2.1   小鼠骨髓间充质干细胞的形态变化   在倒置显微镜下观察前3代小鼠骨髓间充质干细胞，见图1：第2代细胞多呈圆形、三角形、梭形，细胞膜外折光现象明显；随传代次数增多，细胞贴壁牢固，第3代细胞多呈梭形、纺锤形，少见多角形，胞浆丰富、胞体光滑，复苏的细胞3 h后即可贴壁，6 h后细胞由圆形发生形变，生长成形的骨髓间充质干细胞形态均一，细胞呈漩涡状紧密排列。



2.2   慢病毒载体转染细胞的绿色荧光蛋白表达效率及NIPBL基因水平   在荧光倒置显微镜下观察可见：慢病毒转染且经嘌呤霉素筛选后的细胞较转染前形态学无明显变化，胞浆丰富，胞体光滑，生长状态良好，绿色荧光蛋白表达率达90%以上，且稳定表达绿色荧光，空白对照组未见荧光，见图2A，B；qRT-PCR结果示，以空白对照组的NIPBL mRNA表达量为基准，sh-NIPBL组、sh-NC组相对表达量分别为0.360±0.061，0.856±0.115，sh-NIPBL组的NIPBL mRNA相对表达量明显少于sh-NC组(P < 0.05)，sh-NC组与空白对照组差异无显著性意义(P > 0.05)，见图2C，提示通过慢病毒转染骨髓间充质干细胞，可抑制NIPBL基因的表达。



2.3   成软骨诱导分化过程中骨髓间充质干细胞的形态变化    倒置显微镜下观察，骨髓间充质干细胞诱导第3天细胞贴壁牢固，胞体光滑，形态更加细长，多呈长梭形，胞浆丰富；诱导第7天，细胞体积相对缩小，可见细胞由类成纤维状变为圆形；诱导第14天，细胞形态未见明显变化，可见细胞周围有基质分泌；诱导第21天，可见细胞呈多边形、星形、三角形，并伴有多个突起，见图3。随着培养时间的延长，细胞团的体积未见显著增大，骨髓间充质干细胞大量扩增后呈放射状分布的团簇集落样生长，似鱼群样、菊花状或漩涡状排列。



2.4   软骨微球最大横截面周长测量结果   成软骨诱导第1天可见离心管底细胞集聚形成丘样隆起，在诱导第3天隆起形成小球状，轻弹离心管可见小球漂浮于培养液中，但并不散开，随后小球体积缓慢增大，呈现半透明白色。21 d后取出小球，小球稍有韧性并具少量黏性。测量软骨球最大横截面的周长，与sh-NC组(0.950±0.103) mm相比，sh-NIPBL组软骨球最大横截面周长较小，为(0.529±0.103) mm，差异有显著性意义(P < 0.05)，空白对照组与sh-NC组无明显差异，见图4。结果表明，敲低NIPBL基因可降低骨髓间充质干细胞成软骨分化过程的增殖能力。



2.5   阿利辛蓝染色结果   荧光倒置显微镜下用白光视野观察，可见与sh-NC组相比，sh-NIPBL组软骨细胞中的酸性黏多糖较少，sh-NC组与空白对照组无明显差异，见图5。结果表明，3组骨髓间充质干细胞均成功诱导为软骨细胞，敲低NIPBL基因可降低成软骨分化能力。



2.6   免疫荧光法检测成软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白表达   对3组骨髓间充质干细胞进行免疫荧光染色，可见3组细胞核蓝染呈圆形、居中，细胞的胞质均可见Ⅱ型胶原蛋白表达，呈现红色，但与sh-NC组相比，sh-NIPBL组胞质染色强度较低，且sh-NIPBL组胞质与胞核染色比例(0.721±0.022)低于sh-NC组(0.952±0.012)，差异有显著性意义(P < 0.05)，sh-NC组与空白对照组相比无明显差异，见图6，结果显示，敲低NIPBL基因可降低成软骨分化的能力。



