白细胞介素10与沙门菌接合性质粒介导细菌生物膜的形成

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.33.011

摘要/Abstract

摘要：

背景：既往研究发现接合性质粒pRST98可促进其宿主菌生物膜的形成，携带pRST98的菌株感染细胞和实验动物后，可促进白细胞介素10的分泌和表达。
目的：体外研究不同质量浓度白细胞介素10与接合性质粒pRST98对鼠伤寒沙门菌生物膜形成的相互影响。
方法：体外建立鼠伤寒沙门菌标准株χ3306、突变株χ3337及接合株χ3337/pRST98 3组生物膜模型，3组分别加入0(空白对照)，1，10，100 µg/L白细胞介素10，通过结晶紫染色半定量法、共聚焦激光扫描显微镜分析和扫描电镜观察，比较不同质量浓度白细胞介素10对携带和不携带接合性质粒pRST98的鼠伤寒沙门菌生物膜形成的影响。
结果与结论： ①3组组内比较：与空白对照组比较，1，10 µg/L白细胞介素10均能促进鼠伤寒沙门菌的聚集，提高生物膜形成能力，且10 µg/L质量浓度效果更明显；100 µg/L白细胞介素10抑制鼠伤寒沙门菌生物膜的形成。②3组组间比较：在同一白细胞介素10质量浓度下，接合株χ3337/pRST98组A570高于标准株χ3306组、突变株χ3337组。结果说明1，10 µg/L白细胞介素10可促进生物膜的形成，且在携带接合性质粒pRST98的情况下促进作用更明显。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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关键词: 组织构建, 组织工程, 白细胞介素10, 生物膜, 鼠伤寒沙门菌, 接合性质粒, 江苏省自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND: Previous studies discovered that pRST98, originally isolated from Salmonella enterica serovar typhimurium (S.typhimurium) could promote bacterial biofilm formation. In addition, bacterial harboring pRST98 can promote the secretion and expression of interleukin-10 after infection in cells and animals.
OBJECTIVE: In vitro studies have discovered the effects of interleukin-10 at varying concentrations and conjugative plasmid pRST98 on the biofilm formation of S.typhimurium.
METHODS: S.typhimurium wild-type strain χ3306, virulence plasmid-deletion S.typhimurium strain χ3337 and pRST98-transconjugant S.typhimurium χ3337/pRST98 were established in vitro and cultured for biofilm formation. 1, 10, 100 µg/L interleukin-10 were added during the biofilm formation. 0 µg/L interleukin-10 was set as a control. Crystal violet staining method, semi-quantitative method, confocal laser scanning microscopy and scanning electron microscopy were used to determine the effects of interleukin-10 on the biofilm formation and compare the effects of S.typhimurium with or without pRST98.
RESULTS AND CONCLUSION: Intra-group comparison showed that, compared with the control group, S.typhimurium gathered together and formed thicker biofilm in concentration of 1 and 10 µg/L of interleukin-10. The promotion effects of S.typhimurium on biofilm formation were greatly improved in 10 µg/L. Interleukin-10 in 100 µg/L inhibited S.typhimurium biofilm formation. Inter-group comparison showed that, A570 in χ3337/pRST98 was greatly higher than that in χ3306 and χ3337 under the same concentration of interleukin-10. The results indicate that both 1 and 10 µg/L of interleukin-10 promote biofilm formation, especially bacteria harboring pRST98.

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Key words: interleukin-10, biofilms, Salmonella typhimurium

中图分类号:

R318

阙凤霞，刘珍，王婷，燕婧，李嫄渊，吴淑燕，黄瑞. 白细胞介素10与沙门菌接合性质粒介导细菌生物膜的形成[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(33): 5310-5316.

Que Feng-xia, Liu Zhen, Wang Ting, Yan Jing, Li Yuan-yuan, Wu Shu-yan, Huang Rui. Interleukin-10 and conjugative plasmid of Salmonella mediate bacterial biofilm formation[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(33): 5310-5316.

