骨髓干细胞

    骨髓间充质干细胞机械刺激成骨的记忆效应
  • 图1|小鼠骨髓间充质干细胞三系分化染色结果(A,B标尺为500 μm;C,D标尺为100 μm)

    结果:成骨诱导7 d行碱性磷酸酶染色,可见明显的紫色深染,见图1A,诱导14 d行茜素红染色,可见明显的橘红色矿化结节,见图1B,结果表明骨髓间充质干细胞呈现良好的成骨特性。
    成脂诱导14 d,细胞体积逐渐变大且出现了圆形油滴。油红O染色后,镜下可见细胞胞浆内有串珠样显红色的脂滴,见图1C
    成软骨诱导14 d,阿尔新蓝染色胞浆和基质异染证明细胞合成了糖胺多糖,见图1D


    图2|小鼠骨髓间充质干细胞拉伸前后成骨分化结果

    结果:力学刺激7 d后[6,16],将对照组与拉伸组的细胞分别进行碱性磷酸酶染色和茜素红染色,可见拉伸后的细胞碱性磷酸酶明显较未拉伸细胞着色更深,茜素红染色也可见拉伸后的细胞有更多的矿化结节,见图2A。力学刺激7 d后,拉伸组小鼠骨髓间充质干细胞中碱性磷酸酶、骨钙蛋白、Runt相关转录因子2基因表达水平均高于对照组,差异有显著性意义(P < 0.01),见图2B


    图4|拉伸后小鼠骨间充质干细胞向成骨分化的表观遗传记忆效应(标尺为100 μm)

    结果:小鼠骨髓间充质干细胞在拉伸刺激7 d后,将对照组与拉伸组的细胞消化并分别接种于常规12孔板中,普通培养基培养14 d后进行茜素红染色,可观察到拉伸刺激过的细胞较对照组仍可以产生更多的矿化结节,见图4A。小鼠骨髓间充质干细胞在重新种板培养后,碱性磷酸酶、骨钙蛋白、Runt相关转录因子2基因表达水平仍是拉伸组高于对照组,差异有显著性意义(P < 0.01),见图4B


    图5|拉伸前后小鼠骨间充质干细胞的免疫荧光染色(标尺为200 μm)

    结果:免疫荧光检测显示骨髓间充质干细胞核内H3K4me3在拉伸刺激7 d后表达增高,而H3K27me3表达降低甚至完全消失。将拉伸处理后的骨髓间充质干细胞重新铺板后培养14 d再次进行免疫荧光染色,发现拉伸后H3K4me3的表达仍高,与重新铺板前表达趋势相一致。而H3K27me3则出现了相反的表达情况,提示可能是H3K4me3,而不是H3K27me3,在骨髓间充质干细胞机械记忆中发挥作用,见图5


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  • 发布日期: 2022-09-09  浏览: 462