石香膏干预糖尿病溃疡创面模型大鼠创面组织晚期糖基化终产物及其受体与内皮型一氧化氮合成酶表达的变化

doi:10.12307/2022.620

中国组织工程研究 ›› 2022, Vol. 26 ›› Issue (20): 3196-3201.doi: 10.12307/2022.620

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石香膏干预糖尿病溃疡创面模型大鼠创面组织晚期糖基化终产物及其受体与内皮型一氧化氮合成酶表达的变化

费冀1，张开伟1，周一夫2，凌一鸣2

1贵州中医药大学第一附属医院，贵州省贵阳市 550001；2贵州中医药大学，贵州省贵阳市 550001

收稿日期:2021-04-07 接受日期:2021-05-15 出版日期:2022-07-18 发布日期:2022-01-19
通讯作者: 张开伟，主任医师，教授，博士生导师，贵州中医药大学第一附属医院，贵州省贵阳市 550001
作者简介:费冀，男，1988年生，江苏省扬州市人，汉族，2015年贵州中医药大学毕业，硕士，主治医师，主要从事骨伤科疾病的中西医结合治疗方面的研究。
基金资助:
贵州省教育厅青年科技人才成长项目[黔教合KY字(2016)188号]，项目负责人：费冀；贵州省科技计划项目[黔科合LH字(2016)7509号]，项目负责人：费冀

Shixiang Paste interferes with the expression of advanced glycation endproducts and its receptors and endothelial nitric oxide synthase in wound tissue of diabetic ulcer rats

Fei Ji1, Zhang Kaiwei1, Zhou Yifu2, Ling Yiming2

1The First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550001, Guizhou Province, China; 2Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550001, Guizhou Province, China

Received:2021-04-07 Accepted:2021-05-15 Online:2022-07-18 Published:2022-01-19
Contact: Zhang Kaiwei, Chief physician, Professor, Doctoral supervisor, the First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550001, Guizhou Province, China
About author:Fei Ji, Master, Attending physician, the First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550001, Guizhou Province, China
Supported by:
Youth Science and Technology Talent Growth Project of the Educational Department of Guizhou Province, No. KY[2016]188 (to FJ); Science and Technology Planning Project of Guizhou Province, No. LH[2016]7509 (to FJ)

摘要/Abstract

摘要：

文题释义：
石香膏：是一种外用促进各类体表创面愈合的中医外治膏药，为贵州中医药大学第一附属医院院内制剂，适应证为多种创面，尤其适用于糖尿病溃疡等慢性难愈合创面。此方由炉甘石、乳香、没药、煅龙骨、赤石脂、栀子、冰片等中药组成。
糖尿病溃疡：初诊或者已诊断的糖尿病患者出现体表溃疡，通常伴有神经病变和(或)周围血管疾病。作为糖尿病最严重的并发症之一，感染和截肢的风险可能随着疾病进展不断增加，严重者甚至危及生命。给患者带来了巨大的痛苦，也给患者的家庭和整个社会带来了沉重的负担。