图/表（结果） 5

2.1 结晶紫染色半定量法检测白细胞介素10对细菌生物膜的影响结晶紫染色结果显示，与空白对照组相比，质量浓度为1，10 µg/L的白细胞介素10在96孔板内均能促进S.typhimurium聚集，提高生物膜形成能力。特别是白细胞介素10质量浓度为10 µg/L时，S.typhimurium结晶紫染色更深，生物膜形成能力显著增加。当白细胞介素10质量浓度为100 µg/L时，与空白对照组相比生物膜形成能力受到抑制。在同一白细胞介素10质量浓度下，χ3337/pR_ST98形成生物膜的能力明显大于χ3306和χ3337(图1)。半定量结果显示，与空白对照组相比，3组S.typhimurium在白细胞介素10质量浓度为10 µg/L时，A₅₇₀远远高于空白对照组和质量浓度为1 µg/L组(P < 0.05)；当白细胞介素10的质量浓度为100 µg/L时，A₅₇₀明显低于空白对照组(P < 0.05)，提示该质量浓度抑制生物膜形成。在白细胞介素10三个质量浓度下，χ3337/pR_ST98的A₅₇₀均高于χ3306和χ3337 (P < 0.05)，见图2。

2.2 共聚焦激光扫描显微镜结果 S.typhimurium加入不同质量浓度白细胞介素10共同培养3 d后，共聚焦激光扫描显微镜断层扫描和三维重建结果显示，在1，10 µg/L时均能促进生物膜形成，生物膜形成厚度增加，质量浓度为10 µg/L时对生物膜形成的促进作用更显著；而 100 µg/L的白细胞介素10阻碍细菌生物膜形成，生物膜厚度减弱(图3，表1)。同一质量浓度下，χ3337/pR_ST98形成生物膜的厚度均大于χ3306和χ3337，其中χ3306和χ3337厚度差异不大。

2.3 扫描电镜比较结果结晶紫染色半定量和共聚焦激光扫描显微镜结果均显示白细胞介素10对生物膜形成的显著促进质量浓度为10 µg/L。当白细胞介素10质量浓度为 10 µg/L，可见3株S.typhimurium在玻片上形成厚厚的膜结构，表层细菌紧密相连，排列非常密集，呈云海状，并可见产生的胞外基质(图4)。