2.7   RT-qPCR检测成软骨过程中Sox-9、TGF-β1/Smad信号通路mRNA表达   6孔板提取各孔成软骨诱导细胞总RNA，所测的质量浓度为200-500 mg/L，A260/A280=1.8-2.0，检测诱导不同时间段3组细胞内Sox-9、TGF-β1、Smad2、Smad4 mRNA的相对表达量，结果见图7，表2，在成软骨诱导过程中，与sh-NC组相比，sh-NIPBL组细胞内各基因mRNA的相对表达量均显著降低，差异均有显著性意义(P < 0.05)，且sh-NIPBL组各基因mRNA的相对表达量随诱导时间的增加呈逐渐上升趋势。

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Cornelia de Lange综合征(CdLS)是一种具有显著遗传异质性的先天多器官系统发育异常综合征，表现为生长发育迟缓、严重认知障碍、特征性面容、肢体骨骼发育畸形等[1-2]，据报道，CdLS的发病率为1/30 000-1/10 000，其中肢体发育异常发生率高达73.1%，且大多数报道为散发性病例[3]。国外研究发现该病至少与9个基因相关[4]，其中NIPBL基因最为常见，约占60%，且NIPBL基因的表达水平与患者骨骼发育异常程度呈反比，因此检测NIPBL基因是否发生突变是诊断CdLS的首要指标。然而，NIPBL基因引发CdLS骨骼发育异常的分子机制尚不明确。NIPBL基因在人和小鼠的各个组织中均有表达，尤其在前肢，胚胎期表达分布部位广泛，且其骨骼发育异常的表现与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)生长发育能力密切相关，这与前期课题组已经成功验证的新生小鼠的主要畸形高度一致[5]。骨髓间充质干细胞是一种来源于发育早期的中胚层和外胚层的细胞亚群，具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化[6]，能够分化成骨、脂肪、软骨、神经及成肌细胞等多种细胞类型[7-8]。因此，该研究拟利用小鼠骨髓间充质干细胞探讨NIPBL基因引起CdLS骨骼发育异常的分子机制。

研究表明，大多数CDLS患者都存在骨骼发育异常的临床表现，如脊柱侧弯或身材矮小[4]。据报道，哺乳动物中的大部分骨骼(80%)是通过软骨内生形成的[9]。软骨形成异常和骨骼发育障碍将导致多种骨骼疾病，如骨骼畸形、发育迟缓、异位成骨、骨折愈合缺陷等[10]。骨髓间充质干细胞成软骨诱导分化过程受多种信号通路的调控，其中转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1，TGF-β1)/Smad信号通路发挥了重要作用[11]。但是目前缺乏NIPBL基因突变所致骨骼发育异常与TGF-β1/Smad信号通路相关性报道，因此，为探讨这一问题，该研究预通过体外培养小鼠骨髓间充质干细胞，探索NIPBL对骨髓间充质干细胞成软骨诱导分化能力的影响，并探求TGF-β1/Smad信号通路是否参与了NIPBL缺陷小鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化过程，为CdLS的临床治疗提供新的理论依据。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

1.1   设计   细胞学体外实验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。
1.2   时间及地点   实验于2021年4-12月在石河子大学医学院实验室完成。
1.3   材料
1.3.1   研究细胞   原代c57小鼠骨髓间充质干细胞，购自武汉普诺赛生命科技有限公司。
1.3.2   实验试剂与设备 

(1) 试剂：低糖DMEM培养基、胎牛血清(美国Gibco公司)；慢病毒(吉玛基因)；嘌呤霉素(吉凯基因)；成软骨诱导培养基、阿利辛蓝染色试剂(美国Cyagen公司)；TRITC标记山羊抗小鼠IgG(中杉剑桥公司)；TRIzol试剂(美国Life公司)；反转录试剂盒(德国 QIAGEN公司)；荧光定量试剂盒(美国Thermo公司)。

(2)设备：超净工作台、生物安全柜(中国智成公司)；-80 ℃冰箱、二氧化碳培养箱、倒置荧光显微镜、紫外分光光度计(美国Thermo公司)；倒置显微镜(日本Nicon公司)；荧光PCR仪(德国QIAGEN公司)。
1.4   实验方法   
1.4.1   小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养   小鼠骨髓间充质干细胞用含体积分数为10%胎牛血清、1%双抗(青霉素、链霉素)的低糖DMEM培养基，置于37 ℃、体积分数为5% CO2 细胞培养箱中培养。每一两天全量换液1次，待培养瓶底部的贴壁细胞汇合率达80%-90%时，用0.25%胰酶按1∶3消化并传代，传至第3代进行以下实验。倒置显微镜下观察细胞形态、融合程度，判断细胞活性和增殖情况。
1.4.2   慢病毒载体转染细胞及检测

