomed. 2006;19(6):636-654.

[9]Yoneyama T, Sun J, Hippe DS, et al. In vivo semi-automatic segmentation of multicontrast cardiovascular magnetic resonance for prospective cohort studies on plaque tissue composition: initial experience. Int J Cardiovasc Imaging. 2016;32(1):73-81.

[10]Kerwin WS, O'Brien KD, Ferguson MS, et al. Inflammation in carotid atherosclerotic plaque: a dynamic contrast-enhanced MR imaging study. Radiology. 2006;241(2):459-468.

[11]Vidal-Perez R, Franco-Gutierrez R, Perez-Perez AJ, et al. Subclinical carotid atherosclerosis predicts all-cause mortality and cardiovascular events in obese patients with negative exercise echocardiography. World J Cardiol. 2019;11(1):24-37.

[12]Tarp JB, Sorgaard MH, Christoffersen C, et al. Subclinical atherosclerosis in patients with cyanotic congenital heart disease. Int J Cardiol. 2019;277:97-103.

[13]Novo S, Carita P, Lo Voi A, et al. Impact of preclinical carotid atherosclerosis on global cardiovascular risk stratification and events in a 10-year follow-up: comparison between the algorithms of the Framingham Heart Study, the European SCORE and the Italian 'Progetto Cuore'. J Cardiovasc Med (Hagerstown). 2019 ; 20(2):91-96.

[14]Bando M, Yamada H, Kusunose K, et al. Comparison of carotid plaque tissue characteristics in patients with acute coronary syndrome or stable angina pectoris: assessment by iPlaque, transcutaneous carotid ultrasonography with integrated backscatter analysis. Cardiovasc Ultrasound. 2015;13:34.

[15]Cardellini M, Rovella V, Scimeca M, et al. Chronic kidney disease is linked to carotid nodular calcification, an unstable plaque not correlated to inflammation. Aging Dis. 2019;10(1):71-81.

[16]Zhou H, Wang X, Zhu J, et al. Relation of carotid artery plaque to coronary heart disease and stroke in Chinese patients: does hyperglycemia status matter? Exp Clin Endocrinol Diabetes. 2018; 126(3):134-140.

[17]Yoon HJ, Kim KH, Park H, et al. Carotid plaque rather than intima-media thickness as a predictor of recurrent vascular events in patients with acute ischemic stroke. Cardiovasc Ultrasound. 2017;15(1):19.

[18]Deng F, Hao X, Tang Z, et al. Carotid plaque magnetic resonance imaging and recurrent stroke risk: a protocol for systematic review and meta-analysis. Medicine (Baltimore). 2019;98(18):e15410.

[19]Sun R, Wang L, Guan C, et al. Carotid atherosclerotic plaque features in patients with acute ischemic stroke. World Neurosurg. 2018;112:e223-e228.

[20]Ota H, Yarnykh VL, Ferguson MS, et al. Carotid intraplaque hemorrhage imaging at 3.0-T MR imaging: comparison of the diagnostic performance of three T1-weighted sequences. Radiology. 2010;254(2):551-563.

[21]Wang X, Sun J, Zhao X, et al. Ipsilateral plaques display higher T1 signals than contralateral plaques in recently symptomatic patients with bilateral carotid intraplaque hemorrhage. Atherosclerosis. 2017; 257:78-85.

[22]Cai JM, Hatsukami TS, Ferguson MS, et al. Classification of human carotid atherosclerotic lesions with in vivo multicontrast magnetic resonance imaging. Circulation. 2002;106(11):1368-1373.

[23]Oikawa M, Ota H, Takaya N, et al. Carotid magnetic resonance imaging. A window to study atherosclerosis and identify high-risk plaques. Circ J. 2009;73(10):1765-1773.

[24]Kashiwazaki D, Shiraishi K, Yamamoto S, et al. Efficacy of carotid endarterectomy for mild (<50%) symptomatic carotid stenosis with unstable plaque. World Neurosurg. 2019;121:e60-e69.

[25]Lighezan R, Baderca F, Alexa A, et al. The value of the reprocessing method of paraffin-embedded biopsies for transmission electron microscopy. Rom J Morphol Embryol. 2009;50(4):613-617.

[26]Nuotio K, Ijas P, Heikkila HM, et al. Morphology and histology of silent and symptom-causing atherosclerotic carotid plaques -Rationale and design of the Helsinki Carotid Endarterectomy Study 2 (the HeCES2). Ann Med. 2018;50(6):501-510.

