L型钙通道在碱性成纤维细胞生长因子调控软骨细胞增殖中的作用

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.50.006

中国组织工程研究

• 软骨组织构建 cartilage tissue construction • 上一篇下一篇

L型钙通道在碱性成纤维细胞生长因子调控软骨细胞增殖中的作用

王强，何金山，熊传芝，冯新民，王静成，颜连启，陈鹏涛，蔡俊

江苏省苏北人民医院骨科，江苏省扬州市 225001

修回日期:2013-10-08 出版日期:2013-12-10 发布日期:2013-12-10
通讯作者: 蔡俊，硕士，主治医师，江苏省苏北人民医院骨科，江苏省扬州市 225001 13952579389@126.com
作者简介:王强★，男，1974年生，江苏省泰州市人，汉族， 1999年南京大学医学院毕业，硕士，副主任医师，主要从事关节置换及关节内、关节周围创伤的临床医疗科研工作。 wangqiangyz@sina.com
基金资助:
扬州市后备人才基金*；江苏省苏北人民医院院级基金资助项目(NJPH200910)*

Effects of the L-type calcium channels on chondrocytes in response to basic fibroblast growth factor

Wang Qiang, He Jin-shan, Xiong Chuan-zhi, Feng Xin-min, Wang Jing-cheng, Yan Lian-qi, Chen Peng-tao, Cai Jun

Department of Orthopedics, Northern Jiangsu People’s Hospital, Yangzhou 225001, Jiangsu Province, China

Revised:2013-10-08 Online:2013-12-10 Published:2013-12-10
Contact: Cai Jun, Master, Attending physician, Department of Orthopedics, Northern Jiangsu People’s Hospital, Yangzhou 225001, Jiangsu Province, China 13952579389@126.com
About author:Wang Qiang★, Master, Associate chief physician, Department of Orthopedics, Northern Jiangsu People’s Hospital, Yangzhou 225001, Jiangsu Province, China wangqiangyz@sina.com
Supported by:
the Backup Talented Man Foundation of Yangzhou City*; the Northern Jiangsu People’s Hospital Foundation of Jiangsu Province, No. NJPH200910*

摘要/Abstract

摘要：

背景：L型钙通道作为电压依赖式钙通道的一种，是细胞外钙离子进入细胞内的主要途径，在维持细胞的形态及生理活动上起重要作用，具有单通道电导较大，通道衰减较慢，通道开放持续时间较长的特点，以往研究表明碱性成纤维细胞生长因子能够促进体外培养的软骨细胞的增殖。
目的：利用膜片钳技术探讨L型钙通道在碱性成纤维细胞生长因子对软骨细胞增殖分化调控中的作用。
方法：取3日龄新西兰兔关节软骨细胞，培养至第2代后，随机分为实验组和对照组，关节软骨细胞分别在含有10 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子及不含生长因子的培养液中培养。采用膜片钳记录L型钙通道在碱性成纤维细胞生长因子作用下的开放情况。然后采用激光共聚焦显微镜观察碱性成纤维细胞生长因子培养2周后软骨细胞内游离钙离子浓度。最后用Cell Titer单溶液细胞增殖反应试剂盒分析连续培养8 d软骨细胞增殖情况和免疫组织化学染色方法观察培养10 d后软骨细胞合成Ⅱ型胶原情况。
结果与结论：碱性成纤维细胞生长因子对L型钙通道的开放有一定的抑制作用，导致细胞内游离钙离子浓度降低(P < 0.01)。碱性成纤维细胞生长因子培养的软骨细胞与常规条件下培养的软骨细胞相比细胞数量增多 (P < 0.01)，Ⅱ型胶原染色面积明显增大(P < 0.05)。结果证实，碱性成纤维细胞生长因子能够通过抑制L型钙通道的开放使软骨细胞内钙离子浓度维持在较低水平，以此促进软骨细胞的增殖和分化。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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关键词: 组织构建, 软骨组织构建, 软骨细胞, 碱性成纤维细胞生长因子, 钙离子, 钙通道, 膜片钳, 组织工程

Abstract:

