艾灸生成物干预大鼠尿液代谢组学研究

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2015.15.018

中国组织工程研究 ›› 2015, Vol. 19 ›› Issue (15): 2387-2393.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2015.15.018

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艾灸生成物干预大鼠尿液代谢组学研究

周次利¹，陆嫄²，吴璐一²，刘慧荣¹，崔云华¹，赵继梦²，李璟³，周志刚^2，4，吴焕淦¹

1上海中医药大学上海市针灸经络研究所，上海市 200030
2上海中医药大学，上海市 201203
3上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院，上海市 200437
4江西中医药大学，江西省南昌市 330004

修回日期:2015-03-13 出版日期:2015-04-09 发布日期:2015-04-09
通讯作者: 吴焕淦，博士生导师，教授，973计划项目首席科学家，上海中医药大学上海市针灸经络研究所，上海市 200030
作者简介:周次利，女，1980年生，湖北省人，汉族，2010年上海中医药大学毕业，博士，助理研究员，主要从事针灸作用机制与临床研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目(81102637)；上海高校青年教师培养资助计划项目(szy11067)；国家重点基础研究发展计划(973计划)(2009CB522900)；上海市卫生局科研项目(20134239)

Urine metabonomics of moxibustion products in rats

Zhou Ci-li¹, Lu Yuan², Wu Lu-yi², Liu Hui-rong¹, Cui Yun-hua¹, Zhao Ji-meng², Li Jing³, Zhou Zhi-gang^{2, 4}, Wu Huan-gan¹

1Shanghai Research Institute of Acupuncture and Meridian, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200030, China
2Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China
3Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200437, China
4Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004, Jiangxi Province, China

Revised:2015-03-13 Online:2015-04-09 Published:2015-04-09
Contact: Wu Huan-gan, Doctoral supervisor, Professor, Shanghai Research Institute of Acupuncture and Meridian, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200030, China
About author:Zhou Ci-li, M.D., Assistant researcher, Shanghai Research Institute of Acupuncture and Meridian, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 200030, China
Supported by:
the National Natural Science Foundation of China, No. 81102637; the Young University Teacher Training Plan of Shanghai, No. szy11067; the National Basic Research Program of China (973 Program), No. 2009CB522900; the Scientific Research Project of Shanghai Health Department, No. 20134239

摘要/Abstract

摘要：

背景：艾灸过程中产生的艾烟等艾灸生成物是灸法研究的热点之一。运用代谢组学理论与技术，可更为全面、系统地研究艾烟等艾灸生成物对机体的影响。
目的：从尿液代谢组学角度观察不同浓度艾灸生成物对大鼠的影响。
方法：40只SD大鼠随机等分为正常对照组、低、中、高剂量艾灸生成物组、高剂量艾灸生成物恢复组，低、中、高剂量艾灸生成物组和高剂量艾灸生成物恢复组大鼠在艾灸生成物与纯净气的浓度比分别为0.4∶2.0，0.8∶2.0，1.6∶2.0，1.6∶2.0中暴露4 h/d，每周5 d，持续60 d；高剂量艾灸生成物恢复组经60 d高剂量艾灸生成物刺激后，在空气中自然暴露21 d作为恢复期。正常对照组大鼠常规饲养60 d。
结果与结论：气相色谱-飞行时间质谱联用仪分析各组大鼠尿液，共鉴定出108个代谢物，标准品库核实64个。各组大鼠尿液典型代谢物的变化与艾灸生成物浓度呈现一定的正相关关系，其中高剂量艾灸生成物组和正常对照组大鼠尿液代谢物差异最明显，葡萄糖醛酸、维生素C等22个差异代谢物主要参与维生素C代谢等15条糖、氨基酸相关代谢途径，提示艾灸生成物干预大鼠机体能量代谢增加，机体解毒、抗氧化作增强。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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关键词: 组织构建, 组织工程, 艾灸生成物, 艾烟, 代谢组学, 尿液, 气相色谱-飞行时间质谱, 代谢途径, 大鼠, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Moxibustion products produced in moxibustion, such as moxa smoke, are one of hotspots in moxibustion research. Metabonomics can be used to more comprehensively and systematically study the effects of moxibustion products on the body.
OBJECTIVE: To investigate the effect of different concentrations of moxibustion products on urine metabonomics of rats.
METHODS: Forty Sprague-Dawley rats were randomly divided into normal control group, low-dose moxibustion products group, middle-dose moxibustion products group, high-dose moxibustion products group, high-dose moxibustion products recovery group. In the latter four groups, rats from each group were exposed to the mixture of moxibustion products and pure gas at ratios of 0.4:2.0, 0.8:2.0, 1.6:2.0, 1.6:2.0, respectively, 4 hours daily, 5 days weekly, totally for 60 days. After 60-day high-dose moxibustion products stimulation, rats in the high-dose moxibustion products recovery group were raised in normal air for 21 days. Rats in the normal control group were raised in normal air for 60 days without any moxibustion products. Then we analyzed the changes of urine metabonomics in all group rats.
RESULTS AND CONCLUSION: Totally 108 metabolites were identified in the urine of rats using gas chromatography/time-of-flight mass spectrometry, and 64 metabolites were verified by standard library. There were some positive correlations between changes of typical metabolites and moxibustion product concentrations. The metabolites in the urine were most different between the high-dose moxibustion products group and normal control group. Twenty-two differential metabolites, such as glucuronic acid and vitamin C were mainly involved in 15 sugar and amino acid metabolic pathways, such as ascorbate and aldarate metabolism. These findings indicated that energy metabolism, detoxification and anoxidation increased in rats stimulated by moxibustion products.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