[27]Varrassi M, Sferra R, Gravina GL, et al. Carotid artery plaque characterization with a wide-detector computed tomography using a dedicated post-processing 3D analysis: comparison with histology. Radiol Med. 2019. doi: 10.1007/s11547-019-01026-8.

[28]Ota H, Tamura H, Itabashi R, et al. Quantitative characterization of carotid plaque components using MR apparent diffusion coefficients and longitudinal relaxation rates at 3T: a comparison with histology. J Magn Reson Imaging. 2018;48(6):1657-1667.

[29]Mondon JA, Howitt J, Tosiano M, et al. A simple osmium post-fixation paraffin-embedment technique to identify lipid accumulation in fish liver using medaka (Oryziaslatipes) eggs and eleutheroembryos as lipid rich models. Mar Pollut Bull. 2011; 63(5-12):86-90.

[30]Stockert JC, Lopez-Arias B, Del Castillo P, et al. Replacing xylene with n-heptane for paraffin embedding. Biotech Histochem. 2012; 87(7):464-467.

引言

传统石蜡包埋方法在日常病理工作中，一直是组织处理的常规方法^[1-2]。随着科技的发展和实际工作的需要，病理工作者在石蜡包埋方面现已摸索出了常规石蜡包埋流程，并逐步完善^[3-4]，现有的石蜡包埋相关设备比如自动脱水包埋机、石蜡包埋机、冷台，以及各种规格的包埋盒等，极大地方便了广大病理工作者的一般需要。

但是，在科研工作中，就像实验团队国家自然科学基金国际(地区)合作交流项目“急性脑梗死的责任病灶：组织学及磁共振成像评估研究”中所提及的：对于经颈动脉内膜剥脱术(carotid endarterectomy，CEA)取下来的颈动脉粥样硬化斑块，为了便于连续切片后的组织学层面能够与在体磁共振成像(magnetic resonance imaging，MRI)的信息作精准同层比对^[5-7]，需要在组织石蜡包埋的时候将颈动脉粥样硬化斑块组织作为一个整体完整地包埋入蜡块中，然后从向心端往远心端行连续切片，最后每隔0.5- 1.0 mm取适量切片作为库存，并适当进行组织学染色，便于在相同的层面对组织学信息与MRI信息做精准对比^[8-9]，也便于在3D层面全面掌握斑块组织学表现^[10]。

动脉粥样硬化是全身性系统性疾病^[11-12]，容易发生在大血管的分叉处。颈总动脉在颈内动脉和颈外动脉的分叉处是容易发生动脉粥样硬化的部位之一^[13]。动脉粥样硬化斑块分为稳定斑块和不稳定斑块^[14-15]。颈动脉粥样硬化斑块的不稳定性与脑缺血症状有直接的相关性^[16-19]。高分辨率MRI能对颈动脉粥样硬化斑块成分比如纤维帽、斑块内出血、钙化等做出准确判断^[5，20-22]，但亦有一定的局限性。将斑块的组织学表现和MRI信息进行同层面的精准比对将有助于推进MRI判断斑块成分的精准性^[23]。

在颈动脉粥样硬化斑块的石蜡包埋工作中，将平均长度约3 cm的颈动脉粥样硬化斑块组织完整地包埋入蜡块中是上述科研工作所必须。在石蜡包埋过程中，现有包埋盒的底模空腔容积较小，无法完整容纳整块颈动脉粥样硬化斑块组织。如果将颈动脉粥样硬化斑块组织分切成几块较小的样本再进行制片，将不能得到完整的连续切片，不利于后续组织学与MRI信息的同层面精准对比，也不利于在3D层面全面掌握斑块的组织学表现。在实际工作中，作者借鉴合作方美国华盛顿大学血管成像实验室的实践经验^[20，22]，结合实验室的实际情况，通过一种简易包埋方法克服了颈动脉粥样硬化斑块包埋中的困难，文章将详细阐述该简易包埋方法，以方便有类似工作需求的同行参考和引用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计颈动脉粥样硬化斑块整块石蜡包埋方法和包埋过程中的组织学处理。