背景：糖尿病溃疡作为糖尿病的常见并发症之一，其低愈合率和高截肢率已严重危害人类健康，尽管目前多种中医外用膏药已证实能促进创面愈合，但其发挥作用的分子机制尚未明确。
目的：探讨石香膏治疗糖尿病溃疡创面的可能作用机制。
方法：将40只清洁级雄性SD大鼠随机分正常对照组、糖尿病溃疡组、细胞生长因子组、石香膏组，每组10只。除正常对照组外，其余3组均制备糖尿病大鼠模型；1周后4组均采用全层皮肤缺损法制备溃疡创面模型。造模成功1周后，石香膏组、细胞生长因子组分别给予外用细胞生长因子及外敷石香膏干预，糖尿病溃疡组及正常对照组仅使用双层消毒干纱布覆盖固定。分别在干预后第7，14天取各组大鼠背部创面肉芽组织标本，Western-blot法检测大鼠背部创面肉芽组织中晚期糖基化终产物受体、内皮型一氧化氮合成酶蛋白表达水平；苏木精-伊红染色检测大鼠背部创面样本病理变化；免疫组化法检测大鼠背部创面肉芽组织中晚期糖基化终产物表达水平。
结果与结论：①苏木精-伊红染色结果显示，干预第7，14天正常对照组与糖尿病溃疡组镜下均可见大片未修复组织，而石香膏与细胞生长因子组在干预后第7，14天后创面修复良好；②Western-blot法检测结果显示，与正常对照组对比，糖尿病溃疡组的晚期糖基化终产物受体表达量上升，内皮型一氧化氮合成酶表达量下降(P < 0.05)；石香膏组和细胞生长因子组中晚期糖基化终产物受体相对表达量相对下降，内皮型一氧化氮合成酶相对表达量相对上升(P < 0.05)；与糖尿病溃疡组对比，石香膏组和细胞生长因子组中晚期糖基化终产物受体表达量相对下降，内皮型一氧化氮合成酶表达量相对上升(P < 0.05)；与细胞生长因子组相比，石香膏组晚期糖基化终产物受体表达量相对下降，内皮型一氧化氮合成酶表达量相对上升(P < 0.05)；③免疫组化法检测结果显示，与正常对照组对比，糖尿病溃疡组、细胞生长因子组晚期糖基化终产物表达水平上升，石香膏组的晚期糖基化终产物的表达水平下降(P < 0.05)；与糖尿病溃疡组比较，各给药组晚期糖基化终产物的表达水平上升(P < 0.05)；与石香膏组比较，细胞生长因子组的晚期糖基化终产物表达水平下降(P < 0.05)；④提示石香膏可以促进糖尿病溃疡创面修复，抑制创面中晚期糖基化终产物、晚期糖基化终产物受体表达，促进内皮型一氧化氮合成酶表达可能是其作用机制之一。
缩略语：晚期糖基化终产物：advanced glycation endproducts，AGEs；晚期糖基化终产物受体：receptor of AGEs，RAGE

中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

关键词: 石香膏, 糖尿病溃疡, 晚期糖基化终产物, 晚期糖基化终产物受体, 内皮型一氧化氮合成酶

Abstract: BACKGROUND: Diabetic ulcer, as one of the common complications of diabetes, has caused serious harm to human health due to its low healing rate and high amputation rate. Although traditional Chinese medicine has been proved to improve wound healing, the molecular mechanism of this effect has not been clarified.
OBJECTIVE: To investigate the possible mechanism of Shixiang Paste in treating diabetic ulcers.
METHODS: Forty clean male Sprague-Dawley rats were randomly divided into four groups (n=10 per group): a normal control group, a diabetic ulcer group, a cell growth factor group and a Shixiang Paste group. Except for the normal control group, a diabetic rat model was established in the other three groups. After 1 week, an ulcer wound model was established in four groups by using the full-thickness skin defect method. One week after successful modeling, rats in the Shixiang Paste and cell growth factor groups were treated with external Shixiang Paste and cell growth factor, respectively. Wounds in the diabetic ulcer and normal control groups were only covered and fixed with double sterile dry gauze. The granulation tissue samples were taken from the wound on the back of rats on the 7th and 14th days after intervention. Western blot was used to detect the protein expression of receptors of advanced glycation endproducts and endothelial nitric oxide synthase in the granulation tissue from the back wound of rats. Hematoxylin-eosin staining was used to detect pathological changes in rat back wound samples. Immunohistochemical staining was used to detect the expression of advanced glycation endproducts in the granulation tissue from the wound on the back of rats.
RESULTS AND CONCLUSION: The results of hematoxylin-eosin staining showed that large areas of unrepaired tissue were seen under the microscope in the normal control group and the diabetic ulcer group on the 7th and 14th days after intervention, while in the Shixiang Paste and cell growth factor groups, the wounds healed well on the 7th and 14th days after intervention. Western blot results showed that, compared with the normal control group, the expression of receptors of advanced glycation endproducts was decreased in the diabetic ulcer group was increased, and the expression of endothelial nitric oxide synthase (P < 0.05). In addition, the expression of receptors of advanced glycation endproducts was relatively decreased, and the expression of endothelial nitric oxide synthase was relatively increased in the Shixiang Paste group and cell growth factor group (P < 0.05). Compared with the diabetic ulcer group, the expression of receptors of advanced glycation endproducts was relatively decreased, and the expression of endothelial nitric oxide synthase was relatively increased in the Shixiang Paste group and the cell growth factor group (P < 0.05). Compared with the cell growth factor group, the expression of receptors of advanced glycation endproducts was relatively decreased, and the expression of endothelial nitric oxide synthase was relatively increased in the Shixiang Paste group (P < 0.05). The results of immunohistochemical staining showed that, compared with the normal control group, the expression of advanced glycation endproducts was increased in the diabetic ulcer group and the cell growth factor group, and the expression of advanced glycation endproducts was decreased in the Shixiang Paste group (P < 0.05). Compared with the diabetic ulcer group, the expression of advanced glycation endproducts was increased in the other groups (P < 0.05). Compared with the Shixiang Paste group, the expression level of advanced glycation endproducts was decreased in the cell growth factor group (P < 0.05). To conclude, Shixiang Paste can promote the repair of diabetic ulcer wound. Inhibiting the expression of advanced glycation endproducts and receptors and enhancing the expression of endothelial nitric oxide synthase in wound tissue may be one of the mechanisms.

