中国组织工程研究 ›› 2020, Vol. 24 ›› Issue (23): 3643-3648.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2644
• 脊柱组织构建 spinal tissue construction • 上一篇 下一篇
周文明1,林一峰2,张 震3,迟利业1
Zhou Wenming1, Lin Yifeng2, Zhang Zhen3, Chi Liye1
摘要:
文题释义:
线粒体凋亡通路:又称为内源性凋亡通路,可以通过多种应力刺激激活,导致线粒体外膜改变、线粒体DNA损伤等,这些改变将最终导致线粒体外膜通透性的增加,正常情况下存在于线粒体内外膜之间的凋亡相关蛋白将扩散至细胞质中,从而导致细胞凋亡的发生。
中药血清药理方法:是指动物灌胃给予中药及制剂,经吸收进入机体血液循环,在一定时间内采集血液,分离所得血清中必定含有一定量的该药物成分,此时的血药浓度反映了机体的真实血药浓度,将此血清加入到体外细胞培养体系,观察其药理作用。
背景:线粒体凋亡通路是细胞凋亡中的重要通路,前期动物实验发现补肾壮督方可通过抑制线粒体凋亡通路改善椎间盘退变,但其作用机制还有待研究。
目的:观察补肾壮督方含药血清对人髓核细胞线粒体凋亡通路关键蛋白的影响,探讨其改善椎间盘退变的机制。
方法:①37只SD雄性大鼠,随机分为正常组、低剂量中药组[0.506 g/(kg•d)]、中剂量中药组[1.012 g/(kg•d)]及高剂量中药组[2.024 g/(kg•d)],连续灌胃2周,灌胃结束后制备含药血清;②人髓核细胞随机分为正常组、模型组、低剂量含药血清组、中剂量含药血清组、高剂量含药血清组,模型组用200 μmol/L H2O2处理6 h,正常组不进行任何处理,低、中、高剂量含药血清组造模后用体积分数为2%含药血清干预48 h。透射电镜观察髓核细胞的超微结构,流式细胞术检测髓核细胞凋亡率和线粒体膜电位,qPCR和Western blot检测Apaf1、Bcl-2、Bax及Cytc的表达。
结果与结论:①与正常组相比,模型组出现明显的细胞凋亡形态特征,髓核细胞凋亡率显著增加(P < 0.05),Apaf1、Cytc、Bax mRNA及蛋白表达量均显著增加(P < 0.05),线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著下降(P < 0.05);②补肾壮督方含药血清干预后,髓核细胞凋亡率明显减少(P < 0.05),Apaf1、Cytc、Bax mRNA及蛋白表达量均明显下降(P < 0.05),线粒体膜电位、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达量显著增加 (P < 0.05);③补肾壮督方含药血清可有效抑制髓核细胞凋亡,并呈剂量依赖性,可能通过减少Apaf1、Cytc、Bax蛋白及mRNA表达,增加Bcl-2蛋白及mRNA表达,抑制线粒体凋亡通路,从而改善椎间盘退变。
ORCID: 0000-0002-6045-9062(林一峰)中国组织工程研究杂志出版内容重点:组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程
中图分类号: