柚皮苷抑制骨质疏松大鼠骨组织的铁沉积及细胞凋亡

doi:10.12307/2024.593

中国组织工程研究 ›› 2025, Vol. 29 ›› Issue (5): 888-898.doi: 10.12307/2024.593

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柚皮苷抑制骨质疏松大鼠骨组织的铁沉积及细胞凋亡

兰双笠1，向飞帆2，邓光慧2，肖喻琨2，阳运康2，梁杰2

西南医科大学附属医院，1肝胆外科，2骨与关节外科，四川省泸州市 646000

收稿日期:2023-08-04 接受日期:2023-12-14 出版日期:2025-02-18 发布日期:2024-06-01
通讯作者: 梁杰，硕士，主治医师，西南医科大学附属医院骨与关节外科，四川省泸州市 646000
作者简介:兰双笠，女，1994年生，四川省隆昌市人，汉族，主要从事肝病代谢、骨质疏松方向的研究。
基金资助:
四川省科技计划联合创新专项项目(2022YFS0628)，项目负责人：向飞帆；四川省科学技术厅自然基金项目(2022NSFSC1534)，项目负责人：阳运康

Naringin inhibits iron deposition and cell apoptosis in bone tissue of osteoporotic rats

Lan Shuangli1, Xiang Feifan2, Deng Guanghui2, Xiao Yukun2, Yang Yunkang2, Liang Jie2

1Department of Hepatobiliary Surgery, 2Department of Bone and Joint Surgery, Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China

Received:2023-08-04 Accepted:2023-12-14 Online:2025-02-18 Published:2024-06-01
Contact: Liang Jie, Master, Attending physician, Department of Bone and Joint Surgery, Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
About author:Lan Shuangli, Department of Hepatobiliary Surgery, Affiliated Hospital of Southwest Medical University, Luzhou 646000, Sichuan Province, China
Supported by:
Joint Innovation Special Project of Sichuan Science and Technology Program, No. 2022YFS0628 (to XFF); Natural Fund Project of Sichuan Provincial Science and Technology Department, No. 2022NSFSC1534 (to YYK)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
骨质疏松症：是在年龄增长过程中出现的以骨量降低、骨微结构破坏、骨脆性升高、易骨折为主要特征的全身性退行性骨代谢疾病，多发于女性。
铁代谢：铁是细胞进行增殖、分化、生长、运动等生理过程中必不可缺的微量元素之一。铁元素不仅参与细胞中氧的运输和DNA的配装与合成，并且作为线粒体中三羧酸循环重要的辅助因子直接参与细胞中三磷酸腺苷的合成，在此过程中不仅产生三磷酸腺苷还产生了活性氧，当铁代谢异常时细胞中的氧化与抗氧化随之失衡。

背景：有研究发现，铁代谢异常诱发的骨组织细胞异常凋亡在骨质疏松进展中发挥重要作用。
目的：探讨柚皮苷对骨质疏松大鼠骨组织铁代谢与细胞凋亡的影响。
方法：取50只2月龄雌性SD大鼠，采用随机数字表法分成5组，每组10只：除假手术组外，骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组均通过切除双侧卵巢建立骨质疏松模型。造模8周后，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组分别灌胃给予100，400 mg/(kg•d)的柚皮苷，柚皮苷高剂量+DKK-1组灌胃给予400 mg/(kg•d)的柚皮苷+皮下注射25 mg/(kg•d)的Wnt1信号通路抑制剂DKK-1，连续给药7 d。给药结束后进行相关指标的检测。
结果与结论：①与骨质疏松组相比，柚皮苷可提升大鼠骨密度及血清钙、超氧化物歧化酶水平(P < 0.05)，降低血清中骨钙素、丙二醛、磷水平(P < 0.05)，DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P < 0.05)；②Micro-CT扫描、苏木精-伊红与TUNEL染色显示，与骨质疏松组相比，柚皮苷可显著改善大鼠骨微结构、降低细胞凋亡率，DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用；③免疫荧光染色显示，与骨质疏松组相比，柚皮苷可降低胫骨组织内活性氧含量、抗酒石酸酸性磷酸酶的表达，提升碱性磷酸酶的表达(P < 0.05)，DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P < 0.05)；④普鲁士蓝染色、免疫组化染色显示，与骨质疏松组相比，柚皮苷可降低骨组织与肝组织内的铁沉积、骨组织铁吸收相关蛋白受体1的表达(P < 0.05)，提升骨组织膜铁转运蛋白1的表达(P < 0.05)，DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P < 0.05)；⑤胫骨标本PCR与Western blot检测显示，与骨质疏松组相比，柚皮苷可降低抗酒石酸酸性磷酸酶、铁吸收相关蛋白受体1和Bax的表达(P < 0.05)，提升碱性磷酸酶、膜铁转运蛋白1、Bcl-2、Wnt1和β-catenin的表达(P < 0.05)，DKK-1可部分抑制柚皮苷的干预作用(P < 0.05)；⑥结果表明，柚皮苷可通过减少骨组织中的铁沉积及细胞凋亡率抑制骨质疏松的进展，这可能与激活Wnt1信号通路有关。
https://orcid.org/0009-0007-8554-9367(兰双笠)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 柚皮, 骨质疏松, 铁代谢, Wnt1信号通路, 细胞凋亡