Key words: Shixiang Paste, diabetic ulcer, advanced glycation endproduct, receptor of advanced glycation endproduct, endothelial nitric oxide synthase

中图分类号:

费冀, 张开伟, 周一夫, 凌一鸣. 石香膏干预糖尿病溃疡创面模型大鼠创面组织晚期糖基化终产物及其受体与内皮型一氧化氮合成酶表达的变化[J]. 中国组织工程研究, 2022, 26(20): 3196-3201.

Fei Ji, Zhang Kaiwei, Zhou Yifu, Ling Yiming. Shixiang Paste interferes with the expression of advanced glycation endproducts and its receptors and endothelial nitric oxide synthase in wound tissue of diabetic ulcer rats[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2022, 26(20): 3196-3201.

图/表（结果） 8

2.1 实验动物数量分析实验纳入40只大鼠，随机分为4组，全部进入结果分析，无脱失。
2.2 实验造模的评价血糖仪测定基础血糖均低于16.7 mmol/L，随后糖尿病溃疡组、石香膏组、细胞生长因子组大鼠注射链脲佐菌素溶液，未发生大鼠死亡。3 d后测定随机血糖全部大于16.7 mmol/L且小于33.3 mmol/L，表明糖尿病大鼠模型制作成功。
2.3 大体形态观察干预14 d后各组大鼠创面大体形态观察，可见糖尿病溃疡创面面积大于普通创面，经石香膏及细胞生长因子干预后，糖尿病溃疡愈合加快，石香膏组创面愈合率要优于细胞生长因子组，见图1。

2.4 苏木精-伊红染色检测大鼠背部创面肉芽组织病理变化干预第7天，正常对照组与糖尿病溃疡组镜下均可见大片未修复组织，糖尿病溃疡组未修复组织范围较正常对照组大，而石香膏与细胞生长因子组修复情况较好，镜下可见较多的成纤维细胞和纤维细胞，见图2。

