回肠代膀胱家兔模型制作中不同的麻醉药物

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.49.021

中国组织工程研究 ›› 2014, Vol. 18 ›› Issue (49): 7990-7994.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2014.49.021

• 器官移植动物模型 organ transplantation and animal model • 上一篇下一篇

回肠代膀胱家兔模型制作中不同的麻醉药物

沈俭¹，黄春霞²，余云兰²，刘洪新¹，程志军^2，3

上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院，¹泌尿科，²麻醉科，上海市 202150； ³上海市崇明新华癌痛转化研究所，上海市 202150

修回日期:2014-10-31 出版日期:2014-11-30 发布日期:2014-11-30
通讯作者: 程志军，硕士，副主任医师，上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院麻醉科，上海市 202150；上海市崇明新华癌痛转化研究所，上海市 202150
作者简介:沈俭，男，1971年生，上海市人，汉族，1994年上海交通大学医学院毕业，副主任医师，主要从事泌尿系统肿瘤、泌尿系统组织修复方面的研究。

Anesthetics in establishment of rabbit models of ileal neobladder

Shen Jian¹, Huang Chun-xia², Yu Yun-lan², Liu Hong-xin¹, Cheng Zhi-jun^{2, 3}

¹Department of Urology, ²Department of Anesthesiology, Xinhua Hospital (Chongming), Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai 202150, China; ³Xinhua Translational Institute for Cancer Pain, Shanghai 202150, China

Revised:2014-10-31 Online:2014-11-30 Published:2014-11-30
Contact: Cheng Zhi-jun, Master, Associate chief physician, Department of Anesthesiology, Xinhua Hospital (Chongming), Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai 202150, China; Xinhua Translational Institute for Cancer Pain, Shanghai 202150, China
About author:Shen Jian, Associate chief physician, Department of Urology, Xinhua Hospital (Chongming), Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai 202150, China

摘要/Abstract

摘要：

背景：家兔回肠代膀胱模型制作对麻醉要求较高，需要手术野清晰，术毕恢复迅速，麻醉药物及方法的选择不影响肠道平滑肌的蠕动。

目的：比较水合氯醛和乌拉坦对家兔回肠代膀胱模型制作的麻醉效果。

方法：18只家兔随机等分为乌拉坦组和水合氯醛组，分别用体积分数10%水合氯醛2 mL/kg和体积分数20%乌拉坦5 mL/kg实施耳缘静脉麻醉后，于原膀胱外1 cm处离断双输尿管，种植于回盲部10 cm处切取的15 cm肠段，建立回肠代膀胱模型。

结果与结论：2组家兔麻醉后心率均较麻醉前出现明显下降(P ≤ 0.05)，但2组间差异无显著性意义(P > 0.05)。与水合氯醛组相比，乌拉坦组兔被麻醉的持续时间、苏醒时间过长，死亡率高。说明水合氯醛是适合家兔回肠代膀胱模型制作的安全长效的麻醉剂。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

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关键词: 实验动物, 组织工程, 回肠代膀胱, 动物模型, 麻醉, 水合氯醛, 乌拉坦, 围术期, 麻醉剂

Abstract:

BACKGROUND: The anesthesia process is required strict in establishing rabbit models of ileal neobladder. It is required for cleaning operation field, quick postoperative recovery, and the choice of anesthetics and anesthesia does not influence smooth muscle peristalsis.

OBJECTIVE: To compare the anesthetic effects between urethane and chloral hydrate in rabbits with ileal neobladder.

METHODS: Eighteen rabbits were randomly assigned to urethane and chloral hydrate groups, and were respectively anesthetized with 20% urethane 5 mL/kg and 10% chloral hydrate 2 mL/kg through the ear vein. Double ureter was dissociated at 1 cm outside original bladder, and 15 cm-intestine obtained from 10 cm of ileocecal junction was implanted so as to establish models of ileal neobladder.

RESULTS AND CONCLUSION: Heart rates were significantly lower compared with these before anesthesia in all cases (P ≤ 0.05), but no differences were detected between two groups (P > 0.05). Compared with the chloral hydrate group, the maintain time and recovery time were longer and the mortality rate was higher in the urethane group. Above data indicated that chloral hydrate is a safe long-acting anesthetic in establishing rabbit models of ileal neobladder.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

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Key words: ileum, urinary bladder, anesthesia, anesthetics

中图分类号:

R318

沈俭，黄春霞，余云兰，刘洪新，程志军. 回肠代膀胱家兔模型制作中不同的麻醉药物[J]. 中国组织工程研究, 2014, 18(49): 7990-7994.

Shen Jian, Huang Chun-xia, Yu Yun-lan, Liu Hong-xin, Cheng Zhi-jun. Anesthetics in establishment of rabbit models of ileal neobladder [J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2014, 18(49): 7990-7994.