参考文献

[1]Wojcik OP,Kjelso C,Kuhn KG,et al.Salmonella typhimurium outbreak associated with smoked pork tenderloin in Denmark, January to March 2011. Scand J Infect Dis.2012;44(12): 903-908.
[2]Lafuente S,Bellido JB,Moraga FA,et al.Salmonella paratyphi B and Salmonella litchfield outbreaks associated with pet turtle exposure in Spain. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2013; 31(1):32-35.
[3]Crump JA,Mintz ED.Global trends in typhoid and paratyphoid Fever.Clin Infect Dis. 2010;50(2):241-246.
[4]Gole VC,Chousalkar KK,Roberts JR,et al.Effect of Egg Washing and Correlation between Eggshell Characteristics and Egg Penetration by Various SalmonellaTyphimurium Strains.PLoS One.2014;9(3):e90987.
[5]Hall-Stoodley L,Stoodley P.Evolving concepts in biofilm infections.Cell Microbiol.2009;11(7):1034-1043.
[6]He X,Ahn J.Differential gene expression in planktonic and biofilm cells of multiple antibiotic-resistant Salmonella Typhimurium and Staphylococcus aureus.. FEMS Microbiol Lett.2011;325(2):180-188.
[7]HΦiby N.A Personal History of Research on Microbial Biofilms and Biofilm Infections.Pathog Dis.2014; doi: 10.1111/2049-632x.12165.
[8]Steenackers H,Hermans K,Vanderleyden J,et al.Salmonella biofilms: An overview on occurrence, structure, regulation and eradication.Food Res Int.2012;45(2):502-531.
[9]Desin TS,Mickael CS,Lam PK,et al. Protection of epithelial cells from Salmonella enterica serovar Enteritidis invasion by antibodies against the SPI-1 type III secretion system.Can J Microbiol.2010;56(6):522-526.
[10]Spiliopoulou AI,Kolonitsiou F,Krevvata MI,et al.Bacterial adhesion, intracellular survival and cytokine induction upon stimulation of mononuclear cells with planktonic or biofilm phase Staphylococcus epidermidis. FEMS Microbiol Lett. 2012;330:56-65.
[11]Kristian SA,Birkenstock TA,Sauder U,et al.Biofilm formation induces C3a release and protects Staphylococcus epidermidis from IgG and complement deposition and from neutrophil-dependent killing.J Infect Dis. 2008;197: 1028-1035.
[12]周琳,周光炎,路丽明.IL-10的双向免疫调节作用[J].细胞与分子免疫学杂志,2012, 28(10):1100-1104.
[13]王国戗,娄婷叶,裴利宏.生物膜形成菌感染局部细胞因子的变化[J].中华医院感染学杂志,2013,23(5):969-971.
[14]Zelante T,Iannitti RG,De Luca A,et al.Sensing of mammalian IL-17A regulates fungal adaptation and virulence.Nat Commun.2012;3:683.
[15]肖黔林,周忠海,李秋丽,等.质粒分析, 噬菌体定型及耐药谱测定在伤寒流行病学调查中的应用[J].中华流行病学杂志, 1987, 5(5):272-275.
[16]黄瑞,穆荣普.伤寒沙门氏菌耐药性及其耐药质粒的监测[J].中华传染病杂志,1994,12(4):204-206.
[17]黄瑞,吴淑燕,闻玉梅.伤寒沙门菌耐药质粒pRST98介导细菌毒力的研究[J].中华微生物学与免疫学杂志,2001,21(3): 302-305.
[18]黄瑞,吴淑燕,闻玉梅.耐药质粒pRST98在不同种属肠道杆菌间的接合及表达[J].中华微生物学与免疫学杂志,2000,20(4): 302-305.
[19]Ghigo JM.Natural conjugative plasmids induce bacteria biofilm development. Nature.2001;412(6845):442-445.
[20]Wei L,Wu S,Li Y,et al.Salmonella enterica Serovar Typhi plasmid impairs dendritic cell responses to infection.Curr Microbiol.2012;65(2):133-140.
[21]Zhao G,Usui ML,Lippman SI,et al.Biofilms and Inflammation in Chronic Wounds. Adv Wound Care.2013;2(7):389-399.
[22]Zhao T,Zhao P,Cannon JL,et al.Inactivation of salmonella in biofilms and on chicken cages and preharvest poultry by levulinic Acid and sodium dodecyl sulfate. J Food Prot. 2011; 74(12):2024-2030.
[23]Bae YM,Baek SY,Lee SY.Resistance of pathogenic bacteria on the surface of stainless steel depending on attachment form and efficacy of chemical sanitizers. Int J Food Microbiol. 2012;153(3):465-473.
[24]Romling U,Bokranz W,Rabsch W,et al.Occurrence and regulation of the multicellular morphotype in Salmonella serovars important in human disease.Int J Med Microbiol. 2003; 293(4):273-285.
[25]Gerstel U,Park C,Romling U.Complex regulation of csgD promoter activity by global regulatory proteins.Mol Microbiol. 2003;49:639-654.
[26]Latasa C,Roux A,Toledo-Arana A,et al.BapA, a large secreted protein required for biofilm formation and host colonization of Salmonella enterica serovar Enteritidis.Mol Microbiol. 2005; 58:1322-1339.
[27]Fuqua WC,Winans SC,Greenberg EP.Quorum sensing in bacteria: The LuxR-LuxI family of density-responsive transcriptional regulators.J Bacteriol.1994;176(2):269-275.
[28]Dickschat JS.Quorum sensing and bacterial biofilms.Nat Prod Rep. 2010;27(3):343-369.
[29]Otto M.Bacterial evasion of antimicrobial peptides by biofilm formation.Curr Top Microbiol Immunol.2006;306:251-258.
[30]Thurlow LR,Hanke ML,Fritz T,et al.Staphylococcus aureus biofilms prevent macrophage phagocytosis and attenuate inflammation in vivo.J Immunol.2011;186: 6585-6596.
[31]Schommer NN,Christner M,Hentschke M,et al. Staphylococcus epidermidis uses distinct mechanisms of biofilm formation to interfere with phagocytosis and activation of mouse macrophage-like cells 774A.1. Infect Immun. 2011; 79:2267-2276.
[32]Hanke ML,Angle A,Kielian T.MyD88-dependent signaling influences fibrosis and alternative macrophage activation during Staphylococcus aureus biofilm infection. PLoS One. 2012;7:e42476.
[33]Hanke ML,Heim CE,Angle A,et al.Targeting macrophage activation for the prevention and treatment of Staphylococcus aureus biofilm infections. J Immunol.2013; 190:2159-2168.
[34]Prabhakara R,Harro JM,Leid JG,et al.Suppression of the inflammatory immune response prevents the development of chronic biofilm infection due to methicillin-resistant Staphylococcus aureus.Infect Immun.2011;79:5010-5018.