BACKGROUND: L-type calcium channels, as a kind of voltage-dependent calcium channel, is the main way of extracellular calcium ions into the cell, and play an important role in maintaining cell morphology and physiological activities, characterized by a large single-channel conductance, slow channel attenuation, and longer duration of channel opening. Previous studies showed that basic fibroblast growth factor can promote the proliferation of chondrocytes cultured in vitro.
OBJECTIVE: To explore the effect of the L-type calcium channels on regulating chondrocyte proliferation and differentiation in response to basic fibroblast growth factor with patch-clamp.
METHODS: The chondrocytes were harvested from the joints of 3-day-old New Zealand rabbits. The second passage of chondrocytes was divided into experimental group and control group. Chondrocytes were incubated in media containing 10 μg/L basic fibroblast growth factor and media alone separately. The opening of L-type calcium channels under the action of basic fibroblast growth factor was detected by patch-clamp. The intracellular calcium concentration was detected with laser confocal microscopy in the chondrocytes after 2 weeks of culture with basic fibroblast growth factor. Chondrocyte proliferation was analyzed by Cell Titer kit after 8 days of culture. Type Ⅱ collagen was assessed quantitatively by immunohistochemistrical staining after 10 days of culture.
RESULTS AND CONCLUSION: Basic fibroblast growth factor has an inhibitory effect on the opening of the L-type calcium channels, resulting in a decrease in intracellular free calcium concentration (P < 0.01). Cell number was higher after culture with basic fibroblast growth factor than that cultured under conventional condition (P < 0.01), and staining area of type II collagen significantly increased (P < 0.05). Results verified that basic fibroblast growth factor can maintain intracellular Ca2+ concentration at a low level by inhibiting the opening of L-type calcium channels, which can promote the proliferation and differentiation of chondrocytes.

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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Key words: patch clamp, L-type calcium channel, chondrocytes, cell proliferation, cell growth factor

中图分类号:

R318

王强，何金山，熊传芝，冯新民，王静成，颜连启，陈鹏涛，蔡俊. L型钙通道在碱性成纤维细胞生长因子调控软骨细胞增殖中的作用[J]. 中国组织工程研究, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.50.006.

Wang Qiang, He Jin-shan, Xiong Chuan-zhi, Feng Xin-min, Wang Jing-cheng, Yan Lian-qi, Chen Peng-tao, Cai Jun. Effects of the L-type calcium channels on chondrocytes in response to basic fibroblast growth factor[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.50.006.

图/表（结果） 4

2.1 兔软骨细胞L型钙通道电流密度收集第2代软骨细胞，用膜片钳检测L型钙通道电流密度。与对照组比较，实验组L型钙通道最大电流密度显著降低(P < 0.01)，见表1，图1。

2.2 碱性成纤维细胞生长因子培养的兔软骨细胞增殖情况分析见表2。

取第2代兔软骨细胞后，连续培养8 d。分别对实验组和对照组吸光度值进行比较，实验组吸光度值明显高于对照组(P < 0.01)。说明碱性成纤维细胞生长因子能有效促进软骨细胞的增殖。实验组软骨细胞增殖比对照组更快。
2.3 碱性成纤维细胞生长因子培养的软骨细胞内钙离子浓度变化培养2周后，取软骨细胞进行细胞内钙离子浓度测定。通过荧光染料与细胞内游离钙离钙结合后，在激光共聚焦显微镜下激发荧光，当钙离子浓度高时，结合的荧光染料多，相同条件下激发的荧光更亮。实验组和对照组细胞质内均有绿色荧光阳性染色产物。实验组软骨细胞吸光度值为4 670.51±841.07，而对照组软骨细胞吸光度值为5 588.08±548.26，实验组软骨细胞吸光度值较对照组降低(P < 0.05)，见图2。说明实验组软骨细胞内钙离子浓度低于对照组。

