文题释义：
藤黄酸：是从传统中药藤黄中提取的化合物，抗癌作用与一般化疗药不同，对肿瘤细胞的抑制有较高的选择性，能选择性杀伤肿瘤细胞且在有效剂量范围内毒副作用较小，对正常动物造血及免疫系统功能没有影响。
蛋白C受体：是一种内皮Ⅰ型跨膜受体，可增强凝血酶(Ⅱa) -凝血调节蛋白复合物对蛋白C的激活作用。诸多证据表明，蛋白C受体在乳腺干性和人类肿瘤发生中也发挥着作用。最近，蛋白C受体被鉴定为多能性小鼠乳腺干细胞的标记物，同时也被证明在3D培养中对于人乳腺上皮细胞的细胞组织和生长是必需的。
摘要
背景：藤黄酸对乳腺癌具有很强的细胞毒性，可有效杀伤三阴性乳腺癌干细胞，但潜在的机制尚不清楚。
目的：探讨藤黄酸对三阴性乳腺癌干细胞的杀伤作用及可能的机制。
方法：使用PharmMapper数据库预测藤黄酸的靶点蛋白，使用String网站构建各药物靶点蛋白互作网络关系，使用Cytoscape软件构建活性成分-作用靶点网络，通过R语言软件对潜在靶点进行KEGG信号通路富集分析。采用CCK-8法检测不同浓度藤黄酸对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231活力的影响，筛选适宜的作用浓度。采用细胞球培养法富集MDA-MB-231细胞干细胞，经过不同浓度(0，0.5，1.0，2.0 μmol/L)藤黄酸作用24 h，TUNEL荧光染色与流式细胞仪检测干细胞凋亡，qPCR与Western blot检测蛋白C受体表达，Western blot检测p-PI3K、p-AKT、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达；将干细胞分4组培养：空白对照组(干细胞不做任何处理)、siRNA-NC组、siRNA-蛋白C受体组和siRNA-蛋白C受体+PI3K激动剂组，培养36 h后，采用Western blot法检测p-PI3K、p-AKT、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达。
结果与结论：①网络药理学发现，三阴性乳腺癌干细胞标志物蛋白C受体是藤黄酸的作用靶点之一；KEGG富集分析涉及细胞凋亡、上皮生长因子受体、RAS和PI3K-AKT信号通路等；②CCK-8检测结果显示，藤黄酸可抑制MDA-MB-231细胞活力，半数抑制浓度IC50值为(1.18±0.34) μmol/L，因此后续实验选择浓度0.5，1.0，2.0 μmol/L；③TUNEL荧光染色和流式细胞术检测证实，藤黄酸以剂量依赖的方式诱导三阴性乳腺癌干细胞凋亡(P < 0.05)；qPCR和Western blot检测证实，藤黄酸可下调蛋白C受体mRNA和蛋白表达，下调Caspase-3、p-PI3K和p-AKT蛋白表达，上调Cleaved Caspase-3蛋白表达(P < 0.05)；siRNA-蛋白C受体转染实验也进一步证实，敲低三阴性乳腺癌干细胞蛋白C受体表达可提升Cleaved Caspase-3蛋白表达(P < 0.05)、下调PI3K/AKT信号通路磷酸化水平(P < 0.05)，而应用PI3K激动剂740 Y-P能够降低Cleaved Caspase-3蛋白表达(P < 0.05)、提升p-PI3K和p-AKT的磷酸化水平(P < 0.05)，一定程度上改善细胞凋亡情况；④结果表明，藤黄酸可能通过下调蛋白C受体来发挥三阴性乳腺癌及干细胞杀伤及诱导凋亡作用，进一步的分子机制可能和PI3K/AKT信号通路抑制有关。
https://orcid.org/0000-0001-5779-3476 (李溯)
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程
