来源于前列腺周围脂肪的脂肪干细胞膜片培养与鉴定

doi:10.12307/2026.782

中国组织工程研究 ›› 2026, Vol. 30 ›› Issue (19): 4860-4866.doi: 10.12307/2026.782

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来源于前列腺周围脂肪的脂肪干细胞膜片培养与鉴定

周术奎，刘金鹏，高文隆，杨盛柯，廖洪，吴毅，李曾

四川省肿瘤医院·研究所，四川省肿瘤临床医学研究中心，四川省癌症防治中心，电子科技大学附属肿瘤医院泌尿外科，四川省成都市 610041

收稿日期:2025-09-10 接受日期:2025-11-11 出版日期:2026-07-08 发布日期:2026-02-13
通讯作者: 李曾，硕士，副主任医师，副研究员，四川省肿瘤医院·研究所，四川省肿瘤临床医学研究中心，四川省癌症防治中心，电子科技大学附属肿瘤医院泌尿外科，四川省成都市 610041
作者简介:周术奎，男，1985年生，四川省成都市人，汉族，2017年上海交通大学毕业，博士，主治医师，副研究员，主要从事泌尿系肿瘤和修复重建的临床与基础研究。
基金资助:
四川省自然科学基金面上项目(2024NSFSC0699)，项目负责人：周术奎

Culture and identification of adipose-derived stem cells from periprostatic adipose tissue

Zhou Shukui, Liu Jinpeng, Gao Wenlong, Yang Shengke, Liao Hong, Wu Yi, Li Zeng

Department of Urology, Sichuan Clinical Research Center for Cancer, Sichuan Cancer Hospital & Institute, Sichuan Cancer Center, University of Electronic Science and Technology of China, Chengdu 610041, Sichuan Province, China

Received:2025-09-10 Accepted:2025-11-11 Online:2026-07-08 Published:2026-02-13
Contact: Li Zeng, MS, Associate chief physician, Associate researcher, Department of Urology, Sichuan Clinical Research Center for Cancer, Sichuan Cancer Hospital & Institute, Sichuan Cancer Center, University of Electronic Science and Technology of China, Chengdu 610041, Sichuan Province, China
About author:Zhou Shukui, MD, Attending physician, Associate researcher, Department of Urology, Sichuan Clinical Research Center for Cancer, Sichuan Cancer Hospital & Institute, Sichuan Cancer Center, University of Electronic Science and Technology of China, Chengdu 610041, Sichuan Province, China
Supported by:
Natural Science Foundation of Sichuan Province (General Program), No. 2024NSFSC0699 (to ZSK)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：

前列腺周围脂肪组织：包绕前列腺周围的脂肪库，前列腺周围脂肪组织通过旁分泌效应或细胞间相互作用调节前列腺微环境。
细胞膜片：通过连续培养，刺激种子细胞分泌细胞外基质，形成一种复杂的三维结构来高度模拟自然组织，由于未经过胰酶消化，能完整地保留细胞外基质和细胞间连接，细胞损伤小，细胞凋亡率低。

摘要
背景：前列腺周围脂肪组织是最接近前列腺的白色内脏脂肪组织，属于前列腺癌肿瘤微环境的一部分，在前列腺癌发生和进展中起关键作用。
目的：观察前列腺周围脂肪组织来源脂肪干细胞形成三维细胞膜片的能力。
方法：选取拟行前列腺癌根治术患者，术中切取前列腺周围脂肪组织，采用酶消化联合机械切割方式制成脂肪干细胞悬液，CCK-8试剂盒检测脂肪干细胞增殖情况，流式细胞仪检测干细胞相关抗原CD34/CD44/CD45/CD90/CD105表达，采用成骨/成脂/成软骨诱导分化试剂盒检测干细胞多向分化潜能。将前列腺周围脂肪组织来源脂肪干细胞用含100 μg/mL维生素C、体积分数10%胎牛血清的低糖DMEM培养液连续培养3周构建细胞膜片，进行组织学分析和扫描电镜观察。
结果与结论：①前列腺周围脂肪组织来源脂肪干细胞呈长纺锤体或长梭形，同向生长，形态较为一致；原代培养9-10 d可达到95%细胞融合，细胞活性良好，连续传代到第15代时仍未见明显细胞衰老迹象；②流式细胞检测CD44、CD90和CD105表达率为98.24%，84.99%和89.14%；CD34和CD45表达率为0.64%，1.02%；经成骨/成脂/成软骨诱导3周后，前列腺周围脂肪组织来源脂肪干细胞能多向分化诱导为成骨细胞、成脂肪细胞和成软骨细胞；③前列腺周围脂肪组织来源脂肪干细胞经连续培养3周即可形成三维细胞膜片组织，表面光整，质地均匀，其中纤连蛋白和Ⅰ型胶原蛋白等细胞外基质含量丰富；扫描电镜观察结果显示膜片表面平整，长梭形细胞排列方向一致，细胞间大量胞外基质沉积。该实验从前列腺癌患者前列腺周围脂肪组织中原代分离脂肪干细胞，通过维生素C刺激细胞外基质分泌，连续培养3周成功构建细胞三维膜片。

https://orcid.org/0000-0002-6319-723X(周术奎)

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

关键词: 前列腺癌, 前列腺周围脂肪组织, 脂肪干细胞, 细胞外基质, 细胞膜片

Abstract: BACKGROUND: Periprostatic adipose tissue is the white visceral adipose tissue that closest to the prostate, which is part of the prostate cancer microenvironment and plays a key role in the occurrence and progression of prostate cancer.
OBJECTIVE: To investigate the ability of adipose-derived stem cells derived from periprostatic adipose tissue to form three-dimensional cell sheets.
METHODS: Periprostatic adipose tissue was harvested from patients undergoing radical prostatectomy. Adipose-derived stem cell suspensions were prepared using a combination of enzymatic digestion and mechanical dissection. Adipose-derived stem cell proliferation was assessed using a CCK-8 assay. Expression of stem cell-associated antigens CD34/CD44/CD45/CD90/CD105 was determined by flow cytometry. Multidirectional differentiation potential of the stem cells was assessed using osteogenic/adipogenic/chondrogenic differentiation assays. Adipose-derived stem cells were cultured for three weeks in low-glucose DMEM supplemented with 100 μg/mL vitamin C and 10% fetal bovine serum to form cell sheets. Histological analysis and scanning electron microscopy were performed.
RESULTS AND CONCLUSION: (1) The cell morphology of periprostatic adipose-derived stem cells was long spindles or long spindles, grew in the same direction and relatively consistent. After 9-10 days of primary culture, 95% of the cells were fused, and the cell activity was good. No obvious signs of cell senescence were seen even when the cells were passed through passage 15. (2) The expression rates of CD44, CD90, and CD105 were 98.24%, 84.99% and 89.14%, respectively. The expression rates of CD34 and CD45 were 0.64% and 1.02%. After 3 weeks of osteogenic/lipogenic/chondrogenic induction, periprostatic adipose tissue-adipose-derived stem cells could be induced into osteoblast, adipoblast, and chondroblast in multiple directions. (3) Continuous culture of periprostatic adipose tissue-adipose-derived stem cells for 3 weeks could form three-dimensional cell sheet tissue. The surface of the sheet was smooth with uniform texture, and it was rich in extracellular matrix, such as fibronectin and type 1 collagen. The results of scanning electron microscopy observation showed that the surface of the cell sheet was smooth and the long spindle-shaped cells were arranged in a consistent direction, with a large amount of extracellular matrix deposited between cells. In this study, adipose-derived stem cells were successfully isolated from prostate cancer patient derived periprostatic adipose tissue. Vitamin C was used to stimulate extracellular matrix secretion, and three-dimensional cell membranes were successfully constructed after three weeks of continuous culture.

Key words: prostate cancer, periprostatic adipose tissue, adipose-derived stem cells, extracellular matrix, cell sheet

中图分类号:

周术奎, 刘金鹏, 高文隆, 杨盛柯, 廖洪, 吴毅, 李曾. 来源于前列腺周围脂肪的脂肪干细胞膜片培养与鉴定[J]. 中国组织工程研究, 2026, 30(19): 4860-4866.

Zhou Shukui, Liu Jinpeng, Gao Wenlong, Yang Shengke, Liao Hong, Wu Yi, Li Zeng. Culture and identification of adipose-derived stem cells from periprostatic adipose tissue[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2026, 30(19): 4860-4866.