Abstract: BACKGROUND: It has been found that abnormal apoptosis of bone tissue cells induced by abnormal iron metabolism plays an important role in the progression of osteoporosis.
OBJECTIVE: To investigate the effect of naringin on iron metabolism and cell apoptosis in bone tissue of rats with osteoporosis.
METHODS: Fifty 2-month-old female Sprague-Dawley rats were randomly divided into five groups with 10 rats in each group: sham group, osteoporosis group, naringin low-dose group, naringin high-dose group, and naringin high-dose+DKK-1 group. Except for the sham group, rat models of osteoporosis were established by removing bilateral ovarian tissues in the other groups. At 8 weeks after modeling, rats in the naringin low- and high-dose groups were given 100 and 400 mg/kg/d naringenin by gavage, respectively, and rats in the naringenin high dose+DKK-1 group were given 400 mg/kg/d naringin by gavage and subcutaneous injection of 25 mg/kg/d DKK-1, an inhibitor of the Wnt1 signaling pathway, for 7 consecutive days. Relevant indexes were detected after administration.
RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the osteoporosis group, naringin could enhance the bone mineral density and serum calcium and superoxide dismutase levels in rats (P < 0.05), and reduce the serum levels of osteocalcin, malondialdehyde, and phosphorus (P < 0.05), while DKK-1 could partially inhibit the interventional effect of naringin (P < 0.05). Results from Micro-CT scanning, hematoxylin-eosin and TUNEL staining showed that compared with the osteoporosis group, naringin significantly improved bone microstructure and reduced the rate of cell apoptosis, while DKK-1 partially inhibited the interventional effect of naringin. Immunofluorescence staining results showed that compared with the osteoporosis group, naringin could reduce the oxygen content, anti-tartaric acid phosphatase expression, and elevate the expression of alkaline phosphatase in active tibia tissues (P < 0.05), while DKK-1 could partially inhibit the interventional effect of naringin (P < 0.05). Results from Prussian blue staining and immunohistochemical staining showed that compared with the osteoporosis group, naringin reduced iron deposition in bone and liver tissues as well as the expression of transferrin receptor 1 (P < 0.05), and elevated the protein expression of ferroportin 1 (P < 0.05) in bone tissue, and DKK-1 partially inhibited the intervention of naringin (P < 0.05). PCR and western blot assay of tibia specimens showed that compared with the osteoporosis group, naringin decreased the expression of anti-tartrate acid phosphatase, transferrin receptor 1 and Bax (P < 0.05), and elevated the expression of alkaline phosphatase, ferroportin 1, Bcl-2, Wnt1 and β-catenin (P < 0.05), while DKK-1 partially inhibited the interfering effect of naringin (P < 0.05). To conclude, naringin inhibits the progression of osteoporosis by reducing iron deposition and apoptosis rate in bone tissue, which may be related to the activation of the Wnt1 signaling pathway.

Key words: naringin, osteoporosis, iron metabolism, Wnt1 signaling pathway, cell apoptosis

中图分类号:

兰双笠, 向飞帆, 邓光慧, 肖喻琨, 阳运康, 梁杰. 柚皮苷抑制骨质疏松大鼠骨组织的铁沉积及细胞凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(5): 888-898.

Lan Shuangli, Xiang Feifan, Deng Guanghui, Xiao Yukun, Yang Yunkang, Liang Jie. Naringin inhibits iron deposition and cell apoptosis in bone tissue of osteoporotic rats [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2025, 29(5): 888-898.

图/表（结果） 11

2.1 各组大鼠造模结果及一般表现在实验过程中未发生动物死亡的现象。造模后，假手术组大鼠活泼活动，反应机敏，皮毛顺滑浓密，摄食、饮水及睡眠未见异常；骨质疏松组大鼠精神状态偏于狂躁不安，反应迟钝，皮毛暗淡稀疏，大鼠在实验过程中往往处于少动嗜睡的状态，摄食与饮水意愿不强烈；柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠的情绪、精神状态较为稳定，反应较为敏捷，皮毛较为顺整。
与假手术组相比，骨质疏松组大鼠血清钙水平和骨密度明显下降(P < 0.05)，血清骨钙素和磷的水平明显升高(P < 0.05)，证实造模成功。
2.2 各组大鼠血清中骨钙素、钙、磷水平及骨密度的变化与假手术组相比，骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠血清钙水平和骨密度下降(P < 0.05)，骨钙素和磷水平升高(P < 0.05)；与骨质疏松组相比，柚皮苷干预组大鼠血清钙水平和骨密度升高(P < 0.05)，骨钙素和磷水平下降(P < 0.05)；与柚皮苷高剂量组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠血清钙水平和骨密度下降(P < 0.05)，骨钙素和磷水平升高(P < 0.05)，见图1。
2.3 各组大鼠骨微结构的变化 Micro-CT扫描结果显示，与假手术组相比，骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠胫骨组织的平均骨体积分数和平均骨小梁数下降(P < 0.05)，骨小梁间距升高(P < 0.05)；与骨质疏松组相比，柚皮苷干预组大鼠胫骨组织的平均骨体积分数和平均骨小梁数升高(P < 0.05)，骨小梁间距下降(P < 0.05)；与柚皮苷高剂量组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠胫骨组织的平均骨体积分数和平均骨小梁数下降(P < 0.05)，骨小梁间距升高(P < 0.05)，见图2。
2.4 各组大鼠骨组织病理损伤苏木精-伊红染色结果显示，假手术组大鼠胫骨组织形态正常，结构完整，骨小梁粗细匀称，排列致密有序，骨小梁内纹理清晰可辨，骨皮质厚度均一，未见明显异常；骨质疏松组大鼠胫骨组织结构破坏明显，骨小梁数量减少，排列紊乱，结构变细，模糊不清晰，部分有断裂、缺失现象，髓腔扩张明显，骨皮质变薄，出现部分空洞结构；与骨质疏松组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠胫骨组织病理症状明显改善，骨小梁结构宽度接近正常，排列较为规则，骨皮质明显增厚，尤以柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组改善程度最为明显，见图3。
2.5 各组大鼠胫骨组织细胞凋亡情况胫骨组织TUNEL染色显示，与假手术组相比，骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组细胞凋亡率升高(P < 0.05)；与骨质疏松组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组细胞凋亡率下降(P < 0.05)；与柚皮苷高剂量组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组细胞凋亡率升高(P < 0.05)，见图4。
2.6 各组大鼠胫骨组织中相关基因的表达胫骨组织PCR检测显示，与假手术组相比，骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组抗酒石酸酸性磷酸酶、铁吸收相关蛋白受体1、Bax的mRNA表达升高(P < 0.05)，碱性磷酸酶、膜铁转运蛋白1、Bcl-2、Wnt1、β-catenin的mRNA表达降低(P < 0.05)；与骨质疏松组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组抗酒石酸酸性磷酸酶、铁吸收相关蛋白受体1、Bax的mRNA表达降低(P < 0.05)，碱性磷酸酶、膜铁转运蛋白1、Bcl-2、Wnt1、β-catenin的mRNA表达升高(P < 0.05)；与柚皮苷高剂量组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组抗酒石酸酸性磷酸酶、铁吸收相关蛋白受体1、Bax的mRNA表达升高(P < 0.05)，碱性磷酸酶、膜铁转运蛋白1、Bcl-2、Wnt1、β-catenin的mRNA表达降低(P < 0.05)，见图5。
2.7 各组大鼠胫骨组织中氧化应激水平胫骨组织超氧化物阴离子二氢乙啶染色显示，与假手术组相比，骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠活性氧含量升高(P < 0.05)；与骨质疏松组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组活性氧含量降低(P < 0.05)；与柚皮苷高剂量组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组活性氧含量升高(P < 0.05)，见图6。
与假手术组相比，骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠血清丙二醛水平升高(P < 0.05)，超氧化物歧化酶水平下降(P < 0.05)；与骨质疏松组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠血清丙二醛水平下降(P < 0.05)，超氧化物歧化酶水平升高(P < 0.05)；与柚皮苷高剂量组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠血清丙二醛水平明显升高(P < 0.05)，超氧化物歧化酶水平下降(P < 0.05)，见图7。
2.8 各组大鼠胫骨组织和肝组织中铁沉积情况普鲁士蓝染色显示，与假手术组相比，骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠肝组织与骨组织中普鲁士蓝阳性细胞比例升高(P < 0.05)；与骨质疏松组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠肝组织与骨组织中中普鲁士蓝阳性细胞的比例降低(P < 0.05)；与柚皮苷高剂量组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组大鼠肝组织与骨组织中普鲁士蓝阳性细胞比例升高(P < 0.05)，见图8。
胫骨组织免疫组化染色显示，与假手术组相比，骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组膜铁转运蛋白1的表达降低(P < 0.05)，铁吸收相关蛋白受体1的表达升高(P < 0.05)；与骨质疏松组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组膜铁转运蛋白1的表达升高(P < 0.05)，铁吸收相关蛋白受体1的表达降低(P < 0.05)；与柚皮苷高剂量组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组膜铁转运蛋白1的表达降低(P < 0.05)，铁吸收相关蛋白受体1的表达升高(P < 0.05)，见图9。
2.9 各组大鼠胫骨组织中抗酒石酸酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的表达胫骨组织免疫荧光染色显示，与假手术组相比，骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组碱性磷酸酶表达明显降低(P < 0.05)，抗酒石酸酸性磷酸酶表达升高(P < 0.05)；与骨质疏松组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组碱性磷酸酶表达升高(P < 0.05)，抗酒石酸酸性磷酸酶表达明显降低(P < 0.05)；与柚皮苷高剂量组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组碱性磷酸酶表达降低(P < 0.05)，抗酒石酸酸性磷酸酶表达升高(P < 0.05)，见图10。
2.10 各组大鼠胫骨组织中Wnt1信号通路相关蛋白的表达胫骨组织Western blot检测显示，与假手术组相比，骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组Bcl-2、Wnt1、β-catenin蛋白表达降