全文链接：

Key words: Urine, Smoke, Metabolism

中图分类号:

R318

周次利，陆嫄，吴璐一，刘慧荣，崔云华，赵继梦，李璟，周志刚，吴焕淦. 艾灸生成物干预大鼠尿液代谢组学研究[J]. 中国组织工程研究, 2015, 19(15): 2387-2393.

Zhou Ci-li, Lu Yuan, Wu Lu-yi, Liu Hui-rong, Cui Yun-hua, Zhao Ji-meng, Li Jing, Zhou Zhi-gang, Wu Huan-gan . Urine metabonomics of moxibustion products in rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2015, 19(15): 2387-2393.

图/表（结果） 7

2.1 实验动物数量分析 所有大鼠均进入结果分析，实验流程图见图2。

2.2 总离子流图 各组大鼠尿液代谢物总离子流图见图3，共检测出峰255个，其中NIST数据库和LECO/Fiehn数据库鉴定出108个代谢物，标准品库核实64个代谢物。

2.3 主成分分析图与正交偏最小二乘判别分析图 主成分分析分析表明，不同浓度艾灸生成物干预对大鼠尿液代谢物的分离趋势不明显，显示不同浓度艾灸生成物干预对大鼠的影响比较有限，但高剂量艾灸生成物组大鼠尿液代谢物与正常对照组大鼠尿液代谢物的差异最为明显(图4A)。高剂量艾灸生成物组大鼠尿液代谢物与正常对照组大鼠尿液代谢物比较的正交偏最小二乘判别分析图见图4B。

2.4 差异代谢物 高剂量艾灸生成物组和正常对照组大鼠尿液代谢物差异最为明显。正交偏最小二乘判别分析分析显示2组大鼠尿液代谢物VIP> 1，且差异有显著性意义的代谢物有22个(表1)。与正常对照组相比，高剂量艾灸生成物组大鼠尿液代谢物均值比(Fold change)> 1，显示高剂量艾灸生成物组大鼠尿液差异代谢物浓度较正常对照组上升，其中最明显的是葡萄糖醛酸和维生素C。