1.2 时间及地点于2014年1月至2018年12月在首都医科大学附属北京天坛医院临床医学研究实验室完成。

1.3 材料颈动脉粥样硬化斑块组织取自首都医科大学附属北京天坛医院CEA手术样本，样本取材获得了伦理委员会的批准和患者的知情同意。

1.4 方法

1.4.1 包埋前的组织固定、脱钙、脱水、透明及浸蜡颈动脉粥样硬化斑块组织比较特殊，由于课题研究的需要，要将斑块整块包埋入蜡块中以备连续切片。其包埋前处理与常规组织的石蜡包埋前处理有所不同。作者将详细阐述实验室在斑块处理过程中的步骤和注意事项。

组织固定：将颈动脉粥样硬化斑块组织在手术剥离后30 min内置于50 mL的离心管(Corning公司，美国)中，每管只放一例，在管壁外侧标记好斑块的信息，往离心管内注入约30 mL的体积分数10%中性甲醛(益利，北京)固定液，使组织充分浸没在固定液中，液体量依组织的大小可适当调整，一般至少应确保液体与组织体积比大于10，并使组织充分浸没在液体中，由于斑块大多为管状组织且长度为3.0-4.0 cm，见图1，注入的液体量以液面能全部浸没组织为准，可在此基础上适当增加，后面所有的步骤均遵循这一标准。置于4 ℃固定3-5 d，期间换液一两次，使组织达到充分固定。

脱钙：固定3-5 d后，在离心管中，保留组织，弃掉固定液，注入适量脱钙液(ZLI-9307，中杉金桥，北京)，液体量依组织的大小适当调整，以在50 mL离心管底能够使组织充分浸没在液体中为准，置于4 ℃脱钙≥72 h，使组织达到充分脱钙。个别较大、较硬的组织，在72 h后更换脱钙液，适当延长脱钙时间。脱钙结束后流水冲洗4 h。

梯度乙醇脱水：脱钙并充分冲洗后，将组织置入离心管中，注入体积分数75%乙醇，使组织充分浸没在液体中，室温浸泡大于12 h，依次更换体积分数85%乙醇、95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ。为了达到

较好的脱水效果，液体体积和浸泡时间一定要充分。与组织的常规石蜡包埋不同，本组织每一个乙醇梯度都需要浸泡大于12 h，遇周末可在液体中等待至下一个工作日。

透明和浸蜡：充分脱水后，在离心管内，弃掉无水乙醇，注入适量二甲苯(益利，北京)，第1遍二甲苯浸泡过夜效果更好，过夜后，于次日早上更换第2遍二甲苯，浸泡2.0-3.0 h，个别组织在第一遍二甲苯中2.0-3.0 h即可达到较好的透明效果。透明结束后，将组织转移到预热好的液体石蜡(Leica，德国)中，使组织在60 ℃的液体石蜡中浸蜡2.0-3.0 h。在浸蜡前对组织进行充分的脱水和充分的透明将有助于组织的充分浸蜡。浸蜡结束后，即可依照后续步骤进行整块组织的石蜡包埋。

1.4.2 手工制作合适的包埋底模在石蜡包埋过程中，为了便于将颈动脉粥样硬化斑块整块包埋入蜡块中，需要依据下述步骤制作容积合适的包埋底模。①取普通A4纸，绘制并剪裁成如图2A所示的线格。线格由横向侧翼和纵向侧翼交叉组成，交叉处形成模具的底。横向侧翼和纵向侧翼各自长度大于4 cm(虚线间隔1 cm)。在横向侧翼上缘和下缘分别延伸1 cm，以便于在模具折叠时形成封闭的底模空腔；②线格绘制好后，将横向侧翼上缘和下缘在延伸处折叠，使形成折痕；并将底的4个边折叠，使形成折痕，如图2B，更加具体的绘制和折叠方式请参见实验团队已获得授权的实用新型专利(专利号：ZL201420609402.7)，该专利是阐述的一种石蜡包埋底模，专门用于这种较大组织的石蜡包埋，在专利申请稿中对于该底模的折叠方法有较为详细的描述；③将模具的底面坐落在水平台面上，沿底面的4个折线处使各侧翼垂直立起，即形成封闭的底模空腔，见图2C，在封闭空腔形成时，将2个横向侧翼延伸处的4个对折后的边缘分别包住相邻的侧壁；④模具折叠形成后，为加强底模空腔侧壁的密闭性和支撑性，用宽透明胶带将各缝隙处紧密粘贴并封住，如图2D，即形成包埋所用的底模，使用该底模，配合市售的通用包埋盒可完成后续包埋过程。