低(P < 0.05)，Bax蛋白表达升高(P < 0.05)；与骨质疏松组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组Bcl-2、Wnt1、β-catenin蛋白表达升高(P < 0.05)，Bax蛋白表达降低(P < 0.05)；与柚皮苷高剂量组相比，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组Bcl-2、Wnt1、β-catenin蛋白表达降低(P < 0.05)，Bax蛋白表达升高(P < 0.05)，见图11。

参考文献

[1] PATEL D, WAIRKAR S. Bone regeneration in osteoporosis: opportunities and challenges. Drug Deliv Transl Res. 2023;13(2):419-432.
[2] LAIRD C, BENSON H, WILLIAMS KA. Pharmacist interventions in osteoporosis management: a systematic review. Osteoporos Int. 2023; 34(2):239-254.
[3] CHAKRABARTI K, MCCUNE WJ. Glucocorticoid-induced osteoporosis in premenopausal women: management for the rheumatologist. Curr Opin Rheumatol. 2023;35(3):161-169.
[4] ZHANG G, ZHEN C, YANG J, et al. 1-2 T static magnetic field combined with Ferumoxytol prevent unloading-induced bone loss by regulating iron metabolism in osteoclastogenesis. J Orthop Translat. 2022;38(11):126-140.
[5] VASIKARAN SD, MIURA M, PIKNER R, et al. Practical Considerations for the Clinical Application of Bone Turnover Markers in Osteoporosis. Calcif Tissue Int. 2023;112(2):148-157.
[6] LI J, SONG J, MENG D, et al. Electrospun naringin-loaded microsphere/sucrose acetate isobutyrate system promotes macrophage polarization toward M2 and facilitates osteoporotic bone defect repair. Regen Biomater. 2023;2(10):1-16.
[7] HU J, LIN X, GAO P, et al. Genotypic and phenotypic spectrum and pathogenesis of WNT1 variants in a large cohort of patients with OI/osteoporosis. J Clin Endocrinol Metab. 2023;3(1):1-11.
[8] MOUSAVI S, VAKILI S, ZAL F, et al. Quercetin potentiates the anti-osteoporotic effects of alendronate through modulation of autophagy and apoptosis mechanisms in ovariectomy-induced bone loss rat model. Mol Biol Rep. 2023;50(4):3693-3703.
[9] HWANG JH, PARK YS, KIM HS, et al. Yam-derived exosome-like nanovesicles stimulate osteoblast formation and prevent osteoporosis in mice. J Control Release. 2023;355(3):184-198.
[10] CHEN M, FU W, XU H, et al. Pathogenic mechanisms of glucocorticoid-induced osteoporosis. Cytokine Growth Factor Rev. 2023;70(4):54-66.
[11] ZHANG K, QIU W, LI H, et al. MACF1 overexpression in BMSCs alleviates senile osteoporosis in mice through TCF4/miR-335-5p signaling pathway. J Orthop Translat. 2023;39(3):177-190.
[12] ZHUANG Q, CHEN S, ZHANG W, et al. Avicularin Alleviates Osteoporosis in Ovariectomized Mice by Inhibiting Osteoclastogenesis through NF-κB Pathway Inhibition. J Agric Food Chem. 2023;71(1):411-420.
[13] XIE H, CAO L, YE L, et al. microRNA-29b-3p/sirtuin-1/peroxisome proliferator-activated receptor γ suppress osteogenic differentiation. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 2023;59(2):109-120.
[14] LEE AS, SUNG MJ, SON SJ, et al. Effect of Menaquinone-4 on Receptor Activator of Nuclear Factor κB Ligand-Induced Osteoclast Differentiation and Ovariectomy-Induced Bone Loss. J Med Food. 2023;26(2):128-134.
[15] ZENG C, WANG S, CHEN F, et al. Alpinetin alleviates osteoporosis by promoting osteogenic differentiation in BMSCs by triggering autophagy via PKA/mTOR/ULK1 signaling. Phytother Res. 2023;37(1):252-270.
[16] BEEKMAN KM, DUQUE G, CORSI A, et al. Osteoporosis and Bone Marrow Adipose Tissue. Curr Osteoporos Rep. 2023;21(1):45-55.
[17] QASEEM A, HICKS LA, ETXEANDIA-IKOBALTZETA I, et al. Pharmacologic Treatment of Primary Osteoporosis or Low Bone Mass to Prevent Fractures in Adults: A Living Clinical Guideline From the American College of Physicians. Ann Intern Med. 2023;176(2):224-238.
[18] GE X, JIANG F, WANG M, et al. Naringin@Metal-Organic Framework as a Multifunctional Bioplatform. ACS Appl Mater Interfaces. 2023; 15(1):677-683.
[19] CHENG C, PENG X, XI L, et al. Feasibility study of oxidized naringin as a novel crosslinking agent for crosslinking decellularized porcine Achilles tendon and its potential application for anterior cruciate ligament repair. J Biomed Mater Res A. 2023;111(2):170-184.