引言

沙门菌在自然界分布广泛，可感染人类、动物和植物，主要经污染的水和食物传播，引起人类胃肠炎、食物中毒、败血症等多种疾病。沙门菌病作为威胁公众健康最严重的疾病之一，发病率和致死率均位于细菌性疾病前列^[1-3]。尽管随着医疗卫生事业的发展，伤寒沙门菌所致的伤寒热得到有效控制，但在发展中国家，如中国部分省份，非洲的津巴布韦甚至是某些发达国家仍然是不容忽视的传染病。据统计，澳大利亚每年用于治疗和预防以沙门菌为主要病原菌引发的食源性疾病花费高达12亿美元^[4]。鼠伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar typhimurium，S.typhimurium)作为重要的人畜共患病原菌，所致疾病居于沙门菌感染的首位，占人源沙门菌感染的40%-80%。细菌以两种方式存在于自然界，一种是以游离的方式存活，这种方式只占1%，而绝大部分细菌都以一种更有利于自身存活的状态存在，即生物膜状态。美国国家健康研究所指出，80%的人类细菌性感染与生物膜的形成密切相关^[5-6]。生物膜是指细菌黏附到有生命或无生命的介质表面，产生多糖、蛋白质、核酸等多种胞外基质形成复合物^[7-8]。生物膜形成可分为3个阶段：首先是黏附阶段，即细菌蛋白与黏附介质蛋白相互作用，促进黏附；其次是细菌繁殖和成熟，产生胞外基质并包裹细菌本身的阶段；最后由于表面活性剂所致的细菌彼此间相互作用被破坏，细菌扩散，造成二次感染。细菌处于生物膜状态与游离状态相比，诸多特性发生了改变，如黏附力、侵袭力、抗性等，这也从一个方面解释了细菌耐药性增加的原因^[7]。细菌在机体外形成的生物膜，特别是在食品加工和运输过程中形成的生物膜，给大众安全带来严重隐患和危害，细菌在体内形成的生物膜可导致多种慢性感染和肝癌的发生^[9]，直接危害人类健康。

体内免疫如巨噬细胞、中性粒细胞及分泌的细胞因子与生物膜的相互作用一直是研究的热点^[10-11]。细胞因子在炎症反应过程中发挥非常重要的作用，根据其来源细胞不同，细胞因子被分为两类，Th1型和Th2型。白细胞介素10作为重要的抗炎细胞因子，能抑制多种促炎因子的产生和Th1细胞应答，参与Th2型细胞介导的抗炎反应^[12]。有研究证实生物膜形成菌在机体感染部位形成生物膜后，主要诱发了Th2型免疫反应，使白细胞介素4、白细胞介素10等细胞因子表达增加^[13]。已有文献提出真菌感染机体后会通过自身系统感知宿主免疫产生细胞因子，改变自身形态，增强黏附和毒力，促进真菌生物膜形成^[14]，提示细胞因子与生物膜形成存在一定联系。

pR_ST98是本实验室保存的自伤寒患者分离的一个相对分子质量大小为98.6×10⁶(98.6 Mu，约159 kb)的可发生接合传递的大质粒，该质粒是一种既编码细菌耐药性又能增强细菌毒力的具有双重功能的嵌合型大质粒^[15-16]，课题组前期研究发现pR_ST98很容易从伤寒沙门菌中通过接合作用转移到鼠伤寒沙门菌、大肠埃希菌、志贺氏菌等其他肠道菌中^[17-18]，从而增加耐药菌和毒力菌，给疾病预防和治疗带来困难。

Ghigo^[19]首先证实大肠埃希菌中接合性质粒能促进生物膜形成。本实验室已证实pR_ST98既能促进伤寒沙门菌生物膜形成，也可通过接合作用转移到其他肠道菌中，促进宿主菌生物膜形成。携带沙门菌接合性质粒pR_ST98的菌株感染细胞和实验动物后，可促进细胞因子白细胞介素10的分泌和表达^[20]；但白细胞介素10是否与pR_ST98对生物膜形成的促进作用有关尚未阐明。本研究通过体外实验，利用结晶紫染色半定量法，共聚焦激光扫描显微镜和扫描电镜探讨了不同质量浓度白细胞介素10与接合性质粒pR_ST98对生物膜形成的相互影响，旨在进一步为体内研究宿主免疫与生物膜的相互作用，防治生物膜相关性疾病奠定基础。