(1)慢病毒稳转小鼠骨髓间充质干细胞：将第3代小鼠骨髓间充质干细胞以2×105/孔接种于6孔板中，待细胞汇合率达40%-60%时加入慢病毒进行转染，低糖DMEM培养基培养16 h后更换为完全培养基，72 h后将6孔板置于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达效率。用质量浓度为1.5 mg/L的嘌呤霉素进行稳定株筛选，每36 h更换含嘌呤霉素的完全培养基，两三天传代1次，待荧光量接近100%时收集稳转细胞。以转染含NIPBL shRNA慢病毒载体的骨髓间充质干细胞为实验组(sh-NIPBL组)，以转染慢病毒空载体的骨髓间充质干细胞为阴性对照组(sh-NC组)，以未行转染处理的骨髓间充质干细胞为空白对照组。

(2)实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)检测细胞中NIPBL基因的mRNA表达水平：Trizol法提取各组细胞总RNA，反转录为cDNA，RT-qPCR法检测细胞内NIPBL mRNA表达水平。反应体系为：cDNA 2 μL，上下游引物各1 μL，QN ROX Reference Dye 1 μL，2×SYBR Green PCR Master Mix 10 μL，Nuclease-Free Water 5 μL，总反应体系为20 μL。反应条件：预变性95 ℃ 2 min，变性95 ℃ 10 s，联合退火/延伸60 ℃ 20 s，40个循环。引物由生工生物工程(上海)公司合成，引物序列见表1。将结果标准化为内参β-actin的表达，采用2-ΔΔCt法计算 NIPBL mRNA相对表达量。