图/表（结果） 4

2.1 前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞原代分离后生长情况及细胞活力 细胞贴壁前呈球状，胞浆透亮、均匀，接种24 h后可观察到少量细胞贴壁，呈不规则多角形，大小形态不一，连续培养9-10 d可达95%以上细胞融合，细胞呈长纺锤体或长梭形，同向生长，形态较为一致(图2)，原代细胞传代后细胞增殖速度明显加快，按照1∶3传代后四五天细胞融合度即可达到95%以上，细胞连续传代到第15代时仍未见明显衰老迹象，上述结果表明前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞增殖能力强、细胞活性良好。通过CCK-8试剂盒检测传代后细胞增殖变化，结果显示接种24 h即可良好贴壁，至第5天达到生长平台期后基本维持稳定，生长曲线与光镜下观察结果基本一致。

2.2 流式鉴定干细胞表型 流式细胞仪检测第2代前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞中干细胞相关抗原CD34/CD44/CD45/CD90/CD105的表达，其中CD45和CD34属于血源性干细胞标记物，结果显示CD44、CD90和CD105 表达率分别为98.24%，84.99%和89.14%；CD34，CD45表达率分别为0.64%和1.02%，符合干细胞表型标记，见图3。

2.3 前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞成骨/成脂/成软骨多向分化潜能 与未诱导细胞相比(图4A-C)，细胞成骨诱导3周，茜素红染色显示大量红染钙质结节沉积(图4D)，成脂诱导3周，油红染色显示大量红染脂滴(图4E)，成软骨诱导3周，阿利新蓝染色显示软骨细胞呈蓝色(图4F)，上述结果进一步证实前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞具有强大的多向分化潜能。

2.4 前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞膜片培养与鉴定结果 经维生素C刺激前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞分泌细胞外基质，在体外连续培养3周后收获膜片状物(图5A)，表面平滑，灰白样外观，质地均匀，具有较好的机械性能，能用镊子提起(图5B)；光镜下观察细胞膜片表面细胞分布纵横交错，局部细胞走行一致(图5C)，扫描电镜观察细胞膜片表面平整，长梭形细胞排列方向一致，细胞间大量胞外基质沉积(图5D)。苏木精-伊红染色(图5E)显示，细胞之间紧密连接形成三维片状结构，厚度50-70 μm。细胞膜片中细胞外基质蛋白含量丰富，马松染色观察到大量蓝染胶原分布(图5F)，纤连蛋白(图5G)和Ⅰ型胶原蛋白(图5H)免疫组化染色强阳性表达，呈现棕黄色广泛分布。

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引言

前列腺癌是最常见的男性泌尿生殖系肿瘤[1-2]，也是全球男性癌症死亡的第二大原因，仅次于肺癌。肥胖在推动前列腺癌侵袭性和死亡率增加方面起着重要作用。世界癌症研究基金会将肥胖与晚期前列腺癌风险之间的联系列为“强有力的证据”[3]。前列腺周围脂肪组织(peri-prostatic adipose tissue，PPAT)是包围前列腺表面的脂肪层，主要由白色脂肪细胞构成，属于内脏脂肪，形成前列腺组织生长微环境，较多的前列腺周围脂肪组织形成是晚期前列腺癌的特征之一，并参与前列腺癌发病机制和转移进程[4]。前列腺周围脂肪组织作为一种活跃的内分泌器官，能产生肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、脂联素等激素和细胞因子，在前列腺癌的生长和转移中发挥作用，能够影响前列腺癌脂质微环境和炎症状态[5]。多因素Cox回归分析显示，高体积前列腺周围脂肪组织(前列腺周围脂肪组织/前列腺体积比> 73%)为腹腔镜下前列腺癌根治术后生化复发的独立危险因素，且高体积前列腺周围脂肪组织患者Gleason评分和病理T分期均较高[6]。
间充质干细胞是一类多能、可分化的基质细胞，具有增殖、分化、多能性、归巢/迁移、营养和免疫调节等治疗作用，其中临床应用最多的间充质干细胞来源于骨髓、脐血和脂肪组织[7]。具有干细胞样特性的脂肪祖细胞被称为脂肪基质细胞，即脂肪干细胞，能不断分化成脂肪中各类细胞成分，维持脂肪组织细胞的交替更新。脂肪干细胞通过重塑细胞外基质和支持新血管形成，促进免疫抑制细胞的募集，并通过旁分泌信号传导诱导上皮-间质转化来促进肿瘤生长[5]。由于上皮-间质转化与癌症化疗耐药和转移有关，因此脂肪干细胞被认为是前列腺癌治疗的潜在靶点。
该研究对前列腺癌患者前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞进行原代培养及鉴定，并观察这种脂肪干细胞形成细胞膜片的能力，为后续研究开展奠定良好基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