[20] ZHENG L, SHEN X, XIE Y, et al. Metformin promotes osteogenic differentiation and prevents hyperglycaemia-induced osteoporosis by suppressing PPARγ expression. Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2023;55(3):394-403.
[21] WANG M, LI H, TANG J, et al. Effect of simvastatin on osteogenesis of the extremity bones in aging rats. Connect Tissue Res. 2023;64(1):
64-74.
[22] WU H, ZHANG D, XIA H, et al. SDH5 down-regulation mitigates the damage of osteoporosis via inhibiting the MyD88/NF-κB signaling pathway. Immunopharmacol Immunotoxicol. 2023;45(3):317-327.
[23] WAWRZYNIAK N, GRAMAZA-MICHALOWSKA A, KURZAWA P, et al.
Calcium carbonate-enriched pumpkin affects calcium status in ovariectomized rats. J Food Sci Technol. 2023;60(4):1402-1413.
[24] 张敏,张晓明,刘童斌.柚皮苷在骨组织再生领域的应用潜力[J].中国组织工程研究,2023,27(5):787-792.
[25] GAN J, DENG X, LE Y, et al. The Development of Naringin for Use against Bone and Cartilage Disorders. Molecules. 2023;28(9):3716-3736.
[26] LIU Y, ZHU S, LIU J, et al. Vitexin Regulates Angiogenesis and Osteogenesis in Ovariectomy-Induced Osteoporosis of Rats via the VDR/PI3K/AKT/eNOS Signaling Pathway. J Agric Food Chem. 2023; 71(1):546-556.
[27] SUN H, XU J, WANG Y, et al. Bone microenvironment regulative hydrogels with ROS scavenging and prolonged oxygen-generating for enhancing bone repair. Bioact Mater. 2023;24(1):477-496.
[28] HE Q, YANG J, PAN Z, et al. Biochanin A protects against iron overload associated knee osteoarthritis via regulating iron levels and NRF2/System xc-/GPX4 axis. Biomed Pharmacother. 2023;157:113915-113930.
[29] FENG M, LIU L, WANG J, et al. The Molecular Mechanisms Study of Engeletin Suppresses RANKL-Induced Osteoclastogenesis and Inhibits Ovariectomized Murine Model Bone Loss. J Inflamm Res. 2023;16(5):2255-2270.
[30] NOONAN ML, NI P, SOLIS E, et al. Osteocyte Egln1/Phd2 links oxygen sensing and biomineralization via FGF23. Bone Res. 2023;11(1):7-23.
[31] JIN C, TAN K, YAO Z, et al. A Novel Anti-Osteoporosis Mechanism of VK2: Interfering with Ferroptosis via AMPK/SIRT1 Pathway in Type 2 Diabetic Osteoporosis. J Agric Food Chem. 2023;71(6):2745-2761.
[32] MENG D, SONG J, YI Y, et al. Controlled released naringin-loaded liposome/sucrose acetate isobutyrate hybrid depot for osteogenesis in vitro and in vivo. Front Bioeng Biotechnol. 2023;10(1):1097178-1097190.
[33] ZHANG H, WANG A, LI G, et al. Osteoporotic bone loss from excess iron accumulation is driven by NOX4-triggered ferroptosis in osteoblasts. Free Radic Biol Med. 2023;198(3):123-136.
[34] BAE S, KIM K, KANG K, et al. RANKL-responsive epigenetic mechanism reprograms macrophages into bone-resorbing osteoclasts. Cell Mol Immunol. 2023;20(1):94-109
[35] CHEN R, WANG M, QI Q, et al. Sequential anti-inflammatory and osteogenic effects of a dual drug delivery scaffold loaded with parthenolide and naringin in periodontitis. J Periodontal Implant Sci. 2023;53(1):20-37.
[36] ZHANG W, ZHOU X, HOU W, et al. Reversing the imbalance in bone homeostasis via sustained release of SIRT-1 agonist to promote bone healing under osteoporotic condition. Bioact Mater. 2022;19(5): 429-443.
[37] AYERS C, KANGSAGARA D, LAZUR B, et al. Effectiveness and Safety of Treatments to Prevent Fractures in People With Low Bone Mass or Primary Osteoporosis: A Living Systematic Review and Network Meta-analysis for the American College of Physicians. Ann Intern Med. 2023;176(2):182-195.
[38] OH WT, YANG YS, XIE J, et al. WNT-modulating gene silencers as a gene therapy for osteoporosis, bone fracture, and critical-sized bone defects. Mol Ther. 2023; 31(2):435-453.
[39] WANG X, MA Y, CHEN J, et al. A novel decellularized matrix of Wnt signaling-activated osteocytes accelerates the repair of critical-sized parietal bone defects with osteoclastogenesis, angiogenesis, and neurogenesis. Bioact Mater. 2022; 21(8):110-128.
[40] FU M, TIAN Y, ZHANG T, et al. Comparative study of DHA-enriched phosphatidylcholine and EPA-enriched phosphatidylcholine on ameliorating high bone turnover via regulation of the osteogenesis-related Wnt/β-catenin pathway in ovariectomized mice. Food Funct. 2020;11(11):10094-10104.