2.4 碱性成纤维细胞生长因子培养的软骨细胞胞中Ⅱ型胶原的表达培养10 d后，对软骨细胞爬片进行Ⅱ型胶原免疫组织化学染色，结果发现实验组和对照组均有棕黄色的Ⅱ型胶原免疫组织化学阳性染色，染色深度两组差异无显著性意义(P=0.121)。但实验组的阳性染色面积比对照组大(P=0.015)。结果发现：实验组Ⅱ型胶原阳性染色的面积百分比为(0.79±0.12)%，对照组为(0.68±0.15)%，实验组Ⅱ型胶原染色面积大于对照组 (P < 0.05)。说明经过10 d的培养实验组的软骨细胞增殖数量比对照组多，见图3。两组染色深度吸光度值，实验组为113.05±11.57，对照组为118.15±7.10，两者差异无显著性意义(P > 0.05)。说明实验组和对照组的软骨细胞分泌Ⅱ型胶原的能力相同，细胞质量相近。

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引言

由于关节软骨缺乏再生的能力，临床上各种原因引起的关节软骨的损伤是医生治疗的棘手问题。软骨钻孔、自体或异体软骨移植、自体骨膜软骨膜移植等传统的治疗方法难以取得满意的效果^[1-4]。其中自体关节软骨移植在临床上取得了一定的疗效，但存在供区受限、增加移植创伤等问题。当关节软骨缺损发展至严重骨关节炎阶段，则必须接受人工关节置换，创伤大、费用高，远期并发症较多。
随着软骨组织工程的不断发展，为软骨组织缺损的修复提供了新的方法^[5]。为了构建出具有良好功能及活性的组织工程化软骨并能够符合临床应用的需要，仍面临着很多亟待解决的问题。其中关键就是种子细胞来源不足的问题。如何培养出足够数量的软骨细胞是目前研究的一个热点。软骨细胞作为软骨组织工程理想的种子细胞也有自身的局限性，软骨细胞在体外单层培养时表现出有限生长的特性，即经过一定的倍增后逐渐失去增殖能力而停止分裂, 常规培养条件下无法获得足够数量功能和活性良好的软骨细胞^[6]，在体外培养扩增后容易发生去分化^[7]，从而丧失增殖能力和原有的表型是目前软骨组织工程面临的一个难题^[8]。
生长因子具有调节软骨细胞增殖、分化及代谢功能^[9]，因此有望通过生长因子的刺激，达到细胞数量的扩增。有研究表明，序贯的使用合适浓度的生长因子组合，能够有效促进软骨细胞增殖和代谢^[10]。

但是，细胞因子作为细胞外信号是如何转换成细胞内信号进而促进软骨细胞生长分化的机制还不清楚。谢金元等^[11]于2007年利用膜片钳技术从离子通道和电生理的角度探讨了电压依赖性钙通道参与保护脊髓神经细胞的作用。L型钙通道的开放情况在细胞因子调节软骨细胞生长增殖中起到怎样的作用缺少相关报道。

为了观察软骨细胞钙通道在碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)作用下的开放情况，实验采用膜片钳技术测量碱性成纤维细胞生长因子作用下L型钙通道电流密度变化，及其对细胞内游离钙离子浓度的调节。初步探讨L型钙通道在碱性成纤维细胞生长因子对软骨细胞调控中的作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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材料方法

设计：细胞学体外实验。

时间及地点：实验于2012年9月至2013年4月在南京医科大学生理学实验室完成。

材料：健康3日龄新西兰乳兔4只，购买于南京金陵种兔场，许可证号SCXK (苏)2002-0025。

软骨细胞培养试剂与仪器：

方法：

兔关节软骨细胞的分离培养：处死3日龄乳兔，乙醇消毒后解剖分离四肢关节软骨，修剪成约1 mm³，用体积分数0.25%胰酶消化30 min，弃上清，PBS漂洗后，用体积分数0.2%Ⅱ型胶原酶消化3 h。用200目滤网过滤，滤液经1 500 r/min离心5 min收集细胞。将细胞悬液浓度调整为5×10⁷ L^-1，接种于细胞培养板。每周换液2次。待细胞达到80%融合后，用体积分数2.5%胰酶消化传代。

