其他干细胞
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图1｜生发泡期卵母细胞在不同培养基(G1、CZB、M16)中体外成熟的成熟率及体外受精后的发育情况
结果：对各组卵母细胞成熟率进行统计，结果显示：3组之间第一极体排出率无明显差异(P > 0.05)，G1组(n=154)为79.87%，CZB组(n=154)为73.38%，M16组(n=149)为79.19%，见图1A，表1。以体内成熟卵母细胞为对照组，统计各组体外受精后的受精及发育情况，对照组(n=171)受精率为(75.04±11.96)%，G1组(n=202)为(52.86±11.24)%，CZB组(n=172)为(30.62±5.51)%，M16组(n=247)为(37.76±6.70)%，其中体外成熟组的受精率显著低于对照组(P < 0.05)；在体外成熟组中，G1组受精率显著高于M16组(P < 0.05)，M16组显著高于CZB组(P < 0.05)，见图1B，表2。对照组囊胚率为(78.16±4.17)%，G1组为(55.75±7.63)%，CZB组为(36.23±6.63)%，M16组为(53.36±6.33)%，体外成熟组的囊胚率均显著低于对照组(P < 0.05)；在体外成熟组中，CZB组显著低于G1组及M16组(P < 0.05)，见图1B，表2。利用时差成像观察胚胎发育速度，与对照组相比，G1组无明显差异，M16组和CZB组胚胎发育速度显著减缓，见图1C，D。
图2｜不同培养基体外成熟后MⅡ期卵母细胞的纺锤体形成结果
结果：对各组MⅡ期卵母细胞的纺锤体及染色体进行染色，并统计纺锤体的长宽比及染色体排列异常率，结果显示：对照组(n=17)的纺锤体长宽比为1.76±0.20，G1组(n=22)为1.67±0.92，CZB组(n=19)为2.09±0.42，M16组(n=17)为1.90±0.19，见图2A，B。与体内成熟对照组相比，CZB组的纺锤体长宽比显著增加(P < 0.005)，而G1组和M16组无明显改变；在体外成熟组中，CZB组的纺锤体长宽比显著高于M16组，而M16组显著高于G1组(P < 0.05)。对照组染色体排列异常率为5.34%，G1组为8.46%，CZB组为24.44%，M16组为10.82%。CZB组显著高于对照组、G1组和M16组(P < 0.05)；对照组、G1组和M16组之间无差异(P > 0.05)，见图2C。
图3｜不同培养基体外成熟MⅡ期卵母细胞的线粒体功能
结果：用JC-1染色评估线粒体膜电位，结果显示：对照组(n=14)相对荧光强度为0.88±0.23，G1组(n=36)为1.00±0.27，CZB组(n=35)为0.70±0.26，M16组(n=35)为1.09±0.36。CZB组的线粒体膜电位显著低于其他组(P < 0.05)；对照组、G1组和M16组之间无显著差异，见图3A，C。用Mitotracker进行线粒体定位检测，统计线粒体异常分布及凝集率，结果显示：对照组(n=42)为14.29%，G1组(n=43)为16.28%，CZB组(n=41)为41.46%，M16组(n=44)为18.18%。CZB组的线粒体异常率显著高于其他组(P < 0.05)；对照组，G1组和M16组之间无显著差异，见图3B，D。
图4｜不同培养基体外成熟、体外受精后卵母细胞钙离子浓度及钙震荡情况
结果：用FLUO-4AM染色评估胞内钙离子浓度，结果显示：对照组(n=30)相对荧光值为1.14±0.34，G1组(n=45)为1.00±0.27，CZB组(n=44)为1.40±0.38，M16组(n=44)为1.67±0.28。M16组胞浆内钙离子浓度显著高于CZB组(P < 0.05)，CZB组显著高于G1组和对照组(P < 0.05)，G1组和对照组无明显差异(P > 0.05)，见图4A，B。用FLUO-2AM染色进行受精后钙震荡追踪，见图4C-F，分析1 h内的震动频率，结果显示： 对照组(n=15)为(6.53±1.58)次/h，G1组(n=15)为(6.16±1.14)次/h，CZB组(n=12)为(10.17±4.86)次/h，M16组(n=12)为(13.08±9.37)次/h。
CZB组及M16组的震动频率显著高于G1组和对照组(P < 0.05)，G1 组和对照组无明显差异(P > 0.05)，见图4G。
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