干预第14天，正常对照组与糖尿病溃疡组镜下仍可见大片未修复组织，糖尿病溃疡组未修复组织范围较正常对照组大；石香膏与细胞生长因子组修复情况良好，见图3。

2.5 Western-blot法检测各组大鼠背部创面肉芽组织中RAGE、内皮型一氧化氮合成酶的蛋白表达水平干预第7，14天，和正常对照组对比，糖尿病溃疡组的RAGE表达量相对上升，内皮型一氧化氮合成酶表达量相对下降，差异有显著性意义(P < 0.05)；石香膏组与细胞生长因子组中RAGE相对表达量下降，内皮型一氧化氮合成酶相对表达量上升，差异有显著性意义(P < 0.05)；与糖尿病溃疡组相比，石香膏组与细胞生长因子组中RAGE表达量相对下降，内皮型一氧化氮合成酶表达量相对上升，差异有显著性意义(P < 0.05)；石香膏组中RAGE表达量与细胞生长因子组相比相对下降，内皮型一氧化氮合成酶表达量相对升高，差异有显著性意义(P < 0.05)，见表1及图4。

2.6 免疫组化法检测各组大鼠背部创面肉芽组织中AGEs表达水平干预第7天，与正常对照组对比，糖尿病溃疡组、细胞生长因子组AGEs表达水平明显上调(P < 0.05)，石香膏组的AGEs的表达水平明显下调(P < 0.05)。与糖尿病溃疡组比较，各给药组 AGEs 的表达水平明显下调(P < 0.05)；与石香膏组比较，细胞生长因子组的AGEs表达水平明显上调(P < 0.05)，见表2及图5。

干预第14天，与正常对照组对比，糖尿病溃疡组、细胞生长因子组、石香膏组的AGEs表达水平明显上调(P < 0.05)；与糖尿病溃疡组比较，各给药组AGEs 的表达水平下调(P < 0.05)，与石香膏组比较，细胞生长因子组的AGEs表达水平上调(P < 0.05)，见表2及图6。

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引言

目前全世界范围内1型糖尿病和2型糖尿病发病率逐年攀升，其致死率在所有疾病中排名第十，给患者及社会带来了沉重的负担[1-2]。据统计，2014年全球大约有4.25亿人(年龄在20-79岁之间)患有糖尿病，到2035年这一数字将高达5.92亿[3]。2013年国内糖尿病患者数量已高达1.14亿，全球每3例糖尿病患者就有1例来自中国[4]。随着社会生活水平的提高以及人口老龄化进程不断加剧，其防治形势必然更加严峻。糖尿病溃疡是糖尿病常见的难治并发症，发病率为15%-25%，住院患者截肢率为19.3%-27.3%，其病情反复延绵，严重者甚至引发脓毒血症而危及生命，给患者个人以及全社会都带来了严重的负担[5]。因此，如何促进糖尿病溃疡修复，是医患及社会共同面临的挑战，对于糖尿病溃疡的治疗目前尚无统一的最佳方案。创面修复是一个包括再生、修复、重建，对患处进行修补的过程[6]，正常创面会按照炎症期、增生期、重塑期过程进行有序愈合，而糖尿病溃疡则会由于各种原因导致创面在愈合过程中停滞于某一阶段，不再继续发展，导致创面延迟愈合或不愈合，甚至侵袭周围正常组织[7]。目前研究认为，糖尿病溃疡多由于组织缺血、缺氧、感染、局部生长因子数量减少等因素导致机体免疫力与细菌毒力处于相对平衡的状态，使愈合过程停滞在炎症期，无法继续进展[8-9]。
石香膏作为贵州中医药大学第一附属医院治疗各类慢性难愈合创面的经典外用膏药，应用于临床40余年，疗效显著[10]，适应于各种急慢性体表创面(包括糖尿病溃疡、静脉血栓性溃疡、动脉闭塞性溃疡、压疮、瘘窦、感染手术创面等)。晚期糖基化终产物(advanced glycation endproducts，AGEs)为体内蛋白在非酶糖化和氧化反应下与还原糖结合形成的结构，研究表明该物质会明显抑制创面修复[11]，糖尿病患者由于长期处于高血糖状态下，AGEs的表达量较正常人明显增多，当AGEs与其受体(receptor of AGEs，RAGE)结合后，会触发不同的信号传导，核因子κB 作为产物之一，激活后会介导多种基因的表达，调节炎症反应与免疫反应，影响组织细胞修复。此次研究通过建立糖尿病溃疡创面大鼠模型，观察石香膏对大鼠AGEs/RAGE/内皮型一氧化氮合成酶的影响，进一步探讨中药石香膏促进糖尿病溃疡创面修复的作用机制。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