1.4.3   诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化   用0.25%胰酶分别消化3组汇合率达80%的稳转小鼠骨髓间充质干细胞，PBS清洗细胞沉淀2次，用成软骨诱导分化完全培养基(C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞成软骨诱导分化基础培养基194 mL、地塞米松20 μL、抗坏血酸600 μL、ITS添加物2 mL、丙酮酸钠200 μL、脯氨酸200 μL、转化生长因子β3 2 mL)重悬细胞，细胞悬液分别行以下处理：①以3×105/孔接种于6孔板中培养，2 d换1次成软骨诱导分化完全培养基，得到诱导3，7，14，21 d的软骨细胞，于倒置显微镜下观察成软骨诱导过程中细胞形态变化。②将3×105个细胞进行1 000 r/min离心5 min，再用成软骨诱导分化完全培养基重悬细胞并转移至15 mL离心管中，再次离心后置于培养箱培养，24 h后轻弹离心管底使细胞团悬浮于液体中，3 d换1次成软骨诱导分化完全培养基，得到诱导21 d的软骨细胞球，分别用1 mL 40 g/L多聚甲醛溶液在室温环境下固定30 min，将软骨球转移至无菌外科单上，用Image J 软件测量3组软骨微球最大横截面的周长。
1.4.4   阿利辛蓝染色软骨细胞   取3组成软骨诱导培养21 d的骨髓间充质干细胞，弃培养基，分别向每孔中加入2 mL的PBS清洗2次，每孔加入2 mL 40 g/L多聚甲醛，室温下固定30 min，弃40 g/L多聚甲醛，用2 mL的PBS清洗2次，每孔加入1 mL阿利辛蓝染液，于室温下染色30 min，弃阿利辛蓝染液，用2 mL的PBS清洗3次，于倒置显微镜下观察染色结果。 
1.4.5   免疫荧光检测骨髓间充质干细胞中Ⅱ型胶原蛋白的表达   在6孔板中置入直径20 mm的细胞爬片，将3组骨髓间充质干细胞分别常规离心后，用成软骨诱导分化完全培养基重悬细胞，分别取100 μL细胞浓度为1×108 L-1的3组细胞悬液，接种于细胞爬片上，置于37 ℃、体积分数为5% CO2细胞培养箱中静置3 h后，向每孔加入2 mL成软骨诱导分化完全培养基，每2 d换液1次，培养21 d后，用37 ℃预热的PBS清洗3×10 min；37 ℃、40 g/L多聚甲醛固定20 min，PBS清洗3×10 min；0.3% TritionX-100 37 ℃下透膜20 min，PBS清洗3×10 min；5%牛血清白蛋白37 ℃下封闭30 min；加入一抗山羊抗鼠Ⅱ型胶原蛋白单克隆抗体100 μL，4 ℃冰箱内孵育过夜；取出6孔板，室温复温10 min；PBS清洗3×10 min；滴加TRITC标记的羊抗鼠二抗100 μL，37 ℃下避光孵育1 h；PBS清洗3×10 min；10 mg/L DAPI染液室温避光复染细胞核5 min，PBS清洗3×10 min；取出细胞爬片并用抗荧光淬灭剂封固处理后，于倒置荧光显微镜下观察Ⅱ型胶原蛋白在细胞中的表达。
1.4.6   RT-qPCR法检测Sox-9、TGF-β1/Smad信号通路 mRNA表达水平   收集成软骨诱导第3，7，14，21天的3组细胞，以Trizol法提取总RNA，反转录成cDNA，按RT-qPCR Kit说明检测细胞内Sox-9、TGF-β1、Smad2、Smad4 mRNA表达水平，以 β-actin 为内参基因。反应条件：预变性95 ℃ 2 min，变性95 ℃ 10 s，联合退火/延伸60 ℃ 20 s，40个循环。以空白对照组细胞内各基因mRNA的2-ΔΔCt值为基准，检测各组目的基因mRNA的相对表达量。引物由生工生物工程(上海)公司合成，目的产物上游、下游序列见表1。
1.5   主要观察指标   ①骨髓间充质干细胞的形态学观察；②慢病毒转染效率；③3组细胞成软骨诱导过程中细胞形态学观察；④3组细胞成软骨诱导分化21 d后阿利辛蓝染色结果；⑤3组细胞成软骨诱导21 d的软骨微球最大横截面的周长；⑥3组细胞成软骨诱导分化21 d后Ⅱ型胶原免疫荧光染色结果；⑦3组细胞成软骨诱导过程中Sox-9、TGF-β1、Smad2、Smad4 mRNA的表达水平。
1.6   统计学分析   实验数据采用GraphPad Prism 8.0和 SPSS 26.0软件处理，用x±s表示，若资料符合正态分布，多组间比较采用方差分析，组间比较采用LSD-t检验；非正态分布资料采用秩和检验；P < 0.05为差异有显著性意义。

CdLS最常见的临床特征是骨骼发育异常，有研究发现，CdLS小鼠在出生前就出现明显体型较小，双上肢生长异常[12]，Nipb1+/-胚胎(E17.5-E18.5)比野生型所产后代的身长短18%-19%，且胚胎骨骼染色结果显示，Nipb1+/-胚胎软骨和膜状骨出现骨化延迟。

NIPBL编码外显子上游基因突变杂合的小鼠表现出许多人类CdLS的特征，包括出生前和出生后的生长迟缓，骨发育迟缓，伴有特征性颅面变化的小头畸形等，这些表型可稳定遗传至后代。目前研究认为CdLS的病因与粘连蛋白复合体相关的基因突变有关[13]，NIPBL作为粘连复合物加载因子，其突变导致胎盘中DNA持续损伤和细胞衰老，最终导致突变胚胎的发育缺陷。

有研究发现，与NIPBL基因突变相关的CdLS临床表型是基因表达调控改变的结果[14]，NIPBL等位基因的杂合子是导致CdLS个体最常见的基因型，大多数突变的等位基因会导致编码的蛋白质完全缺失或只产生一个严重的截断蛋白质，因此尽管有NIPBL基因错义突变的报道，但该基因型被认为是NIPBL功能等位基因的缺失[15]。而且这种基因型的模型小鼠具有CdLS个体特有的表型，包括生长迟缓、头面部发育异常、心脏缺陷和行为变化。NIPBL mRNA在CdLS患儿和模型小鼠中的表达水平均是正常水平的60%-70%，表明NIPBL野生型拷贝数量上调。然而，CdLS细胞系并不总是在早期即表现出姐妹染色单体分离的现象[16]，而CdLS患者所表现出的临床特征表明，在细胞分裂过程中，存在基因调节异常，而非染色单体凝聚力存在缺陷，这可能是NIPBL基因的单个功能保留并复制足以使染色单体聚集，但尚不具备调控分裂间期与发育相关基因功能的作用。因此，对于NIPBL基因致CdLS的具体分子机制尚未达成一致。目前该病采用终生对症治疗，患者临床预后较差，其平均寿命比一般人群短10-20年[17]。