引言

骨质疏松是一种全身性的代谢性骨骼疾病，主要以骨组织中骨量减少、骨微观结构受损、骨强度降低等为主要特征，进而引起骨脆性增加，显著增加发生骨折的风险，引起患者骨骼疼痛、变形等一系列临床不适症状，严重影响患者的生活质量，多发于老年人及绝经后妇女等群体[1]。临床主要应用抑制骨吸收药物、促进骨形成药物、骨健康基本补充剂等药物控制骨质疏松的发展，但化学药物价格昂贵、毒副作用明显[2]，并且现有的干预措施只是能缓解患者的不适症状，并不能阻滞疾病的恶化进展。CHAKRABARTI等[3]研究显示，物质代谢异常尤其是铁元素代谢异常导致的铁沉积而诱发的骨组织细胞异常凋亡，在骨质疏松的进展中发挥重要作用。ZHANG等[4]报道在双侧卵巢切除小鼠模型中，抑制铁吸收相关蛋白受体1的表达、升高膜铁转运蛋白1的表达、抑制铁元素在股骨组织中的蓄积能明显降低小鼠股骨组织中活性氧自由基的含量，降低小鼠股骨组织的氧化应激。
柚皮苷是中药化橘红、枳实、骨碎补、枳壳等的主要活性组分之一，属于双氢黄酮类化合物，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、免疫调节以及调控物质代谢等药理学效用[5]。LI等[6]研究显示在颅骨缺损大鼠模型中，柚皮苷的应用能明显降低缺损区域破骨细胞标志物抗酒石酸酸性磷酸酶的表达、升高成骨细胞标志物碱性磷酸酶的表达、降低骨组织中的铁沉积、下调骨组织的细胞凋亡，促进颅骨缺损的修复。
Wnt1信号是机体内调控细胞应激、生长、凋亡等生物学过程的通路。HU等[7]研究显示在绝经后骨质疏松大鼠模型中，Wnt1及其下游蛋白β-catenin的转录与翻译水平下降，升高其表达后能明显升高抗凋亡Bcl-2的表达、下调促凋亡Bax的表达，降低大鼠股骨组织的细胞凋亡率。此次实验通过构建大鼠骨质疏松模型，以Wnt1信号通路抑制因子dickkopf-1(DKK-1)进行功能挽救实验，探讨柚皮苷对骨质疏松大鼠铁沉积和细胞凋亡的干预作用，希望为药物的推广应用提供可靠的数据基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计随机对照动物实验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。
1.2 时间及地点实验于2022年4-8月在西南医科大学附属医院基础动物房中进行。
1.3 材料
1.3.1 实验动物与分组健康2月龄未生育雌性SD大鼠50只，无特定病原体级，体质量220-250 g，购自中国人民解放军陆军特色医学中心，生产许可证号：SCXK (渝)2022-0004。所有实验动物饲养于西南医科大学附属医院基础动物SPF级房中，温度(25±2)℃，湿度(45±5)%，12 h/12 h交替光暗循环周期，噪声< 50 db，饮水与摄食自由，基础饲料，待动物适应后用于实验。采用随机数字表达法分为假手术组、骨质疏松组、柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组、柚皮苷高剂量+DKK-1组，每组10只。
实验方案经西南医科大学附属医院动物实验伦理委员会批准，批准号为CLXNDX-030520220418。实验过程遵循了国际兽医学编辑协会《关于动物伦理与福利的作者指南共识》和本地及国家法规。
1.3.2 主要试剂及仪器柚皮苷(纯度≥99.99%)购自美国Sigma-Aldrich公司；DKK-1蛋白购自安迪生物科技(上海)有限公司；麻醉剂、磷酸盐、甲醛、二甲苯、中性树脂(北京索莱宝生物科技有限公司)；兔抗大鼠Wnt1、β-catenin、Bcl-2、Bax、GAPDH单克隆抗体(上海碧云天生物科技有限公司)；免疫荧光、免疫组化、苏木精-伊红、普鲁士蓝染色试剂盒(上海卧宏生物科技有限公司)；Western blot试剂盒、TUNEL试剂盒(南京森贝伽生物科技有限公司)；超氧化物阴离子二氢乙啶荧光试剂盒、超氧化物歧化酶和丙二醛试剂盒(南京建成生物技术有限公司)。
组织剪、止血钳、除毛器等手术器械(浙江省金华市金华市益迪医疗设备有限公司)；ULTRAFOCUS-Faxitron生物学小动物骨密度仪(美国itron公司)；Sky Scan-1176 型
Micro-CT仪(比利时BRUKER公司)；Image Quant LAS4010凝胶成像系统(美国GE公司)；qRT-PCR扩增仪(美国Bio-Rad公司)；Leica DMI6000B显微镜(德国莱卡公司)；Z-5000分光光度计(日本日立公司)；CK-150型高速冷冻离心机(美国Sigma公司)。
1.4 方法
1.4.1 大鼠骨质疏松模型的建立根据MOUSAVI等[8]
介绍的方法建模。各组大鼠禁食不禁水24 h，腹腔注射3%戊巴比妥钠(45 mg/kg)麻醉后，将大鼠俯卧位固定在操作台上，备皮消毒，在下腹部正中行纵切口，逐层剥离，直至暴露粉红色的卵巢组织，假手术组大鼠仅暴露卵巢组织，不进行切除；其余4组在显微镜下切除双侧卵巢，缝合伤口，术后肌肉注射10×104 U的青霉素预防感染。术后8周，利用ULTRAFOCUS-Faxitron生物学小动物骨密度仪检测大鼠骨密度，腹主动脉取血2 mL，采用酶联吸附试剂盒检测各组大鼠血清骨钙素、钙和磷的水平，以验证造模是否成功[9]。
1.4.2 造模后分组干预造模8周后(造模成功)，柚皮苷低剂量、高剂量组分别灌胃给予100，400 mg/(kg•d)的柚皮苷[10]，柚皮苷高剂量+DKK-1组灌胃给予400 mg/(kg•d)的柚皮苷+皮下注射25 mg/(kg•d)的Wnt1信号通路抑制剂DKK-1，假手术组与骨质疏松组大鼠灌胃给予等体积的生理盐水，连续给药7 d。
1.4.3 取材末次给药结束4 h后麻醉大鼠，利用

