骨髓干细胞

    M2型巨噬细胞外泌体诱导骨髓间充质干细胞的成骨分化
  • 图1|复苏后的RAW264.7与CP-M131形态(×200)

    结果:复苏后的RAW264.7及CP-M131细胞培养24 h后均转为贴壁细胞,绿色为细胞骨架,蓝色为细胞核,见图1


    图3|M2巨噬细胞来源外泌体的表征

    结果:通过聚合物沉淀法提取M2型巨噬细胞外泌体,并通过透射电子显微镜、Western blot分析进行鉴定,透射电子显微镜观察样品中存在尺寸范围为30-200 nm的颗粒,并显示这些颗粒具有杯状或球状形态,见图3A。  Western blot分析进一步证明提取出的颗粒对外泌体表面标志物呈阳性,包括CD63、TSG101、Alix,见图3B,上述结果证明上清液中提取的颗粒物质为外泌体。


    图4|骨髓间充质干细胞摄取不同质量浓度DiI标记的M2型巨噬细胞来源外泌体(比例尺:50 μm)

    结果:为检测M2型巨噬细胞分泌的外泌体被骨髓间充质干细胞摄取,首先使用白细胞介素4诱导RAW264.7细胞分化为M2型巨噬细胞,培养24 h后分离培养上清液中的外泌体。然后用DiI标记M2型巨噬细胞来源外泌体,进一步与骨髓间充质干细胞共培养。DiI标记的外泌体位于骨髓间充质干细胞内,并聚集在细胞核附近,见图4


    图7|M2型巨噬细胞来源外泌体(M2-EXOs)干预不同时间对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响(×100)

    结果:茜素红染色结果显示,随着共培养时间增加,矿物质沉积染色逐渐增强,表明骨髓间充质干细胞向成骨分化,见图7


    图8|不同质量浓度M2型巨噬细胞来源外泌体(M2-EXOs)对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响(×100) 

    结果:此外,60 mg/L M2型巨噬细胞来源外泌体组矿物质沉积染色显著大于其余组(P < 0.05),与M2型巨噬细胞来源外泌体摄取效率及蛋白质印迹结果一致,见图8


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  • 发布日期: 2022-08-05  浏览: 454