骨髓干细胞
-
图1｜镜下观察c57小鼠骨髓间充质干细胞的形态
结果：在倒置显微镜下观察前3代小鼠骨髓间充质干细胞，见图1：第2代细胞多呈圆形、三角形、梭形，细胞膜外折光现象明显；随传代次数增多，细胞贴壁牢固，第3代细胞多呈梭形、纺锤形，少见多角形，胞浆丰富、胞体光滑，复苏的细胞3 h后即可贴壁，6 h后细胞由圆形发生形变，生长成形的骨髓间充质干细胞形态均一，细胞呈漩涡状紧密排列。
图2｜慢病毒载体转染骨髓间充质干细胞72 h后观察转染效率(荧光倒置显微镜，×100)
结果：在荧光倒置显微镜下观察可见：慢病毒转染且经嘌呤霉素筛选后的细胞较转染前形态学无明显变化，胞浆丰富，胞体光滑，生长状态良好，绿色荧光蛋白表达率达90%以上，且稳定表达绿色荧光，空白对照组未见荧光，见图2A，B；qRT-PCR结果示，以空白对照组的NIPBL mRNA表达量为基准，sh-NIPBL组、sh-NC组相对表达量分别为0.360±0.061，0.856±0.115，sh-NIPBL组的NIPBL mRNA相对表达量明显少于sh-NC组(P < 0.05)，sh-NC组与空白对照组差异无显著性意义(P > 0.05)，见图2C，提示通过慢病毒转染骨髓间充质干细胞，可抑制NIPBL基因的表达。
图3｜成软骨诱导过程中骨髓间充质干细胞的形态学变化(倒置显微镜，×100)
结果：倒置显微镜下观察，骨髓间充质干细胞诱导第3天细胞贴壁牢固，胞体光滑，形态更加细长，多呈长梭形，胞浆丰富；诱导第7天，细胞体积相对缩小，可见细胞由类成纤维状变为圆形；诱导第14天，细胞形态未见明显变化，可见细胞周围有基质分泌；诱导第21天，可见细胞呈多边形、星形、三角形，并伴有多个突起，见图3。随着培养时间的延长，细胞团的体积未见显著增大，骨髓间充质干细胞大量扩增后呈放射状分布的团簇集落样生长，似鱼群样、菊花状或漩涡状排列。
图5｜成软骨诱导21 d各组骨髓间充质干细胞阿利辛蓝染色
结果：荧光倒置显微镜下用白光视野观察，可见与sh-NC组相比，sh-NIPBL组软骨细胞中的酸性黏多糖较少，sh-NC组与空白对照组无明显差异，见图5。结果表明，3组骨髓间充质干细胞均成功诱导为软骨细胞，敲低NIPBL基因可降低成软骨分化能力。
图6｜各组骨髓间充质干细胞Ⅱ型胶原蛋白表达
结果：对3组骨髓间充质干细胞进行免疫荧光染色，可见3组细胞核蓝染呈圆形、居中，细胞的胞质均可见Ⅱ型胶原蛋白表达，呈现红色，但与sh-NC组相比，sh-NIPBL组胞质染色强度较低，且sh-NIPBL组胞质与胞核染色比例(0.721±0.022)低于sh-NC组(0.952±0.012)，差异有显著性意义(P < 0.05)，sh-NC组与空白对照组相比无明显差异，见图6，结果显示，敲低NIPBL基因可降低成软骨分化的能力。