ULTRAFOCUS-Faxitron生物学小动物骨密度仪检测各组大鼠骨密度[11]。检测完毕后，腹主动脉取血3 mL，离心后留取血清待测，随后处死大鼠，无菌分离大鼠胫骨组织，置入多聚甲醛中固定24 h，转入体积分数75%乙醇中保

存待测；同时分离各组大鼠肝组织，待测[12]。
1.5 主要观察指标
1.5.1 骨密度检测给药结束后检测各组大鼠骨密度。
1.5.2 血清指标检测将各组大鼠的血清送往医院检测室，根据酶联吸附试剂盒要求，按试剂盒说明书进行操作，检测各组大鼠血清中骨钙素、钙、磷、超氧化物歧化酶和丙二醛的水平。
1.5.3 骨微结构变化[13] 取各组大鼠的右侧胫骨组织进行
Micro-CT扫描，使用CT Analyser软件统计分析骨小梁厚度、骨小梁间距、平均骨体积分数、平均骨小梁数。
1.5.4 骨组织病理损伤取大鼠部分左侧胫骨组织，经脱钙、梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋后，经石蜡切片机制成4-6 μm的切片，进行苏木精-伊红染色，显微镜下观察。
1.5.5 骨组织细胞凋亡[14] 取各组大鼠部分胫骨组织标本，按TUNEL试剂盒前期要求进行固定、切片、浸洗后，添加TUNEL工作液37 ℃避光孵育，脱水、封固，镜检，利用图像处理Image-Pro 6.2软件统计分析骨组织中的细胞凋亡率。

1.5.6 胫骨组织中相关基因的表达取大鼠的部分胫骨组织标本，加入适量Trizol裂解液，按Trizol试剂盒要求提取总的RNA，使用Z-5000分光光度计测定其浓度后，Prime Scrip TM试剂盒合成cDNA，进行qRT-PCR扩增，条件如下：预变性95 ℃ 5 s，变性95 ℃ 5 s，退火60 ℃ 60 s，40个循环。引物序列见表1，通过2-ΔΔCt来表示各目的基因的相对表达量[15]。

1.5.7 胫骨组织中活性氧含量[16] 取各组大鼠部分胫骨组织标本，经脱钙、离心、消化、过滤之后制备单细胞悬液，与超氧化物阴离子二氢乙啶荧光探针避光孵育90 min，用PBS清洗后，显微镜下观察，使用Image Pro-Plus 6.0软件分析超氧化物阴离子二氢乙啶的荧光强度均值。
1.5.8 胫骨组织和肝组织中的铁沉积将各组大鼠的胫骨组织和肝组织经常规固定，切片，按普鲁士蓝染色试剂盒要求进行，Perls染色，核固红试剂B复染[17]，显微镜下观察，使用Image Pro-Plus 6.0软件分析普鲁士蓝染色阳性细胞的比例。
1.5.9 胫骨组织中抗酒石酸酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的表达按要求处理各组大鼠胫骨组织后脱蜡处理，微波修复，置于体积分数3%双氧水中孵育，用PBS清洗，山羊血清封闭，以1∶500的稀释比较加入一抗(抗酒石酸酸性磷酸酶和碱性磷酸酶)，4 ℃避光过夜，次日加入荧光二抗[18]，避光孵育，显微镜下观察。
1.5.10 胫骨组织中膜铁转运蛋白1和铁吸收相关蛋白受体1的表达将各组大鼠胫骨组织按要求处理，经固定、包埋、切片后，按免疫组化试剂盒要求进行实验操作，加入1∶500稀释比的一抗(膜铁转运蛋白1和铁吸收相关蛋白受体1)，二抗(1∶1 500)，显微镜下观察[19]，使用Image J图像处理软件分析目标蛋白的免疫组化评分。
1.5.11 胫骨组织中相关蛋白的表达将各组大鼠胫骨组织按要求处理，经固定、包埋、切片后，在4 ℃裂解液中放置30 min，离心并将上清液稀释，常规方法提取样本中的总蛋白，以50 μg样品进行上样，电泳后，转膜，封闭，加入一抗(兔抗Wnt1、β-catenin、Bcl-2、Bax抗体，稀释比均为1∶500)，加入二抗(1∶1 500)室温下孵育2 h[20]，显色30 min，以GAPDH为参照，分析目标蛋白的灰度值。
1.6 统计学分析实验所得数据采用SPSS 16.0软件进行统计分析，采用Graphpad 8.0软件作图，对于各组样本中的细胞凋亡率及样本中蛋白表达含量等符合正态分布的数据，采用x±s表示，多组间比较采用单因素分析，两两比较采用t检验，P < 0.05表示差异有显著性意义。该文统计学方法已经西南医科大学生物统计学专家审核。