兔软骨细胞的鉴定：取第2代软骨细胞，调整细胞浓度为1×10⁸ L^-1，接种于预涂多聚赖氨酸的盖玻片，将盖玻片放于6孔细胞培养板内在盖玻片上培养。培养3 d。取出盖玻片，用PBS漂洗2次后用丙酮4 ℃固定30 min。PBS洗涤，Ⅱ型胶原单克隆抗体(1∶200)4 ℃过夜，再次漂洗后，加生物素化二抗(1∶500)室温孵育20 min，洗涤后，加SABC 20 min，DAB显色试剂盒显色^[12]。Ⅱ型胶原阳性的软骨细胞的呈棕黄色。

细胞接种和分组：取第2代细胞^[13]，调整细胞浓度为5×10⁷ L^-1，分别接种于预涂多聚赖氨酸的盖玻片和96孔细胞培养板。待细胞贴壁24 h后，将细胞随机分为实验组和对照组，每组3孔。实验组加入含10 μg/L 碱性成纤维细胞生长因子的1640培养液中培养，对照组在不含碱性成纤维细胞生长因子的1640培养液中培养，其余条件均相同。

软骨细胞增殖曲线分析：取第2代细胞，按2 500个/孔(每孔含100 μL培养液)接种于96孔板，每组3×8孔。实验组加入含10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子的1640培养液，对照组为不含碱性成纤维细胞生长因子的1640培养液。连续培养8 d，每隔2 d换液1次。每天取两组各3个孔分别以CellTiter 96AQueous^®单溶液细胞增殖反应试剂分析盒测定增殖活性^[15]，每组测定样本3例，取吸光度值的平均值。吸光度值的高低与软骨细胞的数量成正比。

免疫组织化学染色：培养10 d后，分别取出实验组和对照组3个盖玻片，用PBS漂洗2次后用丙酮4 ℃固定 30 min。PBS洗涤，小鼠抗兔Ⅱ型胶原单克隆抗体 (1∶200) 4 ℃过夜，再次漂洗后，加生物素化二抗 (1∶500)室温20 min，用PBS洗涤后，加试剂SABC 20 min，DAB显色试剂盒显色。在显微镜下观察Ⅱ型胶原分泌情况并且收集图像资料。采用Image-pro plus软件系统对Ⅱ型胶原免疫组织化学染色面积和染色深度进行半定量分析。用棕黄色染色面积占图像总面积的百分比表示Ⅱ型胶原染色面积。每个样本分别取3个视野计算染色面积百分比和吸光度值，取平均数。

全细胞膜片钳记录：取第2代软骨细胞，将软骨细胞悬液(2滴)滴入预先盛有电极外液的培养皿中。给药 10 min 内，利用Hamill的实验方法^[14]，电压钳制由AXOPATCH 200B 放大器和Pulse+Pulsefit V8.53 软件操纵。数据经由采集放大后，通过模数转换器(A/D)连接于计算机，进行数据采集、记录和处理。记录软骨细胞跨膜L型钙通道变化情况，保持电压(HP)在-40 mV灭活T型钙通道电流和钠通道电流。检测电位(TP)从 -40 mV到+50 mV，阶跃10 mV，脉宽200 ms，间隔3 s。用平均膜电流与膜电容之比表示电流密度(1 d)，单位为pA/pF。每组分别检测5个细胞并记录结果。

软骨细胞内钙离子浓度测定：分组培养2周后，分别从实验组和对照组中取出3个盖玻片，用PBS洗涤2次，Fluo-3荷载20 min，再次漂洗后，于激光共聚焦显微镜下观察细胞内荧光强度。采用Image-pro plus软件将荧光强度转换为吸光度值进行定量分析。

主要观察指标：各组软骨细胞的L型钙通道电流密度，软骨细胞增殖情况。细胞内钙离子浓度，Ⅱ型胶原免疫组织化学染色面积。

统计学分析：计量资料以x(_)±s表示，采用SPSS 11.5 统计学软件进行数据分析，组间数据的比较采用两样本t 检验，检验水准α=0.05。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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讨论