骨骼发育的最早阶段形成软骨，这是软骨内骨化过程中的主要环节，并在成年后由间充质干细胞修复[18-19]。在胚胎发育中，间充质干细胞凝聚并分化为软骨细胞，然后发育成生长板软骨，在生长板软骨中软骨细胞可以通过增殖、分化促进长骨生长[20-21]，可见软骨对骨形态与功能的重要性。

该研究结果发现：慢病毒转染骨髓间充质干细胞可抑制NIPBL基因表达，抑制效率达64%，且未转染组未见绿色荧光蛋白表达，其NIPBL基因表达水平与慢病毒空载体转染组相比无显著性差异，表明NIPBL shRNA可整合到小鼠骨髓间充质干细胞基因组并实现长期稳定表达，同时，慢病毒空载体对实验细胞无显著影响。成软骨诱导21 d后，与sh-NC组相比，sh-NIPBL组细胞数量较少，软骨微球的体积显著减小，说明NIPBL基因缺陷明显降低了骨髓间充质干细胞在成软骨分化中的增殖能力。Sox-9作为软骨细胞中关键的转录因子，在软骨形成分化和表型中起着重要的作用[22-23]。Ⅱ型胶原是组成透明软骨基质的重要组成成分，其表达能力可特异性反映间充质干细胞成软骨分化能力[24]。在成软骨诱导过程中，sh-NIPBL组的Ⅱ型胶原、Sox-9基因表达水平均显著低于sh-NC组，且两者的表达水平呈正相关性，这与先前的研究认为Sox-9是通过与蛋白聚糖的增强子原件以及软骨细胞特征性成分Ⅱ型胶原结合而激活其表达的结论一致[25]。阿利辛蓝是一种与软骨的弱硫酸化黏多糖和糖蛋白强烈结合的阳离子染料，在酸性条件下，可将内酸性黏多糖染成蓝色[26]，在成软骨诱导21 d时，sh-NIPBL组染色阳性的软骨细胞数量少于sh-NC组。上述实验结果均提示NIPBL基因缺陷降低了小鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化能力。

骨骼发育是一个复杂的过程，它在空间和时间上都受到细胞信号网络和基因调控程序的精确控制。在过去的几十年里，对先天性人类疾病的研究揭示了大量与软骨生长分化有关的基因，包括TGF-β/BMP通路、Ras-MAPK途径、经典Smad通路、Wnt/β-catenin通路和Hedgehog信号[27-29]。然而，此前尚缺乏NIPBL基因突变所致的骨髓间充质干细胞软骨向分化能力降低的分子机制相关报道，该研究探索TGF-β1/Smad 通路在NIPBL敲低的小鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化中的作用，结果发现sh-NIPBL组TGF-β1、Smad2、Smad4基因表达水平均降低，TGF-β1与TGF-βR-Ⅱ结合，激活Smad蛋白信号通路，激活的Smad2/3与Sox-9形成转录复合物，并刺激Ⅱ型胶原的表达，从而促进软骨细胞增殖、分化。这验证了现有的研究结论：敲除小鼠骨髓间充质干细胞TGF-β1基因，小鼠无法形成正常的关节软骨，表现出关节变形等症状，并且肢体明显比正常小鼠短小；敲除人骨髓间充质干细胞Smad2基因，TGF-β信号转导途径在激活过程中的表达明显降低，反之，过表达Smad2则TGF-β信号转导途径的表达显著增强。此外，敲除Smad4基因可见通过Smad1/5/9替代途径激活的TGF-β信号显著降低，Smad4基因敲除在很大程度上抑制了TGF-β诱导人骨髓间充质干细胞成软骨分化能力[30-31]，说明 TGF-β1/Smad 通路在NIPBL基因缺陷的骨髓间充质干细胞成软骨细胞分化过程中发挥重要作用。