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材料方法

设计：对比观察实验。

时间及地点：于2012年11月至2013年8月在苏州大学病原生物学实验室完成。

材料：

菌株：S.typhimurium标准毒株χ3306和毒力质粒消除后的突变株χ3337由美国亚利桑那州立大学生命科学学院的Roy Curtiss Ⅲ教授惠赠。质粒pR_ST98经接合转移导入χ3337形成的S.typhimurium接合株χ3337/pR_ST98由本实验室构建。

实验方法：

细菌培养定量及生物膜模型的制备：将S.typhimurium标准毒株χ3306、毒力质粒消除后的突变株χ3337及S.typhimurium接合株χ3337/pR_ST98分别以LB肉汤培养过夜至对数生长期后，测定菌液浓度并作平板菌落计数(colony formation unit，CFU)。调整菌液浓度为 1×10⁷ CFU/mL，将等量待测菌液加入含有0.1%葡萄糖的肉汤中，以200 μL每孔加入96孔板或1 mL每孔加入24孔板，同时分别加入质量浓度为1，10，100 µg/L的白细胞介素10，并设不加白细胞介素10的为空白对照。用封口膜密封96孔板或24孔板，置于30 ℃恒温培养箱培养3 d，所有实验均重复3次。

结晶紫染色半定量法比较细菌生物膜：受试菌培养3 d后，缓慢吸出96孔板各孔菌液，PBS轻柔洗涤2次，甲醇固定10 min，空干孔内液体，加入1%结晶紫溶液200 μL染色10 min，30%乙酸溶液200 μL溶解黏附于底部和孔壁的菌膜，于酶标仪下A₅₇₀对生物膜形成进行半定量测定。

共聚焦激光扫描显微镜制样和观察：24孔板中培养的受试菌培养3 d后，沿孔壁缓慢加入PBS，形成气液凸形面，用预先处理过的小圆玻片轻柔倒扣液面，从而使得气液界面的菌膜黏附到小圆玻片上。PBS轻柔洗涤3次，滴加0.01%吖啶橙染液100 μL，黑暗中静置10 min，PBS轻柔洗涤3次，吸干玻片上的多余液体，加40%甘油固定，共聚焦激光扫描显微镜下观察。

扫描电镜生物膜样品制备和观察：按上述方法将加入10 µg/L白细胞介素10培养的菌膜转移到小圆玻片后，滴加2.5%戊二醛溶液于小圆玻片上，4 ℃固定2 h，用0.1 mol/L PBS漂洗3次，1%锇酸固定1 h，叔丁醇溶液梯度脱水，干燥，镀金后于扫描电镜下观察。