膜片钳是从分子水平研究钙离子通道对细胞生理功能调节的技术。该技术记录通过细胞膜上的各种离子通道的离子电流来反映细胞膜上单一的或多个的离子通道活动情况。Neher和Sakmann^[16]于1976 年首次报道了用膜片钳技术记录到细胞膜离子单通道，并于1991 年以此获得诺贝尔生理学与医学奖。随着膜片钳技术应用于心血管生理学、药理学、病理生理学及神经科学等领域研究中，使离子通道研究达到细胞分子水平，解决了大量的理论和实际问题。自1981年以来,该技术已经在不同动物的肝、脾、胃肠、心肌、骨骼肌、神经系统及内分泌等各类细胞上应用并取得了研究成果^[14]，给生命科学研究带来了巨大的前进动力^[17-18]。也是研究药物对离子通道活性影响的最直接手段。本次实验应用该技术，研究碱性成纤维细胞生长因子对软骨细胞膜L型钙通道电流的影响。

碱性成纤维细胞生长因子能够促进软骨细胞的增殖。实验在体外培养8 d的时间里，分别对每日的软骨细胞增殖数量进行比较，发现实验组的软骨细胞增殖明显快于对照组，并且随着时间的延长，此差距更加明显。在碱性成纤维细胞生长因子促进软骨细胞分裂增殖方面实验的结果和以往的实验结果一致。说明碱性成纤维细胞生长因子能够加快体外培养的软骨细胞的增殖，增加相同培养时间内所获得的软骨细胞的数量。

碱性成纤维细胞生长因子可以抑制软骨细胞L型钙离子通道电流。在软骨细胞中主要存在L型(long-lasting)和T型(transient)钙离子通道。L型钙通道因其电导大且其通道开放时间长而得名，而T型主要是由于其电导较低且其通道开放时间较短暂而得名。本实验保持电位为-40 mV，这样排除了T-型钙离子通道的干扰，也有效避免钠电流的影响，数据均取自给药后10 min 内的结果，在此时间内基本上没有电流衰竭，从而保证了实验结果的可靠性。在各组间细胞膜电容相当的情况下，在用碱性成纤维细胞生长因子刺激后的软骨细胞最大膜电流明显减少，单位时间内由细胞外通过L型钙离子通道进入细胞内的钙离子明显减少。

目前，有关碱性成纤维细胞生长因子在软骨细胞中调控的研究如下(CNKI：按主题词排序)：

文题	作者	单位	发表时间
胰岛素样生长因子-I、碱性成纤维细胞生长因子和透明质酸钠对藻酸钙载体—关节软骨细胞复合物的生物学效应	汤旭日	第二军医大学	2005-04-01
bFGF对体外培养的兔软骨细胞的胶原合成和稳定细胞表型的作用	冯明利，雍宜民，沈惠良，等	首都医科大学学报	2001-03-21
碱性成纤维细胞生长因子对体外培养的兔软骨细胞合成蛋白多糖的影响	冯明利，雍宜民，沈惠良，等	首都医科大学学报	2003-09-21
补肾益气活血方含药血清对兔软骨细胞增殖和bFGF-mRNA表达的影响	唐勇，姜杰，孟辉，等	时珍国医国药	2006-05-20
成纤维细胞生长因子对体外培养的兔软骨细胞增生的作用	冯明利，雍宜民，沈惠良，等	首都医科大学学报	2001-09-21
碱性成纤维细胞生长因子对无血清培养大鼠生长板软骨细胞的影响	季煜华，曾耀英，俞瑜	暨南大学学报(自然科学与医学版)	2005-12-30
BMP-14与bFGF对大鼠关节软骨细胞体外增殖作用的实验研究	于尧	中国医科大学	2009-03-01
bFGF对人关节软骨细胞增殖和凋亡的影响	周新社，戴尅戎，汤亭亭，等	解剖与临床	2004-12-30
碱性成纤维细胞生长因子对生长板软骨细胞增殖与分化的影响(英文)	吴凤麟，宇丽，汪卓赟	中国组织工程研究与临床康复	2008-12-09
b-FGF、IGF-Ⅰ对体外培养的兔关节软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响	苏新	南京医科大学	2006-04-01
碱性成纤维细胞生长因子对生长板软骨细胞增殖与分化的影响	宇丽，吴凤麟，汪卓赟	中国生物工程杂志	2005-02-25
IGF-Ⅰ与bFGF对体外培养的豚鼠肋软骨细胞增殖和代谢的影响	刘利锋，薛瑛，屠军波，等	第四届中国国际暨第七次全国口腔颌面外科学术会议论文集	2005-10-01
碱性成纤维细胞生长因子对兔甲状软骨细胞的影响	杨彩荣，马崧，马季青，等	医药论坛杂志	2005-05-30
抗骨增生片对兔膝骨关节炎软骨细胞bFGF及bFGF-mRNA的影响	汪福东，郭义娟，董立新，等	中国中医骨伤科杂志	2012-12-15
成纤维细胞生长因子和胰岛素促小鼠软骨细胞增殖分化的效应(英文)	史剑波，江逊，狄静芳，等	中国临床康复	2005-03-14