TGF-β是由骨细胞合成、分泌的细胞因子，也是骨组织中含量最丰富的生长因子，它在调节骨形成的过程中发挥重要作用。TGF-β家族中的TGF-β1功能最多，分布最广，TGF-β1主要在软骨细胞增殖和肥大区表达，能够刺激成软骨细胞的增殖与分化，促进细胞外基质合成，同时降低成骨细胞分泌破骨细胞分化因子的能力，被认为是连接成骨细胞与破骨细胞的重要生长因子[32]。TGF-β信号转导过程由转录因子Smads蛋白家族介导，Smads蛋白是TGF-β信号通路唯一的底物蛋白，TGF-β1活化受体可磷酸化受体激活型Smads蛋白Smad2/Smad3，被磷酸化的Smad2/Smad3与Smads家族通用型蛋白 Smad4形成三聚体复合物，这一复合物可以将信号从细胞质转移至细胞核，在DNA结合辅助因子的帮助下与DNA上被称为Smad结合元件的区域结合后诱导转录，从而调节目的基因表达[33-34]。Smad4作为TGF-β进行信号转导的共激活因子和介体，在偶联骨形成和骨吸收以及维持正常的骨稳态方面起着至关重要的作用，它在小鼠体内异常表达会导致许多发育缺陷。敲除骨细胞中Smad4基因导致骨体积减小，骨密度和骨形成率降低，从而导致骨骼发育缺陷[35]。

综上所述，慢病毒敲低小鼠骨髓间充质干细胞NIPBL基因构建的CdLS疾病模型细胞，在体外诱导向软骨细胞分化的过程中，软骨特异性基因和TGF-β1、Smad2、Smad4基因表达下降，这提示NIPBL基因和TGF-β1/Smad信号通路在一定程度上可能共同调控骨髓间充质干细胞的成软骨分化，使其软骨和膜状骨的骨化延迟，最终导致骨骼发育缺陷。

CdLS的发生发展可追溯至胚胎发育阶段，加之对其发病机制的认识尚不足，因此对该疾病的临床诊断及治疗往往出现滞后现象，而对患儿采用的终生治疗方案对其自身和家庭带来沉重负担。这一实验发现为后续进一步探索CdLS骨骼发育缺陷的致病机制提供细胞生物学依据，最终将为该病提供“早、准、稳”的临床干预新思路，从而减轻家庭及社会的经济压力。
中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

文题释义：
Cornelia de Lange综合征：是一种由基因突变引起的多器官系统发育异常综合征，临床患儿主要表现为身体智力发育迟缓、认知障碍、面容畸形、肢体骨骼发育缺陷等。该病由NIPBL、MAU2、SMC1A、SMC3、RAD21、BRD4、HDAC8、ANKRD11、EP300基因的致病性变异所致，其中NIPBL占60%，且该病80%最严重的临床表现涉及NIPBL突变。
NIPBL基因：是位于5号染色体的类似于B蛋白的基因(Nipped-B-like protein)，其编码的Delangin蛋白在胚胎和成人心脏、骨骼肌及脑等组织中大量表达，具有调节胚胎时期器官组织发育的作用。同时，在染色单体凝聚、基因表达和DNA损伤修复中发挥重要作用。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

Cornelia de Lange综合征是一种由基因突变引起的多器官系统发育异常综合征，该病由9种基因突变所致，其中NIPBL基因占60%，目前尚无NIPBL基因突变导致CdLS的具体分子机制研究报道，其致病机制尚不明了，因此该病现采用终生对症治疗，患者临床预后较差，其平均寿命比一般人群短10-20年。Cornelia de Lange综合征患儿发生肢体发育畸形的概率高达73.1%，该研究利用骨髓间充质干细胞可定向分化成软骨的特性，探讨NIPBL基因缺陷与CdLS骨骼发育异常的相关性及其可能的发病机制，为临床实践提供一个创新的、具有良好应用前景的理论思路。

中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程

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