脂肪干细胞
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图1｜大鼠脂肪间充质干细胞鉴定
结果：见图1。从大鼠腹股沟区皮下或附睾周围的脂肪组织中提取脂肪间充质干细胞，培养传代后，光学显微镜观察显示第3代脂肪间充质干细胞形态均一，呈典型的鱼群样、成纤维状、漩涡式排列生长，无明显蝉翼样变宽分化现象。流式细胞仪鉴定第3代脂肪间充质干细胞的表面抗原，结果显示高表达CD90，CD44，阳性率分别为99%，94.7%；低表达CD45，阳性率为1.58%。经成脂诱导14 d后，可见细胞形态逐渐由长梭形变为多边形或圆形，胞浆内积聚了大小不等的脂肪滴，经油红O染色后脂肪滴呈鲜艳深红色。经成骨诱导21 d后，可见细胞逐渐由长梭形变为多边形，呈聚集样、铺路石样多层生长，表面有大小不等的黑色小颗粒，局部有矿化样的结晶物，经茜素红染色后可见“蘑菇样”散落分布、大小不等的深红色球形结节。经成神经干诱导分化3 d后，经神经干细胞表面标记蛋白Nestin及SOX2荧光染色后鉴定具有神经干细胞特性。以上结果说明已成功分离出大鼠脂肪间充质干细胞。
图2｜脂肪间充质干细胞外泌体(ADMSC-Exo)的鉴定
结果：透射电子显微镜观察显示所提取纳米粒子具有典型的杯状形态，见图2A，符合外泌体的一般形态。激光粒度仪检测显示，所提取纳米粒子直径较均一，分布在50-140 nm范围内，见图2B，符合外泌体粒径分布在30-150 nm范围内的特征。此外，Western blot检测结果显示所提取纳米粒子表达外泌体表面特异性标志膜蛋白Alix、CD63及TSG101，见图2C。以上结果证明外泌体已成功分离。
图3｜脂肪间充质干细胞外泌体(ADMSC-Exo)的细胞摄取实验
结果：为了检测外泌体的细胞内化性能，使用DiI(红色)亲脂性染料标记ADMSC-Exo，并与PC12细胞共孵育12 h，荧光显微镜观察结果显示，外泌体可进入PC12细胞胞质，主要分布在细胞核周围，结果证明PC12细胞可摄取外泌体，见图3。
图6｜脂肪间充质干细胞外泌体(ADMSC-Exo)miR-29b-3p预处理减轻过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡
结果：与对照组相比，30 μmol/L过氧化氢处理PC12细胞24 h后，细胞突起严重受损，细胞存活率显著降低；与过氧化氢组相比，ADMSC-Exo预处理后PC12细胞突起受损程度减轻，且存活率高于过氧化氢组；过表达miR-29b-3p的ADMSC-Exo 预处理后可进一步增强外泌体的保护作用；反之，抑制miR-29b-3p的表达则减弱了外泌体的神经保护作用，见图6A，B。TUNEL染色结果显示，与过氧化氢组相比，ADMSC-Exo预处理后PC12细胞的凋亡率明显下降；过表达miR-29b-3p的ADMSC-Exo预处理后细胞的凋亡率低于ADMSC-Exo预处理的PC12细胞，敲低miR-29b-3p的ADMSC-Exo预处理后细胞的凋亡率明显高于ADMSC-Exo预处理的PC12细胞，见图6C，D。Western blot进一步证实，过表达miR-29b-3p的ADMSC-Exo预处理可上调PC12细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，下调凋亡蛋白Bax的表达；相反，敲低miR-29b-3p表达的ADMSC-Exo预处理可下调PC12细胞中Bcl-2的表达，而上调Bax的表达，见图6E-G。
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