图/表（结果） 2

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引言

膀胱癌是指发生在膀胱黏膜上的恶性肿瘤，在国内泌尿系肿瘤中发病率居首位，膀胱癌可发生于任何年龄，甚至于儿童，且发病率随年龄增长而增加，高发于50-70岁。苯胺、二氨基联苯、2-萘胺、1-萘胺都是膀胱癌的致癌物，长期接触这类化学物质者患膀胱癌的概率增加^[1-11]。目前全膀胱切除加尿流改道仍是其治疗的金标准，而以回肠代膀胱重建膀胱功能为目前的研究热点^[12-14]。多数研究以家兔为实验模型动物，观察其术后泌尿系统组织的再生与重建情况以及膀胱的功能情况，以此来评价手术治疗的效果并推动今后的组织工程学替代进程^[15]。由于家兔回肠代膀胱手术比较复杂，持续时间较长，手术野要求较高，术后需要实验动物长期生存，且因为测压和测量容积的需求，要求麻醉因素不影响肠道平滑肌蠕动，因此，对麻醉药物与麻醉方式的选择要求较高^[16-19]。

水合氯醛作为麻醉用药可在30 min内即诱导入睡，催眠作用温和，不缩短快速眼动睡眠，无明显后遗作用，作用机制可能与巴比妥类相似，引起近似生理性睡眠，无明显后作用，较大剂量有抗惊厥作用，可用于小儿高热等引起的惊厥，大剂量可引起昏迷和麻醉，抑制延髓呼吸及血管运动中枢，导致死亡。乌拉坦通过抑制乙酰胆碱酯酶的活性，造成乙酰胆碱的积累，影响了实验动物正常的神经传导而起麻醉作用。

因此实验在家兔回肠代膀胱手术模型制作的基础上，用动物实验最常用的两种麻醉药物水合氯醛和乌拉坦对家兔分别进行耳缘静脉麻醉，观察比较围术期及术后较长期的家兔的生存及死亡状态。

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材料方法

设计：随机对照动物实验。

时间及地点：实验于2014年2至7月在上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院科研中心及上海市崇明新华癌痛转化研究所动物实验室完成。

材料：

实验动物：健康清洁级实验家兔18只，兔龄4个月，雌雄各半，体质量2.07-3.09 kg，平均(2.58±0.51) kg，购于上海交通大学医学院实验动物科学部SYXK(沪)2013- 0050。于温度为25 ℃的净化实验室内，以颗粒饲料喂养并完成实验。实验过程中对动物的处置方法符合2009年《Ethical issues in animal experimentation》相关动物伦理学标准的条例。

药物：水合氯醛粉剂(国药集团化学试剂有限公司，批号为20130918)，以生理盐水配置成10%水合氯醛溶液，且每10 mL 10%水合氯醛溶液含0.5 mL 2%利多卡因。

乌拉坦，又名氨基甲酸乙酯(国药集团化学试剂有限公司，批号为20130720)，以生理盐水配置成20%乌拉坦溶液，消毒备用。

方法：

动物分组：18只家兔随机分为乌拉坦组和水合氯醛组，各9只

麻醉：

乌拉坦组：用20%乌拉坦溶液按5 mL/kg的剂量，经家兔耳缘静脉注射给药，缓慢推注直到达到麻醉满意状态，推注速度2.0-3.0 mL/min。推注过程中观察家兔睫毛、角膜反射和呼吸频率，术中根据需要可适当追加0.5-1.0 mL/kg 的剂量。

水合氯醛组：用10%水合氯醛溶液按2 mL/kg的剂量，经家兔耳缘静脉注射给药，缓慢推注直到达到麻醉满意状态，推注速度2.0-3.0 mL/min。推注过程中观察家兔睫毛、角膜反射和呼吸频率，术中根据需要可适当追加0.2- 0.5 mL/kg的剂量^[20-21]。

回肠代膀胱模型的制作：兔全麻后固定于操作台上，腹部备皮消毒铺巾，无菌条件于下腹正中切口打开皮肤，皮下组织，进入腹腔，以回肠系膜为标志找到回肠，距回盲部10 cm处切取15 cm肠段，保留血管弓，以生理盐水纱布保护，丝线端端吻合重建回肠连续性。轻轻分离膀胱顶部及后壁，剥离出双输尿管，在膀胱外1 cm处离断，种植于切取肠段形成的新膀胱内。游离肠段一端荷包缝合，另一端留置引流管且夹闭，以丝线缝合恢复管状。游离肠段远端固定于腹壁，引流管拉出腹腔固定于腹部皮肤，以 50 mL灭滴灵冲洗腹腔后关腹，完成模型待苏醒后进行膀胱压力和容积的测定。

麻醉效果判断：以Philips多功能监护仪监测实验兔的呼吸频率和心率。优：睫毛、角膜反射消失，呼吸频率30- 50次/min且平稳，以腹式呼吸为主，心率120-150次/min，骨骼肌完全松弛，触觉、痛觉消失，麻醉持续时间60 min以上，对手术切割、牵拉无反应。良：睫毛角膜反射减弱，触觉消失，呼吸频率30-50次/min且平稳，以腹式呼吸为主，心率120-150次/min，骨骼肌松弛，手术切割、牵拉时有感觉且躁动，需追加少量麻药才能手术。差：给药后镇静、镇痛效果差，骨骼肌不能完全松弛，不能进行保定，需继续追加麻药才能手术^[22]。