材料方法

1.1 设计细胞学水平，随机对照动物实验，计数资料以率表示，率的检验采用χ 2 检验；计量资料组间比较采用 t 检验。
1.2 时间及地点实验于2020年3月在贵州中医药大学实验室完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物纳入清洁级雄性SD大鼠共40只，由贵州医科大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(黔)2012-0001，实验动物使用许可证号：SYXK(黔) 2018-0001。实验室温度保持在25 ℃左右，湿度保持在50%左右，明暗周期12 h，不限制进食饮水，先通过适应性喂养，3周后称质量。实验动物伦理经贵州中医药大学实验动物伦理检查委员会审议批准。
1.3.2 主要药品与试剂石香膏由贵州中医药大学第一附属医院中药制剂室制备提供，批准号：黔药制字：Z20030035，由煅龙骨、冰片、炉甘石等中药组成；重组牛碱性成纤维细胞生长因子外用溶液(商品名：细胞生长因子)，批准文号：国药准字S10980077，规格：63 000 IU/15 mL，购自珠海亿胜生物制药有限公司；柠檬酸钠缓冲液、链脲佐菌素购自中国上海远慕生物有限公司；苏木精染液，购自中国南京建成公司；伊红染液、Western-blot裂解液，购自中国碧云天公司；中性树脂，购自中国国药集团；一抗(RAGE、内皮型一氧化氮合成酶)、内参一抗，购自美国Abcam公司；二抗(羊抗兔/小鼠IgG)、甲基磺酰氟(PMSF)，购自美国Sigma公司；PVDF膜，购自美国Bio-Rad公司；丙烯酰胺(29∶1)购自中国上海生工公司；TEMED、牛血清白蛋白，购自美国Amersham Pharmacia Biotech公司。
1.3.3 主要仪器垂直板电泳转移装置、Trans-Blot转膜装置、电泳仪，购自美国Bio-Rad公司；图像分析系统，购自美国LabworksTM Analysis Softwar公司；多功能酶标仪，购自美国Thermo Fisher公司；Tannon-4200凝胶成像系统，购自中国天能公司；除热原超纯水系统，购自美国Millipore公司；低温高速离心机(GS-15R)，购自美国Beckman公司；电热恒温水浴箱(DK-8D)，购自中国上海博讯实业有限公司；旋涡振荡器(QL-901)，购自中国江苏海门其林贝尔公司；脱色摇床，购自中国麒麟医用仪器厂。
1.4 方法
1.4.1 动物分组采用随机数字表法将40只SD大鼠随机分为4组，即正常对照组、糖尿病溃疡组、细胞生长因子组和石香膏组，每组设第7，14 天2个时间点，每个时间点5只大鼠。
1.4.2 建立诱导糖尿病大鼠模型[12] 除正常对照组外，其余3组均构建糖尿病大鼠模型。造模前18 h禁食，自由饮水；于造模当日以电子称称取糖尿病溃疡组、石香膏组、细胞生长因子组大鼠体质量，以血糖仪于尾部采血而得出基础血糖值；对大鼠腹腔注射1%的链脲佐菌素溶液65 mg/kg(使用pH值为 4.0的0.1 mmol/L柠檬酸钠缓冲液溶解链脲佐菌素配制)，3 d后检测其随机血糖，大于16.7 mmol/L时即为糖尿病大鼠模型造模成功。如测得血糖大于33.3 mmol/L时，可以使用诺和灵R[诺和诺德(中国)制药有限公司，国药准字J20160057]1-4 U/d皮下注射，以控制血糖，提高实验数据准确性[4]。正常对照组仅在腹腔注射等量0.1 mmol/L的柠檬酸钠缓冲液。