材料方法

1.1 设计 细胞学实验性研究。实验方案设计见图1。

1.2 时间及地点 实验于2024年1-12月在四川省肿瘤医院放射肿瘤学四川省重点实验室完成。
1.3 材料 胎牛血清购自美国Gibco公司；0.25%胰酶、CCK-8试剂盒、低糖DMEM培养液和双抗均购自武汉赛维尔生物科技有限公司；细胞滤网购自成都拓山生物科技有限公司；细胞培养耗材购自武汉赛维尔生物科技有限公司；Ⅰ型胶原酶购自美国Worthington公司；iCell间充质干细胞成骨/成脂/成软骨诱导分化试剂盒、茜素红染色试剂盒、油红染色试剂盒和阿利新蓝染色试剂盒均购自上海赛百慷生物技术股份有限公司；FITC标记鼠抗人CD34/CD44/CD45/CD90/CD105购自北京四正柏生物科技有限公司；细胞膜片培养用维生素C购自美国Sigma公司(货号：A4544)。
实验所用人前列腺周围脂肪组织来源于四川省肿瘤医院，已获得患者知情同意。该研究经四川省肿瘤医院医学伦理委员会审批，批准号：SCCHEC-02-2024-101。
1.4 实验方法
1.4.1 前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞原代分离培养 共有6例接受前列腺癌根治术患者纳入研究，均施行机器人辅助腹腔镜手术，平均年龄为(69.0±10.9)岁(49-78岁)，平均初始前列腺特异性抗原为(15.0±4.71) ng/mL，术后病理分期pT2b-pT3b，危险分层均为中高危，其中3例高危，3例中危。参照之前课题组脂肪干细胞原代分离方法[8-9]，术中切取前列腺周围脂肪组织，大小约2.0 cm×2.0 cm×1.0 cm，切取时注意避免使用能量器械，尽可能去除脂肪表面筋膜组织和血管，PBS冲洗3次，每次1 min，用眼科剪尽量剪碎脂肪组织后转移至50 mL离心管中，加入2倍体积的0.1% Ⅰ型胶原酶，37 ℃、1 000 r/min振荡消化1 h，加入适量含体积分数10%胎牛血清的低糖DMEM培养液制成细胞悬液，100目不锈钢滤网过滤，滤液进行1 500 r/min离心5 min；弃去细胞上清液，沉淀用含体积分数10%胎牛血清的低糖DMEM培养液重悬，以1×108 L-1细胞浓度接种于100 mm培养皿中，在37 ℃、体积分数5% CO2、95%湿度的CO2孵育箱中培养，避免振动。
1.4.2 前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞传代 待72 h原代细胞贴壁后予以首次换液，以后每3 d换液1次，一般于9-10 d细胞融合达到95%以上，PBS轻柔冲洗1次，0.25%胰蛋白酶消化后1∶3传代。细胞传代后置于37 ℃、体积分数5% CO2培养箱内继续培养，可选择第2代细胞进行冻存。
1.4.3 CCK-8检测传代前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞增殖情况 第2代细胞生长融合至95%以上，胰酶消化，1 000 r/min离心5 min收集细胞，用含体积分数10%胎牛血清的低糖DMEM培养液重悬，接种至96孔板中，每组6个孔，每孔100 μL，约2 000个细胞，每3 d换液1次，每天在相同时间点每孔加入CCK-8试剂10 μL，与孔内培养液体积比为1∶10，在37 ℃、体积分数为5% CO2细胞培养箱中培养2 h，用酶联免疫分析仪测定450 nm波长处各孔吸光度值，共检测7 d，观察传代后脂肪干细胞增殖情况，绘制生长曲线。