虽然不同浓度艾灸生成物干预对大鼠尿液代谢物的分离趋势不明显，仅高剂量艾灸生成物组与正常对照组大鼠尿液代谢物差异较大，但从图4，5可知，各组大鼠尿液典型代谢物的波动与艾灸生成物浓度呈现一定的正相关关系。与正常对照组相比，随着艾灸生成物干预浓度的增加，低、中、高剂量艾灸生成物组大鼠2，5-二羟基-1H-吲哚、3，4，5-三羟基戊酸、3，4-二羟基丁酸、3-甲基己二酸、尿囊素、D-苏糖醇、L-苏糖醇和苏糖酸8个典型代谢物含量增加；经21 d恢复期后，高剂量艾灸生成物恢复组大鼠上述8个典型代谢物含量下降(图5)。

2.5 代谢途径 将差异代谢物导入MetaboAnalyst 3.0 (http://www.metaboanalyst.ca)，结合KEGG (http://www. kegg. jp)、HMDB (http://www.hmdb.ca)和METLIN (http:// metlin. scripps .edu)分析代谢途径^[9-10]。如图6，表2所示，艾烟等艾灸生成物对机体维生素C代谢，戊糖和葡萄糖醛酸酯互变现象，三羧酸循环，缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸生物合成，乙醛酸和二羧酸代谢，丁酸甲酯代谢，丙酮酸代谢，淀粉和蔗糖代谢，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢，磷酸肌醇代谢，糖酵解或糖易生，半胱氨酸和蛋氨酸代谢，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢，缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸降解，嘌呤代谢等糖、氨基酸等相关代谢途径产生影响，其中，影响最显著的是维生素C代谢。

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引言

材料方法

设计：随机对照动物实验。

时间及地点：实验于2012年1月至2013年5月在复旦大学上海医学院实验动物科学部、上海交通大学、上海市针灸经络研究所完成。

材料：

实验动物：清洁级雄性SD大鼠40只，体质量(160±20) g，由复旦大学上海医学院实验动物科学部提供，合格证编号：2008001629497。饲养环境为12 h昼夜节律交替，室温(20±2) ℃，相对湿度(50±10)%，普通饲料喂养，自由进食与饮水。实验符合动物伦理学的要求。

药物：艾条为3∶1精制清艾绒制成，25 g/根，直径2 cm，长20 cm，购自南阳汉医艾绒有限责任公司。

方法：

动物分组：40只SD大鼠随机分为正常对照组、低剂量艾灸生成物组、中剂量艾灸生成物组、高剂量艾灸生成物组、高剂量艾灸生成物恢复组，各8只。

艾灸生成物干预：在HOPE-MED8053B燃烟动式基础染毒设备中点燃艾条，通过调节混合气(艾灸生成物)与纯净气的浓度比调控不同组别的艾灸生成物浓度(图1)。结合前期预实验结果，低、中、高剂量艾灸生成物组3组混合气(艾灸生成物)与纯净气的浓度比分别为0.4∶2.0，0.8∶2.0，1.6∶2.0。

低、中、高剂量艾灸生成物组和高剂量艾灸生成物恢复组4组大鼠，分别置于8050-1型动静洗三合一染毒柜中，按不同浓度暴露4 h/d，每周5 d，持续60 d(8周半)；高剂量艾灸生成物恢复组大鼠经60 d高剂量艾灸生成物刺激后，在空气中自然暴露21 d作为恢复期。正常对照组大鼠常规饲养。

尿液收集：60 d艾灸生成物干预结束后，正常对照组、低、中、高剂量艾灸生成物组4组大鼠分别置于代谢笼中，单笼饲养，自由饮食，收集24 h尿液，1 000 r/min离心10 min，取上清，-80 ℃保存。每份尿液样本收集时加入100 μL浓度为1 mmol/L的叠氮钠。21 d恢复期结束后，高剂量艾灸生成物恢复组大鼠也按此方法收集尿液。

