骨髓干细胞
-
图1｜复苏后的RAW264.7与CP-M131形态(×200)
结果：复苏后的RAW264.7及CP-M131细胞培养24 h后均转为贴壁细胞，绿色为细胞骨架，蓝色为细胞核，见图1。
图3｜M2巨噬细胞来源外泌体的表征
结果：通过聚合物沉淀法提取M2型巨噬细胞外泌体，并通过透射电子显微镜、Western blot分析进行鉴定，透射电子显微镜观察样品中存在尺寸范围为30-200 nm的颗粒，并显示这些颗粒具有杯状或球状形态，见图3A。 Western blot分析进一步证明提取出的颗粒对外泌体表面标志物呈阳性，包括CD63、TSG101、Alix，见图3B，上述结果证明上清液中提取的颗粒物质为外泌体。
图4｜骨髓间充质干细胞摄取不同质量浓度DiI标记的M2型巨噬细胞来源外泌体(比例尺：50 μm)
结果：为检测M2型巨噬细胞分泌的外泌体被骨髓间充质干细胞摄取，首先使用白细胞介素4诱导RAW264.7细胞分化为M2型巨噬细胞，培养24 h后分离培养上清液中的外泌体。然后用DiI标记M2型巨噬细胞来源外泌体，进一步与骨髓间充质干细胞共培养。DiI标记的外泌体位于骨髓间充质干细胞内，并聚集在细胞核附近，见图4。
图7｜M2型巨噬细胞来源外泌体(M2-EXOs)干预不同时间对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响(×100)
结果：茜素红染色结果显示，随着共培养时间增加，矿物质沉积染色逐渐增强，表明骨髓间充质干细胞向成骨分化，见图7。
图8｜不同质量浓度M2型巨噬细胞来源外泌体(M2-EXOs)对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响(×100)
结果：此外，60 mg/L M2型巨噬细胞来源外泌体组矿物质沉积染色显著大于其余组(P < 0.05)，与M2型巨噬细胞来源外泌体摄取效率及蛋白质印迹结果一致，见图8。