1.4.4 流式细胞仪检测前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞标志物表达 取第2代对数生长期细胞，消化后调整细胞浓度为1×1010 L-1，制备细胞悬液，流式细胞仪检测干细胞相关抗原CD34/CD44/CD45/CD90/CD105的表达。取6支流式细胞管，每管分别加入细胞悬液100 µL，用吸管吹打均匀，分别加入FITC标记的鼠抗人CD34抗体2 µL，FITC标记的鼠抗人CD44抗体2 µL，FITC标记的鼠抗人CD45抗体2 µL，FITC标记的鼠抗人CD90抗体2 µL，FITC标记的鼠抗人CD105抗体2 µL，混匀后置室温避光孵育30 min，PBS洗3次，弃上清液，将细胞重新悬浮于500 μL PBS，上流式细胞仪检测，每份标本检测1×105个细胞，以荧光抗体染色阳性细胞的百分率记录结果，以未进行抗体孵育细胞作为阴性对照，考虑到干细胞标志物表达强阳或强阴性，流式图分群清晰明显，未设置同型对照。
1.4.5 前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞的多向分化潜能 设置未分化诱导脂肪干细胞作为对照组，利用iCell间充质干细胞成骨/成脂/成软骨诱导分化试剂盒进行干细胞多向诱导分化，将脂肪干细胞在上述诱导液中连续培养3周，分别使用茜素红染色观察成骨诱导效果；使用油红染色观察成脂诱导效果；使用阿利新蓝染色观察成软骨诱导效果，检测脂肪干细胞多向分化潜能。
1.4.6 前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞膜片培养 选取第2代活性良好的前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞，接种于60 mm普通培养皿中，接种密度为5×104/cm2，待细胞融合生长达到100%时，更换为含100 μg/mL维生素C、体积分数10%胎牛血清的低糖DMEM培养液继续培养，每隔1 d换液1次，只换液不传代，连续培养3周即可成膜，换液时注意37 ℃水浴预热培养液，轻拿轻放，避免振荡，成膜后可将细胞膜片用镊子轻柔完整撕下。
1.4.7 前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞膜片鉴定分析 待细胞膜片培养成熟后，用40 g/L多聚甲醛固定，进行常规石蜡切片，行苏木精-伊红染色、马松染色。同时，行细胞外基质蛋白标志纤连蛋白和Ⅰ型胶原蛋白免疫组化染色，切片脱蜡入水，柠檬酸钠(pH 6.0)溶液水浴煮沸30 min进行抗原修复，5% BSA封闭常温30 min，一抗(纤连蛋白 1∶500稀释，Ⅰ型胶原蛋白 1∶1 000稀释)4 ℃孵育过夜，PBS清洗5次，HRP-二抗37 ℃孵育45 min，DAB(1∶50)显色15 min，终止显色后苏木精复染，乙醇梯度脱水后中性树胶封固，正置显微镜观察。另外，细胞膜片培养成熟后，取大约1 cm2细胞膜片样品，生理盐水清洗3遍，1.25%戊二醛4 ℃预固定2 h，0.1 mol/L磷酸缓冲液清洗3次，每次15 min，1%饿酸4 ℃固定2 h，乙醇梯度脱水，临界点干燥仪中干燥约2 h，用双面胶将干燥样品粘贴于样品台上，喷金3 min，扫描电镜观察拍照。