尿液GC-TOFMS分析：

样本前处理：尿样室温溶解，涡旋混匀后取200 μL，12 000 r/min离心10 min。取离心后的尿液上清50 µL，加入尿素酶(Type C)30 U(10 μL)，离心1 min，37 ℃反应15 min。加入甲醇溶解的1 g/L的十七酸10 µL、水溶解的0.3 g/L氯苯丙氨酸10 µL以及甲醇170 µL，振荡30 s，12 000 r/min离心5 min，取200 µL上清于1.5 mL高回收进样瓶中，室温下真空干燥。抽干后用氮气对样品再次干燥，以保证样品中无水并排除空气中湿气对衍生的影响(衍生时，空气湿度≤35%)。氮气吹干后加入15 g/L吡啶溶解的甲氧胺80 µL，密封后振荡30 s，30 ℃摇床(220 r/min)反应90 min；反应结束后，在反应瓶中加入80 µL的N-O-双(三甲硅基)三氟乙酰胺(含1%三甲基氯硅烷)，密封后振荡30 s，70 ℃反应60 min。反应结束后，振荡10 s，室温下放置1 h后进样分析。

GC-TOFMS分析条件：DB-5MS 色谱柱，30 m×250 μm i. d．，0.25 μm；进样量1 μL。进样口温度260 ℃，程序升温：起始温度80 ℃，保持2 min，随后分别以10 ℃/min升至140 ℃，4 ℃/min升至180 ℃，10 ℃/min升至280 ℃，280 ℃保持3 min。载气为氦气，载气流速1 mL/min。电子能量70 eV，全扫描方式，m/z 30-500，离子源温度200 ℃。

主要观察指标：大鼠尿液代谢物。

统计学分析：原始数据经HAD软件(上海交通大学)进行基线校正、平滑和去噪等预处理以及峰提取和峰对齐等操作。运用SPSS(SPSS 16.0，Chicago，IL)、SIMCA-P 12.0.1+(Umetrics，Umeå，Sweden)、Excel(Microsoft，USA)、R(GNU)软件对数据进行单维和多维统计。单维分析采用t 检验，P < 0.05为差异有显著性意义。多维分析采用主成分分析、偏最小二乘判别分析和正交偏最小二乘判别分析。变量权重值(VIP)> 1为潜在代谢差异物。采用NIST library 2005、LECO/Fiehn Metabolomics Library和上海交通大学自建的标准品库进行物质鉴定。结合MetaboAnalyst 3.0(http://www.metaboanalyst.ca)、KEGG(http://www. kegg.jp)、HMDB (http://www.hmdb.ca)和METLIN (http:// metlin. scripps.edu)分析代谢物通路。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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讨论