讨论

骨质疏松的发病机制十分复杂，年龄、性别、遗传、药物及内分泌失衡等均与疾病的发生、发展关系密切[21]，尚无根治性的治疗措施或干预药物，该病在老年人及绝经后女性群体中呈现较高的发病率[22]。研究显示，骨质疏松的本质是骨质形成和骨质吸收失衡，即负责骨形成的成骨细胞和负责骨吸收的破骨细胞的稳态受损[23]，因此深入揭示成骨细胞与破骨细胞之间稳态平衡的分子机制，寻找可靠的治疗靶点，积极有效地推动个体化靶向治疗的开展，具有重要临床意义。
而在漫长的历史进展中，中医药技术在治疗骨质疏松方面积累了丰富经验，中草药因其来源丰富、价格便宜、整体治疗效果明显、毒副作用小等优势得到学术界的一致认可。柚皮苷是一种广泛存在于葡萄柚、橘柑、橙的果皮和果肉中的天然药物中药单体，是中药骨碎补的主要活性成分之一。柚皮苷来源广泛，化学结构稳定，工业提取技术纯熟，在临床应用中具有疗效显著、不良反应小等优势[24]。现代药理学研究显示，柚皮苷具有促新骨生成、抑制破骨细胞增生、营养补给以及脏器保护等作用[25]。
3.1 柚皮苷下调骨质疏松症大鼠骨组织中的氧化应激研究显示，骨组织中氧化应激的加剧直接推动骨质疏松症病情的恶性进展[26]。骨组织中的活性氧自由基、血清中丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性是反映氧化应激水平的参考指标。SUN等[27]研究显示在颅骨缺损小鼠模型中，抑制骨组织中活性氧自由基的含量能明显降低动物颅骨组织中的氧化应激，加快骨组织的修复。HE等[28]研究显示在膝关节炎小鼠模型中，降低动物血清中丙二醛的含量、升高超氧化物歧化酶活性能明显抑制动物关节软骨组织中的氧化应激，降低软骨组织细胞凋亡率。超氧化物阴离子二氢乙啶可自由透过活细胞膜进入胞浆，被富集的活性氧自由基氧化，形成氧化乙啶；氧化乙啶可掺入染色体中形成红色荧光，可依据活细胞中红色荧光强度来判断活性氧自由基的含量[29]。此次实验超氧化物阴离子二氢乙啶染色结果显示，与假手术组相比，骨质疏松组大鼠骨组织中超氧化物阴离子二氢乙啶荧光强度明显升高，活性氧自由基含量明显升高，以柚皮苷低、高剂量干预后，超氧化物阴离子二氢乙啶荧光强度明显下降。经柚皮苷低、高剂量干预后，骨质疏松大鼠血清中丙二醛含量明显降低、超氧化物歧化酶的活性明显升高，证实柚皮苷能明显降低骨质疏松大鼠骨组织中的氧化应激。
3.2 柚皮苷降低骨质疏松症大鼠骨组织中铁沉积在骨质疏松症中存在一定程度的铁元素代谢异常[30]。铁作为机体必需的微量元素之一，在红细胞功能、免疫调节及线粒体三羧酸循环等正常生理活动中发挥重要作用。当铁含量超出骨组织中膜铁转运蛋白1等蛋白的结合能力后，形成铁沉积[31]。MENG等[32]研究显示在关节炎大鼠模型中，柚皮苷能明显降低实验动物关节软骨组织中的活性氧含量，抑制软骨组织中的铁沉积，下调软骨组织细胞凋亡率。ZHANG等[33]研究显示在骨质疏松症小鼠模型中，骨组织中负责将铁转运至细胞内的铁吸收相关蛋白受体1表达升高，负责将铁进行跨膜转运至细胞外的膜铁转运蛋白1表达明显下降，骨组织中的铁沉积随之升高，诱导更大的氧化应激反应，抑制铁吸收相关蛋白受体1表达能明显降低组织的铁沉积。普鲁士蓝染色常用来检测样本中铁元素或铁蛋白的含量。与假手术组相比，骨质疏松组大鼠肝组织及骨组织中普鲁士阳性细胞比例均明显升高，说明在骨质疏松症大鼠中铁代谢异常，肝以及骨组织中的铁沉积升高；以柚皮苷低、高剂量进行干预后，柚皮苷低剂量组、柚皮苷高剂量组大鼠肝和骨组织中的普鲁士阳性细胞的比例明显下降。免疫组化结果显示，经柚皮苷干预后骨组织中铁吸收相关蛋白受体1表达明显降低、膜铁转运蛋白1表达明显升高，这些结果显示柚皮苷能明显改善骨质疏松症大鼠铁代谢异常，降低骨组织中的铁沉积。
3.3 柚皮苷能明显改善骨质疏松症大鼠骨组织中破骨细胞和成骨细胞的失衡众所周知，正常生理状态下，骨组织中的新骨生成和骨质吸收处于动态的平衡中，当机体出现骨质疏松后动态平衡被打破，骨质吸收大于骨质生成导致骨量丢失，加剧骨质疏松的进展[34]。CHEN等[35]研究显示在牙周炎小鼠模型中，柚皮苷的应用能明显抑制炎性应激的级联放大，抑制抗酒石酸酸性磷酸酶的表达，促进牙骨组织的新骨再生，缓解动物不适症状。ZHANG等[36]研究显示在尾吊诱导失重性骨质疏松大鼠模型中，升高碱性磷酸酶的表达、降低抗酒石酸酸性磷酸酶的表达能明显升高大鼠骨密度，减轻动物骨组织中的病理损伤。此次实验以免疫荧光染色检测骨组织中碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶的表达，结果显示与假手术组相比，骨质疏松组大鼠骨组织碱性磷酸酶的表达明显降低、抗酒石酸酸性磷酸酶的表达明显升高；而经柚皮苷低、高剂量干预后，骨组织中抗酒石酸酸性磷酸酶的表达降低、碱性磷酸酶的表达升高，说明骨组织中成骨细胞数量明显回升，而破骨细胞数量明显降低。结合骨密度检测结果显示，经柚皮苷干预后骨质疏松大鼠的骨密度明显升高，证实柚皮苷能明显改善骨质疏松症大鼠骨组织中破骨细胞和成骨细胞的失衡。
3.4 柚皮苷通过Wnt1信号干预骨质疏松症的进展骨质疏松的病理进展过程十分复杂，是多种信号协调参与调控多种基因表达的最终结果，而Wnt1信号是一条与骨稳态密切相关的重要通路[37-38]。WANG等[39]研究显示在绝经后骨质疏松大鼠模型中，Wnt1信号的表达明显降低，激活Wnt1信号后Wnt1、β-catenin的表达升高，能明显降低骨组织中活性氧与骨钙素含量。FU等[40]研究显示在双侧去卵巢小鼠模型中，激活Wnt1信号后能明显抑制骨组织中促凋亡蛋白Bax的表达、升高抗凋亡Bcl-2的表达，下调骨组织细胞凋亡率。此次实验以Wnt1信号通路抑制剂DKK-1进行功能挽救实验，实验结果显示DKK-1能部分逆转柚皮苷对骨质疏松进展的干预作用。
3.5 柚皮苷干预骨质疏松的机制以及其对铁代谢的影响当发生骨质疏松后，大鼠胫骨组织中Wnt1的表达明显下降，一方面胫骨组织中负责将铁转运至细胞内的铁吸收相关蛋白受体1表达升高，负责将铁进行跨膜转运至细胞外的膜铁转运蛋白1表达明显下降，因此胫骨组织中的铁沉积随之升高，诱导更强的氧化应激反应，胫骨组织中活性氧不能及时有效清除，活性氧的含量明显升高；另一方面，胫骨组织中破骨细胞标志物抗酒石酸酸性磷酸酶的表达随Wnt1表达的降低而升高，成骨标志物碱性磷酸酶的表达明显下降，这些事件均导致胫骨组织中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显下降、促凋亡蛋白Bax的表达明显升高，胫骨组织中的细胞凋亡率升高，胫骨的病理损伤加重，骨质疏松病情趋于恶化进展。当使用柚皮苷进行干预后，骨质疏松大鼠胫骨组织中Wnt1、膜铁转运蛋白1的表达明显升高，铁吸收相关蛋白受体1的表达下降，因此胫骨组织中的铁沉积随之下降，氧化应激反应受限，胫骨组织中活性氧含量明显降低；另一方面，胫骨组织中石酸酸性磷酸酶表达随Wnt1表达的升高而降低，碱性磷酸酶的表达明显升高，这些事件导致胫骨组织中Bcl-2表达明显升高、Bax表达明显下降，胫骨组织细胞凋亡率下降，骨组织病理损伤缓解，骨质疏松病情进展受阻。当以Wnt1信号通路抑制剂DKK-1进行功能挽救实验，实验结果显示DKK-1能部分逆转柚皮苷对骨质疏松进展的干预作用，见图12。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