麻醉持续效果的评价：记录家兔的麻醉诱导时间(从注射麻醉药物开始到家兔无自主活动的时间)，麻醉维持时间(从麻醉诱导结束到术后家兔出现疼痛反应的时间)，麻醉苏醒时间(从出现疼痛反应到站立行走时间)以及死亡率[含术前、术中或术后(非手术原因)]。①诱导期(麻醉显效时间)：自肌肉或静脉注射麻醉药物至实验家兔出现麻醉状态的时间。动物在此期间表现为肌张力下降，精神萎靡，头颈下垂，呼吸平稳，痛觉慢慢消失，进入麻醉状态。②麻醉期(麻醉维持时间)：动物进入麻醉状态到开始苏醒时间。在维持期表现为呼吸平稳，肌肉松弛，手术切割及牵拉无反应，痛觉消失，睫毛反射、角膜反射消失。③苏醒期(苏醒时间)：从开始苏醒(出现疼痛反应)到站立行走时间。此时表现为动物呼吸频率加快，睫毛和角膜反射恢复，肢体开始活动至完全能站立行走。

主要观察指标： 水合氯醛及乌拉坦两种麻醉方法中实验兔的麻醉诱导时间，维持时间，苏醒时间，死亡率及围术期心率和呼吸频率的变化。

统计学分析：采用SPSS 13.0软件包统计分析。其中定量资料以x(_)±s表示，组间比较用采成组方差分析；计数资料采用秩和检验，以P ≤ 0.05为差异有显著性意义。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植；肝移植；移植；心脏移植；组织移植；皮肤移植；皮瓣移植；血管移植；器官移植；组织工程

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讨论

家兔性情温顺、体型不大、便于管理，广泛地应用于各种实验的动物模型。实验为建立家兔回肠代膀胱手术模型，由于手术复杂，持续时间较长，术后需较长期地观察实验兔的膀胱压力及膀胱容积，故对家兔的麻醉要求较高^[23-25]。本实验排除了影响手术视野的腹腔注射麻醉，因家兔耳缘静脉表浅、明显、易于操作，实验时采用了家兔耳缘静脉麻醉，麻醉药物选择了对肠道平滑肌蠕动影响较小的水合氯醛和乌拉坦^[26-29]，对麻醉效果进行了全面评价。

实验结果显示两组麻醉起效均迅速平稳，维持时间足够完成手术，且两组手术过程中镇痛均比较完善，家兔钳夹无躁动挣扎。乌拉坦的麻醉机制与巴比妥类相似^[30-33]，但作用更温和，肌肉松弛效果好，对家兔的呼吸、血压、心率影响小，可运用于心血管、呼吸、泌尿等多个系统的大多数实验中^[34-40]，实验结果也证实与麻醉前比较，家兔的心率有明显抑制而呼吸抑制作用并不明显。尽管有研究报道乌拉坦麻醉镇痛作用较弱^[41]，术中可能有实验动物的挣扎，但本实验证实在这一药物浓度下，家兔麻醉镇痛效果良好。

本实验结果同时证实：乌拉坦组麻醉维持时间与苏醒时间相对水合氯醛组明显更长，且家兔气道内分泌物较多，死亡率明显高于水合氯醛组。由于家兔个体体质的差异，乌拉坦对家兔麻醉后的苏醒时间变得更加无法控制，甚至影响到术后家兔膀胱测压与膀胱容积的测定。

水合氯醛常规作为催眠与抗惊厥药，同样广泛应用于动物实验的麻醉，其机制也与巴比妥类相似^[42-47]。据报道水合氯醛麻醉过程中可抑制呼吸中枢和心血管中枢，使呼吸频率和心率减慢，另外也可引起动物体温下降，但抑制作用不强，且可随着麻醉时间的延长而逐渐减弱^[48-50]。

本实验结果显示与麻醉前比较，家兔的心率有明显抑制而呼吸抑制作用并不明显。有研究报道发现水合氯醛腹腔麻醉可导致麻痹性肠梗阻^[51-53]，本实验中可能由于术后苏醒较快，血供良好，药物代谢迅速等原因，家兔的肠道蠕动并无明显影响，不干扰膀胱压力和容积的测定。且本实验中水合氯醛组死亡率为0，麻醉效果及清醒后家兔状态均良好，完全适合家兔回肠代膀胱手术模型的麻醉。

综上所述，由于乌拉坦静脉麻醉相对较高的死亡率和麻醉苏醒时间的相对不可控性，水合氯醛耳缘静脉麻醉是家兔回肠代膀胱手术较适合的麻醉方式，10%水合氯醛 2 mL/kg的浓度和剂量是安全有效的。

回肠代膀胱家兔模型制作中不同的麻醉药物

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