临床艾灸，艾叶加工而成的艾绒是最常用的施灸材料。艾中富含萜类、烯类、醇类、内酯类、黄酮类、芳香族类等^[11-14]。施灸过程中，经燃烧而生成以烷烃、烯烃、芳香烃、醇、酮、酸、酯、呋喃类等物质多见的艾烟等艾灸生成物，其中，艾中的部分成分也可通过热馏转移至艾烟中^[11^，^15-16]。对艾烟等艾灸生成物的成分分析研究表明：艾烟等艾灸生成物中，既含有桉油精(1，8-桉树脑)、冰片(2-茨醇)、樟脑(2-茨酮)、4-松油烯醇、龙脑、斯巴醇、长叶薄荷酮、异泽兰黄素等对人体有益的成分，亦含有焦油、苯甲醛、苯酚、2，4-二甲基苯酚和绿花白千层醇等可能对人体不利的成分^[8^，¹¹^，^17]。目前，有关艾烟环境检测的报道结果不尽相同。Mo等^[18]报道艾灸诊室内单芳香烃、甲醛、多环芳烃的浓度较高，具有明显的健康风险。黄茶熙等^[19]认为艾灸场所内存在以艾燃烧生成物为主要来源的PM10污染。Wheeler等^[20]则报导：艾烟的检测结果与城市环境中报告结果基本水平相当；正常情况下，艾烟中的挥发性物质和CO含量均不会产生安全危害；极端情况下，艾烟中只有丙烯醛、对苯二酚2种挥发性物质含量和CO含量等于或大于安全接触水平。上述3项研究中艾绒的燃烧状态与环境各不相同，可见，艾绒的燃烧状态与环境，对艾灸安全性的评价具有重要影响。关于艾烟的细胞毒性作用方面，现有研究表明，艾烟和/或艾燃烧灰烬水提取物选择性对肿瘤细胞产生细胞毒作用，具有抗癌潜力；可剂量依赖性诱导早幼粒细胞白血病细胞(HL-60)核小体间DNA断裂，但与紫外线照射、放线菌素D治疗等阳性对照比较，艾烟对肿瘤细胞HL-60的细胞毒作用小得多^[21-25]。目前尚未见艾烟等艾灸生成物诱发肿瘤的报道。黄玉海等^[26]研究表明9-12 mg/m³浓度的艾烟对人体的血压、呼吸频率、心率、心电ST段、血氧饱和度等各项常见生理指标无明显影响，20例试验组人员中有7例出现不适症状，2例出现舒适症状，认为艾烟浓度需要适度控制，一定浓度艾烟是相对安全的，较高浓度艾烟会使人产生不适感受。作者的前期研究表明：艾灸生成物对大鼠肺形态的影响与艾灸生成物的浓度有一定相关性，艾灸生成物对大鼠肺形态的影响具有可逆性，但对大鼠脑神经系统形态无明显影响^[27-28]。可见，现阶段众多研究者们已经从艾烟等艾灸生成物的物质成分、对环境的影响、细胞毒作用、对人体/动物的影响等多方面开展了艾烟等艾灸生成物安全性评价工作，然而，尚缺乏从系统生物学角度探索艾烟等艾灸生成物对机体影响的研究报道。

机体是一个完整的生命体系，生命活动包含分子、细胞、组织、器官、个体等多个层面，代谢组学是后基因时代系统生物学的重要组成部分，通过在新陈代谢的动态过程中，提取分析相关代谢产物，揭示机体生命活动代谢本质^[29-31]。近年来代谢组研究已引起诊断学、毒理学、药理学等众多领域，包括针灸界研究者的关注^[32-37]。运用代谢组学理论与技术，可更为全面、系统地研究艾烟等艾灸生成物对机体的影响。本实验采用了3种不同浓度的艾灸生成物干预SD大鼠，从尿液代谢组学方面探讨艾灸生成物对机体的影响。与正常对照组比较，低、中、高剂量艾灸生成物组大鼠尿液代谢物，如2，5-二羟基-1H-吲哚、3，4，5-三羟基戊酸、3，4-二羟基丁酸、3-甲基己二酸、尿囊素、D-苏糖醇、L-苏糖醇、苏糖酸等，随着艾灸生成物干预浓度的增加，其含量增加，经21 d恢复期后，高剂量艾灸生成物恢复组大鼠上述尿液代谢物含量下降，显示大鼠尿液代谢物含量的波动与艾灸生成物浓度呈现一定的正相关关系，表明艾烟等艾灸生成物浓度在一定程度上对机体代谢存在影响。高剂量艾灸生成物组和正常对照组大鼠代谢物差异最为明显，两组间差异代谢物22个。与正常对照组相比，高剂量艾灸生成物组大鼠尿液差异代谢物表达含量均上调。此22个差异代谢物共参与了机体维生素C代谢等15条代谢途径，这些代谢途径主要与糖、氨基酸等代谢相关，显示艾烟等艾灸生成物对机体上述15条糖、氨基酸等代谢相关途径产生了影响。上述15条代谢途径中，差异代谢物参与影响最显著的代谢通路是维生素C代谢。差异代谢物葡萄糖醛酸和维生素C参与维生素C代谢，二者是维生素C代谢途径的终代谢产物。在人体，葡萄糖醛酸可通过葡萄苷酸化作用转化为葡糖苷酸，参与消除机体毒性物质，利于激素转运^[38-39]。维生素C具有抗氧化作用，可作为还原剂和辅酶参与多个代谢途径，参与胶原羟基化、肉毒碱和去甲肾上腺素生物合成、酪氨酸代谢和肽类激素酰胺化，是维持结缔组织和骨骼所必须的^[40-41]。值得注意的是，本实验中，与正常对照组相比，高剂量艾灸生成物组大鼠尿液差异代谢物含量上升倍数最多的也是葡萄糖醛酸和维生素C，分别为3.092倍和2.592倍，表明艾烟等艾灸生成物干预可明显影响机体维生素C代谢，促进葡萄糖醛酸和维生素C生成，机体解毒和抗氧化等作用增强。差异代谢物中，高剂量艾灸生成物组大鼠丙酮酸含量升高也较明显，是正常对照组大鼠的1.874倍。丙酮酸是一种碳水化合物、蛋白质、脂肪代谢的中间产物，本研究中，参与了三羧酸循环，缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸生物合成，丁酸甲酯代谢，丙酮酸代谢，丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢，糖酵解或糖易生，半胱氨酸和蛋氨酸代谢，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢8条代谢途径，是差异代谢物中参与代谢途径最多的，显示艾烟等艾灸生成物干预增强机体能量代谢。