1.4.3 包埋方法在1.4.2自制包埋底模的辅助下，即可对1.4.1浸蜡后的颈动脉粥样斑块组织进行整块组织的石蜡包埋。包埋时，①依据组织的长度来调整底模的深度，如图3A，确定底模的深度后，留足容纳组织所需的空间，将多余的侧壁在折痕处剪开并向外折叠使形成侧翼，侧翼可便于移动时的捏持；②将调整好的底模置于石蜡包埋机(Leica EG1150 H，德国)的正中小冷台上(实验室石蜡包埋机在操作者一侧的正中包含一金属冷台，若不含冷台，需另配，冷台有助于底面的石蜡迅速凝固)，往底模内注入少量石蜡液如图3B，液量约占底模容积的1/3；③将待包埋的颈动脉粥样硬化斑块组织站立置于底模内如图3C，注意向心端朝下；④向底模内灌注石蜡液使蜡液浸没组织如图3D；⑤覆盖市售通用包埋盒于顶端并放平如图3E，通过包埋盒的缝隙往底模内注满石蜡液如图3F；⑥待其充分凝固后，形成蜡块如图3G；⑦撕掉纸质底模，将蜡块适当修整，置于石蜡切片机(Leica RM2245，德国)蜡块座上如图3H即可进行连续切片。如此，通过从向心端向远心端进行连续切片而获得的石蜡切片在组织学层面的信息展现将具有完好的连续性，组织学层面信息的连续性便于与MRI信息进行相同层面的精准比对，也便于在3D层面全面掌握斑块的组织学表现。为后续深入研究建立了完善的切片样本库。

1.5 主要观察指标通过文中所述的方法能够良好地将颈动脉粥样硬化斑块组织完整地包埋入蜡块中，并易于进行从向心端向远心端的连续切片。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

讨论

为了便于达到组织学与MRI同层面的精准比对，在颈动脉粥样硬化斑块的石蜡包埋过程中对组织进行整块石蜡包埋和有效的连续切片是必需的。在颈动脉粥样硬化斑块的石蜡包埋过程中，若为了迎合现有技术瓶颈将斑块沿横向或纵向切成小块，斑块内的成分，尤其是不稳定的成分^[24]，在组织包埋前处理过程中容易流失^[25]，不利于在组织学原位全面地掌握斑块组织学表现^[26]。而且，也不利于组织成分与MRI的精准比对^[27-28]。

对于颈动脉粥样硬化斑块的整块包埋及处理流程，整块石蜡包埋是最关键的技术要领，也是重要的技术难点。实验的合作方美国华盛顿大学血管成像实验室通过一系列的“L”型专利产品完成斑块的整块石蜡包埋。由于版权的限制，无法将美国的“L”型专利产品共享给我方。为了克服现有困难，作者结合实际，综合实验现有的条件，设计出了实验所述的简易包埋底模，进而克服了颈动脉粥样硬化斑块整块石蜡包埋的技术难点。

在实验中，作者阐述的包埋底模系用纸质折叠手工制作，简单易行，比不锈钢底模和“L”型专利产品更利于包埋的形成^[1]。当底模为不锈钢材质时，在制备组织蜡块过程中，由于体积较大，石蜡在冷却凝固过程中会产生收缩，组织蜡块的上表面会向下凹形成较大的凹坑。在实验描述的包埋方法中，底模为纸质，在蜡块凝固过程中，四个侧壁会随石蜡一起回缩，从而避免了组织蜡块在顶部产生较大的凹坑，有助于保持蜡块和顶端包埋盒形成一体的完整性，亦有利于后续的连续切片。通过此种方法获得的连续切片，亦有利于在3D层面全面掌握斑块的组织学表现，为进一步的深入研究提供各层面真实可靠的组织学信息。

实验阐述的包埋前脱水和透明方法为实践过程中摸索出的适用于动脉粥样硬化斑块组织的处理方法^[29-30]。对于其他类型较大块的组织，比如脑组织等，由于其组成成分与动脉粥样硬化斑块的组成成分不同，需要通过适当的预实验摸索出其特异的处理流程。除此之外，实验所述材料和方法的其他部分均具有通用性，尤其是底模制作和包埋方法，可供对较大组织有包埋需求的同行借鉴和使用。综上，实验阐述了颈动脉粥样硬化斑块组织整块包埋的处理方法和技术要领，为后续获得高质量的连续切片提供了基础。