1.5 主要观察指标 ①前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞原代分离后生长情况及细胞活力；②前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞标志物表达及多向分化潜能；③前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞膜片形貌；④前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞膜片组织学形态，免疫组化分析纤连蛋白和Ⅰ型胶原蛋白表达。

讨论

肥胖是一种以过量白色脂肪组织积累为特征的代谢紊乱状态，并具有遗传特性[10]。全球范围内的肥胖问题正在加剧，从1990年到2022年男性肥胖患病率从4.8%增加到14.0%，几乎增加了3倍[11]。肥胖是导致癌症风险增加的主要危险因素之一[12]。该研究采用胶原酶消化联合机械切割方式，从前列腺癌患者前列腺周围脂肪组织中成功地原代分离出高纯度脂肪干细胞，传代后细胞活性好、增殖快，具有强大的成骨/成脂/成软骨多向分化潜能，能连续培养构建细胞膜片，为后续研究前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞在前列腺癌中的串扰致病机制奠定良好基础。
脂肪组织是一种代谢活跃的器官，在体内广泛分布，根据解剖位置被分为内脏脂肪组织和皮下脂肪组织。相较而言，内脏脂肪组织通过分泌各种内分泌和旁分泌递质在肿瘤发生发展过程中发挥更积极作用。前列腺周围脂肪组织位于骨盆区域，主要包绕前列腺被膜，1/3的前列腺直接接触前列腺周围脂肪组织。与皮下脂肪组织相比，前列腺周围脂肪组织具有独特的形态和功能特征，表现为前列腺周围脂肪组织中脂肪细胞较小，具有相同的基础脂肪分解率，但释放的多不饱和脂肪酸种类较少，对异丙肾上腺素诱导的脂肪分解更敏感，可以影响前列腺癌脂质微环境和炎症状态[13]。共聚焦显微镜和三维重建显示，前列腺周围脂肪组织的血管网络稀疏，广泛分布致密的纤维胶原网络，表明该组织缺氧和易产生炎症[14]。通常在T2加权mpMRI正中矢状面测量从耻骨联合至前列腺之间的最短垂直距离为前列腺周围脂肪组织厚度。前列腺周围脂肪组织厚度/体积与前列腺癌患者预后存在相关性。BHINDI等[15]研究表明，前列腺周围脂肪组织厚度是高级别前列腺癌的危险因素，前列腺周围脂肪组织厚度每增加1 mm可观察到前列腺癌检出率增加12%，高级别前列腺癌检出率增加20%。UZUN等[16]多因素Logistic回归分析显示前列腺周围脂肪组织厚度是高危前列腺癌患者根治性前列腺切除术后复发的独立危险因素(OR=1.358， 95%CI=1.081-1.707，P=0.009)，同时前列腺周围脂肪组织厚度> 3 mm是术后病理升期的独立危险因素。XIONG等[17]研究表明前列腺周围脂肪组织厚度是具有临床意义前列腺癌的独立预测因子，具有临床意义前列腺癌(Gleason评分为> 6)患者的前列腺周围脂肪组织厚度大于无临床意义前列腺癌(Gleason评分≤6)患者，4.78 mm vs. 4.52 mm，P=0.041。
脂肪干细胞是间充质干细胞的一种亚型，优势在于能通过低创吸脂术获得，具有分化为多种细胞谱系潜力和免疫调节特性，并通过分泌细胞因子和生长因子来促进组织再生[18]。由于自体来源，使脂肪干细胞成为人体组织再生治疗的潜在来源，这将显著降低所涉及的成本、风险和法律法规，从而在实际临床实践中得到更广泛应用。前列腺周围脂肪组织中富含间充质干细胞，这是前列腺肿瘤间质的潜在来源，与前列腺增生患者相比，前列腺癌患者的前列腺周围脂肪组织中脂肪干细胞含量明显增加，这表明前列腺周围脂肪组织是脂肪干细胞储存库，具有向前列腺肿瘤迁移的潜力[19]。脂肪干细胞具有活性好、迁移能力强和促毛细血管形成的能力，可直接或转分化为支持性基质细胞(如内皮细胞和肌成纤维细胞)，进入肿瘤部位并促进肿瘤生长。原代细胞分离方法强烈影响脂肪干细胞产量，目前原代培养方法没有最优解和标准流程。ALSTRUP等[20]采用酶解法与机械切割相结合方法分离脂肪干细胞，通过流式细胞术和集落形成能力定量测定干细胞产量，结果显示与常规酶消化相比，加入机械切割后，脂肪干细胞产量达到140×103/g，这是目前文献报道中最高数据，同时切除脂肪组织中获取的脂肪干细胞数量提升5倍，抽脂脂肪组织中获取的脂肪干细胞数量提升2.3倍。因此，该研究同样采取酶消化联合机械切割方法原代分离脂肪干细胞，优势在于切割处理后脂肪组织更细小，增加了脂肪组织表面积，有助于消化酶充分消化。影响脂肪干细胞产量和增殖能力的患者因素包括年龄、体质量指数、性别、绝经状态、供者部位、HIV状态和癌症治疗等[21]。