碱性成纤维细胞生长因子能够降低软骨细胞内钙离子浓度。软骨细胞内钙离子浓度与其增殖能力密切相关。细胞内钙离子浓度的变化是细胞生理功能的重要物质基础，广泛参与基因转录、蛋白质合成、细胞生长分化等多种重要的生理活动^[19]。有实验证实细胞内钙离子浓度与骨细胞的Ⅰ型胶原蛋白的表达存在量效关系^[21]。本次实验认为细胞内钙离子浓度维持在一定范围内，有利于软骨细胞生理功能的稳定；钙离子浓度过高或者过低都会造成不利的影响，当钙离子浓度过低时，会造成细胞内缺乏重要的第二信使，影响细胞正常的增殖分化。Beit-Or等^[20]实验发现随着培养时间的延长，体外培养的软骨细胞内游离钙离子浓度逐渐降低，并且软骨细胞逐渐丧失增殖分化的能力；钙离子浓度过高，则会引起细胞内钙离子超负荷，诱发细胞的凋亡。只有在某个生理范围内的钙离子浓度的高低变化才能起到调节软骨细胞的增殖作用。

碱性成纤维细胞生长因子对软骨细胞内Ⅱ型胶原合成有一定的促进作用。由于碱性成纤维细胞生长因子能够促进软骨细胞的增殖，行Ⅱ型胶原免疫组化染色后，镜下见碱性成纤维细胞生长因子组软骨细胞密度大于对照组，与细胞增殖分析的结果一致，所以软骨细胞内Ⅱ型胶原染色面积较对照组明显增大，进一步说明软骨细胞的数量更多。而反映Ⅱ型胶原质量的染色吸光度值差异无显著性意义，说明碱性成纤维细胞生长因子促进Ⅱ型胶原合成是通过增加软骨细胞的数量来实现的，而不是直接促进软骨细胞内Ⅱ型胶原蛋白合成来实现。

这次实验利用膜片钳技术证实了L型钙离子通道的抑制能使软骨细胞内钙离子浓度维持在一个较低的水平。通过借鉴其他学科中膜片钳技术的应用经验，成功的将该技术引入到软骨细胞体外培养的实验中，来研究钙离子通道参与软骨细胞增殖的调节。实验采用碱性成纤维细胞生长因子刺激软骨细胞，用膜片钳研究L型钙通道开放情况。通过对L型钙通道电流密度的检测，发现碱性成纤维细胞生长因子能够抑制软骨细胞L型钙离子通道电流密度，使单位时间内通过跨膜转运进入细胞质的钙离子减少。以往未见类似的报道。为了证实钙通道电流密度的减少可以下调细胞内钙离子浓度。本次实验用激光共聚焦显微镜检测软骨细胞内的游离钙离子浓度，结果发现实验组的软骨细胞内游离钙离子浓度较低。证实了钙通道电流密度的减少可以下调细胞内钙离子浓度的推论。

总之，L型钙通道介导的细胞内钙离子浓度的降低在碱性成纤维细胞生长因子调节软骨增殖中起着重要的作用。实验认为维持细胞内游离钙离子稳定在相对较低的水平，有利于加快软骨细胞的增殖，但是对于促进软骨细胞增殖的最佳钙离子浓度以及随着软骨细胞体外培养时间的延长这种钙离子通道的作用是否能够持续存在还有待进一步研究证实。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

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L型钙通道在碱性成纤维细胞生长因子调控软骨细胞增殖中的作用

Effects of the L-type calcium channels on chondrocytes in response to basic fibroblast growth factor

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