对于颈动脉粥样硬化斑块组织连续切片，获得高质量的组织切片需要一定的技巧和适当的经验积累。常规石蜡包埋方法做出的蜡块厚度通常不超过0.5 cm。如图1所示，大多数经颈动脉内膜剥脱术取材后的斑块长度约3 cm，如此，包埋出的蜡块厚度约4 cm，在切片的时候将切片机的刀座向外移动，将蜡块座向内移动，使刀片与蜡块表面之间的间距利于石蜡切片，一定要避免蜡块凸出刀片，如此，摇动转轮执行连续切片，可流畅进行。若蜡块的长度凸出刀片，在摇动转轮时，蜡块卡到刀座上，不利于切出薄片，反而容易损伤蜡块和刀座。实验所述的切片机，能容纳的蜡块厚度最好不要超过4.5 cm，超过4.5 cm则超出了刀片与蜡块表面的最大间距，不利于切片。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

整块石蜡包埋处理颈动脉粥样硬化斑块的方法

An en bloc paraffin embedding method for serial sectioning of carotid atherosclerotic plaque

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

图/表（结果） 1

参考文献

相关文章 15

引言

材料方法

讨论

文章快阅

延伸阅读

编辑推荐

Metrics

本文评价

[1]	闵友江, 姚海华, 孙洁, 周璇, 余航, 孙前谱, 洪恩四. 磁共振评价“三通针法”对脊髓损伤患者脑功能的影响[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(在线): 1-8.
[2]	靖慧敏, 余雯娟, 王思佳, 陈聪, 李逸凡, 王永兰, 李欣, 张娟, 梁猛. 静息态脑功能成像评价夜磨牙者的大脑默认网络[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(5): 685-689.
[3]	李杰, 马跃文, 康楠, 张静, 张瑜. 体外放散式冲击波促进脑梗死大鼠海马区神经干细胞增殖并抑制miR-124的表达[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(31): 4981-4987.
[4]	易美芝, 罗光华, 肖雅雯, 胡蓉, 陈小龙, 赵衡. 距骨解剖变异的MRI表现[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(24): 3888-3893.
[5]	陈小龙, 赵衡, 胡蓉, 罗光华, 刘进才. 髌下脂肪垫水肿与滑车及髌股关节形态相关性的MRI评估[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(15): 2410-2415.
[6]	乔钰淇, 富荣昌, 章立红. 沙疗对不同狭窄程度股动脉分叉管血流脉动动力学影响[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1218-1224.
[7]	谢秀峰, 张越, 曲泽. 药物洗脱球囊和药物洗脱支架对支架内再狭窄的疗效比较[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(4): 555-560.
[8]	张擎柱, 万乾, 尹雪莲, 侯敬, 张义. 内固定与关节置换治疗老年脑梗死偏瘫侧股骨转子间骨折的比较[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(36): 5818-5824.
[9]	魏刚, 高尚远, 张英, 黄维义. 免疫刺激协同液氮冷冻损伤血管构建动脉粥样硬化易损斑块大鼠模型[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(35): 5656-5661.
[10]	李伟, 初占飞, 于泽晨, 于静红, 贾岩波, 王宗博. 基于序列优化的T2-mapping定量成像技术评价踝关节距骨骨软骨损伤[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(27): 4333-4337.
[11]	谢媛媛, 张延军, 张晓曼. miR-150-5p抑制TLR-5/NF-κB p65信号通路对大脑中动脉阻塞模型大鼠的神经保护效应[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(2): 223-229.
[12]	余恒, 周涛. 人脐血间充质干细胞移植脑梗死大鼠神经功能的恢复及脑组织端粒酶反转录酶表达[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(19): 2972-2977.
[13]	申沧海, 冯永健, 宋彦澄, 刘钢, 刘志伟, 王玲, 戴海洋. MRI T2WI量化指标评估胸椎黄韧带骨化症手术预后的价值[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(18): 2893-2899.
[14]	徐浩翔, 文王强, 张泽佩, 苗军. 腰椎间盘生物力学体内外研究的新进展[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(15): 2425-2432.
[15]	张文将, 易健, 贾平, 陈博威, 王勇, 刘柏炎 . 载脂蛋白E基因敲除(APOE-/-)小鼠基因的鉴定方法及模型应用[J]. 中国组织工程研究, 2019, 23(7): 1103-1108.