1.4.3 建立糖尿病溃疡大鼠模型[13-14] 注射1周后，剃去4组大鼠背部毛发，予以硫化钡再次脱毛，大鼠采用盐酸氯胺酮 120 mg/kg 腹腔注射麻醉，麻醉后造模区(腰椎正中偏上)备皮，取大鼠脊柱正中偏上一直径约3 cm的圆形区域。以标准无菌操作根据上述区域剪除表皮层、真皮层以及皮下，造成与深层筋膜外界相通的创口，即造模成功。对创面用双层生理盐水浸润无菌纱布加双侧2层无菌干纱布固定。为预防感染，对所有大鼠连续注射青霉素( 山东鲁抗医药股份有限公司，国药准字H37020079)，时间为术前1 d开始总共4 d，用量按照4 000 U/只。随后分笼防止互相破坏创面，并予充足饮水饲料。

1.4.4 干预方法除正常对照组之外，剩余已建立糖尿病溃疡模型的30只大鼠造模成功1周后再进行分组，即糖尿病溃疡组、石香膏组、细胞生长因子组，每组10只。根据细胞生长因子说明书推荐剂量(每次 150 AU/cm2)推算出细胞生长因子组创面外用细胞生长因子约0.2 mL，石香膏组创面外敷石香膏厚度约2 mm，糖尿病溃疡组及正常对照组仅使用双层消毒干纱布覆盖固定。石香膏组、细胞生长因子组每日换药，正常对照组及糖尿病溃疡组则更换消毒纱布覆盖。用药后的第7，14天采用盐酸氯胺酮120 mg/kg 腹腔注射麻醉大鼠，取背部创面肉芽组织作为标本。
1.5 主要观察指标
1.5.1 苏木精-伊红染色检测大鼠背部创面肉芽组织病理变化用切片机将石蜡块中的组织切成5 μm 厚的薄片，经烤片、脱蜡、复水后苏木精-伊红染色。在切片组织上滴加0.5%Triton X-100，室温打孔20 min，用PBS浸洗切片3次，3 min/次。在25 ℃用体积分数3%H2O2处理切片15 min，用PBS浸洗切3次，3 min/次。山羊血清25 ℃封闭60 min，完毕后取出，甩干封闭液；一抗孵育，4 ℃过夜。PBS清洗标本3次，每次各5 min。二抗孵育37 ℃ 30 min。PBS清洗标本3次，每次各5 min。DAB显色试剂盒显色1-10 min，蒸馏水清洗，苏木精复染5 min，自来水洗返蓝，用梯度乙醇脱水，体积分数75%，85%，95%，100%各3 min。使用二甲苯透明2次3 min，中性树胶封固。倒置显微镜下观察各组标本细胞形态学改变。
1.5.2 Western-blot法检测各组大鼠背部创面肉芽组织中RAGE、内皮型一氧化氮合成酶蛋白表达创面组织剪切成细小的碎片，每100 mg组织加入1 mL RIPA裂解液。用玻璃匀浆器匀浆20次，将匀浆物转移到1.5 mL离心管，12 000 r/min，4 ℃离心5min，离心半径10 cm，吸取上清，进行电泳及免疫沉淀操作。
1.5.3 免疫组化法检测各组创面肉芽组织中AGEs表达取大鼠背部创面肉芽组织标本，经过组织脱水，透明，脱蜡，包埋，切片，烤片后，形成组织石蜡切片，选取相应的石蜡切片脱蜡复水，抗热源修复，随后进行免疫组化染色。在切片组织上滴加0.5% Triton X-100，室温打孔20 min，用PBS浸洗切片3次，3 min/次。在 25 ℃条件下用体积分数3% H2O2处理切片15 min，用PBS浸洗切片3次，3 min/次。山羊血清25 ℃封闭60min，完毕后取出，甩干封闭液；一抗孵育，4 ℃ 过夜。PBS清洗标本3次，每次各5 min。二抗孵育37 ℃ 30 min。PBS清洗标本 3次，每次各5 min。DAB显色试剂盒显色1-10 min，蒸馏水清洗，苏木精复染5 min，自来水洗返蓝，用梯度乙醇脱水，体积分数75%，85%，95%，100%各3 min。使用二甲苯透明2次3 min，中性树胶封固。倒置显微镜下观察各组标本细胞形态学改变。应用显微图像采集系统对免疫组化图像进行摄片。随后使用IPP 6.0图像分析软件操作并得出平均吸光度值。
1.6 统计学分析实验数据采用Excel软件收集，采用SPSS 22.0软件进行统计分析，计数资料以率表示，率的检验采用χ 2 检验；计量资料两组间比较采用t检验。P < 0. 05为差异有显著性意义。