随着年龄增长，脂肪干细胞的增殖和分化能力显著下降，该研究患者平均年龄达到(69.0±10.9)岁，脂肪干细胞传代后5 d细胞融合度才能达到95%以上，生长曲线进入平台期，较早前课题组培养的动物来源脂肪干细胞明显更慢，分析可能与患者年龄较大，导致脂肪干细胞含量下降及活性降低有关。间充质干细胞通常表现为成纤维细胞样形态，黏附于塑料培养物，高表达间充质标志物，如CD105、CD73和CD90，以及低表达(≤2%)造血标志物，如CD45、CD34、CD14、CD11b、CD19和HLA-Ⅱ[22]。该研究流式测定细胞低表达CD34(0.64%)和CD45 (1.02%)，高表达CD44(98.24%)，CD90(84.99%)和CD105 (89.14%)，证实为间充质干细胞类型。脂肪干细胞在诱导培养基中培养14 d或21 d后，能多向分化诱导为成骨细胞、成脂肪细胞和成软骨细胞，茜素红染色显示细胞外基质中有高密度矿化结节，油红染色证实脂肪干细胞胞质中存在大量脂质空泡，阿利新蓝染色证实细胞外基质中存在广泛糖胺聚糖分布。
仿生细胞培养致力于通过工程方法在体外为细胞创造一个仿生微环境，使细胞能够生长、增殖、分化和通讯，并保持细胞在体内的代谢活动和功能。细胞的仿生培养在疾病建模、药物开发和筛选、干细胞研究等方面具有巨大的应用潜力。细胞膜片技术作为一种新的组织工程方法日益受到关注，它可以在不使用支架的情况下制成三维组织结构，类似于细胞仿生培养，脂肪干细胞膜片已应用于心肌梗死治疗[23]、视网膜萎缩等领域[24]。与传统的组织工程方法相比，细胞膜片技术具有多种优势，包括提高细胞活力、保留细胞间连接和细胞外基质，使细胞能够快速与周围组织整合，并有可能创建更复杂的三维结构来高度模仿自然组织[25]。维生素C诱导细胞膜片是一种经济有效的方法，不仅可以优化实验消耗，而且不会损害细胞活力[26]。间充质干细胞是细胞膜片常用种子细胞，该研究利用维生素C刺激细胞外基质分泌，前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞连续培养3周成功构建细胞膜片，表明前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞具有较强的增殖活性，这种富含细胞外基质的三维膜片结构也为体外研究前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞的生物学行为提供了一种理想工具。细胞外基质是一种细胞外三维基质蛋白构成的大分子网络，提供结构支持、调节和促进细胞-细胞和细胞-组织间信号传导，进而控制细胞形态、结构和功能[27]。细胞外基质最常见的成分是胶原蛋白，胶原降解和再沉积可重塑细胞外基质结构和功能，细胞外基质中胶原蛋白变化释放生物力学信号，这些信号被肿瘤细胞和基质细胞感知，引发一系列生物学事件。该研究前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞膜片中富含纤连蛋白和Ⅰ型胶原蛋白，这种细胞外基质类似于体内前列腺周围大分子蛋白结构，可作为前列腺周围脂肪细胞外基质研究的模拟靶点。
该研究存在一定局限性：首先，该研究属于初步探索性研究，旨在论证构建前列腺癌患者前列腺周围脂肪来源脂肪干细胞膜片的可行性，未设置正常前列腺组织来源脂肪干细胞作为对照，由于前列腺周围脂肪组织位置较深，基于临床伦理要求，获取正常前列腺周围脂肪组织对于人体创伤较大，且非前列腺癌患者没有必要获取前列腺周围脂肪组织，不符合临床操作规范，后续可尝试从膀胱癌根治术后前列腺标本中获取正常前列腺周围脂肪组织作为对照；其次，该研究对于脂肪干细胞表达分子选择是基于既往文献报道和过去团队的经验，没有进行脂肪干细胞特性、环境特点和功能评价，后续研究将对前列腺癌特定干性分子、微环境和功能进行深入研究。
总之，前列腺周围脂肪组织成为调节前列腺癌细胞与前列腺周围微环境相互作用的潜在治疗靶点。探索前列腺周围脂肪组织导致前列腺癌发生发展的相关机制可能有助于识别高危人群、指导治疗决策、预判患者预后及开发新的靶向药物。该研究成功地从前列腺周围脂肪组织中原代分离脂肪干细胞，构建细胞膜片并进行相关鉴定，为后续研究开展奠定良好基础。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

来源于前列腺周围脂肪的脂肪干细胞膜片培养与鉴定

Culture and identification of adipose-derived stem cells from periprostatic adipose tissue

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