主要观察指标：各组菌膜结晶紫染色半定量法、共聚焦激光扫描显微镜分析和扫描电镜观察结果。

统计学分析：用SPSS 15.0对数据进行统计学分析，各组数据采用Student t 检验，P < 0.05为有差异的检验标准。

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讨论

当外界生存环境适宜、营养供应充足时，微生物以游离状态存在；当营养匮乏、周围环境不适宜生存时，微生物则以一种类似“静止期”的状态存活，即生物膜状态。生物膜是一种或多种微生物通过与黏附介质相互作用，向外产生胞外基质，包被微生物而形成类似“蘑菇状”的结构。生物膜既可以在无生命体表面形成，如玻璃、塑料等，也可以在有生命体表面形成，如人类、动物和植物^[21]。生物膜对于人类健康的危害，如在伤口表面、牙周炎、人体内置性医用材料表面形成生物膜等，都将加重患者病情。人体许多慢性炎症都与生物膜相关。沙门菌生物膜对人类的危害主要表现在：在胆结石表面形成生物膜后，生物膜状态下的细菌抵抗性发生改变，使得抗菌药物和机体免疫系统的作用减弱，细菌长期存活于宿主体内，造成慢性感染，甚至引发肝癌和胆囊癌；沙门菌通过黏附上皮细胞在黏膜表面形成生物膜，作为“细菌孵化所”间断释放游离菌，导致反复感染，病情加重，疾病长期迁延不愈^[22]；沙门菌生物膜存活于加工器械、食品原料等物体表面，使消毒剂的作用减弱甚至失效，造成公共安全事件^[23]。因此对沙门菌生物膜的研究非常必要。外界因素如温度、pH、渗透压等都会影响细菌生物膜形成^[24]。转录调控因子诸如RpoS，双组份调控系统等感受外界环境的变化，将信号传递给影响生物膜形成的中枢调控子curli亚基因D(csgD)^[25]，CsgD通过整合感受外界变化的信号分子并调控生物膜组成成分来控制生物膜形成^[26]，包括纤维素，curli菌毛，生物膜相关蛋白Bap，O-抗原荚膜，脂多糖及胞外DNA。除此之外，生物膜的形成还与细菌的密度感知系统密切相关。1994年Fuqua等^[27]首先提出细菌的密度感知系统，是指当细菌密度达到一定阈值时发生的感应现象。当细菌数量急剧增加时，细菌分泌的充当彼此交流作用的信息分子浓度也会相应升高，细菌就通过感知信号调整其共同行为，从而应对高密度的细菌作出共同感应。革兰阳性菌和阴性菌均存在密度感知系统，并通过密度感知系统来调控细菌的诸多功能包括生物膜形成^[28]。细菌的密度感知系统由细菌分泌的信息分子介导发挥作用。本实验室前期研究已证实质粒pR_ST98上存在rck基因，直接或间接编码与细菌生物膜相关的细菌黏附素和菌毛，从而诱导细菌生成胞外基质，促进生物膜形成。

游离菌感染机体引发急性感染，内在免疫被激活，中性粒细胞、巨噬细胞和促炎因子等都会发挥清除病原菌的作用。有研究指出，感染的宿主体内生物膜形成，会抑制促炎因子表达，逃避免疫反应^[29]。虽然证实Th2型免疫反应占主导地位，但对其发挥的作用又有不同解释。一种解释认为，细菌在体内感染部位形成生物膜可以逃避机体免疫，诱导抗炎症反应，促使抗炎因子表达，从而加重细菌感染，细菌生物膜形成也更加牢固^[30-33]。而另一种解释则认为抗炎因子产生的原因是为了清除细菌，保护机体^[34]。在BALB/c小鼠中，白细胞介素2、白细胞介素10增高，以此来保护机体，抵抗金黄色酿脓葡萄球菌生物膜形成所引起的慢性疾病。本实验前期研究证实，携带pR_ST98的宿主菌建立体内外感染模型时，能抑制干扰素γ分泌，促进白细胞介素10分泌。体内建立的生物膜模型也证实，在生物膜形成的早期阶段与白细胞介素10表达相关。

本实验发现1，10 µg/L的白细胞介素10在体外均能促进S.typhimurium形成生物膜，且其对携带接合性质粒pR_ST98的细菌生物膜形成促进作用更加明显；当质量浓度为100 µg/L时，生物膜形成则受到抑制。推测适宜浓度的白细胞介素10使细菌处于活跃状态，增强细菌黏附，并使生物膜相关基因表达发生改变。本实验结果显示，中、低浓度的白细胞介素10对生物膜的促进作用，在携带和不携带接合性质粒pR_ST98的S.typhimurium中有明显差异，提示适宜浓度的白细胞介素10可有效促进生物膜形成。推测白细胞介素10作为细胞炎症因子，不利于细菌生存，转录调控因子感受外界这一不利因素后，整合信息并作用CsgD，产生更多胞外基质；此外，白细胞介素10上调pR_ST98上生物膜相关基因的表达，如rck等，使生物膜形成相关的黏附素和菌毛增多，促进细菌彼此粘连，从而促进生物膜形成。

由于接合性质粒pR_ST98极其容易在不同肠道菌中传递，除了导致耐药菌株和毒力菌株的增多外，该质粒对生物膜形成的促进作用亦可进一步造成感染加重。课题组将在体内模型上进一步探讨pR_ST98促进生物膜形成的作用与白细胞介素10介导的免疫应答两者之间的相互影响，为生物膜相关性疾病的防控和新药研发提供理论和实验依据。

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