讨论

糖尿病溃疡属于的中医学中“痈疽”范畴，其病机为脏腑出现功能障碍及某些致病的因素侵袭人体，造成邪毒滞的留滞，从而导致气血聚集不流通，最后出现瘀血凝滞而肌肉、气血腐坏。石香膏方含煅龙骨、冰片、炉甘石等药物成分[15]，其中煅龙骨收敛固涩；冰片清热解毒，敛疮生肌去腐生肌，有研究使用冰片对烧伤的豚鼠模型进行创面换药达到了显著抗炎镇痛效果[16]；而炉甘石有着收湿解毒敛疮的功效。现代药理学认为，煅龙骨中的锌能够调节免疫功能和维持细胞膜的正常功效，可促进创面的修复与愈合[17]；炉甘石可促进创面中成纤维细胞和毛细血管的形成，加快肉芽组织增生，从而加速创面的愈合[18]；冰片具有抗菌、消炎、镇痛的作用，特别针对金黄色葡萄球菌，可以起到较好的抑制作用[19]。作者所在团队先前相关基础研究已证实，中药石香膏能够通过刺激创面内细胞产生内源性生长因子，激发成纤维细胞增殖，进而促进创面的修复。
AGEs为体内蛋白在非酶糖化和氧化反应下与还原糖结合形成的结构，研究表明该物质会明显抑制创面修复[11]，糖尿病患者由于长期处于高血糖状态下，AGEs的表达量较正常人明显增多。当AGEs与其受体RAGE相结合后，会触发不同的信号传导，核因子κB作为产物之一，激活后会介导多种基因的表达，调节炎症反应与免疫反应，影响组织细胞修复[20-21]。糖尿病溃疡创面肉芽形成不良是其难以修复的主要原因之一，而肉芽组织形成不良的最关键因素则是血管新生出现障碍[22-23]。一氧化氮作为血管新生的关键信号转导分子，在促进血管新生过程中有着关键影响[24]，因此阻断内皮型一氧化氮合成酶将会抑制创面血管新生[25]。已有研究证实，在创面修复时，会通过一系列反应将核因子κB激活，免疫调控中的核因子κB因其影响遗传因子进而对整个过程进行干预，不利于创面的恢复[26-27]。RAGE对细胞损伤以及功能破坏的作用，会因为核因子κB激活而具有更强的负面作用[28]。因此，以上创面修复中的相关信号通路合成、血管内皮生长因子分泌及一氧化氮减少，进而造成组织细胞损伤以及功能紊乱，是导致创面血管新生障碍的重要机制之一[29-30]。
此次实验通过将石香膏作用于大鼠糖尿病溃疡创面，研究其对AGEs/RAGE/内皮型一氧化氮合成酶水平的影响，结果表明，对糖尿病溃疡愈合有负面作用的AGEs、RAGE表达量均下调，而有利于创面愈合的内皮型一氧化氮合成酶表达上调，证明该通路是石香膏治疗糖尿病溃疡的可能作用机制之一，为临床治疗糖尿病溃疡提供了新的科学依据以及治疗手段。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程

石香膏干预糖尿病溃疡创面模型大鼠创面组织晚期糖基化终产物及其受体与内皮型一氧化氮合成酶表达的变化

Shixiang Paste interferes with the expression of advanced glycation endproducts and its receptors and endothelial nitric oxide synthase in wound tissue of diabetic ulcer rats

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