值得注意的是，虽然低、中、高剂量艾灸生成物组、高剂量艾灸生成物恢复组大鼠尿液典型代谢物的波动与艾灸生成物浓度呈现一定的正相关关系，表明艾烟等艾灸生成物的浓度在一定程度上对机体代谢存在影响，但各组不同浓度艾灸生成物干预对大鼠尿液代谢物的分离趋势不明显，表明实验设定的艾灸生成物干预浓度对大鼠尿液代谢物的影响不甚明显，后续研究可进一步探讨其他不同浓度艾灸生成物干预对机体的影响，以更全面评价艾灸生成物的安全性，为灸法基础研究和灸法临床服务。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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1实验设计构思介绍：

科学、系统评价艾烟等艾灸生成物对环境与机体的影响已成为中医针灸亟待解决的关键问题之一。已有研究从艾烟等艾灸生成物的物质成分、对环境的影响、细胞毒作用、对人体/动物的影响等方面开展了相关研究，然而，尚缺乏从系统生物学角度探讨艾烟等艾灸生成物对机体影响的研究报道。本实验前期基础上，采用系统生物学研究方法——代谢组学，以SD大鼠为载体，观察不同浓度艾烟等艾灸生成物对机体的影响。

2国内外同类研究水平的介绍：

艾烟等艾灸生成物是否对环境和机体产生不良影响已越来越引起人们的重视，现阶段，大部分研究主要从艾烟等艾灸生成物的物质成分、对环境的影响、细胞毒作用、对人体/动物的影响等方面开展了相关研究，然而，尚缺乏从系统生物学角度探讨艾烟等艾灸生成物对机体影响的研究报道。

3与其他同类研究的比较：

文章率先从尿液代谢组学方面研究不同浓度艾烟等艾灸生成物对SD大鼠的影响，显示艾烟等艾灸生成物浓度与各组典型代谢物的变化呈现一定的正相关关系，影响机体维生素C代谢等15条糖、氨基酸相关代谢途径，提示艾灸生成物干预大鼠机体能量代谢增加，机体解毒、抗氧化作增强。

4文章先进性、创新性及其特色：

2015年3月30日检索PUBMED数据库，以（moxibustion OR moxa smoke） AND （metabonomics OR metabolomics）为检索词，检索MeSH Major Topic，至迄今所有文献中，未见从代谢组学角度探讨艾烟等艾灸生成物对机体影响的研究报道。检索中国知网数据库、万方数据库、维普数据库，中国生物医学文献服务系统，以（艾灸OR 艾烟 OR艾燃烧物 OR艾燃烧产物 OR艾燃烧生成物）AND代谢组学为检索词，进行主题、题名或关键词、摘要检索，至迄今所有文献中，未见从代谢组学角度探讨艾烟等艾灸生成物对机体影响的研究报道。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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艾灸生成物干预大鼠尿液代谢组学研究

Urine metabonomics of moxibustion products in rats

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