柚皮苷抑制骨质疏松大鼠骨组织的铁沉积及细胞凋亡

Naringin inhibits iron deposition and cell apoptosis in bone tissue of osteoporotic rats

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[1]	周金海, 李江伟, 王序全, 庄颖, 赵瑛, 杨渝勇, 王嘉嘉, 杨阳, 周仕炼. 不同骨强度下全膝置换过程中发生股骨前皮质切迹的三维有限元分析[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(9): 1775-1782.
[2]	周佳俊, 马飞, 冷叶波, 徐世财, 何宝强, 李洋, 廖烨晖, 唐强, 唐超, 王清, 钟德君. 全脊柱MRI评估骨质疏松患者椎体骨折的分布特点及临床意义[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(9): 1883-1889.
[3]	赵济宇, 王少伟. 叉头框转录因子O1信号通路与骨代谢[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(9): 1923-1930.
[4]	尹路, 蒋川锋, 陈俊杰, 易明, 王子赫, 石厚银, 汪国友, 沈骅睿. 沙苑子苷A对关节软骨细胞凋亡的影响[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(8): 1541-1547.
[5]	陈帅, 金杰, 韩化伟, 田宁晟, 李志伟. 两样本孟德尔随机化分析循环炎症细胞因子与骨密度的因果关联[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(8): 1556-1564.
[6]	赵嘉诚, 任诗齐, 祝秦, 刘佳佳, 朱翔, 杨洋. 原发性骨质疏松潜在生物标志物的生物信息学分析[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(8): 1741-1750.
[7]	万玲玲, 吴梦滢, 张宇骄, 罗青清. 炎性因子干扰素γ以焦亡途径影响人血管平滑肌细胞的迁移和凋亡[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(7): 1422-1428.
[8]	章镇宇, 梁秋健, 杨军, 韦相宇, 蒋捷, 黄林科, 谭桢. 新橙皮苷治疗骨质疏松症的靶点及对骨髓间充质干细胞成骨分化的作用[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(7): 1437-1447.
[9]	李岳尧, 张民, 杨家驹. 肉苁蓉苷A通过JNK/MAPK通路抑制破骨细胞活性[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(6): 1144-1151.
[10]	郑琳, 靳文君, 罗珊珊, 黄芮, 王杰, 程余婷, 安哲庆, 熊玥, 巩仔鹏, 廖健. 杜仲促进去势大鼠牙槽骨成骨的作用[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(6): 1159-1167.
[11]	贺光辉, 原杰, 柯燕琴, 丘小婷, 张晓玲. Hemin调控小鼠软骨细胞氧化应激的线粒体途径[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(6): 1183-1191.
[12]	黄小彬, 葛继荣, 李生强, 谢丽华, 黄景文, 何艳艳, 薛立鹏. 不同滋阴补肾法干预去势大鼠破骨通路的机制[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(6): 1214-1219.
[13]	何波, 陈文, 马岁录, 何志军, 宋渊, 李金鹏, 刘涛, 魏晓涛, 王威威, 谢婧. 皮瓣缺血再灌注损伤的发病机制及治疗进展[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(6): 1230-1238.
[14]	钱琨, 李子卿, 孙水. 内质网应激与常见退行性骨骼疾病的发生与发展[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(6): 1285-1295.
[15]	赵文生, 李孝林, 彭昌华, 邓佳, 盛浩, 陈洪卫, 张朝驹, 何川. 肠道菌群与骨质疏松性骨折[J]. 中国组织工程研究, 2025, 29(6): 1296-1304.